2.3.2 游离氨基酸含量的测定 精密称取肉苁蓉提取物冻干粉适量，加pH＝2.2的柠檬酸钠缓冲溶液制成100mg·mL-＇的肉苁蓉提取物溶液，用氨基酸自动分析仪以外标法测定氨基酸的含量。2.3.3 肽含量的测定 酸溶性蛋白与游离氨基酸测定值的差值即为肽含量。2.4 苁蓉总苷的含量测定P2.4.1 松果菊苷①色谱条件：采用YMC-Pack Pro C1s色谱柱（4.6mmx150mm，5μm），流动相甲醇-0.15％醋酸水溶液（30：70），流速1.0mL·min＇，检测波长333nm．柱温40℃，进样量10μL。②对照品溶液：精密称取松果菊苷对照品适量，加50％甲醇制成0.1mg·mL-＇（经折算后）的溶液。③供试品溶液：精密称取肉苁蓉提取物冻干粉适量，加50％甲醇适量制成0.3mg＊mL-＇的肉苁蓉提取物溶液。④测定法：分别取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入高相液相色谱仪，记录色谱图，按照外标法计算松果菊苷的含量。2.4.2 苁蓉总苷①对照品溶液：精密称取松果菊苷对照品适量，加50％甲醇制成0.1mg＊mL-（经折算后）的溶液。②供试品溶液：精密称取肉苁蓉提取物冻干粉适量，加50％甲醇适量制成20μg＊mL-＇的肉苁蓉提取物溶液。③标准曲线的制备：精密移取对照品溶液1、2、3、4、5mL置50mL量瓶中，加50％甲醇至刻度，按紫外-可见分光光度计法测定，在333nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。④测定法：取供试品溶液在333nm波长处测定吸光度，从标准曲线读取含量，按照下式计算苁蓉总苷的含量，即得。Q=(01-02)x(624/786)+QQ为肉苁蓉提取物中苁蓉总苷的含量（％）；01为以松果菊苷为对照测得肉苁蓉提取物冻干粉中苁蓉总苷的含量（％）；O2为高效液相色谱法测得肉苁蓉提取物冻干粉中松果菊苷的含量（％）。2.5 总糖的含量测定2.5.1 对照品溶液 精密称取D-无水葡萄糖对照品适量，加纯化水适量制成100μg·mL-的溶液。2.5.2 供试品溶液 精密称取肉苁蓉提取物冻干粉适量，加纯化水适量制成50μg·mL-的肉苁蓉提取物的溶液。度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。2.5.4 测定法 分别精密移取“2.5.1”项下对照品溶液1.0mL和纯化水1.0mL置于25mL比色管中，加入1.0mL苯酚溶液（50mg·mL-＇），混匀后，小心加入浓硫酸5.0mL，再煮沸2min，取出10min后，在波长489nm处测定吸光度，根据标准曲线计算总糖含量。2.6 抗氧化能力的测定2.6.1 DPPH自由基清除能力 准确称取DPPH粉末适量，用无水乙醇溶解并定容，配制浓度为40μg＊mL-的DPPH乙醇溶液。精密称取抗坏血酸（阳性对照）以及肉苁蓉提取物冻干粉适量，分别用乙醇溶解并定容，配制样品乙醇溶液。移取2mL样品乙醇溶液和2mLDPPH乙醇溶液混合均匀（4）；移取2mL供试品溶液和2mL乙醇混合均匀（4，）；移取2mLDPPH溶液和2mL乙醇混合均匀（A。），室温放置30min，在515nm波长处测定吸光度，并根据以下计算公式计算自由基清除率（IR）：IR％＝［1-（4-4，）／A］x100％。2.6.2 ABTS自由基清除能力 准确称取适量ABTS粉末用纯化水溶解并定容，制成4mg＊mL-的ABTS溶液。准确称取适量过硫酸钾用纯化水溶解并定制成4mg·mL-的过硫酸钾溶液。移取352μL过硫酸钾溶液加入至20mLABTS溶液中，摇匀，静置过夜后移取1mL与65mLPBS缓冲溶液混匀，制成ABTS工作液。精密称取肉苁蓉提取物冻干粉适量，用纯化水溶解并定容，配制样品溶液。准确移取0.5mL样品溶液和5mLABTS工作溶液混合均匀（A）；准确移取0.5mL样品溶液和5mLPBS缓冲液混合均匀（4）：准确移取5mLABTS工作溶液和0.5mL PBS缓冲液混合均匀（A。）．立即在734nm处测定吸光度，计算自由基清除率，计算公式同“2.6.1”项下。2.6.3 超氧阴离子自由基清除能力（SRSA）准确移取1mL0.1moL·L-PBS缓冲液（pH＝7.4）于 量瓶中，加入1mL150μmoL·L-氯化硝基四氮唑蓝（NBT）溶液，2mL468μmoL·L-还原型辅酶I（NADH）溶液，1mL 60 μmoL·L-过一硫酸盐（PMS）溶液，搅拌均匀，25℃下反应5min，制成工作液。精密称取肉苁蓉提取物冻干粉适量，用PBS缓冲液溶解并定容，配制样品溶液。准确移取0.5mL样品溶液和5mL工作溶液混合均匀（4，）；准确移取0.5mL供试品溶液和5mL纯化水混合均匀（A，）；准确移取5mL上述工作溶液和0.5mL纯化水混合均匀（A。）．立即在560nm处测定吸光度，并计算自由基清除率，计算公式同“2.6.1”项下。2.7 对班马鱼神经损伤保护作用的评价2.7.1 实验动物 野生型AB品系斑马鱼，以自然成对交配繁殖方式进行，年龄为受精后1d。以上斑马鱼均饲养于28℃的养鱼用水中（水质：每1L反渗透水中加人200mg速溶海盐，电导率：480～510μS·cm：pH为6.9～7.2；硬度：53.7～71.6mg·L-＇CaCO，）． 实验动物使用许可证号为：SYXK（浙）2012-0171。饲养管理符合国际AAALAC认证的要求。2.7.2 最大耐受浓度的测定 随机选取960尾受精后1d的野生型AB品系斑马鱼胚胎于六孔板中，每孔（实验组）均放置30尾斑马鱼，用3mL吗替麦考酚酯（0.4 μmol·L-）诱发斑马鱼中枢神经损伤，同时分别加入用水配制浓度为125、250、500、1000和2000μg·mL-的肉苁蓉提取物溶液各3mL，同时设置正常对照组（加养鱼水）和模型组（只加吗替麦考酚酯）。供试品处理期间，每日对死亡的斑马鱼计数并移除死鱼。处理24h后，观察记录斑马鱼的表型（体型变化和毒性表现）和死亡情况，确定斑马鱼对供试品的最大耐受浓度（MTC）。2.7.3 神经损伤保护作用 随机选取受精后1d的野生型AB品系斑马鱼于六孔板中，每孔（实验组）均放置30尾斑马鱼，用吗替麦考酚酯（0.4μmol·L-＇）诱发斑马鱼中枢神经损伤模型，同时分别给予一定浓度的肉苁蓉提取物溶液或154μg＊mL-的谷胱甘肽（阳性对照组），同时设置正常对照组（加养鱼水）和模型组（只加吗替麦考酚酯）处理24h后，用吖啶橙进行染色，染色后每个实验组随机选取10尾斑马鱼在荧光显微镜下拍照并保存图片，用NIS-Elements D 3.10高级图像处理软件进行图像分析，计算斑马鱼中枢神经（脑和脊髓）凋亡细胞的光强度（S），根据凋亡细胞荧光强度的统计学分析结果评价供试品对斑马鱼中枢神经的保护作用。统计学处理结果用mean±SE表示，中枢神经的保护作用计算公式为：中枢神经保护作用（％）＝（Smmm-S供试m）x100％／（Smmm-S正常照）。用方差分析和Dunnett＇st-检验进行统计学分析，P＜0.05表明差异具有统计学意义。3 结果3.1 工具酶的筛选肉苁蓉含有10％～20％蛋白类成分，由于蛋白类成分水溶性差，较难使用常规的工艺提取，因此在其提取液中添加生物蛋白酶进行提取。蛋白酶的引入，可将药材中大分子蛋白水解成水溶性较好的小分子肽类，从面增加蛋白类的提取率。本文用菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和酸性蛋白酶进行提取，提取液浓缩冷冻干燥，测定肽、总苷和总糖的收率，并作其与时间的关系曲线，如图1所示。图1 不同蛋白酶提取3种成分收率时间曲线Figl Effect of different preteases extraction time on the extration rates of 3 componentA.肽收率（peptide）；B.总苷收率（glycoside）；C.总糖收率（polysaccharide）如图1A所示，菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶以及酸性蛋白酶对肽的提取率均随着提取时间的延长而提高，但在2h后，提高较为缓慢。其最高提取率分别为6.1％、8.2％、11.5％、8.1％和4.1％．可见中性蛋白酶效果最好。5种酶对总苷的提取和总糖的收率也是随着提取时间的延长而提高，2h后基本达到平衡（见图1B和IC）。中性蛋白酶和碱性蛋白酶对总苷的提取效果基本一致，菠萝蛋白酶和酸性蛋白酶提取效果不佳。图1C显示碱性蛋白酶比中性蛋白酶更有助于对总糖的提取，但差异无统计学意义。综合对这3种成分提取率的考虑，本文选择中性蛋白酶作为肉苁蓉提取物工艺中的最佳工具酶，为提高中性蛋白酶的提取效率，将进一步进行提取条件单因素考察。3.2 酶提取条件单因素试验0.4％、0.6％的中性蛋白酶，搅拌2h后，提取液浓缩冷冻干燥，测定肽、总苷和总糖的收率，结果见表1。由表1可知，这3种成分的收率在加酶量为0.1％时较高，加酶量继续增加，收率提高缓慢，可见蛋白酶添加量为药材质量的0.1％时为最佳用量。表1 酶的用量对3种成分收率的影响（n＝3）Tab l Effect of pretease dosage on the extration rates of the three components(n=3)酶用量肽收率总苷收率总糖收率(pretcase(peptide(total glycoside(total sugar)concentration)/%yield)/%yield)/%%0.059.4±0.062.8±0.0330.7±1.280.111.2±0.173.6±0.0236.4±1.330.210.9±0.033.7±0.0136.7±0.710.411.4±0.113.8±0.0238.1±0.850.611.5±0.063.7±0.0238.5±1.05 

刘明川，钟少达，杨进平，翁玲玲，杨胜杰，王昭日（杏辉医药集团杏辉天力（杭州）药业有限公司研究所，杭州 311100）摘要：目的 研究肉苁蓉提取工艺条件及其神经保护作用。方法 利用生物酶对内苁蓉进行提取，通过单因素试验优选工艺条件，提取液经卷式膜纯化，冷冻干燥后获得肉苁蓉提取物，并对其进行抗氧化活性测试，再采用斑马鱼体内试验评价内苁蓉提取物对斑马鱼中枢神经损伤的保护作用。结果 最优工艺为加8倍量纯化水，温度为45～50℃，调整pH为7.0，加入药材质量0.1％的中性蛋白酶，搅拌2h，煮沸灭活后，经微滤卷式膜进行过滤，收集透过液。所制备的肉苁蓉提取物收率在60％以上，肽含量不低于20％，总苷含量在7％左右，糖类成分在63％左右。抗氧化活性测试表明肉苁蓉提取物对2,2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）（ABTS）自由基和超氧阴离子自由基具有较强的清除作用（IC值分别为314.9μg＊mL-和393.5μg＊mL-＇），斑马鱼体内活性实验表明肉苁蓉提取物对班马鱼中枢神经损伤具有较好的保护作用。工艺具有绿色环保、操作简便等优点，所制备的肉苁蓉提取物具有较好的抗氧化和神经保护作用。关键词：肉苁蓉提取物；生物酶；肽；抗氧化；神经保护中图分类号：R284.2．R285.5     文献标识码：A     文章编号：1672-2981（2019）12-2020-07doi:10.7539/j.issn.1672-2981.2019.12.002苁蓉，又名大芸，主产于内蒙古自治区阿拉善盟和新疆维吾尔自治区的塔克拉玛干沙漠。中医称其为地精或金笋，是极其名贵的中药材，素有“沙漠人参”之美誉，历史上就被西域各国作为上贡朝廷的珍品州。沙漠肉苁蓉 Cistanche deserticola Y.C.Ma和德赢vwin登录 Cistanche tbulosa（Schrenk）Wight是主要 品种，已被《中国药典》（2015年版一部）收录均。肉苁蓉具有补肾壮阳、填精补髓、养血润燥、悦色延年等功效，主治男子阳痿，女子不孕、带下、血崩，腰膝冷痛，血枯便秘等制。在历代增力中药处方中出现率占第1位，而在抗老防衰类方剂中仅次于人参，占第2位。肉苁蓉在我国已有两千多年的使用历史，现代药理学研究表明，肉苁蓉除能补肾壮阳外，更兼有抗衰老、增强记忆力、提高免疫力等多种功能叫。从20世纪80年代开始，国内外对肉苁蓉的化学成分进行了大量研究，结果证实了苯乙醇苷类、糖类、蛋白类为肉苁蓉的主要成分。苯乙醇苷类具有抗氧化、抗衰老、调节神经内分泌系统等生物活性；糖类物质可以提高小肠推进度，达到通便润燥的功效，同时还有提高记忆力的作用；蛋白类成分约占肉苁蓉药材的10％～20％，可以提高机体免疫力，增强体质。