摘要： 肉苁蓉中含有多种生物活性物质， 具有较高的营养和保健功能。通过分类总结肉苁蓉活性物质及其体外抗氧化活性评价方法， 为肉苁蓉抗氧化活性研究及相关领域的研究提供依据。关键词： 肉苁蓉； 活性物质； 抗氧化活性； 体外抗氧化评价肉苁蓉始载于《神农本草经》， 享有“沙漠人参” 之美誉， 为列当科肉苁蓉属多年生草本植物，多寄生于藜科梭梭属植物的根部， 主要分布于欧洲、亚洲温暖的干燥地区， 我国的肉苁蓉主要分布于内蒙古（阿拉善盟、巴彦淖尔市）、新疆、甘肃等地。从20 世纪80 年代至今， 国内外学者对肉苁蓉的化学成分及生物活性进行了深入研究并取得较大的成绩， 已从中分离到苯苷类、环烯醚萜类及其苷类、木质素、黄酮类等活性成分， 其具有益肾壮阳[1]、通便润肠[2]、保护肝脏[3]、免疫调节[4]、抗衰老[5]、抗肿瘤、提高学习记忆力[6]、抗骨质疏松[7]、促进创伤愈合、保护缺血心肌、改善微循环等作用。从肉苁蓉活性物质、体外抗氧化活性评价方法及抗氧剂的应用等方面介绍了近年来肉苁蓉活性物质的研究进展。1肉苁蓉抗氧化活性物质苯乙醇苷化合物具有较强的生物活性和显著的药理活性特性[8]。从肉苁蓉中共分离鉴定出苯乙醇苷类61 个[9]， 包括肉苁蓉苷、松果菊苷、毛蕊花糖苷、类叶升麻苷、异类叶升麻苷、红景天苷等。屠鹏飞等人[10]研究肉苁蓉成分， 结果表明其主要的活性成分是苯乙醇总苷（主要指标性成分是松果菊苷和毛蕊花糖苷）， 苯乙醇总苷是肉苁蓉质量控制的主要检测指标。曾克武等人[11]利用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻断模型， 考查肉苁蓉苯乙醇苷的脑保护作用， 结果表明， 从靶点源头上解释了肉苁蓉苯乙醇苷发挥抗痴呆、缓解疲劳、抗肿瘤、免疫调节等诸多作用的潜在药理机制。环烯醚萜类化合物具有多种生物活性[12]， 从肉苁蓉中共分离鉴定出环烯醚萜及其苷类25 个[9]。京尼平苷酸又称梔子苷酸， 是一种环稀醚萜葡萄糖苷， 具有消炎利胆等功效成分， 因此在临床上用于降血压、止痛、镇静等。李莉等人[13]采用高效液相色谱法对肉苁蓉中京尼平苷酸的含量进行测定， 结果表明在5.0~100.0>μg/mL 范围内线性关系良好（R=0.999>9），平均回收率在95%~101%， RSD 为0.55%~1.95%。黄酮类化合物具有重要的生物活性， 王慧[14]研究发现黄酮类化合物具有抗肿瘤、抗心血管疾病、抗氧化、抗衰老、抗菌、抗病毒、免疫调节等作用，徐常永等人[15]采用大孔吸附树脂对肉苁蓉总黄酮的吸附作用， 通过吸附试验和正交试验得到肉苁蓉总黄酮分离纯化较佳的工艺条件， 分离纯化前后总黄酮的质量分数由6.63%,提高到72.35%。目前， 国内外的专家和学者已从肉苁蓉中已分离并鉴定出100 种以上化学成分和微量元素， 除上述成分外， 还有木脂素及其苷类、多糖、生物碱、烃类、氨基酸类、菇类、挥发性成分、无机微量元素等成分。2"""肉苁蓉活性物质体外抗氧化活性的评价方法DPPH·（1,1,-二苯基-,2,-三硝基苯肼） 在517,nm处有最大吸收峰， 是一种较为稳定的自由基， 因其稳定性好、灵敏度高、设备要求不高而成为检测抗氧化能力首选。DPPH·的醇溶液呈深紫色， 当自由基清除剂存在时， 其吸收逐渐消失即颜色变浅， 它的褪色程度与自由基清除剂接受的电子数成定量关系。DPPH·清除率最常用的检测方法是分光光度计法， 还可用高效液相色谱、电子核磁共振、薄层层析等技术进行检测。肖星辉等人[16]采用乙醇- 盐双水相萃取法对荒漠肉苁蓉总黄酮的体外抗氧化性进行研究。结果表明， 荒漠肉苁蓉总黄酮对DPPH·具有有效的清除作用， 其对DPPH·清除率最高可达91.8%，具有较好的抗氧化活性。王国卫等人[17]通过试验表明肉苁蓉多糖对DPPH·的清除能力与其浓度呈正相关,,且清除能力大于抗坏血酸。羟基自由基（·OH） 在510, nm 处有最大吸收峰， 是氧化能力较强的自由基， 可与体内的脂肪等有机物大分子发生连续反应， 引起机体损伤。抗氧化剂用量与·OH 清除能力成正比， 一般以水杨酸作为捕捉剂。·OH 清除率最常用的检测方法是紫外可见分光光度法， 目前还可用荧光法、电子自旋共振法、化学发光法、高效液相色谱法等方法。肉苁蓉活性成分具有清除·OH 的能力， 肖星辉等人[16]研究荒漠肉苁蓉总黄酮对·OH 的体外抗氧化性， 结果表明， 荒漠肉苁蓉总黄酮可以有效清除·OH， 其对·OH清除率最高可达35.9%。宋阳[18]采用荧光法对肉苁蓉中黄酮类化合物抗氧化性进行测定， 其对·OH 清除率为91.5%， 结果表明肉苁蓉中黄酮类化合物具有很强的抗氧化性。王国卫等人[17]通过试验表明肉苁蓉多糖对·OH,有良好的清除作用， 且随浓度增大而增大。ABTS[2,2'- 联氮双（3,- 乙基苯并噻唑啉-, 6, -磺酸） 二铵盐]在414,nm 或734,nm 处有最大吸收峰，具有还原性， 易被氧化成相对稳定的蓝绿色水溶性ABTS+·， ABTS+·与抗氧化剂反应后溶液褪色， 褪色越强， 吸光度越低。溶液退色程度与溶液的抗氧化能力成正比。黄靖等人[19]采用超声酶法对肉苁蓉多糖ABTS+·的清除能力的测定， 通过试验表明在50~,1,000,mg/L 范围内， 肉苁蓉多糖锌配合物对ABTS+·的清除能力高于肉苁蓉精制多糖； 当质量浓度为1,000,mg/L 时， 肉苁蓉多糖锌配合物对ABTS+·清除率达到36.83％。肉苁蓉活性成分除了以上体外抗氧化研究方法外， 还常用到总还原力测定（铁氰化钾法）、氧自由基吸收量的测定、抗氧化当量的测定、超氧自由基（O-2·） 清除能力的试验等体外抗氧化研究方法。3"""结语近年来， 专家学者们对肉苁蓉抗氧化活性进行了大量的研究， 结果表明肉苁蓉在体内外可清除各种自由基， 提高机体内抗氧化酶的活性[20]， 体外抗氧化活性是用以评价抗氧化剂抗氧化活性的一种快速、简便、灵敏可行的方法[21]。肉苁蓉作为一种传统中药材， 多年来的试验研究表明， 肉苁蓉有重要的药用价值和经济价值， 根据肉苁蓉所具有的药理作用等已研制出肉苁蓉产品有苁蓉总苷胶囊、苁蓉四倍丸[22]、复方苁蓉益智胶囊[23]等用于临床应用。据阿拉善盟科技技术局获悉， 从2014 年正式启动了荒漠肉苁蓉申报新食品原料项目工作； 2018 年1 月， 国家卫计委下发通知公开征求意见， 将肉苁蓉（荒漠）、党参等9 种物质增补一批既是食品又是中药的物质进入食药物质目录， 阿拉善荒漠肉苁蓉被列入拟重点研究的物质名单要求荒漠肉苁蓉试生产2 年。未来可以通过一定的加工技术、微生物技术等来实现肉苁蓉有效成分的工业化生产， 满足实际需要， 解决资源破坏和浪费问题。因此肉苁蓉可以借鉴之前药品的开发经验发展保健类食品， 其开发方面具有着广阔的前景。参考文献：王德俊， 盛树青， 梁虹. 肉苁蓉对小鼠睾丸和附睾形态学与组织化学的影响[J] . 解剖学研究， 2000， 22（2）：101-103.王丽卫， 孙健， 赵兵， 等. 肉苁蓉膳食纤维润肠通便功能研究[J] . 食品安全质量检测学报， 2016（7）： 3 740-3 744.Wu Y， Li L， Wen T， et al． Protective effects ofechinacoside on carbon tetrachloride induced hepatotoxicityin rats [J] ． Toxicology， 2007（1/2）： 50-56．张涛， 许文胜， 贾彦斌， 等． 肉苁蓉多糖对THP -1 细胞吞噬作用的影响及其机理研究[J] ． 生命科学研究，2013， 17（2）： 148-150， 155．陈华， 董利森． 肉苁蓉多糖抗衰老作用的研究进展[J] ．中国煤炭工业医学杂志， 2012， 15（2）： 310．Peng X M， Gao L， Huo S X， et al． The Mechanism ofMemory Enhancement of Acteoside（Verbascoside） in theSenescent Mouse Model In-duced by a Combination of D -gal and AlCl 3 [J] ． Phytother Ｒes， 2015， 29（8）： 1 137-1 144．Liang H， Yu F， Tong Z， et al. Cistanches Herba aqueousextract affecting serum BGP and TRAP and bone marrowSmad1 mRNA， Smad5 mRNA， TGF-β1 mRNA and TIEG1Mrna expression levels in osteoporosis disease [J] . MolecularBiology Reports， 2013， 40（2）： 757-763.薛刚， 张成红， 陈玉娟， 等. 苯乙醇苷类化合物的研究进展[J] . 有机化学研究， 2017， 5（2）： 114-119.丁燕， 张开梅， 苍小鑫， 等. 肉苁蓉属化学成分及生物活性研究进展[ J] . 大连工业大学学报， 2016（6）：395-402.屠鹏飞， 楼之岑， 李顺成， 等. 肉苁蓉类润肠通便药效比较[J] . 天然产物研究与开发， 1999， 11（1）： 48-51.曾克武， 廖理曦， 万彦军， 等. 基于靶点“钩钓” 策略的肉苁蓉苯乙醇苷药理靶点鉴定及功效解析[J] . 中草药， 2018， 49（1）： 173-178.雷丽， 宋志宏， 屠鹏飞. 肉苁蓉属植物的化学成分研究进展[J] . 中草药， 2003， 34（5）： 473-476.李莉， 曹进， 张庆生. 高效液相色谱法测定肉苁蓉中京尼平苷酸的含量[J] . 食品安全质量检测学报， 2016（7）： 933-937.王慧. 黄酮类化合物生物活性的研究进展[J] . 食品与药品， 2010， 12（9）： 347-350.徐常永， 杨凯. 大孔树脂分离纯化肉苁蓉总黄酮研究[J] . 中国当代医药， 2016， 24（23）： 130-134.肖星辉， 张向前， 李桂芳， 等. 双水相萃取荒漠肉苁蓉总黄酮及其抗氧化活性[J] . 食品研究与开发， 2017，38（16）： 5-9.王国卫， 赵芳. 新疆肉苁蓉多糖清除活性氧自由基[J] .光谱实验室， 2011（3）： 1 545-1 548.宋阳. 肉苁蓉中黄酮类化合物的提取及抗氧化性能研究[J] . 辽宁化工， 2013（1）： 13-15.黄靖， 邹烨， 王未， 等. 肉苁蓉多糖锌的制备、表征及抗氧化活性[J] .化学研究， 2015（6）： 584-58胡喜兰， 韩照祥， 陶莹， 等． DPPH·法测定17 种植物的抗氧化活性[J] ． 食品科技， 2006（10）： 264-268．徐辉， 魏晓东， 欧琴， 等. 肉苁蓉醇溶成分对致衰大鼠肝线粒体的保护作用[J] . 黑龙江医药科学， 2007， 30（1）： 10-11.吴晓春， 史颖． 肉苁蓉的研究与临床应用[J] ． 甘肃中医， 2007， 20（12）： 49-51．陈国超， 张根明， 陈璐， 等． 复方苁蓉益智胶囊的临床应用及试验研究进展[J] ． 中西医结合心脑血管病杂志，2016（5）： 510-512． ◇

