摘 要: 肉苁蓉属于药食同源物质, 是列当科多年生草本寄生植物, 具有抗氧化、抗疲劳等功效。肉苁蓉有“沙漠人参”之称, 在许多传统中医药古籍中被描述为具有抗衰老特性。肉苁蓉抗衰老功效备受人们的关注, 成为保健食品研究的热点之一。本文从自由基学说、端粒学说、免疫学说、脑中心学说以及干细胞移植、热量限制、中医衰老等方面阐述了抗衰老的机制, 并分别从肉苁蓉多糖、总苷、苯乙醇苷类物质、提取物详细论述了肉苁蓉生物活性成分的抗衰老作用, 以期为肉苁蓉抗衰老产品的开发提供一定的参考依据。关键词: 肉苁蓉; 抗衰老; 衰老学说; 多糖类; 苯乙醇苷类物质0 引 言2020 年1 月, 国家卫生健康委员会、国家市场监督总局正式公布, 对肉苁蓉等9 种物质开展按照传统既是食品又是中药材的物质(简称食药同源物质)进行生产经营试点工作, 肉苁蓉(荒漠)名列其中。肉苁蓉(Cistanches)是列当科多年生草本寄生植物,有“ 沙漠人参” 之称。国内主要分为荒漠肉苁蓉(C.deserticola Y. C. Ma)、德赢vwin登录 [C. tubulosa (Schenk)Wight]、沙苁蓉(C. sinensis G. Beck)和盐生肉苁蓉[C.salsa(C. A. Mey) G. Beck], 分布在内蒙古、新疆、宁夏、甘肃及青海等地[1]。研究证明肉苁蓉及其有效成分具有抗氧化、抗疲劳、抗衰老、抗肿瘤、抗菌、保肝护肝、调节免疫能力、改善性功能、调节中枢神经系统、调理内分泌、提高记忆能力、预防老年痴呆、抗骨质疏松和促进骨形成等功效[2‒9]。1993 年, 国际医学会日内瓦年会上发布一条新闻: 中国阿拉善盟查干希热跻身世界长寿之乡。由中外专家组成的调查小组不惜花费4 个月的时间对查干希热进行调查,发现只有139 人的查干希热(嘎查)村有百岁老人4 人, 人均寿命87.5 岁; 高血压、胃病、肾病、前列腺肥大等常见病的发病率极低。专家组发现这与当地居民的饮食结构有关,其中两点就是这里的人们炖羊肉习惯放入肉苁蓉, 还有饮自家酿的苁蓉酒。因而肉苁蓉抗衰老功效备受人们的关注,成为保健食品研究的热点之一。本文主要综述了肉苁蓉抗衰老方面的功效, 从衰老学说方面区分肉苁蓉抗衰老作用机制, 分析衰老学说与肉苁蓉及其活性成分的关联, 以期为肉苁蓉保健食品的开发提供参考。1 衰老学说人体衰老由多种遗传和环境等因素相互影响, 随着时间推移表现为全身整体性、渐进性、衰退性和不可逆性的机体变化和功能紊乱[10]。衰老还会引起基因突变积累、代谢异常、免疫功能低下等[11], 衰老学说见图1。1.1 自由基学说异常活泼的带电分子或基团称为自由基, 常见的自由基主要包括超氧化自由基、过氧化脂质、过氧化氢、单线态氧以及羟基自由基。自由基具有很强的生物活性,可以破坏DNA、蛋白质、脂质, 造成细胞突变、衰老和凋亡, 这表明氧化细胞的逐渐积累是细胞衰老的基本驱动因素。此外, 随着时间推移自由基学说在衰老研究方面取得了很大进步[12]。自由基学说在1956 年由HARMAN[13]首次提出, 认为过量的自由基可通过过氧化作用导致细胞膜上不饱和脂肪酸的脂质过氧化; 攻击核酸造成DNA突变或复制异常; 破坏蛋白质多肽链, 改变蛋白质结构;降低酶活性等; 它们会破坏细胞膜结构的完整性, 对细胞功能造成严重损害, 最终导致细胞衰老甚至死亡, 从而对机体造成损害, 导致衰老或死亡。随着研究的深入,自由基学说越来越多的强调线粒体DNA(mtDNA)突变和mtDNA 的缺失积累[14]。1.2 端粒学说端粒是染色体末端的小段DNA-蛋白质复合体, 特殊的“帽子”结构可以保持染色体的完整性、控制细胞分裂周期。前苏联Alexei Olovnikov 教授于1973 年首次提出了衰老的“端粒学说”, 认为由于DNA 聚合酶功能障碍,细胞在每次分裂过程中都不能完全复制它们的染色体,DNA 每复制一次, 端粒DNA 就会丢失40~100 bp[15], 随着细胞分裂次数的增加, 端粒DNA 缩短到一定限度时,难以维持染色体的稳定性, 细胞便失去了分裂增殖能力而衰老, 直至死亡[16], 端粒长度作为生物老化的标志物,与各种老化相关疾病有关[17], 有研究发现在生殖细胞和干细胞中端粒酶的增加可以使得端粒延长, 从而达到延缓衰老的作用。1.3 免疫学说机体免疫系统分为先天免疫系统与特异性免疫系统,先天免疫系统作为一种迅速的抗感染作用存在于所有动物和植物之中, 研究较多的是自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)先天性防御已感染的宿主细胞[18], 随着年龄的增长,中性粒细胞和巨噬细胞表现为多种功能明显下降[19‒20]; 特异性免疫主要包括细胞免疫与体液免疫, 经人工预防接种使机体获得抗感染能力。根据免疫学说理论, 衰老与免疫细胞状态之间存在平行关系。也就是说, 在抗衰老的过程中, 机体的免疫功能呈现渐进性的变化, 包括机体对感染的反应能力和持久的免疫记忆能力。免疫衰老的最初原因是胸腺因年龄增长而萎缩, 从而引起免疫系统的一系列生理变化[21], 同时免疫功能的下降又会加速衰老的进程, 使老人易患免疫缺陷病, 例如感染癌症, 脑、心、肾等重要器官的动脉硬化。所以可以提高免疫细胞水平, 清除炎症因子, 为正常健康的细胞提供良好的生存环境, 减少疾病的发生, 达到延缓衰老的目的, 随着人们对免疫细胞的关注度逐年升高, 免疫学说也越来越多的被提及。1.4 脑中心学说脑中心学说认为在中枢神经系统内, 存在一个控制衰老的神经机构-衰老钟, 由单胺类物质支配其运转, 其中,去甲肾上腺素(norepinephrine, NE)能延长寿命, 而5-羟色胺(C10H12N2O, 5-HT)会促进衰老。在神经系统中存在一种单胺氧化酶(monoamine oxidase, MAO), MAO 同工酶分为A、B 2 种形式[22], 通常认为B 与衰老正相关[23]。1.5 其他学说干细胞移植通过人工的方式向机体输注干细胞, 让新细胞代替衰老的细胞发挥作用, 同时提高干细胞更新能力与分化能力[24]。热量限制也是一种特殊的延缓衰老手段,研究发现经过限制饮食的秀丽隐杆线虫可以提高免疫力,增加寿命, 而过度饮食的线虫会抑制先天免疫力, 从而加速衰老[25]。肾虚衰老学说是中医衰老学说中提出的, 据报道, 肾虚在老年人中所占比例最高, 流行病学调查显示,这一比例超过70%, 且肾虚与年龄成正相关, 而中医衰老学说常与免疫学说契合。2 肉苁蓉生物活性成分抗衰老作用肉苁蓉含有多种生物活性成分, 主要包括苯乙醇苷类物质、环烯醚萜及其苷类、木质素及其苷类、多糖类、蛋白质、氨基酸、甜菜碱等[26]。还有少量的其他化合物, 如单萜类、类固醇或其糖苷、脂肪酸和一些微量元素等[27]。2.1 多糖类研究表明, 肉苁蓉多糖具有抗衰老功能[28-30]，主要是通过抗氧化、改善学习记忆、增强免疫功能和端粒酶活性等方面起到抗衰老作用, 见表1。马慧等[39]研究证明多糖可以改善衰老小鼠的学习记忆能力, 其机制可能与脑内海马区环磷酸腺苷(cyclicadenosine monophosphate, cAMP)反应元件结合蛋白环磷腺苷效应元件结合蛋白(cAMP-response element bindingprotein, CREB)表达水平的上调有关。武燕等[38]发现肉苁蓉多糖可以通过cAMP/ 蛋白激酶A (proteinkinase A,PKA)/CREB 信号通路影响脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)的分泌, 并通过影响突触可塑性, 提高多巴胺、谷氨酸以及去甲肾上腺素的释放改善衰老小鼠的学习记忆能力。徐辉等[35] 发现肉苁蓉多糖可以显著降低丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量和磷脂酶(phospholipasea2,PLA2)活性, 提高Ga2+-ATP 酶活性、肝线粒体膜流动性, 改善线粒体能量代谢, 提高呼吸链复合体I+III、II+III 活性,说明肉苁蓉多糖能通过提高衰老大鼠的肝线粒体抗氧化能力和改善线粒体能量代谢, 起到延缓大鼠衰老的作用[36]。吴波等[32]研究发现, 肉苁蓉多糖可以增强衰老小鼠的抗脂质过氧化作用, 使血清与肝脏中的超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性升高和过氧化脂质含量降低, 说明肉苁蓉多糖可以防止亚急性小鼠的脂质过氧化损伤。孙云等[40]使小鼠连续4 周吸入臭氧, 建立肺衰老模型,并检测肉苁蓉多糖耐缺氧能力, 结果表明肉苁蓉多糖可以延长衰老小鼠的耐缺氧时间, 增加SOD 活力, 降低MDA含量, 延缓肺细胞线粒体、板层小体等超微结构的退变,明显延缓了实验性小鼠肺的生理性退化和细胞形态学退变;同时, 肉苁蓉多糖可以降低NO 浓度, 抑制肺组织细胞凋亡, 从而改善衰老小鼠肺组织细胞的退行性变化[33]。另外,孙云等[34]采用D-半乳糖模型小鼠, 观察肉苁蓉多糖对衰老小鼠肺的抗氧化作用, 发现肺与血浆中的谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)活性提高, 说明肉苁蓉多糖对肺组织具有一定的抗氧化能力, 可以延缓肺的衰老。张洪泉等[37]通过建立D-半乳糖亚急性衰老小鼠模型,检测灌胃肉苁蓉多糖的小鼠MDA 含量、端粒酶活性、白细胞介素-2 (interleukin-2, IL-2)含量、淋巴细胞增殖能力、以及腹腔巨噬细胞的吞噬功能, 结果发现肉苁蓉多糖可以拮抗自由基损伤, 增强衰老小鼠心、脑组织端粒酶活性以及机体免疫能力, 延缓D-半乳糖致衰老小鼠的衰老速度,从多方面论证肉苁蓉多糖具有延缓衰老的作用。此外, 肉苁蓉多糖还具有抗疲劳作用[29]; 能显著提高SAM-P8 小鼠的生存率, 改善SAM-P8 小鼠的肠道菌群紊乱[30]; 且可以作为抗氧化剂抑制脂质氧化修饰, 保护细胞不受衰老大鼠皮肤中氧化分子的损伤[41]。2.2 总 苷研究表明, 肉苁蓉总苷主要通过抗氧化、减少脑损伤和调节机体免疫等功能起到抗衰老作用, 见表2。张静等[42‒43]发现肉苁蓉总苷可以提高SAM-P8 小鼠海马CA1 区正常锥体细胞存活率, 推测肉苁蓉总苷可以通过激活谷氨酸受体, 促进相关蛋白的表达, 提高突触形态可塑性, 改善SAM-P8 小鼠学习认知障碍, 达到延缓衰老的目的。肉苁蓉总苷可以使阿尔茨海默病(Alzheimer disease, AD)模型大鼠海马区CA1 区细胞排列整齐, 形态正常; 同时, 灌胃肉苁蓉多糖的大鼠神经元细胞核圆且规则, 核仁明显, 核膜和线粒体结构完整,说明肉苁蓉总苷减轻了受损神经细胞的病理性改变及超微结构的损伤[47]。吴波等[44]发现肉苁蓉总苷不仅可以增加亚急性衰老小鼠血清、脑和肝脏中SOD 的活性, 还可以降低过氧化脂质的含量, 说明肉苁蓉总苷可以从自由基学说方面, 调节机体抗氧化功能的平衡, 拮抗自由基损伤起到抗氧化的作用, 从而达到延缓衰老的目的。张可等[45] 发现肉苁蓉总苷可以逆转衰老动物SAM-P8 小鼠的免疫缺陷, 显著增加血液Sca-1 阳性细胞、初始性T 细胞、NK 细胞比例。张涛等[46]研究表明, 肉苁蓉总苷可以提高D-半乳糖致衰老小鼠的淋巴细胞转化能力、外周血IL-2 含量、NK 细胞活性以及腹腔巨噬细胞吞噬功能, 说明肉苁蓉总苷能增强小鼠免疫功能来达到延缓小鼠的衰老, 支持了抗衰老免疫学说。