目前获得苁蓉提取物最普通的方法是水提取法和有机溶剂提取法，两种方法可以将苁蓉中的苯乙苷类和糖类成分提取出来，但蛋白类成分很难提取彻底，而且两种方法需要多次提取，得率不高，造成资源利用率低。为了简化肉苁蓉提取物的制备工艺，避免有毒试剂的使用，提高肉苁蓉提取物的收率，同时满足大规模生产，本文拟研究肉苁蓉的提取工艺，并期望获得的肉苁蓉提取物中富含较易吸收的小分子肽类、苷类和糖类成分，再通过斑马鱼体内实验评价肉苁蓉提取物的神经保护作用。1 材料R-210型旋转蒸发仪、V-700型真空隔膜泵、K-436快速消解仪和K-360凯氏定氮仪（瑞士步琪公司）。RET control-visc磁力搅拌器（德国IKA公司），A300全自动氨基酸分析仪（德国曼默博尔公司），1525型高效液相色谱仪（美国Waters公司），Lambda 35型紫外可见分光光度计（美国PerkinElmer公司），Milli-QReference纯水机（美国Millipore公司），XS-205型1／10 万电子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司），FreeZone型冷冻干燥机（美国Labconco公司）。肉苁蓉药材（浙江南方药材有限公司，经台湾国防医学院林汉钦教授鉴定为列当科肉苁蓉属植物肉苁蓉 Cistanche deserticolaY．C．Ma干燥的肉质茎，符合2015年版《中国药典》规定，样品编号20180122，并将其粉碎过四号筛网），D．无水葡萄糖对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110833-2012050．纯度：99.9％），松果菊苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：111670-201706，纯度：89.7％），菠萝蛋白酶（酶活力为30万U·g＇）、木瓜蛋白酶（酶活力为40万U·g）、中性蛋白酶（酶活力为30万U·g＇）、碱性蛋白酶（酶活力为20万U·g＇）以及酸性蛋白酶（酶活力60万U·g＇）均为食品级，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。2 方法2.1 提取工艺中工具酶的筛选采用菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、酸性蛋白酶对肉苁蓉进行提取，具体步骤为：取100g肉苁蓉药材，固定料液比1：6（g／mL）加入纯化水，用浓度均为1mol·L-的盐酸和氢氧化钠调节每种酶的最适pH，加入药材质量0.05％的蛋白酶，在各个酶的最适温度恒温搅拌。反应1、2、4、6、8、10h时取样10mL，煮沸灭活，离心过滤后，取滤液，测定肽、总苷和总糖含量，作含量与提取时间的变化曲线。2.2 酶提取工艺单因素考察试验考虑到生物酶法制备肉苁蓉提取物的影响因素，设计考察5个单因素：时间、酶用量、料液比、温度、pH值。2.3 肽含量测定2.3.1 酸溶性蛋白质含量的测定 精密称取肉苁蓉提取物冻干粉适量至10mL量瓶中，加适量15％三氯乙酸，充分溶解后，再加15％三氯乙酸至刻度。过滤后，取全部滤液按凯氏定氯法测定可溶性蛋白质的含量。

王英姿＇，张超，贺葵邦（1．北京中医药大学，北京100102：2．山东中医药大学，山东 济南 250355）摘要：目的 选择肉苁蓉的提取工艺。方法 以松果菊苷、β-谷甾醇、总糖及干浸膏得率为指标，在药材粒度、药材量、滤过、浓缩等条件相同的前提下，采用超声提取法（USE）、絮凝水提法（WFE）、醇提法（AE）3种方法进行比较研究。结果4个指标综合评价Y 值顺序为：Ye＞Y＞Yesx。结论 肉苁蓉提取工艺以絮凝水提法为优。关键词：肉苁蓉；提取方法：综合指标Optimizing of Cistanche desertiola extract technologyWANG Ying-zi',ZHANG Chao',HE Kui-bang'(1.Bei jing University of TCM,Bei jing 100102:2.Shandong University of TCM,Jinan Shandong 250355)ABSTRACT:OBJECTIVE To evaluate the extract technology of Herba Cistcoanchis components.METHODS Three extractionmethods of the ultrasound extraction(USE), the water flocculation extraction(WFE),the alcohol extraction(AE) were evaluated and compared with echinacoside,β-sitosterol,total saccharine and dried extract weight as the indexes under the same conditions of drug granularity, solvent amount, filtration,concentration and so on.RESULTS Comprehensive evaluation of Y value was as follows:Ym>Yu>Ysx.CONCLUSION The WFE method proved to be better than the other two methods in the extraction of Herba Cistcoanchis.KEY WORDS:Cistanche desertiola:extract technology:comprehensive index肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉（Cistanche deserticolaY.C.Ma）或德赢vwin登录 （Cistanchetubulosa（Schrenk）Wight）的干燥带鳞叶的肉质茎。具有补肾阳、益精血、润肠通便等功效，是传统的名贵补益类中药，也是我国第一批珍稀濒危植物（属国家二级保护植物），因此得到国际环境保护组织、野生动植物保护组织和我国政府的重视。为了更好地开发利用这一珍贵的资源，促进肉苁蓉产业和西部地区经济发展，其提取工艺研究值得深入探讨。超声提取法、水提絮凝沉淀法和醇提法这3种提取工艺操作过程都相对简单，在制药企业中大规模生产有一定的可行性，故本文对这3种提取法进行综合评价，优选出提取效率较高的一种工艺，为肉苁蓉质量标准规范化研究及工业生产起到参考作用。1 仪器与试药1.1 仪器高效液相色谱仪（HP1100系列，美国Agilent公司）：MA110型电子分析天平（上海第二天平仪器厂）：721-100型分光光度计（上海第三分析仪器厂）：CS-930型薄层扫描仪（日本·岛津）：LXJ-II型离心沉淀机（上海医疗器械三厂）：KQ2200 型超声仪（昆山市超声仪器有限公司）。1.2试药肉苁蓉购自北京同仁堂药店，经北京中医药大学阎玉凝教授鉴定，为列当科植物肉苁蓉Cistanche deserticola Y．C．Ma．的带鳞叶的干燥肉质茎。松果菊苷对照品（111670-200502）、D-无水葡萄糖（118033-200503）对照品购自中国药品生物制品检定所：β-谷甾醇（S-5753 Lot 104H 0726）购自日本SIGMA ChemicalCo．；壳聚糖购自山东奥康生物科技有限公司：甲醇、乙腈为色谱纯（天津四友公司）；水为自制超纯水，其余试剂均为分析纯。2方法与结果2.1 样品液的制备2.1.1超声提取法（the ultrasound extraction，USE）将药材粉碎，称取肉苁蓉粉末30g，用体积分数75％的乙醇100mL浸泡过夜，于35 kHz超声提取2次，每次30 min，滤过。滤渣加水100mL超声提取30min，滤过：再加水100mL重复超声提取1次，合并2次提取液，浓缩定容洗至250mL量瓶中，定容，摇匀成为USE 液。2.1.2 絮凝水提法（the water flocculation extraction，WFE）取30g粉碎后的肉苁蓉用去离子水浸泡1h，煎煮3次。第一煎用水300mL，煮沸150min；第二煎用水180mL，煮沸75min：第三煎加水180mL，煮沸75min。合并煎煮液，冷却后过滤，将滤液浓缩至150mL。将水提液于温度70～75℃下，缓慢加入壳聚糖溶液，使其含量为0.30％（预实验已经过优选）。边加边搅拌，全部加入后，继续搅拌1min，静置。取上清液，转移至250mL量瓶中，定容，摇匀成为WFE 液。2.1.3醇提法（the alcohol extraction，AE）精密称取粉碎后的肉苁蓉30g，置烧瓶中，用75％乙醇10、6、6倍量提取，时间150min、75min、75 min，回收乙醇，药液离心、浓缩并定容至250mL，即得AE液。2.2 供试品溶液制备2.2.1精密量取2.1项下样品液各25mL，置水浴上蒸至近干，残渣加水10mL使溶解，放冷，通过D-101-I型大孔树脂柱（柱长20cm，内径2cm），以水50mL洗脱，弃去水液，再用体积分数20％乙醇50mL洗脱，弃去洗脱液，继用体积分数70％乙醇80mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至10mL量瓶中，精密量取0.5mL置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得3种供试液，供测定松果菊苷含量。2.2.2精密量取2.1项下样品液各100mL，分别浓缩至流膏状，加硅藻土3g，混匀，105℃烘干，研匀，用石油醚100mL索氏回流提取2h，提取液回收石油醚至干，残留物以氯仿溶解并定容至2mL，即得3种供试液（每1mL相当于原药材6g），供测定β-谷甾醇含量。2.2.3 精密量取2.1项下样品液各2.0mL，分别加乙醇17.0mL，静置冷藏24h，布氏漏斗抽滤，滤渣以适量蒸馏水溶解，滤过，加蒸馏水定容于100mL 容量瓶中，即得3 种供试液2.5.5回收率试验 精密吸取对照品液7 uL，加入已测得β-谷甾醇含量的AE液5 uL，按2.5.1项下方法展开测定含量，结果回收率为98.16％。2.6总糖的含量测定2.6.1 标准曲线的制备 精取2.3.3 项下对照液C 0.20、0.40、0.60、0.80、1.0、1.2mL，分别置于干燥具塞试管中，补加蒸馏水使成2.0mL，分别加入葱酮试剂4mL（精密称取蒽酮0.12g，用浓硫酸10mL 溶解并定容至100mL，冷至室温，即得），混匀。以蒸馏水2.0mL加蒽酮试剂4mL为随行空白，在625nm处测定吸收度。以葡萄糖量为横坐标，吸收度为纵坐标作图，得一条不过原点的直线。葡萄糖的量在0.02～0.10mg 范围内与吸收度呈良好的线性关系，回归方程：Y＝6.84X＋0.018 3，Y＝0.999 1（n＝6）。2.6.2 精密度试验 精密吸取对照液C0.80mL，分别放入5个具塞试管中，按2.6.1项下方法测其吸收度，RSD 为0.510％（n＝5）。2.6.3 稳定性试验 精密吸取对照液C 0.80mL，按2.6.1项下方法测其吸收度，并每隔15min 测定1次，结果吸收度在90min 内稳定，RSD 为0.310％（n＝7）。2.6.4 含量测定 精取2.2.3项下供试液C各0.50mL，按2.6.1项下方法自“分别置于干燥具塞试管中”起，依法测定，结果见表1。2.6.5回收率试验 精密吸取对照液1.0mL，加入已测得葡萄糖含量的WFE 液0.2mL中，混匀，按2.6.1项下方法测定含量，回收率为98.61％。2.7干浸膏得率 精取2.1项下样品液各10.0mL，置干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃烘3h，移至干燥器中，冷却30min，即刻精密称重，计算干浸膏量。结果见表1。2.8 3 种方法提取液指标成分的综合评价 将2.4～2.7项下3种提取液的松果菊苷、β-谷甾醇、总糖、干浸膏得率4个指标的数据，按公式X＝（x，-X，）／s，进行标准化处理。X，为标准化后的值，X，为样品液冲成分的含量，X，为样品中种成分的平均值，S，为成分的标准差。根据各指标在提取工艺选择中的主次地位，给予不同的加权系数，以标准化后的值X，加权后求和，即得综合评价值，其关系式：Y＝（松果菊苷＋β-谷甾醇＋总糖）／3x8＋干浸膏x2，结果见表2．