【摘要】从肉苁蓉的概况、化学成分、药理作用方面综述肉苁蓉治疗阿尔茨海默病研究进展。中医治疗阿尔茨海默病多以补肾为主，肉苁蓉补肾阳、益精血，是中医治疗阿尔茨海默病的常用药。肉苁蓉具有抗氧化、抗炎与调节免疫、促进代谢和保护神经等作用，在防治阿尔茨海默病方面有良好的应用前景。【关键词】肉苁蓉; 阿尔茨海默病; 补肾阳; 抗氧化; 抗炎与调节免疫; 神经保护; 综述阿尔茨海默病( Alzheimer disease，AD) 是最常见的中枢神经系统的退行性疾病之一。临床上以认知衰退、进行性记忆丧失、性情改变、语言不协调，最终导致痴呆进一步发展，失去自主生存能力为主要表现。AD在病理学上的表现主要有β 淀粉样多肽( β-amyloidpeptide) 积聚成的淀粉样蛋白斑，大量的高度磷酸化的微管相关蛋白( tau protein) 组成的神经纤维缠结，以及胆碱能神经元的死亡［1］。目前认为，AD 的发病机制包括β 淀粉样蛋白( β-amyloid protein，Aβ) 沉积、Tau 蛋白过度磷酸化、细胞凋亡、炎症反应、神经细胞钙稳态失调和自由基代谢异常、AD 相关基因突变及多型性假说等［2］。此外，全基因组扫描( GWAS) 研究显示，数十个基因与AD 相关，但位于21 号染色体上的淀粉样蛋白前体蛋白( APP ) ，14 号染色体上的早老素1( PSEN1) ，1号染色体上的早老素2( PSEN2) ，以及19号染色体上的载脂蛋白E( Apolipoprotein E，ApoE) ，是与AD 致病性关系最密切的易感基因［3］。肉苁蓉补肾阳、益精血，是中医治疗大脑神经病变的常用药。现代研究发现，肉苁蓉对脑神经有保护作用，不仅可用于阿尔茨海默病，还常用于治疗帕金森、血管性痴呆等疾病。本文通过综述相关研究进展，对肉苁蓉脑神经保护作用进行总结，进而为阿尔茨海默病的防治提供科学依据及借鉴。1 肉苁蓉概况肉苁蓉( Cistanche deserticola Ma) ，别名疆芸、寸芸、苁蓉，分布在以内蒙古阿拉善高原和新疆北疆为中心的两大生产区［4］。肉苁蓉属植物为寄生植物，其寄主为防沙固沙植物梭梭、柽柳属植物、盐爪爪、红砂、珍珠柴等［5］。《神农本草经》最早记录了肉苁蓉的作用: “主五劳七伤，补中，除茎中寒热痛，养五脏，理阴，益精气，妇人癥瘕。”唐代甄权所著的《药性论》记载肉苁蓉“益髓，悦颜色，延年，治妇人血崩，壮阳，大补益，主赤白下”。《中华人民共和国药典》收载的肉苁蓉的基源鉴定为列当科植物肉苁蓉( Cistanche deserticola Y．C．Ma)或德赢vwin登录 ［Cistanche tubulosa( Schrenk) Wight］的干燥带鳞叶的肉质茎，多于春季苗未出土或刚出土时采挖，除去花序，切段，晒干。肉苁蓉味甘、咸、性温，归肾、大肠经，功效补肾阳、益精血，润肠通便。2 肉苁蓉的化学成分肉苁蓉的主要化学成分包含苯乙醇苷类( phenylethanoid glycosides，PhGs ) 化合物松果菊苷( echinacoside，Ech) 、毛蕊花糖苷( acteoside，Act) 、肉苁蓉多糖( polysacchrides of cistanche deserticola，CDPS) 、甜菜碱、木质素类、环烯醚萜及其他苷类、氨基酸、丁香酚、挥发油等［6］。肉苁蓉还含有丰富的微量元素，包括铁、锰、锌、铜、钙、镁、钼、钴等［7］。PhGs 是肉苁蓉的主要有效活性成分，不同品种肉苁蓉的化学成分有明显差异，德赢vwin登录 松果菊苷的含量较高，几乎是其他品种的6 倍; 德赢vwin登录 有效成分种类也更丰富，如苯乙醇苷类在德赢vwin登录 中可分离出19 种之多，而其他品种肉苁蓉只能得到12 种［8］。不同采收和加工方法影响肉苁蓉不同活性成分的含量，如切片杀酶的方法可获得较多的松果菊苷和毛蕊花糖苷; 直接干燥的方法可获得较多的半乳糖醇［9］。炮制方法也是影响肉苁蓉成分和作用的因素，肉苁蓉酒炙增加苯乙醇苷类化合物松果菊苷、毛蕊花糖苷含量，而8-表马钱酸、丁二酸、京尼平苷的量则下降［10］。肉苁蓉经酒炙后可避免滑肠致泻的副作用，同时增强温肾助阳功能［11］。3 肉苁蓉的药理作用现代生物医学研究显示，肉苁蓉有抗氧化、调节免疫和延缓衰老的作用，还有保肝［12］、抗癌［13］、抗辐射［14］、降血糖［15］、抗变态反应、抗炎、抗恶性细胞增殖［16］，以及改善造血［17］等功能。肉苁蓉的化学组分苯乙醇苷类可以通过增加氧化酶的酶活性从而预防高原肺水肿和高原脑水肿［18］，肉苁蓉也用于治疗骨质疏松和促进骨折愈合［19］。这里主要总结肉苁蓉神经保护方面的作用。3．1 抗氧化作用氧化应激是AD 的主要病理生理学过程之一，抗氧化剂通常被认为对AD 有保护作用。肉苁蓉总苷( Glycosides of cistanche，GCs) 在体内、体外均具有抗氧化活性［20］。GCs 保护小鼠脑缺血/再灌注引起的脑损伤，可以提高脑组织超氧化物歧化酶( Superoxide Dismutase，SOD) 活性，并降低丙二醛( Malondialdehyde，MDA) 含量［21］。GCs 改善血管性痴呆模型大鼠的空间学习记忆能力［22］及D-半乳糖和铝诱导的小鼠记忆能力减退［23］;改善Aβ 所致的AD 模型大鼠学习记忆能力［24］。GCs也可通过提高自由基清除酶活性，降低脂质过氧化反应，以及脑组织钙含量，从而抑制喹啉酸诱导的脑细胞凋亡。GCs 还可通过调节脑内氧化代谢水平，改善随年龄增加而恶化的SAMP8 小鼠空间学习记忆能力和海马椎体细胞的存活率［25-26］。GCs 在体外可保护细胞毒1-甲基-4-苯基-1，2，3，6四氢吡啶( MPTP) 引起的神经元凋亡［27］。3．2 抗炎与免疫调节作用AD 的炎症假说日益受到关注，小胶质细胞激活、大量的细胞因子和免疫补体蛋白释放是AD 的另一重要病理生理过程。苯乙醇苷类( Phenylethanoid Glycosides，PhGs) 和毛蕊花糖苷( Acteoside，Act) 均能有效抑制脂多糖( Lipopolysaccharide，LPS) 诱导的炎症因子的产生，包括肿瘤坏死因子-α( TNF-α) 、前列腺素E2( PGE2) 和一氧化氮( NO) 等［28］。松果菊苷( Echinacoside，Ech) 能促进衰老小鼠胸腺和脾脏质量的增加［29］。GCs 能显著加强D-半乳糖诱导的衰老小鼠淋巴细胞转换能力、腹腔巨噬细胞吞噬功能、NK 细胞活性、CD4+T 细胞和CD8+ T 细胞含量、外周血IL-2 含量，这些表明肉苁蓉具有增强免疫力的作用［30］。Ech 可通过调节脑内NF-κB 通路而保护MPTP 引起的脑内多巴胺能神经元死亡［31］。临床研究表明，肉苁蓉总苷胶囊治疗48 周可以延缓中度AD 患者的认知能力减退、海马体积萎缩，并降低AD 患者脑脊液中总tau 蛋白和炎症因子的水平［32］。3．3 神经保护作用AD 的主要病理特征是内侧隔核、海马、颞叶和内嗅皮质等学习记忆相关脑区的神经元和突触丢失，保护神经、延缓神经元死亡和突触丢失是防治AD 的最终目标。作为补阳中药，肉苁蓉的甲醇浸出物中80%为碳水化合物，这种粗提物按每千克体质量1 克的量给小鼠连续灌胃3 天，心肌ATP 的产生可增加100%［33］。肉苁蓉多糖保护大鼠双侧海马注射Aβ25-35引起的神经元死亡和学习记忆能力减退［34］。毛蕊花糖苷可保护兴奋性氨基酸引起的大脑皮质神经元死亡和1-甲基4-苯基吡啶离子( MPP+) 引起的中脑多巴胺能神经元毒性作用［35-36］。Act 还可抑制Caspase-3 活性保护鱼藤酮引起的神经元死亡［37］。Act 也可保护Aβ 诱导的神经元死亡［38］。Act /Ech 预处理可以调节神经营养因子的表达，保护MPP+引起的氧化应激、内质网应激所导致的中脑多巴胺能神经元死亡［39－40］。肉苁蓉提取物能增加C6 细胞中神经生长因子( nerve growth factor，NGF) 的水平，促进PC12 细胞的神经突起的延伸，刺激小鼠皮质和海马区NGF 的产生，促进海马区神经细胞的分化、轴突生长和突触形成［41］。Ech 可增加胶质细胞源性神经营养因子( glial cell linederivedneurotrophic factor，GDNF) 和脑源神经营养因子( brain-derived neurotrophic factor，BDNF) 的表达［42］。Ech 还可以活化神经营养因子受体Trk A，激活其下游信号通路，抑制细胞色素C 的释放和Caspase-3 的活化［43］。另有研究表明，Ech 可抑制活性氧引起的细胞内游离Ca 的累积，从而保护神经元［44］。GCs 可通过减少tau 蛋白的磷酸化，增加二氢嘧啶酶相关蛋白-2 的表达而保护海马神经元［45］。肉苁蓉可抑制AD 小鼠模型β-淀粉样蛋白斑沉积，修复胆碱能神经元的功能，并改善认知功能障碍［46］。4 小结目前，食品药品监督管理局批准的治疗AD 的药物主要是胆碱酯酶抑制剂和NMDA 受体拮抗剂。这类药物只是调节脑内的神经递质含量，改善早期AD 的症状。有希望发展为保护神经元而延缓AD 发展的药物包括神经营养因子，改善神经细胞新陈代谢的药和传统中医药［47］。含肉苁蓉的经典复方有济川煎、地黄饮子、无比山药丸、加味四斤丸、菟丝子丸、苁蓉丸、参茸丸、润肠丸等; 此外，现代制剂肉苁蓉总苷胶囊、红芸口服液、杞芸口服液、苁蓉四倍丸、还少丹、金匮肾气丸、聪愚汤等都是目前临床常用的含肉苁蓉制剂［48］。GCs 的急性和遗传毒性试验，没有发现异常［49］;GCs 未表现出致突变性，且对动物血液生化指标、器官的正常生长发育等均无明显不良影响［50］，肉苁蓉对孕期大鼠也没有毒性或致畸作用［51］。随着对肉苁蓉研究的不断深入，肉苁蓉在防治神经退行性疾病方面的神经保护作用显示出了良好的前景。肉苁蓉的活性成分Act 可以通过血脑屏障，但Act 和Ech 的生物利用率低。参照中医的理法方药，改进中药传统制剂，如采用PhGs 脂质体、纳米颗粒、磷脂复合物等方法，可以提高肉苁蓉的生物利用度［52］。对肉苁蓉和含肉苁蓉复方的深入研究将为防治AD 提供有效思路。参考文献:［1］ SCHELTENS P，BLENNOW K，BＲETELEＲ M M，et al． Alzheimer’sdisease［J］． Lancet，2016，388( 10043) : 505-517．［2］ 张瑶，冯天骄，张占军，等． 黄芩素对抗阿尔采末病及改善学习记忆能力的研究进展［J］． 中国药理学通报，2010，26( 3) : 294-297．［3］ HINZ F I，GESCHWIND D H． Molecular genetics of neurodegenerativedementias［J］． Cold Spring Harb Perspect Biol，2017，9( 4) : a023705．［4］ 陈君，谢彩香，陈士林，等． 濒危药材肉苁蓉产地适宜性数值分析［J］． 中国中药杂志，2007，32( 14) : 1396-1401．［5］ 屠鹏飞，姜勇，郭玉海，等． 肉苁蓉研究及其产业发展［J］． 中国药学杂志，2011，46( 12) : 882-887．［6］ NAN Z D，ZENG K W，SHI S P，et al． Phenylethanoid glycosides withanti-inflammatory activities from the stems of Cistanche deserticola，cultured in Tarim desert［J］． Fitoterapia，2013，89( 1) : 167-174．［7］ 陈晓东，薛德钧． 肉苁蓉的微量元素分析［J］． 江西中医药大学学报，1994，6( 4) : 31．［8］ JIANG Y，TU P F． Analysis of chemical constituents in Cistanche，species［J］． J Chromatogr A，2008，1216( 11) : 1970-1979．［9］ 蔡鸿，鲍忠，姜勇，等． 不同影响因素下肉苁蓉中3 种活性成分的定量分析［J］． 中草药，2013，44( 22) : 3223-3230．