摘要:肉苁蓉是一味常用的抗衰老、养生与美容中药之一，就肉苁蓉的相关作用机制进行了诠析。认为，肉苁蓉通过补肾作用达到抗衰老、养生与美容的目的。深入研究肉苁蓉的抗衰老机制及其养生与美容作用，在当前关注养生与美容的今天，具有十分重要的意义。关键词:肉苁蓉; 中药; 抗衰老; 养生; 美容; 理论探讨肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉Cistanche deserticola Y． C．Ma 的带鳞叶的肉质茎。其味甘、咸，性温，归肾、大肠经。具有补肾助阳，润肠通便的功效。临床上主要用于肾阳亏虚，精血不足，阳痿早泄、宫冷不孕、腰膝酸痛、痿软无力及肠燥津枯便秘等证。实际上，该药不仅是良好的补肾与通便之药，而且还是一味常用的养生抗衰与美容之品。古人对肉苁蓉在养生与美容方面的记载主要有: “久服轻身”，“润五脏，长肌肉”，“益髓，悦颜色，延年”，“治女人血崩，壮阳，日御过倍大补益”，“补精败，面黑，劳伤”等。兹对上述养生与美容的机理及其相关文献作一诠析。1 肉苁蓉的养生与美容是通过其补肾作用得以实现的1． 1 肉苁蓉作为补肾之品，其补肾的特点是，既能补肾阳，也能滋肾阴，属于阴阳双补之品，补肾阳可煦五脏之阳，滋肾阴可润五脏之阴，药性柔和，被誉为从容补肾之要药在众多本草中，具有补肾作用的药物是不少的，但真正能阴阳双补的药物，却是不多的。说起阴阳双补，初学者总是感到令人费解的样子，为何能阴阳双补呢? 这全取决于肉苁蓉的性味特点。肉苁蓉味甘、咸，味甘能补，味咸入肾，其性温，因而从药的性味组合来看，甘温能补气助阳，咸温能助阳补肾，总以补肾助阳为主。问题是，作为一个药物的作用，不仅取决于其性味，还要取决于之材质。肉苁蓉从其材质上来说，其材为肉质茎，其质丰润有加，这样的材质之性，决定了其能径入下焦，益精血，滋肾阴，养血海，涵冲任。肾阳为一身之阳，肾阴为一身之阴。肾阳得到温阳，自然五脏的阳气也能得到温阳，因而一味肉苁蓉，温肾煦五脏; 同样，肾阴得到滋补，自然五脏的阴津也得到滋补，因而一味肉苁蓉，滋肾润五脏。全身脏腑的阴阳得到温煦滋养，那么，机体的脏腑功能必然得到加强，阴阳更加协调和合，自然气血也就更加充盈旺盛，因而“久服轻身”，“润五脏，长肌肉”，“益髓，悦颜色，延年”，“治女人血崩，壮阳，日御过倍大补益”，“补精败，面黑，劳伤”等一些列作用目的便能得以实现了。1． 2 补肾通便，通便能促代谢，通便能加速毒物排出，也就是通便解毒作用，使得肉苁蓉成为药性温柔，以补为通的通便药，以此达到养生与美容的目的人到中老年以后，脏器的功能日渐衰退，这是自然规律。在脏器功能的衰退中，肠道功能的衰退，最为引人注目。一个直接的表现就是便秘。原本不便秘的体质，在不知不觉中出现了便秘。原本每日很爽快的大便，慢慢地出现了大便艰难，次数减少，甚至数日不大便一次。由于大便次数的减少，使得机体的代谢毒物不能及时排出，不仅毒物能耗损正常的气血，更重要的是影响了正常气血的运行，惹致种种病证，同时从美容的角度说，所谓“欲美容，先通便”，说的也是这个道理。为此，步入中老年后，关注大便，保证每日一次的大便且顺利的排出，是不容忽视的重要问题。如何才能保障正常的大便呢? 除了做好适度的运动、必要的菜蔬等粗纤维饮食外，一个重要的方面，那就是口服必要的补肾通便药物。其代表药物就是肉苁蓉。上已述及，肉苁蓉阴阳双补，补阳有助于增加胃肠的动力，滋阴有助于润滑肠道和软化大便，这种且补且攻、柔中带刚、刚柔相济、以补为通的作用，使得肉苁蓉成为中老年人最为常用的通便药物，在临床上也被誉为温柔的通便药物。1． 3 肉苁蓉阴阳双补，阴阳得补有助于气血更加和合，冲任更加协调，激发阳气举坚功能，被誉为性事疲劳之常用品，男科女科之要药，以此为男子养生，女子美容男子的性事能力，也被称之为举坚能力，是机体的阳气在短时间内得以激发并促进血液涌动的充分体现。很显然，这种能力实现或者维持，必须有赖于气血充盛和阴平阳秘。若气血虚弱，阴阳不足，显然阳气难以勃发，血气难以迅速涌动。就阴和阳或气和血来说，任何一方的不足，也难以实现这种能力。而人到中老年后，由于阴气自半，阳气日衰，阴和阳均在低位的水平上运转，因而男子的这种举坚能力也就日渐减退，生活中的性生活也就日渐减少。为此，只有及时不断地进行阴阳双补，使得阴阳的水平在高位上平衡，促进气血的旺盛，方能扭转或增强男子的性事能力。同样，女子的经带胎产也同样与阴阳的平衡和气血的充盛有密切关系。冲脉为血海，任脉主胞胎，肝为女子之先天，强调的也都是气血在女子经带胎产中的重要作用。通过适当的滋阴补肾，温阳补肾，有助于提高阴阳气血的高位平衡，增强女子之经带胎产的能力，如此，于养生，于美容都是大有裨益的。2 肉苁蓉的养生美容作用与其调节免疫、调节内分泌、雄性激素样作用、抗氧化、保护肝肾功能及增加胃肠动力等综合作用不无关系肉苁蓉中的主要成分是苯乙醇苷类，据文献报道，苯乙醇苷类具有抗不良刺激、增强学习记忆力和助阳等多方面功能。另外还含有环烯醚萜类、马钱子苷酸、木质素类、挥发性成分及甜菜碱及多种微量元素［1］。上述成分构成其养生美容作用的物质基础。2． 1 调节免疫作用肉苁蓉能增强生物体特异性和非特异性免疫功能，显著升高巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数，有一定恢复非特异性免疫功能的作用。其乙酸乙酯提取物或水提取物有激活淋巴细胞杀伤K562 细胞的作用。盐生肉苁蓉的正丁醇提取部位有氧自由基清除活性。苁蓉多糖在促进免疫器官的生长、吞噬细胞系统的吞噬能力以及体液免疫和细胞免疫功能方面都有明显的作用。多糖成分的免疫增强作用在肉苁蓉的强壮和补益效用中可能发挥着主要的影响［2］。2． 2 调节内分泌作用肉苁蓉能激活肾上腺释放皮质激素的作用，可增强下丘脑－ 垂体－ 卵巢的促黄体功能，提高垂体对LRH 的反应性及卵巢对LH 的反应性，而不影响自然生殖周期的内分泌平衡。2． 3 对生殖系统的影响肉苁蓉水煎物醇溶部分可增强去势大鼠的精囊前列腺重量，能促进睾丸生精功能，改善附睾的微环境，提示具有雄性激素样作用。肉苁蓉中的麦角甾苷和甜菜碱也具有雄性激素作用［3］。2． 4 延缓衰老作用肉苁蓉D － 甘露醇和肉苁蓉多糖在延缓皮肤衰老，增强机体免疫功能，激活超氧化物歧化酶和降低体内脂褐质堆积方面均具有显著作用。D － 甘露醇还能使老年鼠LPO/SOD 活性向正常成年鼠逆转。肉苁蓉多糖能明显延缓实验性衰老小鼠肺的生理性退化与细胞形态学退变。利用肉苁蓉治疗臭氧损伤实验性肺衰老模型小鼠发现，给药组小鼠耐受缺氧的时间延长，对衰老小鼠血清和肺SOD 活力均有升高，使MDA 含量下降，可减轻臭氧所致的肺氧化性损伤而造成的结构和功能的改变，延缓肺衰老。将肉苁蓉提取物制成抗衰老制剂，对人体进行了消除血液中过氧化脂的研究。结果表明，抗衰老冲剂能显著改善机体的衰老症状，恢复中老年人精力、体力和活力，具有较好的延缓衰老作用［4 － 5］。2． 5 对肝脏保护作用肉苁蓉对羟基脲所致“阳虚”动物DNA 合成率有增加作用，对动物阳虚症有明显强壮作用和治疗作用，对“阳虚”和“阴虚”动物的肝脾核酸含量下降和升高有调整作用，能显著提高羟基脲所致“阳虚”小鼠肝脾内DNA 合成率，促进RNA 合成，提高蛋白质的核酸代谢，使小鼠体重增加。肉苁蓉水煎液灌服小鼠可拮抗因负重运动而引起的蛋白质的分解，血清尿素氮( BUN) 含量明显减少，显示出肉苁蓉能调整肝脏细胞超微结构，促进蛋白质合成。肉苁蓉水煎及提取物有防止CCl4，所致的肝中毒作用，能明显抑制由CCl4诱导的ALT、SAT 升高倾向。2． 6 对肾脏的保护作用经胃管给予小白鼠肉苁蓉醇提物，剂量为每只每日15mg。取5 只小白鼠处死，立即解剖取出肾脏、肾上腺，组织块以福尔马林液固定，病理检查结果发现肾上腺皮质均未见萎缩现象，束状带细胞的厚度接近正常，肾脏亦未见异常。由此可见动物在较长时期使用皮质激素的同时，加用补肾壮阳的中药肉苁蓉醇提物可防止单用激素所引起的肾上腺皮质萎缩。肉苁蓉醇提物对肾功能亦有一定的保护作用。2． 7 增加胃肠动力与通便作用肉苁蓉类药物的水煎剂具有明显的通便作用，可改善肠蠕动，抑制大肠的水分吸收，缩短排便时间。对老年习惯性便秘，体虚便秘和产妇产后便秘疗效显著。还能引起大鼠胃底条和豚鼠回肠的收缩，并能被阿托品所抑制，推测其有拟胆碱活性并可能与其通便作用有关［1］。综上，从养生与美容的角度来说，肉苁蓉仍是用于以基于肾虚证为主的。尤其适用于男子阳痿不育之精少、女子宫冷不孕证、肾虚之须发早白证、肾虚之骨质疏松证、肾虚之小便频多、面色晦黑、精神不振、腰膝酸软以及肾虚之便秘等。对于缺乏肾虚特征性的或具有肾虚潜质之养生健体与美容亦可择机适当使用。参考文献［1］ 张雷红，堵年生． 肉苁蓉化学成分的研究概况［J］． 中成药，2003，25( 4) : 323 － 327．［2］ 陈绍淑，何生虎，曹晓真，等． 肉苁蓉药理及化学成分的研究进展［J］． 甘肃畜牧兽医，2005，3: 41 － 44．［3］ 王德俊，盛树青． 肉苁蓉对小鼠睾丸和附睾形态学及组织化学的影响［J］． 解剖学研究，2000，22( 2) : 101．［4］ 潘玉荣，闵凡印． 肉苁蓉醇提物对阳虚动物模型肾脏、肾上腺的影响［J］． 实用中医药杂志，2004， 20( 7) : 357 － 357．［5］ 苗明三． 氧自由基、疾病与抗氧化中药［J］． 河南中医药刊，2002，17( 4) : 1 － 4．