其大小顺序为：Ym＞Yu＞Ya。结果见表1。表13种方法提取液各指标成分含量及标准化结果比较（n＝3）Tab.1 Results of three differentextract technology indicators andstandardization of ingredients(n=3)SampleechinacosideB-sitosteroltotaldried extractY(mg·g*)(mg·g*)saccharineweight(g·g*)(g·100g*)USE15.2263±0.44280.1227±0.0054417.9459±0.05310.4224±0.01762-5.3077(-1.0854)(-0.9203)(-0.4193)(0.5795)WFE25.4628±0.45660.3872±0.00819312.8436±0.03420.3821±0.021135.9293 C（每1mL相当于原药材0.0024g），供测定总糖含量。2.3 对照品溶液的制备2.3.1精密称取干燥至恒重的松果菊苷对照品10.00mg，用甲醇定容至10mL，即得对照液A。2.3.2 精密称取β-谷甾醇2.00mg 用氯仿定容至2mL，即得对照液B。2.3.3 精密称取干燥至恒重的葡萄糖5.00mg用蒸馏水溶解并定容至50mL，即得对照液C。2.4松果菊苷含量测定2.4.1 标准曲线的制备色谱条件 色谱柱：Phenomenex Kromasio Ca色谱柱（250mmx4.6mm，5μm）；检测波长：330mm；柱温：30℃；流速：1mL·min：流动相：甲醇-0.1％甲酸水溶液，梯度洗脱。精密量取对照品溶液5,10,15,20,25,30uL进样，按上述高效液相色谱条件进行测定。以松果菊苷进样量为横坐标，测得的峰面积为纵坐标绘制标准曲线，并计算回归方程。所得回归方程为Y＝0.022 5X＋0.0156（r＝0.999 9），线性范围为5～30ug。2.4.2精密度试验 取一定浓度对照品溶液连续测定5次，测定含量，其RSD为0.54％，表明仪器精密度良好。2.4.3稳定性试验 取对照品溶液于室温放置0,1,2,3,4和5h测定含量，RSD为2.50％，表明对照品溶液在5h内稳定。2.4.4回收率试验 精密吸取对照品液10uL，加入已测得松果菊苷含量的USE液5 uL，按2.4.1项下方法展开测定含量，平均回收率99.6％，RSD为0.8％（n＝5）。2.4.5样品测定 取2.2项下供试品溶液，进行含量测定，结果见表1。2.5 β-谷甾醇的含量测定2.5.1 标准曲线的制备薄层扫描条件：入S＝395nm，λR＝435nm；灵敏度中；SX＝3；狭缝1.20mmx1.20mm：双波长反射式锯齿形扫描。标准曲线的制备：0.3％ CMC-Na-硅胶G 板，分别点对照液A 2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0、14.0 uL，用甲苯-乙酸乙酯（4：1）展开15cm，挥干溶剂，喷10％硫酸乙醇，105℃烘3 min 显色，扫描。以点样量为横坐标，峰面积为纵坐标作图，得一条不过原点的直线。β-谷甾醇在2.0～14.0μg范围内点样量与峰面积呈良好的线性关系。回归方程：Y＝1552.8X+147.14,Y=0.999 2.2.5.2 精密度试验 精密吸取对照品液B9.0μL，点于同一块CMC-Na-硅胶G 板上，共点5个点，依2.5.1项下方法展开，显色定位，扫描，RSD 为3.688％（n＝5）。2.5.3 稳定性试验 将上述薄层板选择1个点立即测定，并每隔30min 扫描1次，面积积分值在120 min内稳定，RSD为2.325％（n＝5）。2.5.4 含量测定 精密量取2.2.1项下供试液各30.0uL，2.3.2项下β-谷甾醇对照液4.0、10.0 μL，分别点于同一块薄层扫描板上，按2.5.1项下方法展开，显色，扫描。

苗明三 郭淑云方晓艳孙艳红（河南中医学院 郑州 450008）［提 要］目的：探讨润肠通便浓缩丸对大肠蠕动的影响。方法：采用正常、燥结型便秘模型和实热型便秘模型为研究对象。结果：润肠通便浓缩丸对正常及便秘模型小呈大肠蠕动均有明显促进作用。结论：润肠通使浓缩丸有较好的润肠通便作用。［关键词］润肠通便浓缩丸 便秘模型 肠蠕动Pharmacodynamics Studies on Runchangtongbian Inspissated Pill Miao Mingsan,Gou Shuyun, Fang Xiaoyan,et al(Henan College of TCM,Zhengzhow 450008)Abstract Objective:To discuss the effect of Runchangtongbian Inspissated Pill on the peristalsis of large intestine. Method:To Adopt normal,dry-stagnation-type and substantive-heat-type constipation models as the observed objects. Result:This pill can obviously promote the peristalsis of large intestine of normal and constipation mice models. Conclusion: Runchangtongbian Inspissated Pill has good effect on moisturizing the intestines to relax the bowels.Key words Runchangtongbian Inspissated Pill:constipation model: intestine peristalsis表1 半乳糖醇各浓度组对小鼠的通便时间和通便加速率Gets，991210批）浓度（％）通便时间（min）通便加速率（％）0104±5401.195±3682.277±11254.475±27285.570±17327.792±9409.965±12371161±1442注：经kwallis法统计分析，组间差异具有非常显著意义（P-0.01）。3 讨论实验结果表明，肉苁蓉提取物半乳糖醇对正常动物在1.1％浓度时有润肠通便作用，随着剂量加大作用也逐步增强。但浓度在10％左右时量效曲线走平，通便作用似不再随剂量增大而加强。1.1％半乳糖醇对复方苯乙哌啶造模无任何对抗作用，半乳糖醇浓度在5.5％以上时对复方苯乙哌啶造模有明显的对抗作用，提示肉苁蓉量少可能达不到润肠通便的效果。临床治疗便秘肉苁蓉单味使用不应少于50g。表2 半乳糖醇对复方苯乙哌啶造模的对抗作用Gts，991217批）组别通便时间（min）P溶媒对照组114±88<0.001造模＋溶媒组249±72造模＋1.1％半乳糖醇组287±8820.05造模＋5.5半乳糖醇组185±39<0.05造模＋7.7％半乳糖醇组165±69<0.01造模＋9.9％半乳糖醇组153±25<0.01造模＋11％半乳糖醇组149±16<0.01参考文献1 张百舜，鲁学书，张润珍，锁阳和肉苁蓉的通便作用比较，中医杂志。1991.32(7):392 张百舜，李 川，鲁学书，等，肉苁蓉的通便作用，中药材1992.15（7）：333 张百舜，赵学文，陈双厚，等．肉苁蓉各分离部位的通便作用，中国中医药信息杂志，2003,10（11）：314 居鹏飞，何燕萍，栽培肉苁蓉的化学成分研究，天

张百舜 陈双厚 赵学文＊刘瑞华（中国中医研究院广安门医院 北京 100053）［提 要］目的：研究半乳糖醇润肠通便作用的量效关系及半乳糖醇对复方苯乙哌啶止泻作用的对抗效能。方法：采用8个浓度级别检测小鼠的通便时间，并转换为通便加速率。使用复方苯乙哌啶制造肠管收涩模型，观察不同浓度的半乳糖醇对其造模的对抗作用。结果：半乳糖醇对正常动物在1.1％浓度时有润肠通便作用，随着剂量加大作用也逐步增强，但浓度在10％左右时量效曲线走平，通便作用似不再随剂量增大而加强。半乳糖醇浓度在5.5％以上时对复方苯乙哌啶造模有明显的对抗作用。结论：半乳糖醇的通便作用具有一定的量效关系。［关键词］内苁蓉 半乳糖醇 润肠通便 量效关系Study on the Dosage-Effect Relationship of Laxative Action of Galactitol from CistancheDeserticola Zhang Baishun,Chen Shuanghou,Zhao Xuewen,et al(Guang An Men Hospital.China Academy of TCM.Beijing 100053)Abstract Objective:To study the dosage-effect relationship of laxative action of galactitol and resistive action of galactitol in constipation model mice caused by diphenaxylate composite.Methods: Eight concentrations of galactitol were adopted to examine the time of pass through stomach and Intestines of mice and the resistive action in constipation model mice caused by diphenoxylate composite.Results:The higher the concentration,the larger the laxative action of Galactitols,from 1.1% to 7.7%:when the concentration was from 7.7% to 11%,the laxative action of galactitol doesn't increase.When the concentration is upwards of 5.5%.galactitols have remarkable resistive action in constipation model mice caused by diphenoxylate composite.Conclusion:The laxative action of galactitol displays certain dosage-effect relationship.Key words Cistanche deserticola:galactitol:laxative:dasage-effect relationship前文已报道中药肉苁蓉具有良好的润肠通便功能，并对其有关作用机理进行了现代药理实验研究。近期我们对肉苁蓉各化学提取部位进行分离纯化，依据动物整体通便实验结果确定了半乳糖醇为中药肉苁蓉的主要通便有效成分叫，本文报道了半乳糖醇通便作用的量效关系及半乳糖醇对复方苯乙哌啶止泄作用的对抗实验研究。1 实验材料1.1 药物肉苁蓉原药材购于内蒙古阿拉善盟，特级品，经北京大学药学院屠鹏飞教授鉴定为列当科植物肉苁蓉（CistanchedeserticoleY.C.Ma），也称荒漠肉苁蓉：半乳糖醇：自上述肉苁蓉原药材中分离纯化，实验前用蒸馏水配成不同浓度的供试液（内含 1％曙红）；复方苯乙哌啶片，江苏省武进制药厂产品，每片含苯乙哌啶2.5mg、硫酸阿托品0.025mg。临用前取该药48片，配成40mL供试液。1.2 动物昆明种小白鼠，雄性，购于中国医学科学院动物中心。动物级别：二级。2 方法与结果2.1 半乳糖醇对小鼠通便作用的量效关系选用体重28.0g±1.7g健康小鼠80只，按体重随机分成8组，每组10只。给药前2h断食断水，将小鼠分置单只饲养笼中，各组按0.5mL／只灌胃不同浓度的半乳糖醇供试液，记录给药时间和小鼠排出第1粒红色粪便时间，后者减去前者为该鼠的通便时间。溶媒对照组（半乳糖醇含量为0）的通便时间减去半乳糖醇各浓度组的通便时间，所得差值除以溶媒对照组的通便时间，再乘以 100％为各浓度组的通便加速率。结果见表1。2.2 半乳糖醇对复方苯乙哌啶造模的对抗作用选用体重32.0g±1.9g健康小鼠70只，按体重随机分成7组，每组10只。给药前2h断食断水，将小鼠分置单只饲养笼中，除溶媒对照组单纯给水外，其余各组按50mg／kg体重灌胃复方苯乙哌啶溶液造模。30min 后造模组给不同浓度的半乳糖醇供试液。记录造模、给半乳糖醇供试液及小鼠排出第1粒红色粪便时间，计算通便时间。结果见表2。