［10］ 黄林芳，李文涛，王冬梅，等． 基于UPLC-Q-TOF /MS 技术研究酒苁蓉增效的物质基础［J］． 中草药，2013，44( 24) : 3471-3475．［11］ 张勇，吴焕． 肉苁蓉炮制历史的沿革［J］． 中国中药杂志，1992，17( 4) : 213-215．［12］ 陈百泉，刘瑜新，康文艺． 人工栽培肉苁蓉保肝和抗氧化活性研究［J］． 精细化工，2010，27( 4) : 342-345．［13］ 沈敬华，杨丽敏，张林娜，等． 五种中药提取物抗肿瘤作用的研究［J］． 内蒙古医科大学学报，2005，27( 4) : 300-302．［14］ LI J，ZHENG Ｒ L，LIU Z M，et al． Scavenging effects of phenylpropanoidglycosides on superoxide and its antioxidation effect ［J］． ActaPharmacol Sin，1992，13( 5) : 427-430．［15］ MOＲIKAWA T，NINOMIYA K， IMAMUＲA M， et al． Acylatedphenylethanoid glycosides，echinacoside and acteoside from Cistanchetubulosa，improve glucose tolerance in mice［J］．J Nat Med，2014，68( 3) : 561-566．［16］ HE J，HU X P，ZENG Y，et al． Advanced research on acteoside forchemistry and bioactivities［J］．J Asian Nat Prod Ｒes，2011，13( 5) :449-464．［17］ CHEN Z W，ZHU B D，XU H Y． Cistanche polysaccharide on micebone marrow suppression anemia hematopoietic regulation experimentalstudy［J］． Chin Arch Trat Chin Med，2007，25( 7) : 1473-1474．［18］ 骆新，李建英，许永华，等． 肉苁蓉苯乙醇苷对大鼠高原脑水肿的防治作用［J］． 中南药学，2014，12( 8) : 747-750．［19］ LIANG H D，YU F，TONG Z H，et al． Cistanches Herba aqueousextract affecting serum BGP and TＲAP and bone marrow Smad1mＲNA，Smad5 mＲNA，TGF-β1 mＲNA and TIEG1 mＲNA expressionlevels in osteoporosis disease［J］． Mol Biol Ｒep，2013，40 ( 2 ) :757-763．［20］ KO K M，LEUNG H Y． Enhancement of ATP generation capacity，antioxidant activity and immunomodulatory activities by Chinese Yangand Yin tonifying herbs［J］．Chin Med，2007，2( 1) : 760-769．［21］ 孟新珍，王晓雯，蒋晓燕，等． 肉苁蓉总苷对清醒小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用［J］． 中国临床神经科学，2003，11( 3) : 239-242．［22］ CHEN J，ZHOU S N，ZHANG Y M，et al． Glycosides of cistancheimprove learning and memory in the rat model of vascular dementia［J］．Eur Ｒev Med Pharmacol Sci，2015，19( 7) : 1234-1240．［23］ Peng X M，Gao L，Huo S X，et al． The Mechanism of MemoryEnhancement of Acteoside ( Verbascoside) in the Senescent MouseModel Induced by a Combination of D-gal and AlCl3［J］． PhytotherＲes，2015，29( 8) : 1137-1144．［24］ 罗兰，吴小川，高惠静，等． 肉苁蓉总苷对阿尔茨海默病模型大鼠的保护作用研究［J］． 中国药房，2013，24( 23) : 2122-2125．［25］ 贾建新，宋嵬，闫旭升，等． 肉苁蓉总苷对SAMP8 小鼠空间学习记忆的影响及其机制［J］． 包头医学院学报，2014，30( 6) : 6-8．［26］ GAO L，PENG X M，HUO S X，et al． Memory Enhancement ofActeoside ( Verbascoside) in a Senescent Mice Model Induced by aCombination of d -gal and AlCl 3［J］． Phytother Ｒes，2015，29( 8) :1131-1136．［27］ TIAN X F，PU X P． Phenylethanoid glycosides from Cistanches salsainhibit apoptosis induced by 1- methyl- 4-phenylpyridinium ion inneurons［J］． J Ethnopharmacol，2005，97( 1) : 59-63．［28］ DAZ A M，ABAD M J，FEＲNNDEZ L，et al． Phenylpropanoidglycosides from Scrophularia scorodonia : In vitro anti-inflammatoryactivity［J］． Life Sci，2004，74( 20) : 2515-2526．［29］ 李媛，宋媛媛，张洪泉． 松果菊苷对衰老小鼠免疫功能和线粒体DNA 相对含量的影响［J］． 中国药理学通报，2010，26 ( 6) :810-813．［30］ 张涛，柳朝阳，王建杰，等． 肉苁蓉总苷对D-半乳糖所致衰老模型小鼠免疫功能的影响［J］． 中国老年学杂志，2004，24 ( 5) :441-442．［31］ ZHANG J，ZHANG Z，XIANG J，et al． Neuroprotective Effects ofEchinacoside on Ｒegulating the Stress-Active p38MAPK and NF-κBp52 Signals in the Mice Model of Parkinson’s Disease［J］． NeurochemＲes，2017，42( 4) : 975-985．［32］ LI N，WANG J，MA J，et al． Neuroprotective Effects of CistanchesHerba Therapy on Patients with Moderate Alzheimer’s Disease［J］．Evid Based Complement Alter Med，2015( 2015) : 103985．［33］ KO K M，LEON T Y，MAK D H，et al． A characteristic pharmacologicalaction of‘Yang-invigorating’Chinese tonifying herbs: Enhancement ofmyocardial ATP-generation capacity［J］． Phytomedicine，2006，13( 9-10) : 636-642．

【摘要】 补益药主要指具有补气、补血、补阴、补阳等功能的中药，其偏性能够调整人体的气血、均衡阴阳、补益不足，一般用于人体各类虚症的治疗，能增强久病后身体虚弱的人的体质，促进机体康复，同时也具有抗衰老，提高免疫力、改善认知功能等作用。最近几年，肉苁蓉由于其独特的保健及治疗功效，引起人们越来越多的关注和研究。肉苁蓉（ Cistanche deserticola Y.C.Ma）也叫金笋、大芸、地精。是列当科（orobanchaceac）肉苁蓉属草本植物，多年生，主要寄生在梭梭树根部，分布于欧亚大陆和北非的干旱和半干旱生境，如伊朗、印度、蒙古。在我国主要生长于甘肃、宁夏等西北地区。肉苁蓉的作为一味中药，最早见于《神农本草经》记载。其药用部分主要是干燥带鳞叶的肉质茎。肉苁蓉味甘、性温，传统中医认为肉苁蓉能够补肾阳，益精血、润肠通便等效用。目前，人们通过乙醇提取等方法从肉苁蓉中提取出包括苯乙醇苷类、环烯醚萜类及多糖素类等诸多有效成分，还有少量生物碱、黄酮类及氨基酸类成分。研究发现，肉苁蓉粗提物以及分离出来的有效成分均具有广泛的药理作用，如免疫调节、抗炎、肝保护、抗氧化、抗菌和抗肿瘤等作用。此外，还具有神经保护、认知改善等功能。该文主要围绕近年来关于肉苁蓉有效成分对改善学习记忆，保护神经等方面的研究进行综述。认为肉苁蓉的作用主要是提高脑内神经生长因子（NGF）水平，抑制AChE 过度激活进而维持突触间隙ACh 正常水平，以及促进海马神经细胞的分化和突触形成等。【关键词】 肉苁蓉；NGF；AChE；认知改善

摘要:目的: 探讨肉苁蓉多糖对更年期高血压燥证大鼠血清内分泌功能的调节作用。方法: 采用摘除SHR 大鼠卵巢并给予燥性饲料的方法建立更年期高血压燥证复合动物模型，并对模型进行行为学和检测指标评价。将符合更年期高血压燥证的62 只大鼠随机分为5 组: SHR 组( 10 只) 、假手术组( 10 只) ，模型组( 10 只，更年期高血压燥证) ，阳性组( 10 只，坤泰胶囊，1． 08 g /kg) ，肉苁蓉高剂量组( 11 只，相当于肉苁蓉生药量11． 84 g，1． 2 g /kg) 、低剂量组( 11 只，相当于肉苁蓉生药量5． 92 g，0． 6 g /kg) ，观察各大鼠血压及行为变化，检测大鼠血清神经递质( NE、DA、5 － HT、5 － HIAA、NPY) 及内分泌( E2、FSH、LH)表达水平的变化。结果: 与假手术组相比，模型组大鼠行为学变化、血清神经递质及内分泌变化符合更年期高血压燥证临床特征，提示模型复制成功。药物干预治疗后，肉苁蓉多糖( CDPS) 高、低剂量组明显下调FSH、LH 表达水平( P ＜ 0． 05) ，但对E2表达水平调整作用不明显，比模型组稍高，组间比较显示差异没有统计学意义( P ＞ 0． 05) ; 肉苁蓉多糖( CDPS) 低剂量组对DA 的调节能力稍弱，与模型组相比，没有显著性差异( P ＞ 0． 05) ，肉苁蓉多糖( CDPS) 高剂量组作用强度稍弱于阳性组。结论: 肉苁蓉多糖能通过增强HPOA 功能实现对神经递质与内分泌激素的调节，纠正下丘脑神经递质紊乱状态，改善植物神经功能，稳定机体内环境，促进内分泌功能的改善，并加速新陈代谢，发挥改善更年期症状的作用。关键词:更年期高血压; 燥证; 肉苁蓉多糖; 神经内分泌功能更年期高血压是由于机体内分泌代谢紊乱并伴有植物神经功能失调从而引发的血压波动，有近80%的女性会出现该症状，并且该阶段血压波动易受到情绪、睡眠等外界因素的干扰，导致血压变异性较大，常规降压药控制不理想，并且长期服用有不同程度的不良反应发生。