　肉苁蓉为名贵中药‚具有多种药理作用‚本研究旨在探讨肉苁蓉抗γ射线辐射的免疫保护作用。一、材料和方法1∙仪器和药物：γ射线由FCo-Tkc-i C 型同中心回转式源强3∙09PBq 60Co 治疗机提供。药物：生药肉苁蓉煎液乙醇总提取物‚使用前蒸馏水配成一定浓度（1ml 药液约含生药肉苁蓉10mg）。2∙实验方法：昆明种健康小白鼠32只‚体重（20±2）g‚雌雄不分‚随机分为4组‚每组8只。Ⅰ组：生理盐水对照组；Ⅱ组：药物实验组；Ⅲ组：盐水＋γ射线照射组；Ⅳ组：药物＋γ射线实验组。Ⅱ组、Ⅳ组每日分别灌肉苁蓉液10ml／只（相当于生药肉苁蓉5g／kg）‚Ⅰ组、Ⅲ组每日给予等量生理盐水‚且与Ⅱ组和Ⅳ组同时进行‚于第11天灌喂后2h‚对Ⅲ组和Ⅳ组行全身γ射线照射‚45cGy／d‚吸收剂量率60cGy／min‚共450cGy。3∙检验项目：淋巴细胞转化试验：各组小白鼠均于第19天肌注PHA0∙2ml（含PHA100mg）‚每日1次‚连续2天‚第21天断尾、取血、涂片、瑞氏染色‚镜下计数200个淋巴细胞‚求其淋巴细胞转化百分率。腹腔巨噬细胞吞噬功能检测：各组小白鼠均于第20天照射后2h‚腹腔内注射2％淀粉1ml‚于24h 后腹腔内注射鸡血细胞1ml‚30min 后取腹腔液涂片‚瑞氏染色‚计算腹腔巨噬细胞吞噬百分率。4∙采用t 及χ2 检验。二、结果1∙肉苁蓉对淋巴细胞转化率的影响：Ⅰ～Ⅳ组淋巴细胞转化率（％‚-x ± s）分别为47∙76±1∙25‚58∙62±3∙65‚39∙89±7∙01‚53∙97±4∙71‚Ⅱ组、Ⅲ组与Ⅰ组比及Ⅳ组与Ⅲ组比‚均为P＜0∙01。2∙肉苁蓉对巨噬细胞吞噬率的影响：Ⅰ～Ⅳ组巨噬细胞吞噬率（％‚-x ± s）分别为53∙09±1∙98‚63∙29±2∙91‚39∙21±3∙17‚57∙01±2∙09。Ⅱ、Ⅲ组与Ⅰ组比及Ⅳ组与Ⅲ组比均为P＜0∙01。三、讨论有文献报道‚肉苁蓉能增强机体免疫功能‚本研究表明：γ射线明显抑制了淋巴细胞转化和巨噬细胞吞噬功能‚对机体免疫功能有明显的损伤作用‚而Ⅱ、Ⅳ组所测免疫指标均明显升高‚与对照组相比‚差异有极显著性‚这证明肉苁蓉能增强机体免疫功能‚有抗γ射线辐射作用‚故肉苁蓉煎液在照射前及照射中预防给药可提高机体免疫功能而起到辐射保护作用。

肉苁蓉为稀有的名贵中药材, 具有补肾~ 益精~ 润肠及抗衰老等功效[1]. 研究表明, 肉苁蓉多糖具有延缓皮肤衰老~ 增强机体免疫功能~ 促进人体外成纤维细胞的生长及促进创伤愈合[2]等生理活性作用. 对于肉苁蓉多糖的深入研究尚未见报道, 为探讨多糖的生物活性与结构的关系, 本文对肉苁蓉茎水溶性多糖SPA 组分进行结构分析. 有关肉苁蓉茎水溶性多糖SPA 组分的分离纯化过程见文献[3].1 实验部分1. 1 试剂与仪器Sephadex G-75( Pharmacia 公司) ; 二甲基亚砜( 江苏洪声化工厂) ; ShimadZu 高压液相色谱( 日本岛津) ; Vavian 3400 气相色谱仪( 附FID 检测器, 美国惠普) ; HP 5988A GC/MS四级杆质谱( 美国惠普) ; Ac-80 MHZ 脉冲傅里叶变换核磁共振波谱仪( 瑞士Bruker) .1. 2 SPA 部分酸水解按文献[4]方法进行, 取100 mg 糖样溶于2 mL 蒸馏水中, 加入2 mL0. 1 mO1/L三氟乙酸, 于80 C 水解1 h. 离心, 对沉淀进行GC 分析, 在上清液中加入3 倍体积的无水乙醇醇析过夜. 离心后将沉淀中的一部分作GC 分析, 另一部分作高碘酸氧化, 剩余部分用蒸发皿赶出三氟乙酸( 加无水乙醇) 后作GC 分析.1. 3 SPA 高碘酸氧化及Smith 降解按文献[5]方法进行, 以0. 15 mO1/L 高碘酸钠对SPA 的部分酸水解沉淀进行氧化, 间隔一段时间取样, 用紫外分光光度计在223 nm 处监测高碘酸消耗量. 反应60 h后, 高碘酸消耗量达到一恒定值, 加乙二醇终止反应, 透析后浓缩, 加入过量的KBH4还原过夜. 用50%的HAc 中和至中性, 透析后取1/ 3 干燥, 用作GC 分析, 在剩余部分中加入1 mO1/L H2SO4 , 于25 C 水解40 h 后, 用BaCO3中和至pH= 6, 过滤后, 滤液用蒸馏水透析48 h, 袋外部分经干燥后用作GC 分析, 袋内部分用于乙醇醇析, 上清液及沉淀经干燥后用作GC 分析.1. 4 SPA 甲基化分析按文献[6, 7]方法进行, 在充分干燥的20 mg 样品中, 加入6 mL 以4 目分子筛脱水的二甲基亚砜, 充入N2气, 密封后于40 C 下磁力搅拌至均匀为止, 加入6 mL NaOH-DMSO混悬液和3. 6 mL 碘甲烷, 密封, 磁力搅拌7 min 后, 加入6 mL 蒸馏水中止反应, 装入透析袋内, 经流水~ 蒸馏水各透析24 h, 并以氯仿萃取3 次后, 再用蒸馏水反复洗涤3 次, 无水硫酸钠干燥24 h 后,蒸除氯仿至1 mL 左右, 用IR 检查至3 400 cm-1处无 OH 吸收峰.向甲基化多糖中加入85%的HCOOH, 充N2气封管, 于100 C 水解4 h 后, 以CH3OH 除去HCOOH; 经真空干燥后, 再加入2 mL 2 mO1/L 三氟乙酸, 于100 C 下水解6 h, 用无水乙醇除去三氟乙酸, 再用蒸馏水除去乙醇; 加入KBH4搅拌过夜还原, 以阳离子交换树脂处理后, 用CH3OH 蒸除H2BO4 , 加入乙酐和无水吡啶各0. 5 mL, 封管, 于100 C 乙酰化2 h, 再加无水乙醇除去乙酐, 干燥后用氯仿溶解进行GC/MS 分析. GC/MS 采用毛细管OV 101( 25 m> 0. 2 pm) 玻璃柱测定, 气化温度300 C , 柱温100 C , 检测温度300 C , 并按该仪器所附数据库检索定性.1. 5 气相色谱的测定参照文献[8]方法进行 采用Vavian 3400 气相色谱仪 附FID 检测器 SE-30型色谱柱( 50 m> 0. 22 mm> 0. 25 Mm) 初始柱温120 保持2 min 后以8 /min 的速度程序升温至250 保持30 min 以高纯 2气为载气 气化温度300 检测温度300 .1. 6 红外光谱及核磁共振测定Specord IR 型红外光谱仪 KBr 压片 扫描范围4 000*400 cm-1 .核磁共振测定参照文献[9 10]方法进行 13C MR 频率25 M~Z 室温 宽带噪音去偶 累加49 439次 糖样30 mg 5 mm 13C 双碳头.2 结果与分析2. 1 部分酸水解产物分析SPA 经部分酸水解结果见表1 用GC 检出大量Glc 及少量Gal 和Man说明主链主要由Glc 构成; 袋外部分检出各种单糖的比例显示 Ara 较部分酸水解前明显增加 推测其可能存在于末端结构中.2. 2 SPA 高碘酸氧化及Smith 降解产物分析在SPA 的高碘酸氧化过程中 平均每摩尔己糖残基释放出0. 648 mol 甲酸 说明平均每20 个己糖残基中 有13 个非还原性末端或1-6 糖苷键; 因高碘酸的消耗量多于甲酸生成量的2 倍 说明存在一些可被高碘酸氧化但不释放甲酸的1-4 1-4 6 1-2 及1-2 6 键.Smith 降解结果见表2 降解后产生大量的甘油和赤藓醇 说明SPA 中存在大量的1- 1-21-6 1-2 6 1-4 及1-4 6 中的某些键型; 检出Gal 与Glc 说明 二者存在不被高碘酸氧化的1-3 1-2 3 及1-3 6 键型; 袋外部分检出少量的Gal 和Glc 说明不被高碘酸氧化的Gal 与Glc 或者位于末端及边缘 或者与可被氧化的糖毗邻.2. 3 SPA 甲基化产物分析SPA 经甲基化 水解 还原及乙酰化后得到甲基化糖醇乙酸酯 对其进行GC 和GC/MS 联机分析 其结果见表3. 表明Ara 为末端基 ( 1-6)Glc 在多糖中的含量最多 同时还有一部分( 1-3 6)Glc Gal 及Man 均以1-4 键连接为主 Gal 存在少量的1-3 键 Rha 则以1-2键连接.2. 4 SPA 的红外光谱及13C MR 分析SPA 的红外光谱图在1 625 cm-1处显示有多糖的特征吸收峰 在890 cm-1处的吸收峰为 构型糖苷键的特征吸收峰. SPA 的13C MR 图谱在异头碳 99*110共振范围内有102. 58 和100. 64 两个比较明显的共振信号 表明此多糖的糖苷键为 构型; 另外SPA 的化学位移与相同条件下标准图谱中 ( 1-6)Glc 及 ( 1-4)Gal 的化学位移相似 且从峰高度判断 ( 1-6)Glc 残基的比例明显多于 ( 1-4)Gal 残基的比例.