[摘要] 目的：研究肉苁蓉花序挥发物的种类和相对含量，为其综合利用和种子繁育提供依据。方法：利用动态顶空套袋吸附法和气相色谱-质谱联用（GC-MS）分析方法，研究近自然状态下肉苁蓉花期花序挥发物成分。结果：现蕾期到盛花期共从肉苁蓉花序中鉴定出40 种挥发性化合物。现蕾期主要为烃类与绿叶挥发物，随着肉苁蓉花序上花朵开放，部分挥发物相对含量消失或减少，部分化合物相对含量增加，并出现一些新化合物。初花期和盛花期肉苁蓉花序主要挥发性成分为芳香性酯类与苯环类化合物，其相对含量较现蕾期显著增加。结论：肉苁蓉花序的挥发性成分种类多，且随开花进程出现种类和相对含量的变化，构成了肉苁蓉不同花期的香韵。[关键词] 肉苁蓉花序；挥发物；动态顶空套袋吸附法；气相色谱-质谱联用肉苁蓉Cistanche deserticola Y. C. Ma 为列当科肉苁蓉属多年生寄生性种子植物，寄生于藜科小乔木梭梭Haloxylon ammodendron 根部，以干燥带鳞叶的肉质茎入药。具有补肾阳、益精血，润肠通便之功效，是我国西北干旱区特有的传统名贵中药材，有“沙漠人参”之称[1,2]。肉苁蓉药用部位为地下的肉质茎，而种子需经过肉质茎出土、抽穗、开花、授粉后才能得到。研究发现，肉苁蓉为异花传粉植物，其花色鲜艳，蜜腺发达，具有典型的虫媒花特点，田间试验表明，人工异花授粉或增加传粉昆虫数量可显著提高肉苁蓉种子产量[3-5]。推测肉苁蓉花或花序挥发性物质在吸引昆虫访花传粉者方面发挥着重要作用。本试验利用动态顶空套袋吸附法收集肉苁蓉花序在不同生长发育时期的挥发性物质，研究现蕾、初花和盛花期花序之间挥发物成分的异同，对利用肉苁蓉花序挥发性物质吸引和控制传粉昆虫，提高其访花频率，提高肉苁蓉种子产量具有十分重要的意义。1 试验材料与采集方法于2010 年5 月上旬，在宁夏永宁县本草苁蓉种植基地，选择现蕾期长势相对一致的健康肉苁蓉植株进行标记。采用动态顶空套袋气体采集方法，分别收集肉苁蓉现蕾、初花（10～30%花朵开放）和盛花（100%花朵开放）期未被昆虫访问的花序挥发性气味物质，每个花期重复3 次[4,6]，以空采集袋（无花序）作为对照[7]。用Reynolds 微波炉袋套住肉苁蓉花序，扎紧采样部位。先将袋内空气抽走成真空状态；然后将装有50mg Porapak Q 吸附剂的吸附管与采集部位连接，用大气采样仪（QC-1S 型）将潮湿的经活性炭过滤后的空气泵入采集袋内；30 min 后开始循环采气。采样在晴天的10：00～16：00，采集气流为300 ml/min。采样完毕后用400 ul 色谱纯正己烷将吸附剂中的气味物质洗脱下来，洗脱的提取液用于气相色谱-质谱分析[6-10]。2 肉苁蓉花序挥发物的成分分析2.1 仪器与条件分析仪器为气相色谱-质谱联用仪GC-MS（美国Agilent GC6890/MS5973）。GC 条件：DB-Wax 石英毛细管柱 (30 m×0.25 mm×0.25 μm, J&W Scientific, Folsom, California)。起始柱温为50 ℃，保持1 min，以3 ℃/min 速度升温至120 ℃，不保持，然后再以10 ℃/min 升温至240 ℃，保持10 min。载气为氦气，进样口温度为220 ℃，进样量为2 ul。MS 条件：EI 电离源，离子能量70 eV，离子源温度200 ℃，扫描范围29-350 amu。接口温度250 ℃，扫描间隔0.4 s。2.2 定性和定量分析采用Xcalibur1.2 版本软件，通过NIST98 谱图库检索兼顾保留时间，鉴定肉苁蓉花序挥发物成分。通过面积归一化法对各类化合物的相对含量进行定量[6,7,10,11]。3 结果与分析肉苁蓉不同花期的花序挥发物组成成分种类丰富，从现蕾期到盛花期，鉴定出40 种化合物，主要包括醇类、醛类、烃类、酮类、酯类、苯环类、萜类和醚类化合物（表1）。3.1 现蕾期花序挥发物的化学成分从肉苁蓉现蕾期的花序中共提取鉴定出33 种化合物，包括10 种烃类化合物，其总相对含量为50.18%；其次为5 种绿叶气味物质，即六碳直链的醇类、醛类、烃类和酮类，包括2-己醇、2-乙基-1-己醇、己醛、十六烷和3-己酮，总相对含量为22.94%；醛类化合物与苯环类化合物的相对含量和种类也较为丰富，分别为14.18%（4 种）和11.05%（8 种）；另外还包含有少量的醇类、萜类、酯类和酮类化合物（表1）。3.2 初花期花序挥发物的化学成分肉苁蓉初花期花序挥发物为33 种，以烃类与酯类化合物的相对含量达该时期最高，分别为27.29%、19.35%；其次为六碳直链的绿叶挥发物，其种类与相对含量达5 种、22.20%；苯环类化合物的种类也较多（11 种），但相对含量仅为14.15%；醛类与萜类化合物的种类较少，但总相对含量分别维持在13.58%和10.24%；酮类、醇类和醚类化合物含量最少，均不到10%；醚类化合物是肉苁蓉开花后新增加的一类化合物（表1）。3.3 盛花期花序挥发物的化学成分在盛花期肉苁蓉花序挥发物中有34 种化合物，其中烃类、苯环类及酯类化合物的总相对含量达到最高，分别为28.67%、21.77%和20.27%；六碳直链的绿叶挥发物与醛类化合物的含量次之，分别为15.18%和11.60%；萜类、酮类和醇类化合物的含量均不到10%；醚类化合物只有一种，其相对含量仅为0.25%（表1）。3.4 肉苁蓉不同花期花序挥发物比较肉苁蓉不同花期花序挥发物的组成及其相对含量存在一定差异。现蕾期花序挥发物中以烃类化合物、绿叶挥发物、醛类化合物和醇类化合物的相对含量较高，分别为50.18%、22.94%、14.18%和9.73%，随着肉苁蓉花的开放，这些化合物的含量均显著降低，尤以烃类化合物与醇类化合物的相对含量变化最大。酯类与苯环类化合物为肉苁蓉初花期和盛花期花序挥发物中的最典型成分，其相对含量较现蕾期显著增高。酮类与萜类化合物的含量也较现蕾期有所提高，但伴随着花的盛开，其相对含量较初花期则略微减少。除乙苯为肉苁蓉盛花期花序中所特有的一种化合物外，初花期与盛花期花序挥发物的组成完全相同，只是相对含量有所改变（表1）。另外，现蕾期肉苁蓉花序挥发物的特有成分为2-甲基-1-十六醇、1-氯-己烷、十五烷、6-甲基-十八烷、2,6,10 三甲基-十四烷和环己酮，每类化合物所占比例均不到5%，这些化合物在肉苁蓉开花后便会消失。与现蕾期相比，2-壬烯-1-醇、2,6,10- 三甲基十二烷、乙苯、苯乙烯、苯甲醛、苯乙酮和乙二醇丁醚为开花后肉苁蓉花序的特有组分，其相对含量也较低。这些成分的差异决定了不同花期的肉苁蓉花序具有不同的香韵（表1）。4 结论与讨论4．1 关于肉苁蓉花序的化学成分研究已有相关文献报道，是将其新鲜花序切碎进行正丁醇萃取后，分离并鉴定出6-去氧梓醇、黑立脂素甙、8-表马钱子葡萄糖甙和半乳糖醇四种化合物[12]。本试验首次利用动态顶空套袋法，对近自然状态下的肉苁蓉花序挥发物进行采集，并通过GC-MS 联用仪分析与鉴定其挥发性化学成分，其结果不仅准确、可靠，而且能更真实地反应出近自然状态下肉苁蓉花序所释放出的能吸引访花昆虫的气味物质，是目前分析鉴定低数量挥发性他感化合物的最精确方法[9,13]。4．2 肉苁蓉花序挥发性化合物的组成与比例在不同花期存在一定的差异。现蕾期花序挥发物以烃类化合物与绿叶挥发物为主要组分，伴随着肉苁蓉花的逐渐开放，这两类化合物的相对含量随之减少，但具有芳香性的酯类与苯环类化合物的含量则显著增加。这说明肉苁蓉由花蕾到花的转化中，其内部的化学成分存在一系列的生化反应，使得开花期的花序具有较浓郁的香味。这些香气成分的增多与其他成分一起构成了肉苁蓉花序挥发物特定的化学指纹图，从而能吸引更多的访花昆虫前来访问。作者在研究中也证明肉苁蓉在盛花期的访花昆虫和访花频率显著高于初花期（已整理文章）。上述试验结果对深入研究肉苁蓉花序挥发物与访花昆虫之间的互利共生关系，探讨如何提高访花昆虫对肉苁蓉花的准确识别与定位，以及提高肉苁蓉传粉昆虫的传粉效率奠定基础。4．3 昆虫寻找寄主植物的定位过程依赖于植物释放的挥发性化合物的观点已不容质疑[7]。丰富的花的气味在显示花朵特点上起着很大的作用[14]。花香一般包括几个或多个化学成分，其中一个或几个主要成分占到很大的比例[15]。对于肉苁蓉花序而言，其挥发物成分复杂多样，这些挥发物是否对传粉昆虫具有显著的吸引作用，其主要成分是其中的一种，还是少数几种按一定浓度比例组成的混合物，还需要进一步深入的研究。4．4 肉苁蓉花序能挥发出多种芳香物质，香气是肉苁蓉花的重要特性之一。酯类、苯环类、醛类和萜类物质是肉苁蓉花序的主要香气成分，这些成分除了能吸引传粉昆虫外，有很大一部分具有化工和医药价值。其中，乙酸正丁酯、丙酸丁酯具有令人愉悦的甜的香味，存在于苹果、香蕉等果品中，常用作果实的香精；苯甲醛具有苦杏仁的香味，存在于苦杏仁油、藿香油、风信子油等植物精油中，是医药、燃料、香料和树脂工业的重要原料；苯乙酮以游离状态存在于一些植物的香精油中，多用作制药及其他有机合成的原料，也用于配置香料；柠檬烯是单萜类化合物，具有类似柠檬的香味，具有良好的镇咳、祛痰和抑菌作用。肉苁蓉花序挥发物中的这些具有功能性的成分有很好的应用价值，有必要对其进行更深入研究，以挖掘其深层次的经济价值。参考文献[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典[S]. 一部. 北京：中国医药科技出版社, 2010:126.[2] 屠鹏飞, 何燕萍, 楼之岑. 肉苁蓉的本草考证[J]. 中国中药杂志, 1994,19(1):3-5,61.[3] 陈 君, 刘同宁, 程惠珍, 等.肉苁蓉传粉特性研究[J]. 中国中药杂志, 2003,28(6):504-506.[4] 陈 君, 于 晶, 徐 荣, 等.肉苁蓉生殖生物学初步研究Ⅰ——出土与开花[J]. 中国中药杂志,2007,32(17):1729-1732.[5] 陈庆亮, 田永桢, 郭玉海, 等.肉苁蓉开花习性观察[J]. 中药材, 2008,31(9):1302-1303.[6] Tasin M, Anfora G, Ioriatti C, et al. Antennal and behavioral responses of grapevine moth Lobesia botranafemales to volatiles from grapevine[J]. Journal of Chemical Ecology, 2005, 31(1):77-87.[7] 陈友铃, 吴文珊. 爱玉子花序挥发物成分以及对其传粉小蜂的吸引作用[J]. 生态学报,2010,30(8):2212-2219.[8] 金荷仙, 陈俊愉, 金幼菊, 等. ‘南京晚粉’梅花香气成分的初步研究[J]. 北京林业大学学报, 2003,25（特刊）：49-51.[9] 潘 丹, 翟明普, 郭素娟. 核桃植株挥发性气体化学成分分析[J]. 山东农业大学学报（自然科学版）,2007,38(2):234-238.[10] Tasin M, Backman AC, Anfora G, et al. Attraction of female grapevine moth to common and specific olfactorycues from 2 host plants[J]. Chemical Senses, 2010, 35(1):57-64.[11] 姬志强, 武小红, 康文艺, 等.河南产结香花蕾和花的挥发性成分研究[J]. 河南大学学报（医学版）,2008,27(1):23-27.[12] 屠鹏飞, 何燕萍, 楼之芩. 肉苁蓉鲜花序的化学成分研究[J]. 中药材, 1994,25(9):451,452,502.[13] 娄永根, 程家安. 植物-植食性昆虫-天敌三营养层次的相互作用及其研究方法[J]. 应用生态学报,1997,8(3):325-331.[14] 闫凤鸣. 化学生态学[M]. 北京：科学出版社, 2003: 70.[15] Knudsen JT, Tollsten L, Bengstrom G. Floral scents——a checklist of volatile compounds isolated byhead-space techniques[J]. Phytochemistry, 1993, 33(2):253-280.