现代研究更年期血压异常波动可能与患者内分泌激素水平变化有明显关联［1］，临床治疗主要以雌激素替代疗法进行干预，而该方法不适用于有激素禁忌症的患者，如肝肾功能障碍、乳腺癌、糖尿病等，与此同时也会增加患者心脑血管疾病及生殖系统副反应发生的几率［2］; 相对于祖国医学对该疾病的治疗，则显的更具有优势，中医药辨证组方不但能对血压进行不同幅度的调节，还能改善患者睡眠状况、减轻患者临床症状，临床治疗以疗效确切、毒副作用少等优点而受到患者的好评。肉苁蓉为列当科寄生植物，是“药食两用”之品，营养价值高，具有独特的医药和保健功能，其中多糖( cistanche deserticola polysaccharides，CDPS)为其主要生物学活性组分，有研究显示由肉苁蓉组方制成的制剂能改善更年期综合征的临床症状［3］，且肉苁蓉对雌性肾虚小鼠有促卵泡发育、促黄体生成作用，显示了肉苁蓉对雌性肾虚小鼠内分泌功能的调节作用［4］，但对于肉苁蓉多糖的调节作用机制尚未有深入研究，基于此，本研究以更年期妇女患者的临床指征为基础复制更年期高血压燥证动物模型，并给予肉苁蓉多糖进行干预治疗，以考察肉苁蓉多糖对更年期患者内分泌系统的调节机制。1 材料与方法1． 1 动物健康雌性SPF 级SHR 大鼠65 只，体质量( 200． 0 ±15． 0) g，购自河南省实验动物中心，许可证号SCXK( 豫) 2014 － 0009。大鼠喂养普通饲料，自由饮水，避免噪声及其他环境因素干扰。1． 2 试药与试剂肉苁蓉饮片500 g( 购自张仲景大药房，产地: 内蒙古，批号20121025) ; 其他试剂均为分析纯。坤泰胶囊( 贵阳新天药业股份有限公司，批号140507) ; 内分泌指标［雌二醇( estradiol，E2) 、促卵泡生成激素( folliclestimulating hormone，FSH) 、促黄体酮生成激素( luteinizinghormone，LH) ］Elisa 检测试剂盒购自北京康为世纪生物科技有限公司; 神经递质［去甲肾上腺素( NE) 、多巴胺( DA) 、5 － 羟色胺( 5 － HT) 、神经肽Y( neuropettide Y，NPY) 、5 － 羟吲哚乙酸( 5 － HIAA) ］Elisa 检测试剂盒购自北京四正柏生物科技有限公司。1． 3 仪器与设备超声波清洗器( KQ － 300VDV，昆山市超声仪器有限公司) ; 岛津2010 型紫外可见分光光度计( 日本) ;ACCESS 型全自动化学发光免疫分析仪( 美国BECKMANCOULTER 公司) ; AB204 － S 型梅特勒电子天平( 北京梅特勒－托利多有限公司) ; 动物无创血压测量仪( BP － 100A 型，程度泰盟科技有限公司) 。1． 4 方法1． 4． 1 肉苁蓉多糖的制备取肉苁蓉饮片500 g，加10 倍量水浸泡30 min，加热提取2 次，每次1． 5 h，合并煎液( 呈棕红色) ，浓缩至2∶ 1( 体积质量比) ，离心( 3 000 r /min) 15 min，取上清液，加入3 倍量95%乙醇沉淀，冷藏并静置24 h，离心分离沉淀，将沉淀物用无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤，将洗涤后的沉淀真空干燥，采用蒽酮－硫酸法测定肉苁蓉多糖的含量，即得到肉苁蓉多糖粗品( 灰棕红色，得率为10． 13%) 。1． 4． 2 分组与给药所有大鼠购回后分笼饲养，适应1 周后分组，剔除体质量偏差较大的SHR 大鼠3 只，其余62 只按照随机数字表法分为5 组，分别为SHR 组，假手术组，模型组( 更年期高血压燥证模型) ，阳性组( 坤泰胶囊，1． 08g /kg) ，肉苁蓉高剂量组( 相当于肉苁蓉生药量11． 84 g，1． 2 g /kg) 、低剂量组( 相当于肉苁蓉生药量5． 92 g，0． 6 g /kg) ; 按照《药理实验中动物间和动物与人间的等效剂量换算》公式换算大鼠给药剂量，2015版《中国药典》肉苁蓉用量为6 ～ 10 g /d，肉苁蓉多糖粗品1 g 相当于肉苁蓉生药量9． 87 g，给药前取肉苁蓉多糖适量于灭菌生理盐水中，配制成0． 1 g /mL 的肉苁蓉多糖溶液，阳性组取内容物配制成浓度为0． 1 g /mL的水溶液，按照体质量计算每次给药剂量，正常对照组和模型组给予等剂量的生理盐水。除肉苁蓉多糖两个剂量组分别11 只大鼠外，其余三组均为10 只。各组动物连续给药4 周，观察并记录药物干预期间动物行为学特征变化。1． 4． 3 动物模型的复制参考文献方法复制更年期高血压燥证大鼠模型［5 － 6］，采用手术方法摘除双侧卵巢，复制更年期高血压大鼠，在模型复制成功1 周后，每日给予特殊饲料( 饲料配方: 普通大鼠饲料+ 0． 5%孜然+ 0． 5% 五香粉+ 10% 动物脂肪+ 2． 5% 油炸花生仁+ 2． 5% 熟芝麻) 100 g，饮用水200 mL，保持饲养笼温度和相对湿度恒定，连续造模3 周，复制更年期高血压燥证大鼠，模型复制期间密切观察动物生物学特性并及时记录。1． 4． 4 指标的检测实验结束后，采用动物无创血压测量仪检测实验前后大鼠尾动脉收缩压( 测量3 次，取平均值) 。10%水合氯醛溶液腹腔麻醉( 35 mg /kg) ，腹主动脉取血约5 mL，以3 000 r /min 速度离心15 min，分离血清于Eppendorf管，－ 20 ℃冷冻保存待测。采用放免法测定血清内分泌指标( E2、FSH、LH) 。取血后的大鼠迅速断头取脑，采用化学荧光法测定下丘脑神经递质( 5 －HT、NE、DA、NPY、5 － HIAA) 含量。1． 4． 5 统计学处理采用SPSS17． 0 数据处理系统对实验数据进行统计学分析，首先对实验数据进行正态性检验( KS 检验) ，符合正态分布且方差齐的数据采用单因素方差分析法进行多组间比较; 不符合正态分布的数据采用Chi － square 检验，所有统计比较以P ＜ 0． 05 代表差异具有统计学意义。2 结果2． 1 更年期高血压燥证大鼠模型评价更年期高血压燥证模型大鼠表现出明显的好斗、易怒、性情急躁等特点，动物饮食量降低，毛发槁枯，该症状与临床特征相一致。2． 2 各组大鼠在药物干预前后血压水平变化由表1 可以看出: 假手术组与SHR 组相比血压变化不明显，差异没有统计学意义( P ＞ 0． 05) ; 模型组大鼠血压较SHR 组有明显上升，与假手术组相比差异具有统计学意义( P ＜ 0． 05) 。2． 3 各组大鼠在药物干预前后血清内分泌水平变化由表2 可以看出: 与假手术组和SHR 组大鼠相比模型组大鼠内分泌激素水平较大，组间差异明显( P ＜0． 05) ，集中体现在E2 水平大幅度下降，FSH、LH 表达水平明显上升，提示模型组大鼠内分泌指标出现紊乱，符合更年期高血压临床特征。给予药物干预后，阳性组和CDPS 高、低剂量组大鼠的内分泌水平有不同程度的改善，其中阳性组改善作用更为明显，CDPS 高、低剂量组对E2 水平的改善程度稍弱，与模型组相比，差异没有统计学意义( P ＞ 0． 05) ，而对FSH、LH 指标改善明显，差异具有统计学意义( P ＜ 0． 05) 。2． 4 各组大鼠在药物干预前后各血清神经递质含量变化由表3 可以看出: 模型组大鼠与假手术组相比，各神经递质表达水平有显著差异( P ＜ 0． 05) ，提示模型组大鼠神经递质表达水平异常，该症状符合更年期高血压燥证临床特征。经药物干预治疗后，与模型组相比，除CDPS 低剂量组对DA 调节作用稍弱以外( P ＞0． 05) ，阳性组和CDPS 各剂量组均能不同程度的调整各神经递质的表达水平，且差异具有统计学意义( P ＜0． 05) ，其中阳性组作用强度较CDPS 高剂量组强。3 讨论更年期综合征( menopausal syndrome，MPS) 是指更年期妇女由于卵巢功能衰退，E2 分泌减少，机体对下丘脑－垂体系统的负反馈调节作用减弱，诱导下丘脑弓状核和室旁核脉冲式分泌促性腺激素释放激素( GnRH) 至门脉循环系统，刺激垂体分泌FSH、LH 增加，引起下丘脑－垂体－卵巢轴( hypothalamo － pituitary－ ovarian axix，HPOA) 功能紊乱［7］，进而影响下丘脑单胺类神经递质的平衡。神经递质在神经细胞间及神经细胞与内分泌、免疫系统之间信息传递有非常重要的作用，其中神经递质中以单胺类神经递质为主，包括儿茶酚胺类( 如DA) 、吲哚类( 如5 － HT) ，而5 － HT是控制人类情绪变化的最主要物质，直接影响机体的生理及心理功能，更年期妇女神经递质的异常变化会导致机体植物神经功能的异常，进而影响个人情绪与正常的生理功能，产生诸如失眠多梦、烦躁不安等症状［8］; 有研究证实［9］血清E2 表达水平的降低与FSH、LH 的升高与女性更年期发病有明显关系。传统中医学中，对于更年期并与明确的名称与之相对应，根据患者临床症状，可将本病与“脏燥”“盗汗”“眩晕”等疾病相关联。祖国医学认为，女子以肝为先天，以血为用，更年期妇女天癸将绝而未绝，阴血亏虚，肝失所养，疏泄不力而致肝气郁结不畅，故“肝郁”为更年期发生之标; 肝失条达，则气机不畅，血行不利，可成血瘀之弊，故“血瘀”为其主要病理表现; 肝失所养，日久累肾，肾气日衰，精血不足，阴阳失衡，故而“肾虚”为发生之本; 根据辨证，兼以祛痰、解郁、泻火之法; “更年期”实为本虚标实、虚实夹杂之证，治则当以“滋补肝肾”为主［10］，基于此，实验复制动物模型时在更年期高血压模型的基础上复制了燥证模型更符合更年期特征。肉苁蓉属于《神农本草经》“上品”类中药，为列当科植物肉苁蓉( Cistanche deserticola Y ． C． Ma) 的干燥带鳞叶的肉质茎，具有补肾壮阳、添精补髓、养血润燥、悦色延年之功效，由于其资源的匮乏，目前已列为国家二级保护植物。现代药理学研究证实，肉苁蓉有多种生物学活性，发挥该生物学活性的主要活性成分为多糖类成分，如促进机体产生白介素－ 2、促进免疫细胞增殖、促进网状内皮系统吞噬、促进胸腺成熟细胞向外周释放等免疫调节作用［11 － 13］。坤泰胶囊( 原名更年宁心胶囊) 用于更年期综合征，尤其是对绝经过渡期更年期患者更为适合，提示该制剂可直接作用于卵巢组织，促进卵巢内微循环，增强卵巢供血功能，有效改善卵巢功能; 同时组方中熟地黄、阿胶等中药能刺激已经闭锁的卵泡，恢复卵巢分泌激素的功能，调节激素分泌平衡; 延长卵巢生命力，推迟女性绝经期［14 － 15］，因此本文以坤泰胶囊作为阳性药物参与对照。从研究结果来看: 卵巢摘除前后模型组大鼠尾动脉收缩压无明显变化( P ＞ 0． 05) ，提示摘除卵巢对SHR 大鼠的应激性刺激尚未影响到血压的波动; 摘除后的大鼠内分泌指标有异常变化，大鼠在被切除卵巢后，血清中雌激素E2 表达水平显著下降( P ＜ 0． 05) ，提示此时下丘脑－垂体的负反馈作用减弱，代偿性使FSH、LH 含量上升( P ＜ 0． 05) ，导致内分泌功能出现紊乱，该变化符合更年期特征，而内分泌的紊乱会影响到下丘脑单胺类神经递质的平衡; 研究显示，CDPS高、低剂量组明显下调FSH、LH 表达水平( P ＜ 0． 05) ，但对E2 表达水平调整作用不明显，比模型组稍高，组间比较显示差异没有统计学意义( P ＞ 0． 05) 。从神经递质的角度来看: 模型组大鼠血清5 － HT、5 － HIAA含量显著上升，NPY、NE、DA 含量明显下降，该变化符合更年期妇女神经递质的变化情况; 其主要原因可能是儿茶酚胺类递质合成代谢受到抑制，而分解代谢有所增强，同时会导致大脑内5 － HT 的代谢及神经活性相应增强，打破了5 － HT /NE 的动态平衡，而5 － HT在机体中以抑制兴奋为主要效应，其指标的异常升高，会引起情绪低沉、抑郁寡欢，这也是5 － HT 能够引起神经功能低下导致抑郁症的病理生理基础之一。