综合部分酸水解 高碘酸氧化 Smith 降解及GC 甲基化 红外光谱及13C MR 分析等各种实验手段的结果 SPA 结构中主要为 构型糖苷键 由( 1-6)Glc 构成主链 侧链由( 1-4) Gal ( 1-4)Man ( 1-3)Gal 和( 1-2) Rha 片段组成 分子中每24 个糖残基为一个重复单位 主干为14 个糖残基 平均每7 个( 1-6)Glc 在3-0 处有一个分枝[一个侧链由1 个( 1-3)Gal 和3 个( 1-4)Man 组成另一个侧链由3 个( 1-4)Gal 和一个( 1-2)Rha 组成] 末端残基为Ara 结构式如下:参考文献[ 1 ] LU0 Ting-Bin( 罗廷彬) C~EN Ya-Ning( 陈亚宁) REN Wei( 任崴) . Arid Zone Research( 干旱区研究) [J] 2002 19( 4) :56 58[ 2 ] Z~U Yong-~ua( 朱咏华) LU0 Ze-Min( 罗泽民) . Journal of ~unan Forestry Science and Technology( 湖南林业科技) [J] 200027( 4) : 20 23[ 3 ] Z~A0 Wei( 赵伟) YA~ ~ong( 颜宏) LIANG Zong-Yan( 梁忠岩) . Journal of Northeast Normal University( 东北师大学报) [J] 2004 36( 4) : 111 115[ 4 ] LIANG Zhong-Yan( 梁忠岩) Z~ANG Yi-Shen( 张翼伸) MIA0 Chun-Yan( 苗春艳) . Chinese Biochemistry Journal( 生物化学杂志) [J] 1990 ( 6) : 273[ 5 ] LIANG Zhong-Yan( 梁忠岩) Z~ANG Yi-Shen( 张翼伸) . Chem. J. Chinese Universities( 高等学校化学学报) [J] 1983 4( 3) :364 365[ 6 ] Lindberg B. . Mehods in EnZymology[M] NeWYork: Academic Press 1972 28: 178 195[ 7 ] Ciucanu I. Kerek F. A. . Simple and Rapid Merhod for Permerhylarton of Carbohydrate Carbohysr. Res. [J] 1984 131:209 217[ 8 ] MA Ting( 马亭) LI Gong-Ke( 李攻科) LI Xiao-Dong( 李晓东) . Chem. J. Chinese Universities( 高等学校化学学报) [J]2000 21( 7) : 1023 1025[ 9 ] LIANG Zhong-Yan( 梁忠岩) Z~ANG Yi-Shen( 张翼伸) . Acta Biochimica et Biophisica Sinica( 生物化学与生物物理学报) [J]1993 2$( 1) : 60 62[10] Z~ANG Wei-Jie( 张惟杰) . Biochimical Research Technology on Carbohydrate 2nd Edition( 糖复合物生化技术 第二版) [M]~angZhou: Zhejiang University Press 1994: 327 328

摘要：目的：考琴内双要水煎流对大强度时力训练小鼠能量代谢的影响。方法：通过对照试验评价内苁票水煎液对大强度耐力训练小鼠LD，LDH、NaK-ATPaseCaATPase的影响。结果：经过大强度耐力训练后小鼠血液中LD含量升高，LDHNa＇-K＊-ATPase 及Ca”ATPase活性降低；肉苁源水煎液能明星降纸血液中LD含量、增加LDHNa＇-K＂·ATPase及CaATPase 渗性。结论：肉苁蓉水煎液能监筹政善大强度耐力训炼小鼠的能量代谢。关键词：内双管水取流；大强度耐力训体；能量代谢中药肉苁蓉，为肉苁蓉的干燥带鳞叶的肉质茎，又名金笋、地精，习称大芸。始载于《神农本草经》，列为上品，其味甘，咸、性温。具有补肾阳，益精血，润肠通便之功效，主治男子阳痿、女子不孕、血枯便秘等症［1］。有人统计，它在历代增力中药处方中出现率占第一位。本研究旨在探讨肉苁蓉水煎液对大强度耐力训练小鼠能量代谢的影响，为肉苁蓉作为抗运动疲劳药品或运动保健饮料的开发研制提供理论和实验依据。1材料与方法实验材料：雄性昆明种小鼠30只，体重18-20克，由兰州大学医学院实验动物中心购得。小鼠适应性饲养3天后，副除不能训练小鼠，补充所缺。中药肉苁蓉购自兰州惠仁堂医药连锁总店，纯净水煎制，浓缩为10g／mL备用。乳酸（LD）．乳酸脱氢酶（LDH）及Na＇-K＊-ATPaseo Ca ATPase 检测试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。实验方法［2］：小鼠随机分为3组：空白组，对照组（大强度耐力训练组和肉苁蓉组（大强度耐力训练给药组），灌胃给药，0.2mL／10g，一天2次，其余饲养条件不变。空白组安静饲养，自由饮食、摄水；对照组和肉苁蓉组于动物跑台上先适应性训练5周，然后进行2周大强度耐力训练。适应性训练期间每天训练20min，每周5d，坡度为0，跑速每周递增，分别为15m／min．22 m／min．27m／min．31m／min和35m／min；强化训练期间每天训练30min，每周7d，坡度为0，速度为35m／min。小鼠于第8周的第1天摘眼取血，离心取血清，按试剂盒说明书检测LD.LDH、及Na＇-K＊-ATPase CaATPase。统计处理：所有数据采用SPSS13.0软件处理，用？s表示，组间比较采用1检验。2结果2.1肉苁蓉水煎液对LD及LDH的影响：经过大强度训练后小鼠血液中LD的含量明显升高、LDH活性显著降低（p＜0．05），说明无氧呼吸加强，肉苁蓉水煎液能降低血液中LD的含量，增强LDH的活性（p＜0.05），改善有氧呼吸障碍，结果见表1。2.2肉苁蓉水煎液对ATPases的影响：经过大强度训练后小鼠血液中Na＊-K＊-ATPase和CaATPase活性明显降低（p＜0.05），说明能量代谢发生障碍，肉苁蓉水煎液能显著增强Na＂-K＋-ATPase和CaATPas活性（p＜0.05），改善能量代谢，结果见表2。3讨论研究表明人体运动时所需能量的直接来源是三磷酸腺苷¥性别总质数LD(mmolL)LDH(mmelL)空有量1013770.7*1.8771:45对性量19*7214*13372.56*⑩물方부1014971.63*1,7072.09*表2肉东蓉水煎液对 ATPases的影响组别动物数Na-K'-ATPase(umolPi.mgprot.h')Ca ATPase(umoiPi.mg"prot.h)空白组105,2271.246,7271.33对照组103,8572.54*4,1672.17*肉苏等组104,7670.73*5.9372.64与空白组比较＊p＜0.05．与对照组比较＇p＜0.05。（ATP）的分解，ATP的合成可在两种供能形式下进行，即无氧代谢及有氧代谢，在这两种供能形式下工作的有三个供能系统。1．高能磷酸化物系统（ATP-CP系统），2．乳酸系统（无氧酵解系统），3．有氧氧化系统。无氧代谢即指人体在供氧不足的状态下运动时，能量供应靠物质的无氧分解提供，主要由ATP-CP系统及糖酵解系统供能，所产生能量较少，且代谢产物乳酸如堆积至一定量时，可反馈性抑制该系统工作。人体在供氧充足的条件下运动时，能量供应由能源物质的彻底氧化供给，此时工作的供能系统为有氧氧化系统，可产生大量能量。无氧代谢时的代谢产物如乳酸、肌酸等需有氧供能条件下才能彻底清除［3-8］。大强度耐力训练的关键是保障能量代谢的正常进行。临床常用乳酸（LD）、乳酸脱氢酶（LDH）和ATPases 等作为衡量能量代谢的指标。乳酸（LD）是糖醇解的主要产物，也是引起肌肉酸痛、肿胀的主要诱因。正常组织中的葡萄糖总量的15％经糖酵解生成乳酸，乳酸也可作为组织的一种能源物质，在乳酸脱氢酶（LDH）催化下生成丙酮酸，最后丙酮酸转化成乙酰CoA进入三羧酸循环，生成ATP［9］。大强度训练时，机体出现能量供应不足，能量代谢出现障码，糖醇解途径被激活，同时产生大量的LD，蓄积在血液、组织中，引起酸痛。所以改善能量代谢是大强度耐力训练中提高运动能力和运动效果的关键。肉苁蓉是我国传统滋补类中药之一，在增力和抗疲劳处方中被广泛使用。现代药理学研究表明肉苁蓉可使小鼠游泳时间延长，降低负荷运动后血清肌酸激酶的升高幅度，使运动后小鼠骨骼肌超微结构保持正常，表明肉苁蓉具有增强体力和抗疲劳的作用［10］。我们的实验发现肉苁蓉水煎液可降低大强度耐力训练小鼠血液中LD含量、增强LDH活性，可能是促进了组织中糖的有氧氧化，抑制了酵解过程，也可能是增强了组织LD的转运能力，使其流出组织，两种机制共同作用使组织酸中毒减轻。同时我们还发现肉苁蓉水煎液可显著增强大强度耐力训练小鼠ATPases的活性，促进ATP的合成，从面改善大强度耐力训练时机体能量代谢，这些可能都与肉苁蓉增强体力和抗疲劳作用密切相关。参考文献：[IJiangsu New Medical Collge.Dictonary of Chinese Ma-teria Medica（中药大辞典）［M］Shanghai：Shanghai People＇s Publisher,1977.［2］李宝成等，葛根总黄酮对大强度耐力训练大鼠不同组织Na＇-K＇-AT Pase活性的影响，北京体育大学学报，2006,29（10）：1367~1369

表3 肉苁蓉水提物对肠道菌群紊乱小鼠脏器指数的影响Table 3 Elfect of Cistanche deserticola water extract on organ index of mice with intestinal flora disordermg/g组别AB C D心4.826±0.3054.881±0.340 4.928±0368 4,675+0.522肝41.860±1.498 39.193±2626 40.603±5.193 38.787±1.358脾2.09-0.182.07±0.24 1.88±0.32 1.86±0.15肺6.387±0.7616800±1.135 7.369±1051 7.102±0.948肾11.045-0.761 11.119-0519 11880*2.050 11.480±0.636脑21.5±1.51122.491±0446 2260310.539 21.946±1.175胸腺1.52810.28 0.673±0.329 0.45±0.2141.125±0.335*自肠4.234±1.1388.008±1.445 9.055±1617 8660±1.501注：A为空白对照组，B为肠道菌群素乱模型组，C为肉苁蓉水提液低剂量组，D为肉苁蓉水提物高剂量组：＊表示与空白组相比有显著差异（P＜0.05）：＊＊表示与空白组相比有极显著性差异（P＜0.01）：＃表示与模型组相比有显著意义（P＜0.05）。鼠胸腺的生长发育可能具有抑制作用，引起免疫抑制。与模型组相比肉苁蓉水提物高剂量胸腺指数显著提高（P＜0.05），肉苁蓉水提物低剂量组小鼠胸腺指数降低（P＜0.05）。胸腺作为中枢免疫器官一定程度上反应了机体的免疫功能，可能由于肉苁蓉水提物中的肉苁蓉多糖促进机体中免疫系统产生的IL-2，促进免疫细胞增殖，促进胸腺成熟细胞的释放，缓解应激功能，使免疫功能趋于稳定，减轻抗生素引起对小鼠免疫器官的生长抑制。