摘要目的: 研究肉苁蓉花序挥发物的种类和相对含量，为其综合利用和种子繁育提供依据。方法: 利用动态顶空套袋吸附法和气相色谱-质谱联用分析方法，研究近自然状态下肉苁蓉花期花序挥发物成分。结果: 现蕾期到盛花期共从肉苁蓉花序中鉴定出40 种挥发性化合物。现蕾期主要为烃类与绿叶挥发物，随着肉苁蓉花序上花朵开放，部分挥发物相对含量消失或减少，部分化合物相对含量增加，并出现一些新化合物。初花期和盛花期肉苁蓉花序主要挥发性成分为芳香性酯类与苯环类化合物，其相对含量较现蕾期显著增加。结论: 肉苁蓉花序的挥发性成分种类多，且随开花进程出现种类和相对含量的变化，构成了肉苁蓉不同花期的香韵。关键词肉苁蓉花序; 挥发物; 动态顶空套袋吸附法; 气相色谱-质谱联用肉苁蓉Cistanche deserticola Y. C. Ma 为列当科肉苁蓉属多年生寄生性种子植物，寄生于藜科小乔木梭梭Haloxylon ammodendron 的根部，以干燥带鳞叶的肉质茎入药。具有补肾阳、益精血、润肠通便之功效，是我国西北干旱区特有的传统名贵中药材，有“沙漠人参”之称〔1，2〕。肉苁蓉为异花传粉植物，其花色鲜艳，蜜腺发达，具有典型的虫媒花特点，田间试验表明，人工异花授粉或增加传粉昆虫数量可显著提高肉苁蓉种子产量〔3-5〕。推测肉苁蓉花或花序挥发性物质在吸引昆虫访花传粉方面发挥着重要作用。本试验利用动态顶空套袋吸附法收集肉苁蓉花序在不同生长发育时期的挥发性物质，分析现蕾、初花和盛花期花序之间挥发物成分的异同，对利用肉苁蓉花序挥发性物质吸引和控制传粉昆虫，提高其访花频率，提高肉苁蓉种子产量具有十分重要的意义。1 材料与采集方法于2010 年5 月上旬，在宁夏永宁县本草苁蓉种植基地，选择现蕾期长势相对一致的健康肉苁蓉植株进行标记。采用动态顶空套袋气体采集方法，分别收集肉苁蓉现蕾、初花( 10% ～ 30% 花朵开放) 和盛花( 100%花朵开放) 期未被昆虫访问的花序挥发性物质，每个花期重复3 次〔4，6〕，以空采集袋( 无花序) 作为对照。用Reynolds 微波炉袋套住肉苁蓉花序，扎紧采样部位。先将袋内空气抽走成真空状态; 然后将装有50 mg Porapak Q 吸附剂的吸附管与采集部位连接，用大气采样仪( QC-1S 型) 将潮湿的经活性炭过滤后的空气泵入采集袋内， 30 min 后开始循环采气。采样在晴天的10∶ 00 ～ 16∶ 00，采集气流为300 mL /min。采样完毕后用400 μL 正己烷将吸附剂中的气味物质洗脱下来，洗脱的提取液用于气相色谱-质谱分析。2 肉苁蓉花序挥发物的成分分析2. 1 仪器与条件2. 1. 1 仪器: 气相色谱-质谱联用仪GC-MS( 美国Agilent GC6890 /MS5973) 。2. 1. 2 条件: GC 条件: DB-Wax 石英毛细管柱( 30m × 0. 25 mm × 0. 25 μm， J＆W Scientific，Folsom，California)。起始柱温为50 ℃，保持1 min，以3 ℃ /min速度升温至120 ℃，不保持，然后再以10 ℃ /min 升温至240 ℃，保持10 min。载气为氦气，进样口温度为220 ℃，进样量为2 μL。MS 条件: EI 电离源，离子能量70 eV，离子源温度200 ℃，扫描范围m/z 29 ～ 350。接口温度250 ℃，扫描间隔0. 4 s。2. 2 定性和定量分析采用Xcalibur1. 2 版本软件，通过NIST98 谱图库检索兼顾保留时间，鉴定肉苁蓉花序挥发物成分。通过面积归一化法对各类化合物的相对含量进行定量。3 结果与分析3. 1 现蕾期花序挥发物的化学成分从肉苁蓉现蕾期的花序中共提取鉴定出33 种化合物，包括10 种烃类化合物，其总相对含量为50. 18%; 其次为5 种绿叶挥发物，即六碳直链的醇类、醛类、烃类和酮类，包括2-己醇、2-基-1-己醇、己醛、十六烷和3-己酮，总相对含量为22. 94%; 醛类化合物与苯环类化合物的相对含量和种类也较为丰富，分别为14. 19%( 4 种) 和11. 05% ( 8 种) ; 另外还包含有少量的醇类、萜类、酯类和酮类化合物( 图1A、表1) 。3. 2 初花期花序挥发物的化学成分肉苁蓉初花期花序挥发物为33 种，以烃类与酯类化合物的相对含量达该时期最高，分别为27. 29%、19. 35%; 其次为六碳直链的绿叶挥发物，其种类与相对含量达5种、22. 20%; 苯环类化合物的种类也较多( 11 种) ，但相对含量仅为14. 15%; 醛类与萜类化合物的种类较少，但总相对含量分别维持在13. 58% 和10. 24%; 酮类、醇类和醚类化合物含量最少，均不到10%; 醚类化合物是肉苁蓉开花后新增加的一类化合物( 图1B、表1) 。3. 3 盛花期花序挥发物的化学成分在盛花期肉苁蓉花序挥发物中有34 种化合物，其中烃类、苯环类及酯类化合物的总相对含量达到最高，分别为28. 67%、21. 77%和20. 27%; 六碳直链的绿叶挥发物与醛类化合物的含量次之，分别为15. 18% 和11. 59%; 萜类、酮类和醇类化合物的含量均不到10%; 醚类化合物只有一种，其相对含量仅为0. 25%( 图1C、表1) 。3. 4 肉苁蓉不同花期花序挥发物比较肉苁蓉不同花期花序挥发物的组成及其相对含量存在一定差异。现蕾期花序挥发物中以烃类化合物、绿叶挥发物、醛类化合物和醇类化合物的相对含量较高，分别为50. 18%、22. 94%、14. 19% 和9. 73%，随着肉苁蓉花的开放，这些化合物的含量均显著降低，尤以烃类化合物与醇类化合物的相对含量变化最大。酯类与苯环类化合物为肉苁蓉初花期和盛花期花序挥发物中的最典型成分，其相对含量较现蕾期显著增高。酮类与萜类化合物的含量也较现蕾期有所提高，但伴随着花的盛开，其相对含量较初花期则略微减少。除乙苯为肉苁蓉盛花期花序中所特有的一种化合物外，初花期与盛花期花序挥发物的组成完全相同，只是相对含量有所改变。另外，现蕾期肉苁蓉花序挥发物的特有成分为2-甲基-1-十六醇、1-氯-己烷、十五烷、6-甲基-十八烷、2，6， 10 三甲基-十四烷和环己酮，这些化合物在肉苁蓉开花后便会消失。与现蕾期相比，2-壬烯-1-醇、2，6，10- 三甲基十二烷、乙苯、苯乙烯、苯甲醛、苯乙酮和乙二醇丁醚为开花后肉苁蓉花序的特有组分，其相对含量也较低。这些成分的差异决定了不同花期的肉苁蓉花序具有不同的香韵。4 结论与讨论4. 1 关于肉苁蓉花序的化学成分研究已有相关文献报道，是将其新鲜花序切碎进行正丁醇萃取后，分离并鉴定出6-去氧梓醇、黑立脂素苷、8-表马钱子葡萄糖苷和半乳糖醇四种化合物〔7〕。本试验首次利用动态顶空套袋法，对近自然状态下的肉苁蓉花序挥发物进行采集，并通过GC-MS 联用仪分析与鉴定其挥发性化学成分，其结果不仅准确、可靠，而且能更真实地反应出近自然状态下肉苁蓉花序所释放出的能吸引访花昆虫的气味物质，是目前分析鉴定低数量挥发性他感化合物的最精确方法〔8〕。4. 2 肉苁蓉花序挥发性化合物的组成与比例在不同花期存在一定的差异。现蕾期花序挥发物以烃类化合物与绿叶挥发物为主要组分，伴随着肉苁蓉花的逐渐开放，这两类化合物的相对含量随之减少，但具有芳香性的酯类与苯环类化合物的含量则显著增加。这说明肉苁蓉由花蕾到花的转化中，其内部的化学成分存在一系列的生化反应，使得开花期的花序具有较浓郁的香味。这些香气成分的增多与其他成分一起构成了肉苁蓉花序挥发物特定的化学指纹图，从而能吸引更多的访花昆虫前来访问。作者在研究中也证明肉苁蓉在盛花期的访花昆虫和访花频率显著高于初花期( 已整理文章) 。上述试验结果对深入研究肉苁蓉花序挥发物与访花昆虫之间的互利共生关系，探讨如何提高访花昆虫对肉苁蓉花的准确识别与定位，以及提高肉苁蓉传粉昆虫的传粉效率奠定基础。4. 3 昆虫寻找寄主植物的定位过程依赖于植物释放的挥发性化合物的观点已不容质疑。丰富的花的气味在显示花朵特点上起着很大的作用〔9〕。花香一般包括几个或多个化学成分，其中一个或几个主要成分占到很大的比例〔10〕。对于肉苁蓉花序而言，其挥发物成分复杂多样，这些挥发物是否对传粉昆虫具有显著的吸引作用，其主要成分是其中的一种，还是少数几种按一定浓度比例组成的混合物，还需要进一步深入的研究。4. 4 肉苁蓉花序能挥发出多种芳香物质，香气是肉苁蓉花的重要特性之一。酯类、苯环类、醛类和萜类物质是肉苁蓉花序的主要香气成分，这些成分除了能吸引传粉昆虫外，有很大一部分具有化工和医药价值。其中，乙酸正丁酯、丙酸丁酯具有令人愉悦的甜香味，存在于苹果、香蕉等果品中，常用作果实的香精; 苯甲醛具有苦杏仁的香味，存在于苦杏仁油、藿香油、风信子油等植物精油中，是医药、燃料、香料和树脂工业的重要原料; 苯乙酮以游离状态存在于一些植物的香精油中，多用作制药及其他有机合成的原料，也用于配置香料; 柠檬烯是单萜类化合物，具有类似柠檬的香味，具有良好的镇咳、祛痰和抑菌作用。肉苁蓉花序挥发物中的这些具有功能性的成分有很好的应用价值，有必要对其进行更深入研究，以挖掘其深层次的经济价值。参考文献［1］ 国家药典委员会. 中华人民共和国药典［S］. 一部. 北京: 中国医药科技出版社， 2010: 126.［2］ 屠鹏飞，何燕萍，楼之岑. 肉苁蓉的本草考证［J］. 中国中药杂志， 1994， 19( 1) : 3-5， 61.［3］ 陈君，刘同宁，程惠珍，等. 肉苁蓉传粉特性研究［J］.中国中药杂志， 2003， 28( 6) : 504-506.［4］ 陈君，于晶，徐荣，等. 肉苁蓉生殖生物学初步研究Ⅰ.出土与开花［J］. 中国中药杂志，2007，32 ( 17) : 1729-1732.［5］ 陈庆亮，田永桢，郭玉海，等. 肉苁蓉开花习性观察［J］. 中药材， 2008， 31( 9) : 1302-1303.［6］ Tasin M，Anfora G， Ioriatti C， et al. Antennal and behavioralresponses of grapevine moth Lobesia botrana females tovolatiles from grapevine［J］. J Chem Ecol，2005，31 ( 1) :77-87.［7］ 屠鹏飞，何燕萍，楼之芩. 肉苁蓉鲜花序的化学成分研究［J］. 中药材， 1994， 25( 9) : 451， 452， 502.［8］ 娄永根，程家安. 植物-植食性昆虫-天敌三营养层次的相互作用及其研究方法［J］. 应用生态学报，1997，8( 3) : 325-331.［9］ 闫凤鸣. 化学生态学［M］. 北京: 科学出版社，2003:70.［10］ Knudsen JT，Tollsten L，Bengstrom G. Floral scents--achecklist of volatile compounds isolated by head-spacetechniques［J］. Phytochemistry， 1993， 33( 2) : 253-280.