综上所述，肉苁蓉多糖能通过增强HPOA 功能实现肾上腺素与皮质激素的调节，FSH、LH 指标的下调和E2 含量的回升提示肉苁蓉多糖能显著改善机体的内分泌调节机制，纠正下丘脑神经递质紊乱状态，改善植物神经功能，稳定机体内环境，促进内分泌功能的改善，并加速新陈代谢，发挥改善更年期症状的作用。参考文献:［1］ 祖力胡马尔·玉素甫，郭蔚，徐燕，等． 中西医防治女性更年期高血压病的研究进展［J］． 中国医药导报，2015，33( 12) : 46 － 50．［2］ Marnocha SK，Bergstrom M，Dempsey LF． The lived experience of perimenopauseand menopause［J］． Contemp Nurse，2011，37( 2) : 229 －240．［3］ 段贤春，汪永忠，方朝晖，等． 苁归益肾颗粒对糖尿病肾病模型大鼠的治疗作用［J］． 中成药，2015，37( 3) : 473 － 477．［4］ 刘昕． 肉苁蓉对雌性肾虚小鼠生殖内分泌功能影响的研究［D］．广州: 中山大学，2010．［5］ 葛丽，林雪，李鸿霞，等． 更年期高血压燥证大鼠模型的构建［J］．中国全科医学，2015，18( 30) : 3692 － 3696．［6］ 林雪，周斌，甘庆雷． 虚燥更平散对更年期高血压大鼠血压计血压变异性影响的研究［J］． 中国全科医学，2013，16( 5) : 567 － 571．［7］ 阳松威，郭建生，王晓倩，等． 补肾疗更浸膏对去势更年期模型大鼠神经内分泌功能失调的作用［J］． 中成药，2016，38( 3) : 651 －654．［8］ Otrmann O，Doren M，Windler E，et al． Hormone therapy in perimenopauseand postmenopause ( HT) interdisciplinary S3 guideline ，associationof the scientific medical socienties in germany AWMF 015 /062－ short version［J］． Arch Gynecol Obstet，2011，284( 2) : 343 － 355．［9］ 许凤全，郑瑀，许琳洁，等． 女性更年期抑郁症与下丘脑－ 垂体－卵巢轴关系的研究述评［J］． 精神医学杂志，2016，29( 1) : 69 － 72．［10］ 许凤全，许琳洁，张莹． 98 例女性更年期抑郁症患者中医症候分布规律临床研究［J］． 世界中西医结合杂志，2014，9( 10) : 1056 －1058．［11］ Cai RL，Yang MH，Shi Y，et al． Antifatigue activyty of phenylethanoid－ rich extract from Cistanche deserticola［J］． Phytother Res，2010，24( 2) : 313 － 315．［12］ 尹若煕，李刚，俞腾飞，等． 肉苁蓉多糖对东莨菪碱所致学习记忆障碍模型小鼠在突触可塑性方面的保护作用［J］． 中国药理学通报，2014，30( 6) : 801 － 807．［13］ 崔雅婷，李刚． 肉苁蓉多糖药理作用研究进展［J］． 世界临床医学，2016，10( 1) : 252 － 253．［14］ 王艳芳，赵继军，李旻辉，等． 肉苁蓉多糖对CCl4 所致小鼠急性肝损伤的保护作用［J］． 包头医学院学报，2014，30( 6) : 3 － 5．［15］ 陈蓉，林守清，杨欣，等． 坤泰胶囊与戊酸雌二醇对更年期综合征各种症状的不同疗效分析［J］． 医学综述，2013，19 ( 10) : 1869 －1872．

〔摘 要〕 目的 探讨肉苁蓉多糖对D-半乳糖致衰老小鼠脑神经细胞的保护作用及其机制。方法 建立D-半乳糖致衰小鼠模型,观察肉苁蓉多糖对脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、神经细胞凋亡及DNA 损伤和凋亡相关基因Bcl-2 的表达情况。结果 衰老小鼠脑神经细胞MDA 含量、DNA 损伤率和细胞凋亡率明显增加(P<0. 01),SOD 活性、GSH-Px 活力及Bcl-2 基因表达明显降低(P<0. 05)。灌服肉苁蓉多糖可提高SOD 活性、GSH-Px 活力,降低MDA 含量,增强神经细胞DNA 损伤的修复能力,减少凋亡细胞数,增加Bcl-2 基因表达。结论 肉苁蓉多糖对D-半乳糖致衰小鼠脑神经细胞具有保护作用。〔关键词〕 肉苁蓉多糖;凋亡;Bcl-2肉苁蓉为国家二级保护植物,含多种活性成分,多糖是其主要活性成分之一。肉苁蓉及其有效成分具有抗疲劳、抗衰老、抗肿瘤、增强机体免疫力等药理作用,但有关肉苁蓉多糖对衰老小鼠脑神经细胞保护作用的研究尚未见报道。本实验拟探讨肉苁蓉多糖对衰老小鼠脑神经细胞的保护作用及其机制。1 材料与方法1. 1 材料 昆明种小鼠60 只,雌雄各半(牡丹江医学院实验动物中心提供)。D-半乳糖(上海试剂二厂);丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、考马斯亮蓝蛋白定量试剂盒(南京建成生物工程研究所);细胞凋亡、Bcl-2、二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒(武汉博士德生物制品有限公司);TritonX-100、二甲基亚砜、胰蛋白酶(华舜生物工程有限公司);Scout-Ⅱ半自动生化分析仪;R201D 旋转蒸发仪;真空泵,恒压稳流电泳仪,生化培养箱,OLYMPUS荧光显微镜。1. 2 方法1. 2. 1 肉苁蓉多糖的制备 肉苁蓉生药片,经热乙醇浸泡3 h 后,纱布过滤后弃滤液。药渣加水煎煮3 次,每次1 ~2 h,过滤后合并滤液。蒸发浓缩后离心去沉淀,上清液加2 ~ 3 倍体积的95% 乙醇沉淀,4℃ 静置24 h,次日4℃ 6 000 r/ min 离心20 min 收集沉淀。沉淀经水复溶、脱蛋白透析、冷冻干燥后获粗多糖。1. 2. 2 D-半乳糖致衰小鼠模型的建立 60 只昆明种小鼠随机分为青年对照组,衰老模型组,肉苁蓉多糖组,每组20 只。衰老模型组和肉苁蓉多糖组每日上午颈背部皮下注射D-半乳糖100 mg/ kg,连续30 d。青年对照组每日颈背部皮下注射相同剂量的生理盐水。每天皮下注射的同时灌胃给药,肉苁蓉多糖组灌服肉苁蓉多糖(折合生药0. 01 g/ ml),青年对照组和衰老模型组每日灌胃相同剂量的蒸馏水,连续30 d。1. 2. 3 动物处理及指标测定 30 d 后所有小鼠断头处死,立即取出脑组织,取大脑中部中性甲醛固定。余下脑组织一部分用生理盐水制成匀浆,一部分用胰蛋白酶消化制成单细胞悬液。取脑组织匀浆,按SOD、MDA、GSH-Px 试剂盒说明书操作,用半自动生化分析仪比色分析测定结果。DNA 的损伤率采用单细胞凝胶电泳法即彗星实验检测;TUNEL 法观察神经细胞凋亡数;免疫组化法检测Bcl-2 基因表达。1. 3 统计学处理 用SPSS16. 0 软件行q 检验。2 结 果2. 1 肉苁蓉多糖对小鼠脑SOD、MDA、GSH-Px、DNA损伤率和细胞凋亡的影响 灌服肉苁蓉多糖可提高致衰小鼠SOD 活性、GSH-Px 活力,降低MDA 含量,增强神经细胞DNA 损伤的修复能力,减少凋亡细胞数。见表1,图1 ~3。2. 2 肉苁蓉多糖对脑组织Bcl-2 表达强度的影响青年对照组脑组织Bcl-2 阳性表达18 例,衰老模型组为4 例,肉苁蓉多糖组为16 例,组间比较差异有统计学意义(P<0. 05)。肉苁蓉多糖可增强D-半乳糖致衰小鼠脑神经细胞Bcl-2 表达强度。见图4。3 讨 论衰老自由基学说认为人类随年龄增长的退行性变化是由自由基活性氧化损伤作用所致。D-半乳糖致亚急性中毒状态下,体内产生大量超氧阴离子自由基,对组织产生过氧化损害,这种生化和组织结构的改变与自然衰老表现基本吻合。有研究发现,细胞程序性死亡对衰老起主动作用,并引起特征性形态改变及衰老性生长停滞,衰老细胞死亡的实质就是细胞凋亡〔1〕。Bcl-2 家族蛋白在调控神经细胞凋亡和生存中发挥重要作用,家族成员包括促凋亡基因和抑制凋亡基因,抑制细胞凋亡的基因主要有Bcl-2、Bcl-xl 等。Bcl-2 基因是一种原癌基因, 具有抑制细胞凋亡的作用〔2,3〕。Bcl-2的过度表达可减少神经元程序性细胞死亡,引起特定脑区内神经元数目增多。肉苁蓉又名金笋、地精,为列当科植物肉苁蓉或德赢vwin登录 的干燥带鳞叶的肉质茎,主产于内蒙古、甘肃、新疆、青海等地;性温、味甘咸,为补肾壮阳、润肠通便之要药,有“沙漠人参”的美誉,《中国药典》2010 年版收录的肉苁蓉和德赢vwin登录 为正品药材〔4,5〕。现代药理研究也证明肉苁蓉除具有补肾壮阳、润肠通便作用外,还具有抗疲劳、抗衰老、增强机体免疫力及增强记忆力等作用。吴波等〔6〕研究发现肉苁蓉总苷能明显提高亚急性衰老小鼠抗氧化及延缓衰老的作用;尹刚等〔7〕研究发现肉苁蓉多糖通过调控抗凋亡基因表达水平抑制大鼠海马区神经元的凋亡,这与本实验观察到的结果相似。本实验结果显示灌服肉苁蓉多糖后,衰老小鼠各项衰老指标得以改善,其原因与以下因素有关:①肉苁蓉多糖作为一种功效显著的天然抗氧化剂,可清除超氧自由基、羟自由基、单线态氧等多种自由基及其代谢产物,使SOD 的消耗减少、活性上升,MDA 含量下降。②肉苁蓉多糖中含有多种人体必需的微量元素,能提高DNA 损伤的修复能力。③肉苁蓉多糖有促进代谢、调节基因表达的作用,上调Bcl-2 基因表达水平,通过Bcl-2 发挥其抗氧化作用,可减少氧自由基产生和脂质过氧化物的形成,减少体内自由基积聚引起的一系列连锁反应,减少DNA 氧化损伤,抑制氧化应激诱导的细胞凋亡的发生,对脑神经细胞起到保护作用。综上,肉苁蓉多糖具有改善衰老小鼠脑神经细胞损伤的作用,这种作用与其抗氧化、抗凋亡及上调Bcl-2表达水平有关,但Bcl-2 表达与激活途径的具体机制及与抗氧化、抗凋亡之间的关系还不清楚,将在进一步的实验中深入研究。4 参考文献1 范京惠,左玉柱,李一经. 细胞凋亡的研究进展〔J〕. 东北农业大学学报,2015;36(6):804-7.2 Ehrhardt C,Marjuki H,Wolff T,et al. Role of PI 3-kinase,Akt and Bcl-2-related proteins in sustaining the survival of neurotrophic factor-independentadult sympathetic neurons factor-independent adult sympatheticneurons〔J〕. J Cell Biol,2001;154(5):995-1005.3 Zhang H,Rosdahl I. Bcl-xL and bcl-2 proteins in melanoma progressionand UVB-induced apoptosis〔J〕. Inter J Oncol,2006;28(3):661-6.4 钟 平. 沙漠人参肉苁蓉〔J〕. 森林与人类,2004;24(11):25.5 国家药典委员会. 中国药典〔M〕. 北京:中国医药科技出版社,2010:126.6 吴 波,付玉梅. 肉苁蓉总苷对亚急性衰老小鼠抗脂质过氧化作用的研究〔J〕. 中国药理学通报,2005;21(5):639.7 尹 刚,龚道恺,刘帮会. 肉苁蓉多糖对阿尔茨海默病模型大鼠的学习记忆能力及海马神经元Bcl-2 和caspase-3 表达的影响〔J〕. 时珍国医国药,2013;24(5):1091-2.