2.2.3 肉苁蓉水提物对肠道紊乱小鼠肠道菌群的影响按对机体健康的影响，肠道菌群可分为：益生菌、有害菌和调节致病菌，共同调节肠道微生态平衡。双歧杆菌、乳酸菌作为肠道中典型的益生菌，能够改善肠道功能，刺激机体免疫功能，促进抗炎因子的分泌，缓解炎症反应等。条件致病菌在菌群平衡时不致病，但一旦处于生态失调的状态下，这类细菌可成为致病菌，如大肠杆菌、肠球菌。肠道菌群特定微生物比例失调会影响肠道菌群平衡，B／E值（双歧杆菌／大肠杆菌）可反映肠道内正常菌群对致病菌群定植的抵抗力，肠道环境良好时B／E值≥1。图2为肉苁蓉水提双岐杆菌菌落总数（D）为双岐杆菌含量：（②为乳酸杆菌含量；（3）为肠球菌含量：（4）为大肠杆菌含量：（⑤为B／E值：＊表示与空白组相比有显著差异（R0.05：＊＊表示与空白组相比有极显著性差异（P＜0.01）：＃表示与模型组相比有显著意义（P＜0.05）；＃＃表示与模型组相比极有显著性差异（P＜00D）。图2 肉苁蓉水提物对肠道紊乱小鼠肠道菌群的影响物对肠道紊乱小鼠肠道菌群数量变化情况。图2（D可看出灌胃7d时，与空白组相比模型组小鼠粪便中双岐杆菌含量降低（P＜0.01），肉苁蓉水提物低剂量组及高剂量组与空白及模型组相比双岐杆菌数量升高（P＜0.01），14d时模型组及低剂量组与空白组相比双岐杆菌显著降低（P＜0.01），高剂量组与模型组相比升高（P＜0.01）。图2（2）可知，灌胃7d时，模型组及低剂量与空白组相比组小鼠乳酸菌数量降低（P＜0.01），高剂量组乳酸菌含量升高（P＜0.01）。14d时低剂量组及高剂量组与模型组相比乳酸菌含量升高（P＜0.01）。图2（）可知，灌胃7d时模型组、低剂量组、高剂量组肠球菌与对照组比显著升高（P＜0.0D14d后低剂量组、高剂量组肠球菌与模型组比显著降低（P＜0.01）。图2（4可知，灌胃7d时模型组、低剂量组、高剂量组大肠杆菌菌与对照组比显著升高（P＜0.01）14d后低剂量组、高剂量组大肠菌与模型组比显著降低（P＜0.01）。图2（5）可知，灌胃7d时模型组、低剂量组、高剂量组B／E值与对照组比显著降低（P＜0.0D，且模型组B／E值＜1，低剂量组、高剂量组B／E值＞1，表明低剂量组、高剂量组肠道环境比模型组好。14d后组模型组B／E值显著低于对照组（P＜0.01），高浓度组与对照组B／E值差异不显著（P＞0.05）。试验表明肉苁蓉能显著提高肠道菌群紊乱小鼠粪便中双岐杆菌、乳酸菌含量B／E值，对肠球菌及大肠杆菌生长有一定抑制作用。肉苁蓉对肠道菌群紊乱的调节作用，可能由于其在机体内参与糖代谢从而维持机体内代谢稳态，改善机体内环境，从而降低抗生素对肠道菌群紊乱的影响。2.2.4 肉苁蓉水提物对小鼠肠道菌群紊乱结肠形态结构的影响肠道形态结构的改变对机体生长发育、消化吸收、免疫调节、肠道损伤修复具有一定影响。肠绒毛能够增大肠道黏膜表面积以及与营养物质的接触面积，增强肠道的消化吸收功能。隐窝细胞向绒毛顶端迁移分化后形成绒毛细胞，补充绒毛上皮细胞脱落。绒腺比（V／C值）能综合反映肠道消化状况，与肠道消化吸收能力成正比。肠绒毛、隐窝、V／C值代表肠道黏膜完整性的重要指标。肉苁蓉水提物对小鼠肠道菌群紊乱结肠形态结构的影响见图3和表4。由图3和表4可知，不同试验组结肠绒毛形态有一定的差异。对照组及肉苁蓉水提物高剂量组结肠绒毛较长，呈指状，肠道菌群紊乱模型组及肉苁蓉水提物低剂量组肠绒毛较短，模型组肠绒毛顶端断裂。肉苁蓉水提物高剂量组能够极显著提高肠道菌群紊乱小鼠结肠绒毛高度及V／C值（P＜0.01）。与对照组相比（A）为空白对照组。（ED为肠道菌群紊乱模型组，（O为肉苁蓉水提液低剂量组，（D为肉苁蓉水提物高剂量组。图3 肉苁蓉水提物对肠道菌群紊乱结肠结构的影响Fig3 The effect of Cistanche deserticola water extract on the colonie structure of intestinal flora disorder表4 肉苁蓉水提物对肠道菌群紊乱结肠结构的影响Table 4 The effect of Cistanche deserticola water extract on the colonic structure of intestinal flora disorder组别肠绒毛／μm隐窝／μmV/CA1024,546±220.18676.170±5.44013.581x3,448B332.00423.733" 110.720±13.381*3.018±0.248"C467,852+59.082"113.166±8.658"4,1350.400"D687938±53.187*87.266=4.151"7.887±0.539*注：A为空白对照组，B为肠道菌群素乱模型组，C为肉苁蓉水提液低剂量组，D为肉苁蓉水提物高剂量组：＊表示与空白组相比有量著差异（P＜0.05），＊＊表示与空白组相比由有极显著性差异（P＜0.01）；＃表示与模型组相比有显著意义（P＜0.05）；＃＃表示与模型组相比极有显著性差异（PC0.0D）。其他3组肠绒毛及VC值减小存在极显著性差异（P＜0.0D，模型组与低剂量组与对照组相比隐窝变深存在极显著差异（P＜0.0D，高剂量组与空白组隐窝深度无显著性差异（P＞0.05），隐窝深度增加会降低营养物质吸收。绒毛长度大小顺序为：对照组＞高剂量组＞低剂量组＞模型组：隐窝深度大小依次为：模型组＞低剂量组＞高剂量组＞对照组：V／C值大小为：对照组＞高剂量组＞低剂量组＞模型组，故肉苁蓉水提物可调节肠道菌群紊乱小鼠诱发的肠绒毛变短、隐窝深度增加的现象。这可能由于抗生素诱导肠道菌群紊乱，而使肠黏膜屏障促炎症信号上调，诱发炎症细胞传导，引发肠道炎症疾病，影响机体代谢。肉苁蓉水提物通过提高抗炎因子的释放，降低促炎因子的分泌减缓肠道粘膜的炎性损伤，进而调节肠道菌群紊乱引发的肠道形态结构的改变。3 结论肉苁蓉水提物具有良好的抗氧化作用，DPPH自由基、ABTS自由基、O-自由基的IC值依次为0.225、1.819、12.53mg／ml。肉苁蓉水提物在一定浓度下能够缓解抗生素对小鼠体质量下降及对胸腺的生长抑制，能显著提高肠道菌群紊乱小鼠粪便中双岐杆菌、乳酸菌的数量，对肠球菌及大肠杆菌生长有一定抑制作用，调节肠道内正常菌群对致病菌群定植的抵抗力。改善肠道菌群紊乱小鼠诱发的肠绒毛变短、隐窝深度增加现象。由此看出，肉苁蓉水提物具有一定的抗氧化能力及调节肠道菌群紊乱的作用，为肉苁蓉开发产品及其应用提供一定理论依据。参考文献：1 张京．星状神经节阻滞对失血性休克大鼠肠屏障的干预作用［D］．张家口：河北北方学院 2016王鑫楠，王维维，辛贵忠，等.中草药调控肠道微生态组成与代谢的研究进胸儿中医药学报，2019.47（4）：117-1243 訾雨歌，徐越，肖瀛，等．原花青素B2对D-半乳糖模型小鼠肠道菌群的影响儿食品科学，2019.40（9）146-151张梅梅.黄酮类化合物抗氧化能力的比较及其对肠道菌群的调节作用［D）重庆：西南大学，201815] 李静，吕晓玲，吕冬雪，等，头孢克肟诱导肠道菌群素乱动物模型的建立川食品工业科技，2017,38（5）361-3656 黄玉霞，食品中四环素类抗生素残留高选择性吸附材料的制备与应用［D济南：齐鲁工业大学，2019[7 李璇，肠道菌群素乱对慢性胰腺炎的影响及机制研究［D］无锡：江南大学，2019[8] 孟艳鸽，李岩，不同剂量长双歧杆菌对抗生素诱导大队肠道菌群失调的疗效观察J］中国微生态学杂志，2015.27（3）：280-283,288[6] 闵炬，董刚强，谢文明，等，德赢vwin登录 寄主柽柳林地土壤养分调查研究门土壤，2018.50（1）：73-78[0]Yang L.L,Ding S Q.Zhang B.et al. Beneficial effects of totad phenylethamid glycoside fraction isolated from Cstanche desermi-code on bone microntnacture in warectomied all Odat Medicine and Cellalar Longevity,2019,2019:1-13［11］郭安民，李宇辉，王俊钢，等．新鲜肉苁蓉发酵酒工艺研究食品研究与开发，2019.40（20）：59-64［12］付志飞，戴永娜，毛浩萍，肉苁蓉提取物对快速老化模型小鼠SAMP8行为学及肠道菌群的影响）世界科学技术-中医药现代化，2019.21（6）：1103-1109

性对照，计算其清除率。清除率／％＝（1-A／A2x100式中：A，为4mLABTS-溶液加1mL样液的吸光度：A。为4mLABTS＊溶液加1mL蒸馏水的吸光度。1.3.2.4 肉苁蓉水提物中O2自由基清除率的测定参照Luo等方法，稍作改动。配置不同浓度的肉苁蓉水提物溶液，325mm处测定吸光度，Vc为阳性对照，计算其清除率。清除率院＝［1-（4，-4）／A］x100式中：A1为4mLTris-HC1加20μL邻苯三酚和1mL样液的吸光度；A2为4mLTns-HC1加20μL蒸馏水和1mL样液的吸光度：A3为4mLTris-HC1加20μL邻苯三酚和1mL蒸馏水的吸光度。13.3 肉苁蓉水提物对肠道菌群紊乱的作用1.3.3.1 动物分组与样品采集处理参照史瑛等方法，稍有改动。小鼠适应1周后随机分为4组，每组6只，分别为空白对照组、头孢克肟诱导肠道菌群紊乱模型组、肉苁蓉水提物低剂量组（1mgg）、高剂量组（2mg／g）。肠道菌群素乱模型组头孢克肟给药剂量为30mg／kg为成人剂量的10倍每天，第1、3次灌服头孢克肟，第2次灌服生理盐水。肉苁蓉水提物低（高）剂量第1、3次灌服头孢克肟，第2次灌服低剂量肉苁蓉水提物。空白组每天灌服3次相同剂量生理盐水。每隔3d-4d测定体重，灌胃第0、7、14天，在无菌操作台下用灭菌管采集老鼠粪便，放入-20℃冰箱保存，最后一天灌胃结束后，颈椎脱臼处死小鼠，取心脏、胸腺、脾、肝脏、肺、肾、脑称量脏器质量计算脏器系数。并留取结肠组织样本于在10％的福尔马林中。脏器系数＝小鼠脏器（g）／小鼠体重（g1.3.3.2 肠道菌群定量检测参照王琳等方法，稍作改动。