摘 要：目的 vwin.com 花粉在自然条件下的寿命。方法 采用花粉离体萌发法，对自然生长的肉苁蓉花粉生活力进行测定研究。结果 肉苁蓉花粉萌发的最佳条件为初花期花粉，在恒温25℃，以0.6％ 琼脂＋10％ 蔗糖＋0.1％ 硼酸为离体培养基进行培养，有利于花粉的萌发和花粉管的生长；低温（4℃） 条件下可进行短期的花粉贮藏，延长花粉的寿命。结论 为采用肉苁蓉花粉进行优良种质资源的保存和人工育种工作提供了理论依据。关键词：肉苁蓉；花粉萌发；生活力肉苁蓉Cistanche deserticola Y．C．Ma 又名大芸、苁蓉、荒漠肉苁蓉，为列当科肉苁蓉属多年生寄生草本植物，以肉质茎入药，是我国沙漠地区特有的名贵药材［1］。由于肉苁蓉的寄生生长特性及近年来的过度采挖，致使野生资源日趋减少，已被列为国家二级珍稀濒危保护植物［2～4］，因而保护和扩大肉苁蓉种质资源的研究工作尤为重要。有关植物种质资源保存的方法主要有种植保存、贮藏保存、试管保存等［5］。花粉是种子植物的雄配子体，在有性繁殖中发挥着重要作用，利用花粉进行种质资源的贮藏保存是非常重要的手段之一。目前有关肉苁蓉人工种植成功已有报道［6，7］，这为创造优良肉苁蓉种质资源，对其进行人工育种奠定了基础。而花粉生活力又是人工辅助授粉成败的关键因素，为此对野生肉苁蓉的花粉进行了生活力的测定研究，以期为肉苁蓉优良种质资源的保存和人工育种工作提供理论依据。1 材料与方法1.1 材料：试验所用肉苁蓉的花粉于2003年5月中旬采自内蒙古阿拉善盟阿拉善左旗苏海图苏木荒漠生境中自然生长的开花期肉苁蓉植株上，分别采集花蕾期、初花期和盛花期花粉进行试验。1.2 方法：采用花粉离体萌发法测定花粉生活力［8］。花粉的采集：花蕾期花粉，同花蕾一起采集，装入磨口瓶中密封保存；初花期花粉，剥取初放或含苞待放花的尚未开裂的花药，装入磨口瓶中密封带回室内，在室内自然阴干，待花粉散出后收集花粉；盛花期花粉，采集已开放3d 花的花药，装入磨口瓶中密封带回室内。花粉生活力测定：以0.6％ 琼脂为基本培养基，分别添加不同浓度的蔗糖、硼酸，然后接种处于不同花期、不同贮藏条件下的花粉，在人工控温培养箱中，选择不同温度进行培养，每个处理重复3次，在Leica 光学显微镜下观察并统计花粉萌发率。肉苁蓉花粉在培养5h 后，萌发率基本达到稳定，本试验以培养5h 后统计的萌发率为最终萌发率。2 结果与分析2.1 花粉的形态：在光学显微镜下观察肉苁蓉干燥的花粉粒，该花粉为长椭圆形，为三沟花粉，沟长近到两极。花粉吸水后变为圆球形，极面观为三裂片圆形。又据张志耘扫描电镜研究报道，肉苁蓉花粉大小约为24.0～30.6μm×17.0～22.7μm，外壁具瘤状突起和细网状纹饰［9］。2.2 花粉生活力测定：花粉萌发率是鉴定花粉生活力的一项重要指标，萌发率的高低除了和花粉本身的质量有关外，还与萌发时的环境条件密切相关，如培养温度、营养物质、矿质元素等。2.2.1 不同花期花粉的萌发：将采集的处于不同花期的肉苁蓉的花粉，分别接种于0.6％ 琼脂＋10％蔗糖＋ 0.1％ 硼酸的培养基上，在25℃ 培养箱中进行暗培养，5h 后统计花粉萌发率，结果见表1。初花期花粉的萌发率高达93.6％，明显高于花蕾期和已开放3d 花的花粉萌发率，而且初花期花粉萌发速度较快，花粉管生长迅速。处于花蕾期的花粉因在采收时尚未完全成熟，萌发率低于初花期花粉萌发率，为75.2％。已开放3d 的花，药室已完全开裂，花粉受自然环境的影响，萌发率降低，仅为40.8％。因而要进行肉苁蓉花粉贮藏，应在保证花粉生活力最高时进行采集，肉苁蓉花初放时采集花粉为最佳时期。2.2.2 不同蔗糖浓度下花粉的萌发：以0.6％ 琼脂＋0.1％ 硼酸为基本培养基，分别添加10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％ 的蔗糖，接种初花期花粉，在25℃ 恒温培养箱中暗培养，每隔一段时间统计一次花粉萌发率，结果见表2。不同蔗糖浓度对肉苁蓉花粉的萌发率和萌发速度均有影响，花粉最终的萌发率随蔗糖浓度的增加而呈下降的趋势。当培养基中蔗糖浓度为10％ 时，花粉萌发率达到最高，为94.2％。当蔗糖浓度超过10％ 时，萌发率随蔗糖浓度的增大而下降。当蔗糖浓度达到40％ 时，萌发率仅为6.5％。在培养1h后，花粉萌发速度随蔗糖浓度的增加而有差异，在蔗糖浓度为15％ 时，花粉萌发速度最快，萌发率可达51.0％。当蔗糖浓度超过30％ 时，花粉萌发速度则明显下降。2.2.3 不同培养温度下花粉的萌发：以0.6％ 琼脂＋10％ 蔗糖＋0.1％ 硼酸为基本培养基，接入在4℃ 冰箱中贮藏6d 的初花期花粉，分别在10℃，15℃，25℃，30℃，37℃ 进行恒温培养，并将一部分接种的花粉进行低温（4℃） 1h 和高温（37℃）1h 交替变温处理培养，每隔一段时间统计一次花粉萌发率，最终以5h 后统计的结果为准，结果见表3。在10℃ 以下，花粉萌发受到抑制，萌发率基本为零。在15℃～37℃ 花粉1h 内的萌发速度和最终的萌发率均随着温度的升高而升高。但当温度达到40℃ 时，萌发率显著下降。在42℃ 时花粉萌发完全受到抑制。在37℃ 条件下，培养1h 后花粉萌发率为68.1％，其最终的萌发率达到72.3％，花粉萌发快，萌发率最高，但花粉管多数生长不正常，呈现多次弯曲的状态。在25℃ 条件下，花粉萌发率也较高，达到71.8％，且花粉管生长迅速，成细长管状，长度约为花粉直径的20倍以上。在变温培养条件下，花粉萌发率约为70.1％，但花粉管出现有分枝的现象。因而认为肉苁蓉花粉离体萌发的培养温度以恒温25℃ 为宜。2.2.4 不同硼酸浓度下花粉的萌发：以0.6％ 琼脂＋10％ 蔗糖为基本培养基，分别添加0％，0.1％，0.5％，1.0％，1.5％，2.0％ 硼酸，接入在4℃ 冰箱中贮藏6d 的初花期花粉，在25℃ 培养箱中进行暗培养，5h 后统计花粉萌发率。结果如图1所示。由图1可见，硼酸浓度在0％～0.1％ 花粉萌发率呈增高的趋势，在浓度为0.1％ 时，花粉萌发速度最快，萌发率最高，达到70.4％。硼酸浓度在0.1％～1.0％ 花粉萌发率呈下降趋势。当浓度达到或超过1.0％ 时，花粉萌发受到抑制，培养5h 后萌发率仍为零。2.2.5 不同贮藏条件下花粉的萌发：将初花期花粉装入瓶中，分别于低温（4℃） 冰箱和室温（23℃～25℃） 两种条件下保存花粉，每隔一定天数取少量花粉接种于0.6％ 琼脂＋10％ 蔗糖＋0.1％ 硼酸的培养基上，5h 后统计花粉萌发率，结果见表4。由表4结果看出，肉苁蓉花粉的生活力受贮藏温度的影响很大，在低温和室温条件贮藏的花粉，随贮藏时间的延长，花粉的生活力均呈下降趋势。室温贮藏至第4天，花粉的生活力已降为2.3％，贮藏至第6天，花粉已完全丧失萌发能力。低温贮藏的花粉，在贮藏至第15天的时候，花粉的萌发率降为4.7％，贮藏至17d 时，花粉完全丧失萌发力。由此可知，低温条件有利于肉苁蓉花粉的贮藏。肉苁蓉的花粉由采收，再经过短途的运输，然后在4℃ 低温冰箱保存的条件下，最长可贮藏15d 左右的时间。3 讨论3.1 花粉保持生活力的长短，一方面是由遗传因素所决定，另一方面也受环境因素的影响。花粉萌发率虽不能完全等同于生活力，但在实践中大多数是以花粉萌发率来表示生活力的［10，11］。研究发现，野生肉苁蓉的花粉生活力是比较高的，在适宜的萌发条件下，初花期花粉可达到93.6％的萌发率，这对于传粉、受精和提高结实率是很有利的，这也是肉苁蓉物种在干旱、贫瘠的生态环境条件下得以保存的原因之一。3.2 低温贮藏可使大多数植物的花粉保持较长时间的生活力［10］。肉苁蓉花粉在不同贮藏温度下的萌发特点也充分说明了低温有利于花粉的贮藏，可延长其生活力。由此认为，如果在超低温条件下保存肉苁蓉花粉，会使花粉保持更长的寿命，以利种质资源的保存。3.3 每种植物花粉萌发和花粉管的生长都有自己最适的温度。大多数温带地区的植物，花粉萌发和花粉管的生长在5 ℃ 以下会受到一定的抑制，25℃～30℃ 是最适的萌发温度［10］。肉苁蓉地处西部沙漠中，其开花传粉季节的温度白天在20℃～25℃，试验结果表明肉苁蓉花粉在10℃ 以下萌发受到抑制，在25℃ 条件下，花粉生长正常，萌发速度最快，萌发率最高。3.4 通过4℃ 和37℃交替变温培养，发现肉苁蓉花粉管有分枝现象。目前对于这种异常的行为，有两种不同的解释：一种认为花粉管的分枝穿过珠被、珠心和子房的其他部分，作为吸器的功能；另一种认为花粉管的分枝只在珠孔区域和内株被及外珠被之间或周围，认为分枝是在实现受精以后，由于雌性组织产生的激素的扩散，扰乱了激素的代谢，影响到花粉管管壁的合成没有停止，因而发生突起和分枝［10］。对于肉苁蓉花粉管出现分枝现象的原因及其对结实的影响，还有待进一步的深入研究。References：［1］ Ma Y Q. I nner M ongolia Flora （ 内蒙古植物志） ［M］.Tomus5．Huhhot： Inner Mongolia People’s Press，1980.［2］ Fu L G.T he Rare and I mminent Danger Plant in China （ 中国珍稀濒危植物） ［M］.Shanghai： Shanghai EducationalPress，1989.［3］ Tu P F，He Y P，Lou Z C.Herbalogical study on Cistanchedeserticola ［J］.Chin T radit H erb Drugs （ 中草药） ，1994，19（1） ：3-5.