2.2.2 洗脱方法 取经预处理的AB-8大孔吸附树脂1.0g，置于锥形瓶中，加入质量浓度为8mg／mL的德赢vwin登录 多糖溶液50mL，摇床振摇3h，抽滤，接流出液，浓缩，烘干，备用。2.2.3 实验参数优化 在参考文献［17-19］和前期单因素实验的基础上，以多糖脱色率、多糖保留率为指标计算综合评分（根据前期研究结果设置权重均为50％），选用L（3）正交实验设计对大孔吸附树脂脱色的洗脱流速（A.BV／h）、脱色时间（B.h）、上样质量浓度（C.mg／mL）进行优化，确定德赢vwin登录 多糖的大孔吸附树脂脱色最优工艺条件。德赢vwin登录 多糖大孔吸附树脂脱色的正交实验因素与水平见表1，实验设计与结果见表2，方差分析结果见表3。表1 德赢vwin登录 多糖大孔吸附树脂脱色的正交实验因素与水平Tab 1 Factors and levels of orthogonal experiment on decolorization of macroporous adsorption re-sin of C. tubulosa polysaccharide水平税税流通）BVA（色时）C（上质量度）.mg／ulL06151212203L5525表2 德赢vwin登录 多糖大孔吸附树脂脱色的正交实验设计与结果Tab 2 Orthogonal experimental design and results ondecolorization of macroporous adsorption resinof C.tubulosa polysaccharide序号税流日期期C上种质量流D多持色多糖保留 合评VMR时间座）mg／ml（空白）5*车.％分.％1111158优税KU22219册价税税2333324.983.6112339.00.25%31WLE85.186L0231225.973.77271313135.4190.0010E9321320.083.255L332125080.1852.861513证别15L%16.7万¥168.9516267157.67164.0516733159.33175.40161.06R17826额363.%由表2的极差结果可知，各因素对综合评分的影响由高到低为C＞A＞B，说明上样质量浓度对大孔吸附树脂脱色效果的影响最大，其次是洗脱流速和脱色时间。由表3的方差分析结果可知，上样质量浓度和洗脱流速对大孔吸附树脂的脱色效果均有显著影响，脱色时间的影响不显著。根据上述正交实验结果可知，大孔吸附树脂脱色的最优参数组合为A2B1G．即洗脱流速1.2 BV／h，脱色时间9h，上样质量浓度25mg／mL。表3 德赢vwin登录 多糖大孔吸附树脂脱色的正交实验方差分析结果Tab 3 ANOVA for orthogonal esperiment on decolo-rization of macroporous adsorption resin deco-lorization of C.tubulosa polysaccharide方差源离差平方称自由变坊F值F临养 星性A（使流速）66.07200五期21511900有B（色时间）7.002.003.5026019.00无（（上评量浓度）130.632.0065.3148.469.00有（差）202001352.2.4 验证实验 取质量浓度为25mg／mL的德赢vwin登录 多糖溶液3份，分别上样至填有大孔吸附树脂的层析柱（100cmx6cm）中，分别吸附9h后开始洗脱，洗脱流速为1.2BV／h．接流出液，浓缩后检测多糖脱色率、多糖保留率并计算综合评分。结果，3次重复试验综合评分分别为63.43％、63.29％、63.34％，平均值为63.35％（RSD＝0.11％，n＝3），表明此脱色方法可行。2.3 德赢vwin登录 粗多糖的初步分离2.3.1 DEAE-650M离子交换填料的预处理 先把DEAE-650M离子交换填料倒入较大的容器内，加入3～4倍体积的水浸泡，等填料大部分沉底后弃去上清液，再加入水重复以上操作3～5次，备用。2.3.2 粗多糖分离 将层析柱（80cmx4cm）垂直固定在层析架上，装上经预处理的DEAE-650M离子交换填料，将已脱色的德赢vwin登录 多糖（记为CTC）溶液250mL，以25mg／mL的质量浓度上样至层析柱中，分别用水和系列浓度的氯化钠溶液（0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mol／L）依次进行洗脱，收集洗脱液。其中，水洗脱下来的成分为中性多糖，不同浓度的氯化钠溶液洗脱得到的为酸性多糖。将收集的洗脱液按洗脱曲线合并，经浓缩、透析后，冻干得到多个多糖组分。结果，分离出1种中性多糖，记为CTZ，含量为229.2mg／g：0.1、0.2、0.3、0.4.0.5 mol／L氯化钠溶液洗脱的各酸性多糖分别命名为CT-1、CT-2、CT-3，CT-4、CT-5，含量分别为168.0、123.2、121.6、 54,4、11.2mg/g。2.4 德赢vwin登录 多糖对巨噬细胞免疫活性的影响2.4.1 细胞增殖率的检测 采用CCK-8法进行检测。实验分为空白组［

艾拉旦·麦麦提艾力“，李洋，姚军“，袁洁（1．新疆医科大学药学院，乌鲁木齐 830011；2．新疆医科大学厚博学院，新疆克拉玛依 834000）中图分类号 R284.2；R285：0629.1 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2021）12-1479-06DO1 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.12.12摘 要 目的：分离德赢vwin登录 多糖水提物，考察分离物的体外免疫活性。方法：采用AB-8大孔吸附树脂法对德赢vwin登录 多糖进行脱色，以多糖保留率和多糖脱色率为指标进行综合评分，以吸附速率、脱色时间、上样质量浓度为因素，采用正交实验优化脱色工艺并验证。采用DEAE-650M离子交换柱层析柱对脱色后的德赢vwin登录 多糖水提物进行分离。采用CCK-8法检测不用质量浪度（6.25～100μg／mL）分离前、后各种多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖率的影响，采用Griess法和酶联免疫吸附测定法检测低、中、高质量浓度（12.5、25、50μg／mL）分离前、后各种多糖对脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞一氧化象（NO），白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子a（TNF-a）释放量的影响。结果：AB-8大孔吸附树脂的最优脱色工艺为吸附流速1.2BV／h，脱色时间9h，上样质量浓度25mg／mL；3次验证实验的综合评分分别为63.43％，63.29％、63.34％，平均值为63.35％（RSD＝0.11％，n＝3）。从德赢vwin登录 多糖水提物中分离出1种中性多糖（CTZ）和5种酸性多糖（CT1、CT2．CT3、CT4．CT5），含量分别为299.2,168.0,123.2、121.6,54.4.11.2mg／g。与对照组比较，6.25～100μg／mL的CTZ（6.25pg／mL除外）、CT2、CT4、CT5和6.25μg／mL的CTC（即分离前的多糖）均可显著增加RAW264.7细胞的增殖率（P＜0.05），6.25～100μg／mL的CT1，CT3和50μg／mL的CTC均可显著降低RAW264.7细胞的增殖率（P＜0.05）。与LPS组比较，低、中、高质量浓度CTC、CT2、CT3、CT5组和低质量浓度CIZ组细胞的NO释放量均显著降低（P＜0.05），高质量浓度CT1，CT4组细胞的NO释放量均显著升高（P＜0.05）；低、中、高质量浓度各组细胞的IL-6（高质量浓度CT1组和低质量浓度CT5组除外），TNF-a释放量（中质量浓度CT1组除外）均显著降低（P＜0.05）。结论：本研究所优化的大孔吸附树脂脱色工艺稳定、可行；德赢vwin登录 多糖水提物中可分离出1种中性多糖，5种酸性多糖，其中酸性多糖CT2关键词 德赢vwin登录 多糖；脱色；分离；免疫活性德赢vwin登录 为列当科德赢vwin登录 Cistanche tubulo-sa（Schenk）Wight的干燥带鳞叶的肉质茎。现代研究表明，德赢vwin登录 含有苯乙醇苷类、环烯醚萜苷类、木脂素类、多糖类、生物碱类等多种生物活性物质，具有壮阳、通便、保肝、抗衰老、抗疲劳、增强免疫力及益智等功效“-”，可用于临床治疗肾阳不足、精血亏虚、阳痿不孕、腰膝酸软、筋骨无力、肠燥便秘等症。德赢vwin登录 多糖水提物呈棕黄色，本课题组前期实验发现，该水提物中除含德赢vwin登录 多糖外，还包含水溶性色素、蛋白质等非目标成分，这给多糖的分离纯化、生物活性研究等造成了很大的困难。传统的有机溶剂脱色处理会破坏粗提物中目标成分的化学结构，降低后者的药理活性，并引入对人体有害的成分＂。大孔吸附树脂是中药提取物中多糖脱色的常用材料，是一种性价比较高的高分子吸附材料，其物理、化学性质稳定，利用其对色素成分的选择吸附和筛分性能，可针对性地去除中药提取物中的色素，加之其可通过酸洗碱洗的方式进行再生，因而得以广泛应用＂。本研究拟利用大孔吸附树脂对德赢vwin登录 多糖水提物进行脱色处理，并采用正交实验对脱色条件进行优化；提取物经脱色处理后，依据多糖所携带基团性质的不同，拟用离子交换柱层析的方法，进一步分离德赢vwin登录 多糖中的中性、酸性多糖组分。已有研究表明，植物多糖具有免疫调节作用，是天然的免疫调节剂，可以激活补体系统和T／B淋巴细胞、巨噬细胞、自然杀伤（NK）细胞等免疫细胞，同时亦可促进多种细胞因子的释放，并促进抗体的生成等-。脂多糖（LPS）可激活巨噬细胞的炎症信号通路，诱导一氧化氮（NO）和诸如白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子a（TNF-a）等促炎细胞因子诱导的合成及释放，从而引发机体一系列的炎症反应。本研究拟建立LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞炎症模型，从德赢vwin登录 多糖对巨噬细胞增殖、炎症因子分泌和NO产生等方面的影响入手，初步评价其对机体免疫活性的影响，旨在为深入研究德赢vwin登录 多糖抗炎活性物质基础以及开发其多糖资源提供理论依据。1 材料1.1 主要仪器本研究所用主要仪器包括UV-2550型紫外-可见分光光度计（日本Shimadzu公司）、Multiskan Go型全波长酶标仪（美国Thermo Fisher Scientifie公司）、Herocell 180型CO2培养箱（上海润度生物科技有限公司）、AB135-S型分析天平（瑞士Meuler Toledo公司）、OSB-2100EYELA型油浴锅（上海爱郎仪器有限公司）、N-1001EYELA型旋转蒸发仪（上海爱郎仪器有限公司）、THZ-100型恒温摇床（上海一恒仪器有限公司）、3-18K型离心机（德国SartoriusAG公司）IX71-12FL／PH 型荧光倒置显微镜（日本Olympus公司）等。1.2 主要药品与试剂德赢vwin登录 多糖水提物（批号20180201，每克多糖相当于17.36g德赢vwin登录 ）由新疆win德赢官方 惠赠，样品于密封、阴凉、干燥处存放；蒽酮（批号20190120）购自上海科丰实业有限责任公司；无水葡萄糖（分析纯，批号：20181115）购自天津市科密欧化学试剂有限公司；DEAE-650M离子交换填料（粒径40～90μm）购自日本Tosoh公司；AB-8大孔吸附树脂（粒径3.3～1.25mm）购自天津市光复精细化工研究所；胎牛血清（FBS，批号 1966173C）购自美国Gibco公司；DMEM高糖培养基（批号AF29562465）、链霉素＋青霉素双抗（批号AB10166019）、胰蛋白酶（批号SH30042.01）均购自美国Hyclone公司；磷酸盐缓冲液（PBS，批号2035126．pH7.4）购自以色列BI公司：NO检测试剂盒（Griess法）（批号011020200430）购自北京索莱宝科技有限公司：LPS购自美国Sigma公司：CCK-8细胞增殖毒性测定试剂盒（批号BJ05203090）购自北京博奥森生物技术有限公司：IL-6（批号202012）、TNF-a（批号201922）酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒均购自上海酶联生物科技有限公司；其余试剂均为分析纯，水为纯化水。13 细胞株小鼠巨噬细胞RAW264.7购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心。2 方法与结果2.1 相关指标的检测2.1.1 色素波长的选择及多糖脱色率的计算 德赢vwin登录 多糖水提物经水适当稀释后，使用紫外-可见分光光度计进行紫外-可见全波长扫描，结果未见最大吸收波长。因溶液呈现的颜色是溶液吸收光的互补色，德赢vwin登录 多糖水提物脱色前后、稀释前后均为黄棕色，可知溶液主要吸收蓝色波段的可见光。因此，选择处于该波段吸光度较大的450nm作为检测波长，并按如下公式计算多糖脱色率：多糖脱色率（％）＝（A1-4）／Ax100％（式中，4和4分别为德赢vwin登录 多糖水提物经大孔吸附树脂处理前、后在450nm波长处的吸光度）。2.1.2 多糖质量浓度的测定及多糖保留率的计算 按2020年版《中国药典》（一部）中灵芝多糖含量测定项下的硫酸-蒽酮法处理德赢vwin登录 中多糖：使用使用紫外-可见分光光度计于625nm波长处测定吸光度（4），并根据回归方程A＝39.603c-0.077 1（R2＝0.9998）计算德赢vwin登录 多糖的质量浓度，并按如下公式计算多糖保留率：多糖保留率（％）＝o／c，x100％（式中．a和c2分别为德赢vwin登录 多糖水提物用大孔吸附树脂处理前、后德赢vwin登录 多糖的质量浓度）。该方法的方法学考察结果均符合2020年版《中国药典》（四部）的相关规定。2.2 吸附脱色实验2.2.1 大孔吸附树脂的预处理 AB-8大孔吸附树脂（类型据前期研究结果选择）用95％乙醇浸泡24h，倒去浮在水面的小颗粒树脂后，用水清洗至澄清、无醇味，然后分别用5％盐酸溶液和5％氢氧化钠溶液浸泡24h，用水清洗至中性，最后用水浸泡并封存，备用。