按表1肠道菌群培养条件将粪便稀释后，在相应的浓度下接种于不同的选择型培养基中，采用活菌计数公式计数，结果以每克粪便湿重中菌落形成的对数值形式表示以计算菌落总数（gCFU／g）。并计算B／E值。每克粪便菌落数＝lg（菌落总数x稀释倍数x每次稀释取样体积）／（接种体积x样品质量）B／E值＝双歧杆菌菌落总数／大肠杆菌菌落总数1.3.3.3 小鼠结肠组织病理学观察小鼠处死后，立即取出新鲜的结肠，用生理盐水冲去肠内容物，置于10％中性福尔马林中固定。按常规方法脱水、透明、石蜡包埋，连续横断切片，切片厚5μm，HE染色。使用光学显微镜拍照观察并比较结肠表1 肠道菌群培养条件Table1 Calture conditions of intestinal flora菌种培养基稀释倍数培养条件双岐杆菌BBL培养基10、10、10*37℃.36h乳酸杆菌MRS培养基10°、10、10*37℃.36h大肠杆菌伊红美蓝培养基10°,10.1037℃.36h肠球菌PSE培养基0101-0137℃.36h黏膜形态变化，测量结肠绒毛长度、隐窝深度、计算绒毛长度／隐窝深度比值（V／C值）。1.4 数据统计分析试验数据以G±）表示。应用统计分析软件SPSS20进行两两比较单因素方差分析，P＜0.05表示差异显著，P＜0.01为差异极显著。2 结果与分析2.1 肉苁蓉水提物体外抗氧化作用ABTS＊自由基、DPPH自由基、0自由基清除率及还原力是体外抗氧化能力的检测指标，ABTS＇自由基、DPPH自由基清除率的原理是通过提供H原子或质子清除自由基。O：自由基清除率是通过结合0自由基，阻止H2O2、单重态氧等的形成。还原力则是通过破坏自由基链，给出H原子并发挥抗氧化作用。图1为肉苁蓉水提物的体外抗氧化作用。由图1（D可知肉苁蓉水提物DPPH自由基清除率随浓度的增大而增加．0.3mg／mL．时肉苁蓉水提物DPPH自由基清除率最接近同浓度Vc，0.3mg／mL后肉苁蓉水提物DPPH自由基清除率增加速率减小。图1（2）可知肉苁蓉水提物对ABTS＊自由基具有一定清除率，且与其浓度呈正相关，0.5mg／mL时肉苁蓉水提物ABTS＊自由基清除率最高为95.49％。Vc的ABTS＇自由基清除率始终维持在97％左右。图1（3）可知肉苁蓉水提物超氧阴离子自由基清除率明显低于Vc．0.3mg／mL．后超氧阴离子自由基清除率增长缓慢，0.5mg／ml．时肉苁蓉水提物超氧阴离子自由基清除率最高为32.69％。图1（4）可知肉苁蓉水提物及Vc的还原力均具有浓度依赖性，同浓度Vc还原力与肉苁蓉水提物相比增加速率较大。结果表明，肉苁蓉水提物具有良好的体外抗氧化作用，其DPPH自由基、ABTS自由基、O2自由基的IC，值依次为0.225、1.819、12.53mg／ml。肉苁蓉水提物具有良好的抗氧化能力可能由于其主要活性成分苯乙醇苷类化合物的苯环上具有多对邻酚羟基，这是使化合物具有清除自由基活性的关键结构。2.2 肉苁蓉水提物对肠道菌群紊乱小鼠的影响2.2.1 肉苁蓉水提物对肠道菌群紊乱小鼠体质量的影响小鼠体质量会随机体生理变化发生改变，4组小鼠在不同灌胃天数下的体重变化情况见表2。由表2可知，灌胃第3天每组小鼠体重出现明显表2 小鼠体质量变化Table 2 Changes in body weight of mice组别1d3d6d9d12d14dA19.13320.45717.46720.73420.300±087421.067±1.44620,567-0.90719.300±1.041B18,6660.67717,417±0.28619,600-0.72719.533±0.41318.650=0.565"18.033-0.266C958070016117.200±0.82019,600x1.13819.267±0.8824119.267=1.08618,967±0.852D19.333a0.66517.833±0.78420.333-0.71219.833x0.612*20.133:0.94419,0670.532注：A为空白对照组，B为肠道菌群素乱模型组，C为肉苁蓉水提液低剂量组，D为肉苁蓉水提物高剂量组：＊表示与空白组相比有显著差异（PK0.05）：＊＊表示与空白组相比有极显著性差异（PO．0D；＃表示与模型组相比有显著意义（P0.05）。降低，后缓慢升高，可能由于开始灌胃后引起小鼠应激反应使得体重下降。第9天前每组小鼠体重变化与空白组无显著性差异，第9天时与空白组相比其他3组体重有显著性差异（P＜0.05），第12天时模型组与空白组相比体重降低（P＜0.0D，肉苁蓉低剂量组与空白组体重降低（P＜0.05），肉苁蓉高剂量组体重变化与空白组相近（P＞0.05），第14天时模型组与空白组有显著性差异，肉苁蓉水提物低剂量与高剂量组无显著性差异，结果表明肉苁蓉水提物在一定浓度下能够控制由抗生素导致的体质量下降。2.2.2 肉苁蓉水提物对肠道菌群紊乱小鼠脏器指数的影响脏器指数能间接反映营养物质在机体中的有效沉积、吸收和利用。4组小鼠脏器指数变化见表3。由表3可知，4组小鼠心脏、脾、肝脏、肺、肾、脑指数差异不显著（P＞0.05），而与空白组相比，模型组、肉苁蓉低剂量组和高剂量组胸腺指数存在显著性差异（P＜0.05），其中肉苁蓉水提物低剂量组胸腺脏器指数与空白组存在极显著差异（P＜0.0D，模型组与空白组相比胸腺指数显著降低，表明长期灌服头孢克肟对小

何梦梦，游林，包晓玮“，魏晨业＇，肖子轩，李泽霖＇，曾兰君＇，王慧君＇，赵玉婷（1．新疆农业大学食品科学与药学学院，新疆乌鲁木齐830052：2．win德赢官方 ，新疆和田848000摘要：探究内苁蓉水提物体外抗氧化能力及对小鼠肠道菌群素乱的作用。以还原力、DPPH自由基、ABTS＇自由基、O自由基清除率考察内苁蓉水提物体外抗氧化能力。以肠道菌群，脏器指数，结肠绒毛形态结构，探究内苁蓉水提物对肠道菌群紊乱作用。结果表明：内苁蒙水提物抗氧化能力与其浓度呈正相关，DPPH自由基、ABTS自由基、O5自由基的IC，值依次为：0.225、1.819、12.53mg／ml。内苁蓉水提物能够缓解抗生素导致的小鼠体质量下降及对胸腺的生长抑制，显著提高肠道菌群紊乱小鼠粪便中双岐杆菌、乳酸菌含量及B／E值，对肠球菌及大肠杆菌的生长具有一定抑制作用，改善肠道菌群紊乱小鼠诱发的肠线毛变短、隐窝深度增加的现象。肉苁蓉水提物具有良好的体外抗氧化作用，能够调节肠道菌群紊乱的作用。关键词：肉苁蓉：水提物；体外抗氧化：肠道菌群：结肠绒毛形态结构肠道微生态由肠道菌群菌种、肠道菌群代谢物和黏膜屏障构成，可以通过肠道神经系统、神经内分泌系统及神经免疫系统调节等参与机体生理活动。肠道是机体炎症发生的最初部位，在人体代谢过程中，自由基损伤是炎症病理损伤的重要组成部分，机体未能及时清除自由基使其在机体蓄积，最终在肠道组织内产生，过量的自由基导致肠道组织结构破坏，病原菌与有害物质与肠道上皮细胞充分接触引发炎症，引起肠道菌群紊乱等叫。研究表明，肠道菌群的组成和数量与机体健康有一定联系。抗生素在合理的剂量下，能够有效抑制井杀灭病原体，在治疗疾病中发挥着重要作用。近年来，抗生素的滥用导致植物源及动物源食品抗生素超标从而导致肠道菌群紊乱引发肠道黏膜系统受损导致内部环境紊乱，不利于微生物定植，增加肠道疾病的风险-。天然植物调节抗生素引起的肠道微生态失衡已成为研究热点。德赢vwin登录 ［Cistanche tubulosa（Schrenk）Wight］， 别名大芸，主要寄生于柽柳属植物根部。近年来，肉苁蓉以广泛的药理活性及保健功效在治疗疾病、保障健康中发挥着重要的作用，市场前景乐观。国内外学者对肉苁蓉的化学成分及药理活性等进行深入的研究，药理活性的研究主要集中在激素调节、润肠通便、免疫调节、抗氧化及预防老年痴呆、神经保护、改善微循环、影响肠道菌群等药理作用-。目前，肉苁蓉调节肠道菌群紊乱的研究较少，本研究主要以还原力、DPPH自由基、ABTS＇自由基、0-自由基清除能力考察肉苁蓉水提物体外抗氧化能力。通过计算肠道菌群、肠道定植能力（B／E值），组织染色法观察结肠形态结构，结肠绒毛长度、隐窝深度、结肠绒毛高度／隐窝深度（V／O综合考察肉苁蓉水提物对小鼠肠道菌群紊乱的影响，以期为肉苁蓉调节肠道菌群紊乱提供理论依据。1 材料与方法1.1 材料与试剂德赢vwin登录 干片：win德赢官方 ：抗坏血酸（V2：国药集团化学试剂有限公司：羟甲基氨基甲烷（Tris）：美国 Amresco 公司：MRS培养基：杭州生物试剂有限公司：BBL培养基：杭州百思生物技术有限公司：Pfizer肠球菌选择性琼脂、伊红美蓝琼脂：青岛高科技工业园海博生物技术有限公司：SPF级雄性C57BI／6 小鼠：新疆医科大学实验动物中心24只，体质量（20±2）g。1.2 仪器与设备AL204-4C 电子天平：梅特勒-托利多仪器有限公司：XL-02A粉碎机：烨昌机械有限公司：HH-S数显恒温水浴锅、DHP-9052恒温培养箱：江苏省金坛市医疗仪器厂：TU-1810紫外可见分光光度计、JQ000453无菌操作台：苏净集团安泰公司：SX-500高压灭菌锅：日本TOMY公司：ECLIPS CI显微镜：尼康映像仪器销售（中国）有限公司1.3 试验方法1.3.1 肉苁蓉水提物的制备参照葛继红等提取方法，并稍作改动。由于水的张力较大，如用粒径小于40目的肉苁蓉颗粒提取，较难过滤，故将肉苁蓉干片粉碎，取粒径在20目-40目间的肉苁蓉颗粒，按料液比1：10（g／ml），提取时间5h．沸水浴条件下回流提取两次，过100目滤网，抽滤，过0.45μm滤膜，浓缩成浸膏备用。1.3.2 肉苁蓉水提物体外抗氧化作用1.3.2.1 肉苁蓉水提物 DPPH自由基清除率的测定参照杨冰鑫等方法，稍作改进。配置不同浓度的肉苁蓉水提物溶液，517nm处测定吸光度，VE为阳性对照，计算其清除率。清除率％＝［A。-（4，-4）］A。x100式中：A。为蒸馏水加DPPH溶液的吸光度：A，为待测样加DPPH溶液的吸光度：A2为待测样加蒸馏水的吸光度。1.3.2.2 肉苁蓉水提物还原能力的测定参照Omage方法，稍作改动。配置不同浓度的肉苁蓉水提物溶液取，700nm处测定吸光度，Ve为阳性对照。1.3.2.3 肉苁蓉水提物ABTS·清除试验参照蒲成伟等方法，稍作改动。配置不同浓度的肉苁蓉水提物溶液取，734nm处测定吸光度，Vc为阳