［4］ Zhang Z Y.Study on Chinese Orobanchaceae （ one） ［J］.Plant Res （ 植物研究） ，1984，4（4） ：111-119.［5］ Ma K.General H orticulture （ 园艺通论） ［M］.Beijing：Higher Education Press，2001.［6］ Yang J Q，Zhang X Y，Chai S Z.Technology of planting H aloxylon ammodendron and Cistanche deserticola artificially ［J］.M odern A gric （ 现代农业） ，2002，（12） ：14-15.［7］ Song J L，Zhang Y O.Cultivation and collection of Cistanchedeserticola ［J］.Chin W ild Plant Res （ 中国野生植物资源） ，2001，21（2） ：59-60.［8］ Hu S Y.Botany experimental method （ one） determination ofpollen viability ［J］.Chin Bull Bot （ 植物学通报） ，1993，10（2） ：60-62.［9］ Zhang Z Y.Studies on the pollen morphology and seed coatof the genus Cistanche （ or Obanchaceae） in China ［J］.A ctaPhytotax on S in （ 植物分类学报） ，1990，28（4） ：294-298.［10］ Hu S Y.A ngiosp erm Embryology （ 被子植物胚胎学） ［M］.Beijing： People’s Educational Press，1982.［11］ Wang Q L，Lu L D，Wu X Q，et al．Pollen storage and viabilitydetermination ［J

摘　要: 通过测定不同发育时期肉苁蓉和寄主梭梭体内主要糖类物质含量和蔗糖代谢相关酶活性,以研究寄生植物与寄主植物的糖代谢及其关系。结果表明: 未寄生肉苁蓉的梭梭以积累葡萄糖为主,而寄生肉苁蓉的梭梭在夏季休眠期以积累葡萄糖为主,进入秋季旺盛生长期时以积累蔗糖为主。肉苁蓉的糖分积累与梭梭不同,己糖含量约占可溶性总糖的62. 45% ,而蔗糖仅为可溶性总糖的4. 98% ,故肉苁蓉为己糖积累型。寄主梭梭同化枝内蔗糖磷酸合成酶活性较转化酶活性和蔗糖合成酶活性低,其中寄生肉苁蓉的梭梭的分解酶类活性高于未寄生肉苁蓉的梭梭。肉苁蓉体内转化酶活性较低,而蔗糖合成酶和蔗糖磷酸合成酶活性较高,且蔗糖合成酶活性高于蔗糖磷酸合成酶活性,表现为肉苁蓉中的分解酶类活性高于合成酶类活性,较高的分解酶类活性促进了蔗糖的分解,从而促进了糖分由寄主梭梭向肉苁蓉的不断转移。总体来看,肉苁蓉和寄主梭梭体内糖分的代谢主要以蔗糖合成酶为主,其它2种酶为辅协同参与调控。关键词: 梭梭;肉苁蓉;可溶性糖;蔗糖代谢相关酶寄生是植物之间相互关系的一个重要方面,在被子植物中, 约有3 000余种是以寄生方式生存的[1 ]。寄生植物生长所需要的营养物质来源及其与寄主植物生长发育的关系是研究寄生植物寄生机理的一个重要方面。不同的寄主植物受寄生植物侵染后,其生长和代谢表现各异。Stewa rt等[2 ]研究发现,独脚金可使寄主高粱、甘蔗、玉米、谷子等农作物完全丧失产量,相反,很多槲寄生植物可与寄主一起生活数十年而无多大危害。梭梭[ Haloxylon ammodendron ( C. A. Mey )Bung e ] ( 别名: 琐琐或梭梭柴) 是藜科( Chenopo diaceae)梭梭属( Haloxylon Bung e)的大灌木,主要分布在我国内蒙古、新疆、甘肃以及中亚、西亚等荒漠半荒漠地区,是防风固沙的优良树种,也是寄生植物肉苁蓉(Cistanche deserticola Ma )的专性寄主,二者被合称为“荒漠之宝” [3 ]。肉苁蓉具有增强免疫力、益肾壮阴、抗衰老、润肠消食、调节神经系统功能等作用[4 ]。肉苁蓉是多年生全寄生植物,无叶绿素,其生长发育所需的水、无机盐及有机营养物质均来源于寄主梭梭。近年来,有关梭梭和肉苁蓉的研究[4～ 8 ] ,多集中在肉苁蓉及梭梭的生境土壤特征,梭梭物候期特点,梭梭光合水分代谢,肉苁蓉药理学研究,以及梭梭、肉苁蓉人工栽培及开发利用现状等方面,而且这些研究大都是将肉苁蓉和梭梭分开,单独进行研究,而有关肉苁蓉寄生对寄主梭梭体内主要生理代谢及其生长发育状况研究较少,谭德远等[ 9]对肉苁蓉寄生后对其寄主梭梭生长方面进行了研究,发现肉苁蓉寄生后,其地下部根系和地上部当年生枝条生长均不同程度受到抑制,而关于肉苁蓉寄生后对寄主梭梭体内一些生理生化物质代谢运输方面的研究,目前尚未见报道。近年来人们对园艺作物的果实糖代谢机理进行了广泛的研究[ 10～ 12] ,而有关寄生植物与寄主间糖分的运输与积累方面的研究却未见相关报道。糖类物质是肉苁蓉体内含量较高的一类物质,本研究通过对寄生和未寄生肉苁蓉的梭梭及肉苁蓉在不同生长时期体内主要可溶性糖类物质的含量变化和糖代谢相关酶活性变化进行比较研究,明确寄生植物生长对寄主植物糖代谢的影响,以揭示二者间的相互关系,同时,开展这方面的研究也为我国梭梭属植物资源的保护和肉苁蓉资源的合理开发利用提供生理依据。1　材料与方法1. 1　植物材料与实验地概况　　实验区位于内蒙古阿拉善左旗苏海图肉苁蓉生产基地,该地处东经105°47′,北纬39°32′,属典型的大陆性气候。年平均气温8. 6℃ ,绝对最高气温40. 9℃ ,绝对最低气温- 31. 2℃。全年日照时数3 293 h,无霜期160 d,年平均降水量104. 7 mm,降雨量集中在7～ 9月,年平均蒸发量3 023. 7 mm。年平均风速3. 6 m / s,年平均大风日数34. 5 d。梭梭林分布区多为风沙土,地下水位埋深10 m。植被为旱生和超旱生类型, 建群种以梭梭为主,伴生种有白刺、红砂、猪毛菜、沙蒿、沙冬青等。1. 2　实验设计本实验随机选取5株10年生,生长较一致的未寄生肉苁蓉的梭梭作为对照( CK) ,再选取5株寄生有肉苁蓉(简称CD)的生长状况一致的梭梭(简称HA) ,分别选取寄主梭梭及寄生植物肉苁蓉旺盛的生长部位作为实验材料,每个处理重复5次。在对梭梭进行取样时选取梭梭东、南、西、北4个部位的肉质同化枝混合,然后迅速放入液氮中冷冻,供实验测定使用。采样时间从7月8日开始到10月12日结束,每20 d取样1次。1. 3　测定项目及方法1. 3. 1　蔗糖、葡萄糖、果糖含量的测定　称取5 g梭梭同化枝鲜样,肉苁蓉样量减半,用5 mL 80%乙醇研碎,在75℃下浸提10 min, 4 000 r /min 离心8min,去除提取液中的叶绿素, 收集上清液。再用8m L 80% 乙醇分3次清洗样品,使糖完全溶解,然后在40℃的条件下用旋转蒸发仪将水和乙醇蒸干,再用10 mL的流动相溶解,供液相分析用。色谱条件为流动相(乙腈∶重蒸水= 7∶ 3) ,流速1 mL /min,柱温30℃ ,柱型为Kromasil公司Kr 100-5N H2,岛津SHIM ADZU LC-6A系统,岛津RID-10A示差检测器, SLC-6A 系统控制器和C-R3A 数据处理系统[13 ]。1. 3. 2　可溶性总糖的测定　按照文献[14 ]的方法进行。1. 3. 3　蔗糖代谢相关酶活性测定　酶的提取: 参照Nielsen等[15 ]的方法稍作改进。每个材料设3次重复,每个样本1 g 果肉,加入5 m L预冷的提取缓冲液〔0. 1 mol· L- 1磷酸缓冲液( pH 7. 5) , 5 mmol· L- 1MgCl2 , 1 mmo l· L- 1 EDT A, 0. 1%巯基乙醇, 0. 1%Triton X-100〕冰浴下匀浆后, 10 000 r· min- 1离心15 min,上清液倒入10 mL刻度试管,沉淀用4 mL的提取液再提取1次,合并上清液定溶至10 mL,作为酶提液。( 1)中性转化酶活性的测定: 取0. 1 mL酶提液加入1 m L的反应液〔1% 蔗糖, 0. 1 mo l· L- 1磷酸缓冲液( pH 7. 5) , 5 mmo l· L- 1 MgCl2 , 1 mmol· L- 1EDTA〕于34℃水浴1 h后,沸水浴5 min以终止反应。用3, 5-二硝基水杨酸法测定还原糖含量;另取0.1 mL酶提液沸水浴10 min作为对照。用两者的差值来计算还原糖产生速率,表示转化酶的活性,单位mg· g- 1 FM· h- 1。( 2)酸性转化酶活性的测定: 取0. 1 mL酶提液加入1 m L反应液( 1%蔗糖, 0. 1 mol· L- 1醋酸缓冲液, pH 5. 5) ,于34℃下反应1 h 后沸水浴5 min以终止反应,其余操作同上。( 3)蔗糖合成酶活性的测定: 取50μL酶液加入50μL的反应液〔4 mmol· L- 1 U DP-葡萄糖, 0. 06mol· L- 1果糖, 15 mmo l· L- 1MgCl2 , 0. 1 mol· L- 1磷酸缓冲液( pH 8. 0)〕,于34℃下反应1 h 后加入2m L的30% KO H,转入沸水浴10 min终止反应,冷却至室温,混合后加入3. 