2.2大黄、肉苁蓉水煎液对家兔离体小肠平滑肌的收缩活动影响 大黄水煎液组、肉苁蓉水煎液组对离体小肠平滑肌的收缩频率及收缩振幅的影响均高于正常对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1、图3、图4。2.3阿托品和维拉帕米＋肉苁蓉水煎液对家兔小肠平滑肌的收缩活动影响 与正常组比较，阿托品和维拉帕米对家兔离体小肠平滑肌的收缩频率和振幅均明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）：分别加入肉苁蓉水煎液后，阿托品＋肉苁蓉水煎液组对家兔频率：18次／分最大值：6.06g最小值：4.07g平均值：5.26g图3 肉苁蓉对家兔离体小肠平滑肌收缩活动影响 平均值：3.19g图5 阿托品＋肉苁蓉对家兔离体小肠平滑肌收缩活动影响 最大值：3.25g最小值：2.78g平均值：3.02g图7 阿托品＋大黄对家兔离体小肠平滑肌收缩活动影响离体小肠平滑肌的收缩频率及收缩振幅的影响均开始逐渐增高，差异有统计学意义（P＜0.05）：但维拉帕米＋肉苁蓉水煎液组对家兔离体小肠平滑肌收缩频率和振幅的影响均不明显，差异无统计学意义（P＞0.05），见表1、图5、图6。2.4阿托品和维拉帕米加大黄水煎液对家兔小肠平滑肌的收缩活动影响 阿托品＋大黄组和维拉帕米＋大黄组家兔离体小肠平滑肌收缩频率和振幅变化与加入前比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表1、图7、图83讨论生理状态下，肠道处于不断蠕动状态，促进食糜在肠道内向远端运动，不断消化吸收营养物质，是肠道最基本和最重要的功能。小肠的运动形式的发生都是小肠平滑肌收缩的具体外部表现，可以通过观察小肠平滑肌收缩张力高低和收缩频率快慢来判断小肠兴奋性高低。研究显示，小肠平滑肌自发节律性收缩活动是由小肠纵行肌和环行肌之间的Cajal细胞产生的慢波节律而起步的，任何刺激作用于小肠平滑肌，都是在慢波的基础上产生动作电位，继而引起平滑肌的收缩。因此在适宜的条件下，离体仍然能够保持平滑肌收缩的特性与肠壁神经从的作用。扶垭东等研究发现大黄中结合蒽醌及可水解鞣质具有促进胃肠运动及泻下的作用。朱金照等研究发现大黄对大鼠小肠运动有明显的促进作用，其机制可能与促进肠道MTL及SP的释放和抑制VIP的释放有关：而李红芳等发现大黄水煎剂可使十二指肠纵行肌收缩波平均振幅降低，从而抑制其活动，使十二指肠舒张。由此可见，有关大黄对肠管平滑肌运动的作用结果也不同。但本实验发现低浓度的大黄水煎液对家兔离体十二指肠平滑肌的收缩频率、幅度均具有促进作用。肉苁蓉具有“润肠通便”的作用，其作用比较缓和，对治疗产妇、老年人和身体虚弱等人群有很好的效果四。研究证明，肉苁蓉总寡糖、去半乳糖总寡糖和半乳糖醇均能增强肠蠕动，有效改善肠肌运动功能：本实验结果显示肉苁蓉水煎液能明显促进家兔离体小肠平滑肌收缩活动，与既往研究一致。乙酰胆碱可激动肠道平滑肌细胞膜上的M受体，兴奋胃肠平滑肌并产生强烈的收缩运动。加入0.01g／ml的大黄、肉苁蓉水煎液后，对其十二指肠平滑肌收缩频率，收缩振幅的兴奋作用的影响几乎与乙酰胆碱相同。这表明大黄和肉苁蓉水煎液与乙酰胆碱对十二指肠肠平滑肌兴奋作用的影响具有同等程度的促进作用，二者对离体十二指肠收缩频率的影响作用无明显差异，但大黄能明显增加其收缩幅度。阿托品与乙酰胆碱是阻断M胆碱受体的抗胆碱药，具有松弛内脏平滑肌，解除平滑肌痉挛的作用：同时能抑制腺体分泌等作用。本实验结果显示，阿托品不能对肉苁蓉水煎液兴奋家兔离体小肠平滑肌收缩作用起到抑制作用，这说明肉苁蓉能改善阿托品对M受体阻断作用，却并不能确定肉苁对小肠平滑肌收缩功能的增强作用机制是兴奋了M受体：但是阿托品可明显抑制大黄对家兔离体十二指肠平滑肌收缩活动的促进作用，这与吕金胜等的研究结果一致，但其作用机制还有待于进一步的研究。维拉帕米作为第一类钙通道阻滞剂，对小肠平滑肌细胞上钙离子通道的阻断作用可使小肠的收缩活动变弱，自动节律的运动也会减弱。本实验结果显示，维拉帕米可明显阻断大黄、肉苁蓉对家兔离体小肠平滑肌收缩的促进作用，由此可见，二者促进家兔离体十二指肠平滑肌收缩活动的作用机制可能是促进了平滑肌细胞膜上钙离子通道开放，钙离子内流有关。综上所述，大黄及肉苁蓉对家兔离体小肠平滑肌收缩活动的幅度和频率均有促进作用，但其作用机制却有所不同：相同之处是，二者均能通过促进细胞外液中钙离子的内流而增加小肠平滑肌的收缩张力和收缩频率：不同之处是，大黄可能通过与小肠平滑肌细胞膜M受体的结合而发挥兴奋效应，但肉苁蓉却无此影响作用。参考文献：］国家药典委员会．中华人民共和国药典：2015年版一部［M）．北京：中国医药科技出版社，2015．（2］廖博，陈明飞，伍莉，大黄浸泡液对家兔离体十二指肠平滑肌运动的影响中国鲁医杂志，2015.51（11）：91-92．［］刘亭秀，宋庆，李静，等.核桃叶提取液对家兔离体小肠平滑肌收缩活动的影响［右江民族医学院学报，2015,37（1）：11-13．HKoeppenBM,SaantonBA.Berne&Levy Physiology(M].7th ed. Se Louic Esevier,2017.］扶垭东，张晶，刘额，等生、熟大黄饮片及其活性组分的泻涩双向调节作用分析I中国实验方剂学杂志，2019,25（11）：127-132同朱金照，冷思仁，史洪涛，等，大黄促进肠道运动的机制探讨01．解放军药学学报，2002（6）：339-340,346．［］李红芳，汪龙德，郑天珍，等.大黄水煎剂对离体兔 Oddi 括约肌和十二指肠平滑肌收缩活动的影响［1．兰州医学院学报，2003(3):1-2.9.［8］高云佳，姜勇，戴昉，等，肉苁蓉润肠通便的药效物质研究1中国现代中药，2015,17（）307-310,314．例吕金胜，何风慈，刘震东，等，大黄素对动物离体回肠收缩作用的影响（［］中国药业，2000.3（11）：25．이吴瑞峰，刘俊峰，高杨，等，钙离子拮抗剂维拉帕米对人食管下括约肌舒缩的调节机制［J］中华胸部外科电子杂志20152(3):19-22收稿日期：2020-11-08；修回日期：2020-12-07编辑／宋伟

于向鹏，马春梅，马旭东，刘雨娟（河西学院医学院，甘肃 张掖 734000）摘要：目的 比较大黄及肉苁蓉水煎液对家兔离体小肠平滑肌收缩性的影响。方法 取健康成年新西兰家兔十二指肠肠段，随机分为8组，分别放入恒温灌流装置中给予不同干预，正常对照组加入0.2ml生理盐水；阳性对照组加入0.2ml浓度为1：10000的乙酰胆碱；大黄水煎液组加入0.01g／ml的大黄0.2ml；肉苁蓉水煎液组加入0.01g／ml的肉苁蓉0.2ml；维拉帕米＋大黄组先加入维拉帕米0.2ml，待波形稳定后再加入大黄水煎液0.2ml；阿托品＋大黄组、维拉帕米＋肉苁蓉组和阿托品＋肉苁蓉组的操作方法同维拉帕米＋大黄组。进入VBL-420F系统，记录其收缩张力和频率的变化。结果 阳性对照组、大黄水煎液组、肉苁蓉水煎液组对家兔离体小肠平滑肌收缩频率和收缩波幅均大于正常对照组，阿托品和维拉帕米对家兔离体小肠平滑肌的收缩频率和振幅低于正常对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；加入肉苁蓉水煎液后，阿托品＋肉苁蓉水煎液组对家兔离体小肠平滑肌的收缩频率及收缩振幅的影响均开始逐渐增高，差异有统计学意义（P＜0.05）；但维拉帕米＋肉苁蓉水煎液组对家兔离体小肠平滑肌收缩频率和振辐的影响均不明显，差异无统计学意义（P＞0.05）；阿托品＋大黄组和维拉帕米＋大黄组家兔离体小肠平滑肌收缩频率和振幅变化与加入前比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 大黄及肉苁蓉对家免离体小肠平滑肌收缩活动均有促进作用，此影响作用均可被维拉帕米阻断，但阿托品能阻新大黄的促进作用却无法阻断肉苁蓉的促进作用。关键词：大黄；肉苁蓉；离体小肠平滑肌；收缩活动中图分类号：R285.5            文献标识码：A           DOI:10.3969/j.isn.1006-1959,2021.06.025文章编号：1006-1959（2021）06-0097-04Effect of Decoction of Rhubarb and Cistanche on the Movementof Isolated Small Intestine of RabbitsYU Xiang-peng,MA Chun-mei,MA Xu-dong,LIU Yu-juan(Medical Sehool of Hexi University,Zhangye 734000,Gansu,China)Abstract Objective To Compare the efects of deenction of habat and cistanche on the contractilty of bolated rabbit small intestine smnth muscle Methods The dundenal intetines of healthy atul Now Zealnd abbias wre tandenly dinidel inte & groupe,and thry wee put into a constant temperatue perfusion device for different interntions The momal contel goup was alded with 02 el of temal saline,The positive contel group wa abded with 02 el of aetylholine with a comentraion of l10000,the hutarb decuetion goup w abled with 02 el of 0.01 g/l of rhharb:Cistanche citanche decation group add 0.01 l catanche 02 ml:Verapanil+uburb group fint add 02ml of Verapamil, and then ald 0.2 ml of Rhbarb drcoction aher the wareform is stabile,The aperation metod of ampine +hubab goup,wrapamil-cistanche goup and atropinet eltanche goup is the same as erapamil+hubarh group.Enter the VBL-420F system and eeund changes in its contraction temsion and imqueney. Results The contractile frequrncy and amplitade of small tetine smth mande in pesitive contal goup rhubarh decuction goup and Cistanche deserticola Decaction geup were higher than those in normal contrl guup shile the contractile Eepuracy and amplitute of small intestine smonth muscle in atmpine and verapanil goup wre lower than those in ormal contral goup(Pe0.05)The efects of eepaal and Cistanche deserticola Devaction gmup on the contraction ireepurncy and amplitule of issaed nal atetinal smoeth mascle of rabbits wem nat significant(P>0.05):the elfects of ampine and rhuharb gop and ragumil ad hutarh poup on the contraction Eeuraey and amplitade of iselated small intestinal smontlh nsele of rabbits wew t sigmificat (P0.05)Thee wa  sigifirant dffereuce in the tratile frepurncy and amplitate of intestinal smoh nausele before and afier the addition(P0.05).Conclusion Both hatarb and Catanche can peonte the contraction of isolated small intestinal smooth mucle of rabbi The ame is that thie efet an he borked ty epanil,The differce s that atmpine van block the pometion of rhharh but cannot black the proetion of ChtancteKey words:RhuhahcCistancheJsolatel small intrstinal smnth mscle,Contration activty大黄（hubarh）为蓼科植物的干燥根和根茎，主产于我国青海、甘肃、四川等地。有泻下攻积，清热泻火，利湿退黄等功效，现代药理学研究发现大黄可通过促进大肠蠕动、离子分泌和减少水分吸收的机制发挥泻下的功效。肉苁蓉（cistanche）为列当科植物肉苁蓉的肉质茎，产于宁夏、甘肃、新疆等地，具有补肾阳、益精血、润肠通便等作用。目前有关大黄和肉苁蓉通便作用的报道较多，但二者是否对离品（河南润弘制药股份有限公司，生产批号：H41020324）：维拉帕米（天津市中央药业有限公司，生产批号：H1202005D；肉苁蓉（甘肃省张掖市广泰药材有限责任公司，批号：190520和大黄饮片（甘肃省张掖市广泰药材有限责任公司，批号：180913）。1.2方法1.2.1大黄、肉苁蓉水煎液制备 肉苁蓉水煎液的制备：称取50g肉苁蓉饮片，加水500ml，浸泡30min，煎煮浓缩至300ml，装瓶消毒：药渣加500ml的水继续煎煮浓缩至250ml，合并2次的药液，即得含生药91mg／ml肉苁蓉水煎液。实验操作时将药物稀释成浓度分别为：0.01g／ml的肉苁蓉稀释液备用。大黄水煎液的制备同肉苁蓉水。1.2.2 离体小肠标本的制备 家兔小肠标本的制备：实验前家兔禁食12h，自由饮水。