徐辉，魏晓东欧芹，张鹏霞，白大芳，王明富，杨 晶，李志伟（佳木斯大学基础医学院生化教研宝，黑龙江佳木斯154007）摘要：目的：观察肉苁蒙水提液对D-半乳糖致表大鼠肝脏氧化损伤的保护作用。方法：采用D-半乳糖所致表老模型大鼠，灌服内苁蓉水提液6周，测定肝脏活性氧单位Ca-ATP酶活性，肝线粒体 MDA含量、PLA2活性。结果：肉苁蓉水提液显著提高衰老模型大鼠肝脏活性氧单位C2-ATP酶活性（P＜001）．显著降低肝线粒体 MDA含量、PLA2活性（P＜0.01）结论：内苁蓉水提液能提高衰老模型大鼠肝脏抗氧化能力，具有抗表老作用。关键词：内苁蓉；致表大鼠；肝脏；氧化损伤：线粒体中图分类号：R965.1；R285.5 文献标识码：A 文章编号：1008-0104（2004）05-0022-02肉苁蓉为列当科植物.肉苁蓉（Gstanyhe deseticola Y CMa）的干燥带鳞片的肉质茎，主产于我国的内蒙古、新疆、甘肃、青海、陕西等省区，具有补肾阳、益精血，润肠通便等功效 有研究表明，肉苁蓉具有增强免疫力、抗辐射、抗疲劳等药理作用。但有关肉苁蓉水提液对 D-半乳糖致衰大鼠肝脏活性氧单位、C2-ATP酶活性以及肝线粒体 MDA含量PLA活性的影响未见报道本实验通过肉苁蓉水提液对致衰大鼠肝脏氧化损伤保护作用的研究，以期进一步探讨肉苁蓉的抗氧化作用和抗衰老机制1 材料与方法1.1 材料动物：纯系 Wistar大鼠30只，3-4月龄，体重180-210g，雌雄各半，由黑龙江省佳木斯大学实验动物中心提供药材：肉苁蓉，由佳木斯药材公司提供 主要仪器：赛多利斯PP-25型高灵敏度 pH计：TDZ5-WS多管架自动平衡离心机：GL-21M高速冷冻离心机；722光栅分光光度计：DY89-1 型电动玻璃匀浆机；KQ-5200型超声波清洗器：电热恒温箱等，主要试剂：去氧胆酸钠由 Amence公司提供；MDA试剂盒，活性氧试剂盒，C-ATP酶试剂盒，考马斯亮兰蛋白测定试剂盒，双缩脲蛋白测定试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供；D-半乳糖（D-gal）由上海试剂二厂提供1.2 实验方法1.21 药剂制备取肉苁蓉400g用水浸泡30min，超声提取两次，每次30min，抽滤器抽滤后，合井滤液井浓缩至相当于每毫升含生药0.5g后得肉苁蓉水提液，贮存备用。1．．2 动物分组、给药及处理将30只大鼠随机分为3组：青年对照组，衰老模型组。模型给药组，每组各 10只，常规饲料喂养，青年对照组每日上午皮下注射生理盐水，灌服温开水；衰老模型组每日上午按50mg／kg剂量皮下注射 D-gal．同时灌服温开水；模型给药组每日上午按 S0mg／kg剂量皮下注射 D-gal．同时按生药量2g／kg灌服肉苁蓉水提液。连续给药 6周后，处死动物，取材1.2.3 肝匀浆及肝线粒体制备参照南京建成生物工程研究所提供的实验方法学，取肝脏1g左右，用冷生理盐水漂洗，拭干称重，加入 9倍体积预冷的匀浆介质，用电动匀浆机充分磨碎得肝组织匀浆，将肝组织匀浆（3000r／min）离心 10min，取上清冻存待测 按上述方法制备肝匀浆，取肝匀浆（2000／min）离心10min，弃沉淀，上清液（10000r／min）在高速冷冻离心机中离心15min，沉淀物即为线粒体，将线粒体悬浮于介质中，供指标测定1.2.4 指标测定肝组织活性氧单位，G-ATP酶活性，肝线粒体丙二醛（MDA）含量测定按试剂盒说明进行，其中活性氧单位定义为每毫克组织蛋白在3C下反应1min，使反应体系中HO2降低1mmol／L为一个活性氧单位，活性氧单位越高，抗氧化能力越强C2-ATP酶活性定义为每小时每毫克组织蛋白的 ATP酶分解 ATP产生 μmol无机磷的量为一个ATP酶活力单位。磷脂酶 A活性测定参照陈思锋方法进行四，取2只 25ml烧杯分别作为测定管和对照管，测定管中加入底物缓冲液 8ml．0 5mol／L氯化钙0.2ml．样本 04ml：对照管中加入底物缓冲液 8ml．15mmol／L EDTA1.1mL样本0.4ml然后 37C水洛 60min再向测定管中加入 1.1mlEDTA．对照管中加入0.2ml氯化钙，混匀后用赛多利斯 PP-25型高灵敏度pH计分别测定两管的pH．用新标定的0.002mol／1腾盐酸将对照管的pH滴定至测定管的pH值，以所消耗的盐酸计算测定管中酶的活力。1.3 统计学分析实验数据以均数土标准差（x士s）表示，应用 SPSS11．统计学软件进行统计学分析。2 结果肉苁蓉水提液显著提高衰老模型大鼠肝脏活性氧单位。C-ATP酶活性（P＜0.01），显著降低肝线粒体 MDA含量、PLA活性（P＜0.01），见附表附表 肉苁蓉水提液对衰老模型大鼠肝脏活性氧单位.Ca-ATP酶活性。肝线粒体丙二醛（MDA）含量，PLA2活性的影响（x±s）组别-活性氯单位（U）C2-ATPmol Pi/mg prot b)MDAnmol/mg prot)PLA2(U/mg prot)青年对照组1083.2361 4.1551.1531 0 2034.28社 0.8546.1991 0.778衰老模型组960 2471 3 199A0.71日 0.104657H 0.98249.863± 0 97A模型给药组979.48± 4 7761.05 0.0924.3451 0 656.79址 0.835注 与青年对照组比较ΔP＜0.01，与衰老模型组比较＊P＜0.013 讨论许多实验证据表明，D-半乳糖衰老模型大鼠出现一系细胞器，在线粒体产生能量的同时，有2％的氧在线粒体内转化为氧自由基，由于机体内存在抗氧化剂，使活性氧等氧自由共的生和造验保持平密团多这融平衡被破坏时 就金使自由基生成过多，导致机体出现衰老的改变实验表明，衰老时细胞内尤其是线粒体 SOD活性下降，MDA含量增加本实验以D-半乳糖衰老模型大鼠为研究对象，结果表明，衰老大鼠肝组织活性氧单位（抗氧化能力）较青年鼠显著下降，肝线粒体丙二醛（MDA）含量显著上升，这说明，衰老时抗氧化剂清除率的下降，使机体抗氧化能力下降，进使活性氧等自由基的产生和清除失去平衡，于是活性氧在机体内堆积。损伤细胞 由于线粒体膜直接接触活性氧，受到直接攻击，使膜脂质氧化形成大量过氧化脂质及丙二醛，同时由于线粒体膜氧化受损，使活性氧外漏而损伤细胞器，造成细胞功能的下降，本实验证明，衰老大鼠肝组织C2-ATP酶活性的下降可能也是由于氧自由基从线粒体漏出后损伤细胞膜而导致的结果磷脂酶A（PLA）位于线粒体内外膜之间，与内外膜紧密结合，属于 PLA-11型（膜结合型），是磷脂Sn-2位酰基水解酶的简称，相对分子质量约为14000．C2为其激活剂问 大量实验证据表明，衰老时出现细胞内钙稳态失调和细胞钙调节能力减低，细胞膜钙泵活性随年龄增加而显著下降，外排C的能力明显降低，结果导致细胞内游离钙增加。钙稳态失调 钙超载时对细胞造成的损伤主要有两方面：①使线粒体氧化磷酸化解偶联，细胞呼吸抑制，②激活磷脂酶GAA3本实验证实，衰老大鼠肝组织C2-ATP酶活性下降，肝线粒体 PLA2活性升高，说明可能由于C2-ATP酶活性的下降使胞浆C浓度升高，导致线粒体 PLA活性的升高。PLA是许多生化过程的关键酶，它可以水解自身磷脂使线粒体膜骨架脆性增加，花生四烯酸释放增加，同时产生大量自由基，导致膜通透性增加，钙离子大量流入，钙离子进一步激活 PLA从而造成恶性循环、此外，PLA活性的升高可以改变膜磷脂的成分，对膜流动性产生影响，同时，PLA降解磷脂的产物也会损害呼吸链，影响氧化磷酸化并造成线粒体不可逆损伤！PLA2还可以直接造成质子跨线粒体内膜转运能力下降及 H-ATP酶活性下降可见，PLA会从不同方面造成线粒体功能下降进而影响机体正常功能本实验结果显示，肉苁蓉水提液可提高肝脏抗氧化能力C2-ATP酶活性，降低肝线粒体MDA含量，PLA活性。这可能是由于肉苁蓉具有抗氧化功能，使自由基生成减少，从面减轻自由基对肝组织及线粒体的损伤作用，进而提高肝脏抗氧化能力，减少脂质过氧化，也使 Ca-ATP酶免受损伤，保证了C2-ATP酶的活性，使肝细胞内外钙离子浓度保持正常水平，避免由于胞内钙超载而导致线粒体PL．A2活性的升高本实验表明，肉苁蓉水提液通过提高肝脏抗氧化作用，减少脂质过氧化产物，减轻线粒体氧化损伤起到抗衰老作用参考文献：1陈思锋，吴中立，体液和组织磷脂酶 简便快速测定法［J］第二军医大学学报，1989.10（3）254-25612陈熙，李文彬，张炳烈，D-半乳糖亚急性中毒大鼠拟衰老生化改变｜川中国药理学与毒理学杂志，1990.4（4）：309-3103]lnone M,Sate EF,Nishikawa M,et al Mitochondrial genera-tion of reactiw e asygenspecies and is role in aerobie bfe Jl.Curr Med Chem,2003.10(23):2495-2505[4]Harman D.The fee radeal theory of aging[JAntiosid Redex Signal 2003.5(5):557-561[5]Vohra BP.Sharma SP,Kanal VK.Age- depe nde at variations in mitochond rial and eytosolie antioxilant enzymes and lipil per-exidation in dffere at regions of central nevous sysem of gna Pigs[ J} Indian JBochem Beplays.2001,38(5):321-326［6顾天爵．生物化学［M］．第4版，北京：人民卫生出版社，2000.115-116（7］狄荣料，马瑞，周志强，等，褪黑激素对中老年大鼠抗氧化作用的初步观察［月中国老年学杂志，2000.20（4）：232-233[8]Bordorf G.Uemura Y,Banventre JN.Characterization of phm-pholipame Az( PL Ae) activity in gerbil brais enhanced activties of eyteseke,mitochondrial.and microsomal brms dter ischemia and reperfsion[J] J Nerosci 1991.11(6)1829-183619課晚益，黄跃生，杨宗城，严重烧伤早期心肌线粒体磷脂变化及其机制［J月中华创伤杂志，2001.17（7）：416-419［10陆松敏，杨鹤鸣，宋双明，等，LPS PLA2及氧自由基对线粒体跨膜质子转运和 H-ATPase的影响［J］第三军医大学学报，1998.20(4)329-332（收稿日期：2004-09-13）

［摘　要］　从野生肉苁蓉的茎中分离出水溶性粗多糖．粗多糖经Sevage 法脱蛋白、反复冻融、高速离心、超滤分级‚得级分SPA．经高压液相色谱等方法证明SPA 为均一组分‚气相色谱分析‚SPA 的单糖组成为Ara‚Rha‚Man‚Gal‚Glc‚摩尔比依次为1．83∶1．00∶3．06∶4．56∶14．74．以上结果表明多糖SPA 是以葡萄糖和半乳糖为主兼有阿拉伯糖、鼠李糖和甘露糖的中性杂多糖．［关键词］　肉苁蓉；多糖；组成0　前言肉苁蓉（Cistanche deserticola Ma）为列当科肉苁蓉属多年生草本植物‚专性寄生于沙漠戈壁植物梭梭的侧根部‚为国家二级重点保护植物．其肉质茎可入药‚药性为：补精血、益肾强筋、润五脏、暖腰膝‚治虚劳内伤［1］‚被誉为“沙漠人参”．目前国内外对肉苁蓉的研究表明‚其主要的药理活性成分为多糖和苯乙醇苷‚肉苁蓉多糖的药理活性主要有抗衰老、调节免疫、促进创伤愈合、抗氧化、强体、保肝健脾等作用［2］．目前分离到的肉苁蓉多糖大多都是一些杂多糖‚加之生境、培养条件、提取分离技术的不同‚造成多糖结构及活性出现差异‚这些都给进一步研究带来了困难‚在分子水平上阐明它们的药理作用和作用机理受到了很大的限制．虽然有不少肉苁蓉多糖已应用临床‚但由于其化学结构不明确‚质量很难控制‚造成药物重复性较差‚不符合国际规范‚因而也难以在医药领域占主导地位．有关肉苁蓉多糖进一步分离纯化的研究较少且不全面［3］‚所以‚本文拟对其进行较细致的研究‚以求确定是哪一种多糖在药理上发挥主要作用．1　材料仪器与试剂1∙1　材料肉苁蓉（Cistanche deserticola Ma）‚购于吉林省长春市吉林大药房‚东北师范大学生命科学学院植物教研室鉴定．1∙2　仪器与试剂2300全自动凯氏定氮仪Ⅱ（丹麦FOSS 公司）‚ALPHA1－2型号冻干机（德国）‚SHIMADZU高压液相色谱（日本岛津）‚WZZ－T1 型旋光仪（上海物理光学仪器厂出品）‚Vavian3400气相色谱仪（美国‚附FID 检测器）．右旋糖酐为中国药品生物制品检定所生产‚Sephadex G－75及Sephadex G－100均为Pharmacia 产品‚三甲基氯硅烷为Flukache mika 产品‚六甲基二硅胺烷为上海试剂一厂产品‚其余试剂均为分析纯．2　实验方法2∙1　粗多糖的提取与分离将切成薄片的肉苁蓉茎置于2∙5倍体积的蒸馏水中‚浸泡24h 后‚小火煮提4次‚每次2h‚合并滤液‚并浓缩至挂壁．加入3倍体积的84％乙醇醇析24h‚离心后得粗多糖SP．2∙2　蛋白含量测定（凯氏定氮法）取粗糖700mg‚硝化后进样‚蒸馏时间3∙5min‚循环时间4．5min‚测定范围0．1～200mg‚重现性1％‚回收率99．5％～100％．2．3　粗多糖的纯化分级2．3．1　反复冻融将粗多糖SP 用蒸馏水配成5％的溶液‚－20℃冷冻‚室温缓慢融化‚高速离心（8000r／min）‚重复三次．2．3．2　脱蛋白将英国进口链蛋白酶‚按w 酶∶w 蛋白＝1∶50加至5％的糖溶液中‚同时加入少量二甲苯防腐（1％NaCl 作激活剂）‚37℃保温48 h．按糖液总体积的1／4加入Sevage 试剂（V 氯仿∶V 正丁醇＝4∶1）‚充分振荡1～2h‚静止‚离心‚取上清重复‚至无游离蛋白为止［4］．2．3．3　超滤分级将糖液配成2％的溶液‚分别过膜进行超滤‚压力为68．9kPa‚时间为1h．将糖液冻干后‚取相对分子质量为5000～10000之间的多糖做进一步的分级［5］．2．3．4　Sephadex G－75柱层析分级将相对分子质量为5000～10000之间的多糖配成100％的溶液‚上Sephadex G－75（2．5cm×90cm）制备柱‚0．9％NaCl 洗脱‚流速0．5mL／min‚得级分SPA．2．4　SPA 纯度鉴定2．4．1　高压液相色谱层析柱：G3000PWXL；流动相：0．9％NaCl；流速：0．5mL／min；柱温：40℃；压力：2．0MPa；进样量：20μL．2．4．2　醋酸纤维薄膜电泳醋酸纤维薄膜电泳2cm×8cm‚缓冲液为硼砂－NaOH（pH＝10）‚甲苯胺蓝染色‚90％乙醇作漂洗液‚无水乙醇和冰醋酸（ V 无水乙醇∶V 冰醋酸＝3∶1）作透明液‚电压40V‚电泳时间50min．2．5　SPA 的有关性质测定2．5．1　总糖含量测定（酚－硫酸法）将0∙1mg／mL 糖溶液、6％苯酚溶液、浓硫酸依次按1∶0．5∶2．5的体积比加入‚振荡‚静止‚冷却‚然后在490nm 波长下比色‚所得数值查标准曲线可得总糖含量［6］．2．5．2　相对分子质量测定采用G3000PWXL高压液相层析柱‚0．9％的NaCl 为流动相‚示差检测器检测‚以中国药品生物制品检定所生产的右旋糖酐（相对分子质量分别为2．14×104‚1．0×104‚0．71×104‚0．46×104‚0．25×104）制成标准曲线‚测定SPA 的相对分子质量．2．5．3　红外光谱检测采用SPECORD IR 型红外光谱仪‚样品与KBr 压片‚扫描范围4000～400cm－1‚常规方法测定．2．5．4　比旋光度测定将10mL 饱和糖液用自动旋光仪‚钠灯光源‚蒸馏水调零点‚1dm 管室温下测定［7］．2．6　气相色谱分析（G．C．）2．6．1　甲醇解彻底干燥的糖样10mg‚加入无水HCI－甲醇2mL‚充氮气封管‚80℃甲醇解20h‚凉至室温后‚用无水KOH－甲醇中和至pH＝6‚40℃减压旋转蒸干‚常规干燥［8］．2．6．2　硅烷化（T．M．S 衍生物制备）向彻底干燥的甲醇解产物中加入0．2mL 无水吡啶（内含饱和甘露醇作内标）；75℃溶解30min‚然后加入0．3mL 硅烷化试剂（V 六甲基二硅胺烷∶V 三甲基氯硅烷＝2∶1）‚摇匀‚静止几分钟‚即可取上清进行分析．2．6．3　气相色谱条件色谱柱：SE－30（50mm×0．2mm×0．25μm）；气化：300℃；检测：300℃；柱温：120℃（2min）→250℃（30min）；载气：高纯氮气．3　结果与讨论粗多糖SP（常规干燥样品）的收率为5％‚为棕褐色粉末‚易溶于水‚酚－硫酸法测得总糖含量为49％‚用凯氏定氮仪测其蛋白含量为10．69％‚经P．C．和G．C．分析其组成为Rha‚Ara‚Man‚Gal‚Glc‚摩尔比依次为3．46∶1．00∶2．58∶2．98∶7．33‚为中性杂多糖．粗多糖在Sephadex G－100柱层析中峰形分布宽且不对称‚为不均一组分‚需进一步分级、纯化．粗多糖反复冻融3次‚高速离心‚取上清液冻干‚经酶法和Sevag 法联合脱蛋白41次后‚再经超滤分级‚发现相对分子质量在5000～10000之间的级分收率最好‚为30．1％‚且相对分子质量分布范围较窄‚故选其为进一步分级的对象．将所得级分经Sephadex G－75制备柱制备得级分SPA．经高压液相色谱检测SPA 呈单一狭窄对称峰（见图1）‚醋酸纤维薄膜电泳检测呈单一谱带‚在不同浓度的低醇溶液中‚SPA 的比旋光度基本一致‚由此可见SPA 为纯度较好的多糖样品．SPA（冻干样品）为灰白色粉末‚易溶于水‚旋光值为［α］20D ＝＋288°‚相对分子质量为7600．红外光谱分析表明它在890cm－1处有特征吸取峰‚说明SPA 主要由β－糖苷键构成‚在3600～3200cm－1的吸收峰是－OH 的吸收峰‚在2922cm－1左右有一强的吸收峰‚是－CH 和－CH2 的共振吸收峰‚1671cm－1左右的峰是多糖的水合振动峰（见图2）．经酚－硫酸法测定‚查标准曲线‚它的糖含量为95％．经G．C．分析‚其单糖组成为Ara‚Rha‚Man‚Gal‚Glc‚摩尔比依次为1．83∶1．00∶3．06∶4．56∶14．74．多糖药物的研制已成为当今世界新药的发展方向之一．多糖具有多种生物活性‚是理想的免疫增强剂‚随着中国加入WTO 和中药现代化的要求‚祖传秘方已经不被人们所信服‚要想将中药打入国际市场‚就必须弄清其有效成分是什么‚其结构如何、比例怎样‚将中药现代化的口号打响．应利用我国现有的化学、物理和生物学等分析技术对肉苁蓉多糖的分子结构进行深入研究‚在此基础上探讨肉苁蓉多糖的构效关系、量效关系及肉苁蓉多糖免疫作用机理‚加强肉苁蓉多糖的制备、质量标准、给药途径等技术问题的研究‚为肉苁蓉多糖的合成、药理学及临床学的研究打下坚实的理论基础‚以不断扩大肉苁蓉多糖在临床领域的应用．肉苁蓉多糖SPA 相对分子质量较小‚且水溶性好‚与已知的天然活性多糖有许多相似之处‚所以有必要对SPA 继续进行深入研究‚目前SPA 的结构研究正在进行中．［参　考　文　献］［1］　樊文颖．肉苁蓉开发利用研究的进展与问题［J］．内蒙古林业调查设计‚2001‚24（4）：46～47．［2］　曾群力‚郑一凡‚吕志良．肉苁蓉多糖的免疫活性作用及机制［J］．浙江大学学报‚2002‚31（4）：284～287．［3］　曾群力‚霍亚楠‚毛俊浩‚等．肉苁蓉多糖的分离、纯化和鉴定［J］．中草药‚2002‚33（12）：1057～1058．［4］　梁忠岩‚张翼伸．斜订菌中水溶性多糖的研究［J］．高等学校化学学报‚1983‚4（3）：364～370．［5］　张维杰．糖复合物生化研究技术［M］．杭州：浙江大学出版社‚1999．94．［6］　Sana S K‚Bre wer C F．Deter mination of the concentrations of oligosaccharides‚complex type carbohy drates‚andglycoproteins using the phenol－sulfuris acidt method［J］．Carbohydr Res‚1994‚254：157～167．［7］　陈玉香‚张丽萍‚梁忠岩‚等．沙棘果水溶性多糖H2 的分离纯化与抗病毒研究［J］．东北师大学报（自然科学版）‚1997（4）：74～77．［8］　石德成‚张翼伸．碳水化合物的气相色谱分析［J］．东北师大学报（自然科学版）‚1982（3）：43～49．