木棒敲击其头部，昏迷后快速沿腹正中线开腹，迅速取出十二指肠，分别剪取2.0～3.0cm的肠段数段，用温热的台式液将肠内容物洗净，置于37℃新鲜台氏液中备用，同时将台式液定容至10ml，灌流液的温度为（37.0±0.5）℃，并立即通入含95％02和5％CO2的混合气体。随后将该小肠段随机分配至各实验小组中，小肠段一端用细线固定于张力换能器上，另一端固定于通气管钩上，轻放于灌流管中，更换台式液。将张力换能器与生物信息采集分析系统1、2、3、4、5、6、7、8通道连接，选择实验项目：生理学实验-消化系统-离体小肠平滑肌灌流实验，设置控制参数（增益G：1 mv、时间常数T：3s、滤波F：50 Hz、扫描速度：5s／div），记录1min内肠段收缩变化情况。1.3实验分组及处理①正常对照组：在灌流液中加入0.85％ NaCl 0.2ml；②阳性对照组：加入浓度为10mol／L的Ach 0.2ml；③大黄水煎液组：加入浓度为0.01gml的大黄水煎液0.2ml：④肉苁蓉水煎体小肠平滑肌的收缩活动的影响，报道少见。因此，本研究主要通过观察大黄和肉苁蓉对离体小肠平滑肌收缩性的影响，探讨二者促进小肠运动的可能作用机制，旨在为大黄和肉苁蓉的应用提供理论依据。1材料与方法1.1实验动物及材料 健康成年新西兰家兔（张掖市誉诚医药生物科技有限公司提供）12只，雌雄不限，体重（2.0±0.5）kg。生物信息采集与分析系统（成都泰盟科技有限公司提供，型号：BL-420F）：离体组织器官恒温灌流装置（成都泰盟科技有限公司提供，型号：B20-420F）：生物张力传感器（成都泰盟科析科技有限公司，型号：FT-100）：乙酰胆碱（上海笛柏化学品技术有限公司，生产批号：P／NK900017）：阿托平均值：2.98g图1 家兔离体小肠平滑肌正常收缩活动液组：加入浓度为0.01g／ml的肉苁蓉水煎液0.2ml：⑤阿托品＋大黄组：先加入浓度为10-mol／L的阿托品0.2ml，等波形稳定后，再加0.01g／ml的大黄水煎液0.2ml：⑥维拉帕米＋大黄组：先加入浓度为10＋mol／L的维拉帕米0.2ml，待波形稳定后，再加0.01g／ml的大黄水煎液0.2ml：⑦阿托品＋肉苁蓉组：操作同⑤和⑥，剂量同④：⑧维拉帕米＋肉苁蓉组：操作同⑤和⑥，剂量同④。1.4统计学方法 采用SPSS 20.0进行统计分析，计数资料以（）表示，组间显著性差异采用多因素方差分析，P＜0.05表明差异有统计学意义。2结果2.1家兔离体小肠平滑肌正常收缩活动 将家兔离体小肠平滑肌放入台式液中，自发活动规律且稳定。阳性对照组对家兔离体小肠平滑肌收缩频率和收缩波幅均大于正常对照组（P＜0.05），具有显著增强效应，见表1、图1、图2。表1 大黄和肉苁蓉水煎液对十二指肠平滑肌收缩频率、振幅的影响（n＝20，x±s）药品收缩频率（次／min）收缩振幅（g）正常对照组15.20±1.053.40±0.40阳性对照组24.12±2.956.98±0.54大黄水煎液组23.65±2.40*6.78±0.85肉苁蓉水煎液组18.05±1.316.09±0.78阿托品13.05±1.08*3.04±0.25维拉帕米11.05±1.021.19±0.19阿托品＋肉苁蓉组14.45±1.63*%43.82±0.4244维拉帕米＋肉苁蓉组11.58±1.53%1.50±0.40%阿托品＋大黄组13.16±1.03*-3.25±0.324维拉帕米＋大黄组12.28±1.53*41.19±0.20#注：与正常组比较，“Pk0.05；与肉苁蓉组比较，P＜0.05；与大黄组比较，P＜0.05；与阿托品比较，＊P＜0.05 最大值：6.98g最小值：3.42g平均值：5.20g图2 乙酰胆碱对家兔离体小肠平滑肌收缩活动影响

郭小莉， 高如意， 许明君， 刘文英， 柏伟荣（江苏康缘药业股份有限公司，江苏连云港222001）摘要：目的 优化复方肉苁蓉酒提取工艺。方法 以浸提时间、基酒度数、基酒倍数为影响因素，松果菊苷＋毛蕊花糖苷、红景天苷、总皂苷量为评价指标，在正交试验基础上分别采用AHP法、CRITIC法、AHP-CRITIC混合加权法优化提取工艺。结果 AHP-CRITIC混合加权法所确定的权重系数更科学合理，最佳条件为浸提时间42d，基酒度数60％，基酒倍数8倍，松果菊苷＋毛蕊花糖苷、红景天苷、总皂苷量分别为2.03、2.56、2.09g，综合评分为98.87分。结论 该方法重复性良好，稳定可行，可用于提取复方肉苁蓉酒。关键词：复方肉苁蓉酒：提取；正交试验：AHP法：CRITIC法；AHP-CRITIC混合加权法中图分类号：R284.2 文献标志码：B 文章编号：1001-1528（2021）09-2469-05doi:10.3969/j.issn.1001-1528.2021.09.036复方肉苁蓉保健酒由德赢vwin登录 、红景天、西洋参、枸杞4味中药组成。方中肉苁蓉补肾气，养精血；红景天补气健脾：西洋参补气养阴，清热生津，加强红景天益气之功：佐以补肝肾益精血之枸杞，诸药合用，平补阴阳，调养五脏，温而不燥，补而不腻，无阴阳偏盛之弊，共奏补肾填精益气之功效，具有缓解体力疲劳、增强免疫力的双重保健功效。保健酒是指以酿造酒、蒸馏酒或食用酒精为酒基，以中药材为原材料，利用萃取、浸提等技术，得到中药有效成份进而配制所得的具有一定保健功能的本品，它是否具有保健功能，中药材有效成分的提取是关键。本实验以复方肉苁蓉保健酒中君药肉苁蓉的功效成分松果菊苷、毛蕊花糖苷，红景天中红景天苷及产品中总皂苷为指标，采用层次分析法（AHP）结合CRITIC法计算权重系数，求出综合评分，正交试验优化该方提取工艺，以期在保证其功效的基础上为后续相关开发提供依据。1 材料1.1 仅器 Agilent 1200高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）：LC-20AT液相色谱仪、UV-2700型紫外可见分光光度计（日本岛津公司）：XP6、MS-105DU电子分析天平（瑞士梅特勒托利多公司）。1.2 试剂与药物 松果菊苷（纯度89.7％，批号111670-201706）、毛蕊花糖苷（纯度92.5％，批号 111530-201713）、红景天苷（纯度98.8％，批号 110818-201709）、人参皂苷Re（纯度97.4％，110754-201626）对照品均购自中国食品药品检定研究院。德赢vwin登录 购自新疆北达苁蓉生物科技有限公司，红景天购自亳州市国一堂中药饮片有限公司，西洋参购自云南白药文山七花有限责任公司，枸杞购自江苏国苏中药材有限公司，经检验均符合2015年版《中国药典》一部规定。乙腈、甲醇为色谱纯，购自美国天地公司；其他试剂均为分析纯：水为超纯水。2 方法与结果2.1 松果菊苷、毛蕊花糖苷含量测定 参考文献 B-4］报道。2.1.1 对照品溶液制备 精密称取对照品适量，置于棕色量瓶中，50％甲醇溶解定容至刻度，即得（松果菊苷、毛蕊花糖苷质量浓度分别为1.6765、0.629mg／ml）。2.1.2 供试品溶液制备 精密量取本品1ml至2ml量瓶中，50％甲醇溶解定容至刻度，超声处理15min，50％甲醇定容至刻度，离心，取上清液，即得。2.1.3 色谱条件 Intersustain Swif C色谱柱（4.6mmx 250mm，5μm）：流动相乙腩（A）-0.1％甲酸（B），梯度洗脱（0-30 min．15％-27％A：30-40min，27％A）：体积流量1.0ml／min：检测波长330mm：柱温30℃：进样量10μL。色谱图见图1．  1．松果菊苷 2．毛蕊花糖苷图1 松果菊苷、毛葛花糖苷HPLC 色谱图2.1.4 线性关系考察 精密吸取“2.1.1”项下对照品溶液5ml，置于10ml棕色量瓶中，50％甲醇定容至刻度，摇匀，逐级稀释，分别吸取10pL，在“2.1.3”项色谱条件下进样测定。以峰面积为纵坐标（Y），对照品质量浓度为横坐标（X）进行回归，得方程分别为松果菊苷Y-12 282 607.55X＋429 234.77（R2＝0.999 2），线性范围0.0524～ 1.6765mg／ml：毛蕊花糖苷Y＝16 956 179.10X＋64 108.76 （R2＝0.999 5），线性范围0.0197～0.6290mg／mL。2.1.5 精密度试验 取供试品溶液及“2.1.4”项下对照品溶液 DZ1、DZ4、DZ6．在“2.1.3”项色谱条件下进样测定6次，测得DZ1、DZ4、DZ6中松果菊苷峰面积 RSD分别为0.23％、0.44％、0.31％，毛蕊花糖苷分别为0.44％、0.54％、0.52％，而供试品溶液中两者峰面积RSD分别为0.10％、0.16％，表明仪器精密度良好。2.1.6 稳定性试验 精密吸取“2.1.4”项下对照品溶液DZ4及供试品溶液，于0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24h在“2.1.3”项色谱条件下进样测定，测得2种溶液中松果菊苷峰面积RSD分别为0.76％、0.23％。毛蕊花糖苷分别为1.42％、0.18％，表明溶液在24h内稳定性良好（C）核市附据、2项品对2.1.7 重复性试验 取本品适量，按“2.1.2”项下方法制备6份供试品溶液，在“21.3”项色谱条件下进样测定，测得松果菊苷，毛蕊花糖苷含量RSD分别为1.45％、1.40％，表明该方法重复性良好。2.1.8 加样回收率试验 按照供试品溶液中松果菊苷、毛蕊花糖苷含量的100％水平，取对照品溶液适量于2ml棕色量瓶中，氮吹至干，加入本品0.5ml，平行6份，按“21.2”项下方法制备供试品溶液，在“21.3”项色谱条件下进样测定，计算回收率。结果，松果菊苷、毛蕊花糖苷平均加样回收率分别为100.32％、99.42％，RSD分别为1.70％、1.85％。2.2 红景天苷含量测定2.2.1 对照品溶液制备 精密称取红景天苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.852mg该成分的溶液，摇匀，即得。2.2.2 供试品溶液制备 精密量取本品1ml，置于2mL量瓶中，甲醇定容至刻度，超声处理20min，放冷，甲醇补足减失的质量，摇匀，离心，取上清液，即得。2.2.3 色谱条件 参考文献［B-6］ 报道，Agilent Ca色谱柱（4.6mmx250mm，5μm）：体积流量1mL／min：流动相乙腩（A）-0.3％磷酸（B），梯度洗脱（0-20mim，3％～5％A：20～40 min，5％A）：柱温35℃；检测波长275mm；进样量5μL．色谱图见图2， B.供试品1．红景天苷图2 红景天苷HPLC色谱图2.2.4 线性关系考察 精密吸取“2.2.1”项下对照品溶液适量，置于10mL量瓶中，甲醇逐级稀释并定容至刻度，分别吸取5p止，注入高效液相色谱仪，在“2.2.3”项色谱条件下进样测定，以峰面积为纵坐标（Y），对照品质量浓度为横坐标（X）进行回归，得方程为Y＝10534278.65X＋334 643.51（R2＝0.9998），线性范围 0.027-0.852mg/ml.2.2.5 精密度试验 精密吸取“2.2.4”项下同一份对照品、供试品溶液，在“2.2.3”项色谱条件下进样测定6次，测得2种溶液中红景天苷峰面积RSD分别为0.57％0.98％，表明仪器精密度良好。品、供试品溶液，于0、2、4、8、12、16、20、24h在“22.3”项色谱条件下进样测定，测得2种溶液中红景天苷峰面积RSD分别为0.49％、1.05％，表明溶液在24h内稳定性良好。2.2.7 重复性试验 取本品适量，按“2.2.2”项下方法制备6份供试品溶液，在“2.2.3”项色谱条件下进样测定，测得红景天苷含量RSD为1.45％，表明该方法重复性良好。2.2.8 加样回收率试验 按照供试品溶液中红景天苷含量的100％水平，取对照品溶液（0.4191mg／mL）0.2mL置于2ml棕色量瓶中，加入本品0.5mL，平行6份，按2.2.2”项下方法制备供试品溶液，在“2.2.3”项色谱条件下进样测定，计算回收率。结果，红景天苷平均加样回收率为101.48％，RSD＜3％。2.3总皂普含量测定 2.3.1 对照品溶液制备 精密称取人参皂苷Re对照品适量，甲醇制成每1ml含2mg该成分的溶液，据匀，即得。取100μL至蒸发皿中，置于60℃水浴中挥干，加1mL纯化水溶解，10ml注射器作为层析柱，内装3cm Ameitite-XAD-2大孔树脂，上加1cm中性氧化铝。先用25ml．70％乙醇洗柱，弃去洗脱液，再用25ml．水洗柱，弃去洗脱液。将1.0mL对照品溶液加入层析柱中，先用25ml水洗柱。弃去洗脱液，再用25ml．70％乙醇洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置于60℃水浴再挥干，用于显色。23.2 供试品溶液制备 取本品适量，离心，精密量取1ml。置于10ml量瓶中，37％乙醇定容至刻度，摇匀，吸取1mL。置于水浴中挥干，1ml水溶解残渣，进行柱层析，以下操作同“2.3.1”项。2.3.3 吸光度测定 在已挥干的对照品、供试品溶液中精密加入0.2ml．5％香草醛冰乙酸溶液，残渣溶解，再加0.8ml高氯酸，混匀后移入10ml比色管中，60℃水浴加热10min，取出，冰浴冷却，精密加入5.0ml．冰乙酸，摇匀，在560mm波长处测定吸光度。2.4 正交试验 在前期单因素试验基础上，并结合《保健食品注册与备案管理办法》中关于保健酒的酒精度数和食用量的规定，以松果菊苷＋毛蕊花糖苷、红景天苷、总皂苷量为评价指标，浸提时间（A）、基酒度数（B）、基酒倍数（C）为影响因素，采用1、（3）正交试验优化提取工艺，计算综合评分Y，公式为Y＝（松果菊苷＋毛蕊花糖苷总量／最高总量x权重系数＋红景天苷含量／最高含量x权重系数＋总皂苷含量／最高含量x权重系数）x100,1，（3＇）正交试验优化提取工艺，结果见表1。表1 试验设计与结果试验号因素松果菊营＋毛蕊红景天管／g总皂营／gY综合评分1分4浸提时间日B基酒度数／％C 基酒倍数／倍D（空白）花糖苷／g135(1)55(1)6(1)11.421.801.3160.84235(1)60(2)8(2)21.732.571.9179.84335(1)65(3)10(3)31.902.202.1185.52442(2)55(1)8(2)32.092.932.3295.97542(2)60(2)10(3)12.202.122.4196.97642(2)65(3)6(1)21.652.151.4269.51749(3)55(1)10(3)21.951.752.1886.07849(3)60(2)6(1)31.791.951.6275.07949(3)65(3)8(2)12.142.852.2696.12K175.40080.96068,47084,640----K287.48083.95390,64378.473----K385.75083.71789.51785,517--