5 mL的蒽酮溶液( 0. 15 g蒽酮溶于10 mL 81%硫酸)于40℃下反应20 min后冷却,测定在620 nm的吸光值; 对照50μL酶液在沸水浴杀酶10 min后,其余操作同上。用两者的差值来计算蔗糖的合成量,表示蔗糖合成酶活性,单位为mg· g- 1 FM· h- 1。( 4)蔗糖磷酸合成酶活性的测定: 除反应液改为UPD-葡萄糖10 mmol· L- 1 ,果糖-6-磷酸5 mmol·L- 1 ,葡萄糖-6-磷酸15 mmol· L- 1 , 15 mmo l· L- 1Mg Cl2 , 1 mmo l· L- 1 EDTA, 0. 1 mol· L- 1硼酸缓冲液( pH 8. 0)和反应时间为30 min外,其余与蔗糖合成酶活性测定相同。单位为mg· g- 1 FM· h- 1。1. 4　数据处理应用DPS 3. 0软件对所得数据进行统计处理。2　结果与分析2. 1　不同发育时期肉苁蓉及其寄主梭梭体内主要可溶性糖类含量的变化2. 1. 1　不同发育时期肉苁蓉及其寄主梭梭体内可溶性总糖含量的变化　从图1, A中可知, CK和HA体内可溶性糖含量差异不显著,而它们与肉苁蓉间却达到了极显著的差异( F= 163. 69* * )。从发育时期看, 9月22日CK的可溶性总糖含量达到最大值,而HA的可溶性总糖的含量在10月12日才达到高峰,出现这种现象的原因可能由于肉苁蓉的寄生使得寄主梭梭整体生育时期延迟。而肉苁蓉体内可溶性糖含量在9月1日后明显下降,这可能与糖类物质转化为有机酸或其它酚类物质有关[12 ]。2. 1. 2　不同发育时期肉苁蓉及其寄主梭梭体内蔗糖含量变化　从图1, B可知,肉苁蓉和CK、HA体内的蔗糖含量存在一定的差异性,表现为肉苁蓉中的蔗糖含量明显高于CK和HA体内的蔗糖含量,而CK 和HA 之间的蔗糖含量无显著差异( F =4. 86*)。从不同发育时期来看,肉苁蓉中的蔗糖含量呈现持续上升的趋势,其中在9月22日以前,其蔗糖含量上升较平缓,之后则快速上升。CK和HA体内表现为HA> CK> CD的蔗糖变化趋势则不同于肉苁蓉,二者都表现为先下降再上升然后再下降的变化趋势,其中, CK的蔗糖高峰出现在9月22日而HA的却出现在9月1日,并且除7月8日外HA的蔗糖含量均高于同期CK的蔗糖含量,说明肉苁蓉的寄生对寄主梭梭的蔗糖积累起到了一定的影响。2. 1. 3　不同发育时期肉苁蓉及其寄主梭梭体内的葡萄糖含量的变化　从图1, C可知, CK、HA和肉苁蓉中都含有葡萄糖,且肉苁蓉中的葡萄糖含量远远高于CK和HA体内的葡萄糖含量,差异达极显著水平( F= 138. 92* * ) ,而CK的葡萄糖含量虽略高于HA,但二者差异不显著。从不同发育时期来看,肉苁蓉中葡萄糖的含量在采样期呈上升趋势,到9月22日达到最高峰。在CK中除9月1日外,其它时期葡萄糖含量均高于HA的, CK中葡萄糖的含量在梭梭进入休眠期时呈上升趋势,到了9月22日后梭梭进入生长旺盛期时葡萄糖含量下降。与CK相比,HA的葡萄糖含量变化恰恰相反,在休眠期葡萄糖含量呈现下降的趋势,当进入旺盛生长期时出现最高峰,这可能与快速生长期肉苁蓉大量积累葡萄糖有关。2. 1. 4　不同发育时期肉苁蓉及其寄主梭梭体内果糖含量的变化　从图1, D可知,肉苁蓉和寄主梭梭体内果糖含量有一定的差异,肉苁蓉体内有较高的果糖含量,而CK和HA体内均未检测出果糖含量,而且从不同发育时期来看,肉苁蓉中果糖的含量呈持续上升的趋势,到10月12日达到最高峰。说明在肉苁蓉-梭梭这一寄生体系中,果糖主要贮藏于肉苁蓉的肉质茎中,而不是寄主梭梭的同化枝内。大量研究表明,植物组织中的果糖主要来自于蔗糖分解,而蔗糖分解又取决于蔗糖代谢相关酶的活性。从图3和表1可知,肉苁蓉中分解酶类的活性大于合成酶类的活性, 表现在转化酶含量较低而蔗糖合成酶( SS)和蔗糖磷酸合成酶( SPS)的活性较高,其中SS的活性又大于SPS的,肉苁蓉中较高活性的分解酶促进了蔗糖的分解,从而使得糖分源源不断地从寄主梭梭向肉苁蓉转移,这是导致肉苁蓉中果糖含量升高的主要原因,这与陈俊伟等[15 ]在柑橘上的研究结果是一致的。2. 1. 5　不同发育时期寄主梭梭和肉苁蓉体内果糖、葡萄糖、蔗糖含量占可溶性总糖含量比例　根据图1( A、B、C、D)中不同发育时期CK、HA和CD中可溶性总糖、蔗糖、果糖和葡萄糖含量的动态变化,可以计算出不同发育时期CK、HA和CD中蔗糖、果糖和葡萄糖含量占不同发育时期CK、HA和CD中可溶性总糖含量的比率(图2)。在糖积累高峰期( 9月22日) ,肉苁蓉体内主要以积累葡萄糖为主,约占可溶性总糖含量的43. 84% (图2, B) ,其次为果糖,占18.61% (图2, C) , 二者合计约占62. 45% ,而蔗糖仅占到4. 98% (图2, A ) , 由此可以断定, 肉苁蓉体内主要以积累己糖为主,为己糖积累型,这主要与其体内蔗糖合成酶活性较高有关(图3, C) ,当然除己糖和蔗糖外,肉苁蓉体内还含有其它种类的可溶性糖。而CK和HA体内的蔗糖、果糖、葡萄糖这3种可溶性糖总和仅占其体内可溶性总糖的21%左右( 9月22日) ,而且在不同的发育时期,二者在葡萄糖和蔗糖的积累上还表现出一定的差异。对于CK梭梭(图2, A、B) ,其在7月8日到9月22日这段时间,葡萄糖和蔗糖含量的总和占可溶性总糖的比例总体呈现下降的趋势,由7月8日的30%降到后期的20%( 9月22日)左右,随着生长期停止,其比例迅速下降到12% 左右( 10月12日) ,其中葡萄糖所占比例高于蔗糖,说明CK主要以蔗糖积累为主; 对于HA,从7月8日至10月12,葡萄糖和蔗糖含量的总和占可溶性总糖的比例总体呈现先上升后下降的趋势,在9月1日达到高峰, 为41. 12% ,而且在休眠期主要以积累葡萄糖为主当进入生长旺盛期后以积累蔗糖为主,其中9月1日为其转变过渡期,到生长终止期二者比例迅速下降,远低于CK的葡萄糖和蔗糖含量总和。HA生长后期蔗糖和葡萄糖总量的急剧下降可能与肉苁蓉这种专性根寄生植物生长发育对梭梭体内有机营养物质吸收消耗直接相关,表现为肉苁蓉生长后期糖分的迅速增加。2. 2　不同发育时期肉苁蓉及其寄主梭梭体内蔗糖代谢相关酶活性变化2. 2. 1　不同发育时期肉苁蓉及其寄主梭梭体内酸性转化酶、中性转化酶、蔗糖合成酶、蔗糖磷酸合成酶活性变化　转化酶是植物库组织中分解蔗糖的一类酶,包括酸性转化酶和中性转化酶2种。从图3, A可以看出, CK和HA同化枝内的中性转化酶活性呈现先上升后下降的变化趋势,其中HA的中性转化酶在7月28日达到高峰,而CK的中性转化酶活性则推迟到9月1日,与寄主梭梭的中性转化酶相比,寄生植物肉苁蓉的中性转化酶活性相对较低,且在生长发育过程中也呈现出一个先逐渐上升后下降的过程,在9月1日达到活性最高峰。另外通过对CK、HA和肉苁蓉体内的中性转化酶活性作方差分析发现, HA的中性转化酶活性与CK的相比差异不显著,而它们与肉苁蓉的中性转化酶活性则达显著水平(F= 3. 104 * )。从图3, B可以看出, CK和HA的酸性转化酶与它们的中性转化酶表现出同样的变化趋势,所不同的是,二者的酶活性最高峰均出现在7月28日,之后下降很快。肉苁蓉的酸性转化酶活性变化与中性转化酶有一定差异,其活性变化比较平缓,即在肉苁蓉的不同发育时期酸性转化酶活性变化不大。另外,对CK、HA及肉苁蓉体内的酸性转化酶活性方差分析表明, CK和HA间的酸性转化酶活性差异不明显,但二者均比肉苁蓉的酸性转化酶活性高,且具有显著性差异( F= 2. 919* )。通过以上分析,可以看出,作为库组织的肉苁蓉中酸性转化酶和中性转化酶活性均低于源组织的CK和HA的,说明转化酶在一定程度上参与了肉苁蓉库强的调节。蔗糖合成酶是蔗糖代谢过程中,主要对蔗糖分解起关键作用的酶。从图3, C可以看出,肉苁蓉体内的蔗糖合成酶活性呈现先上升后下降的变化趋势,最高峰出现在9月1日,而HA和CK的蔗糖合成酶活性在肉苁蓉的旺盛生长期整体上变化比较平缓( 9月22日以前) ,之后随着外界气候环境的恶化,二者体内的蔗糖合成酶活性快速下降。另外对HA、CK和肉苁蓉的蔗糖合成酶活性行进方差分析发现,肉苁蓉体内的蔗糖合成酶活性极显著高于CK和HA的( F= 52. 968* * ) ,而HA和CK的蔗糖合成酶活性差异不显著,肉苁蓉体内较强的蔗糖合成酶活性为增强肉苁蓉肉质茎这一特殊的库组织的库强度起到了巨大的调节作用。蔗糖磷酸合成酶是植物体内调控蔗糖合成的一类关键酶。从图3, D可知,肉苁蓉的蔗糖磷酸合成酶活性呈现先缓慢上升后快速下降的变化趋势,其最高峰值出现在9月1日,而CK和HA的酶活性整体变化趋势较平缓,只是在9月1日后, CK的酶活性略高于HA的。方差分析表明,肉苁蓉与CK和HA间的酶活性差异达极显著,而CK和HA间的酶活性差异不显著( F= 19. 756* * ) , 这与肉苁蓉、CK 和HA(图1, B)体内蔗糖的变化趋势是一致的。2. 2. 2　不同发育时期寄主梭梭和肉苁蓉体内蔗糖合成酶类和分解酶类及酶净活性变化规律蔗糖合成酶、蔗糖磷酸合成酶和转化酶(包括中性转化酶和酸性转化酶)是植物果实糖代谢的关键酶,其中,蔗糖磷酸合成酶是合成蔗糖的酶,转化酶是分解蔗糖的酶,而蔗糖合成酶虽然能催化合成蔗糖,但现在有足够的证据表明它也是主要起分解蔗糖的作用[16. 17 ] ,一般被归结为蔗糖分解酶类,所以蔗糖分解酶类活性包括酸性转化酶、中性转化酶和蔗糖合成酶的活性,而蔗糖合成酶类活性主要是蔗糖磷酸合成酶的活性,合成酶类活性减去分解酶类活性即为蔗糖代谢相关酶的净活性[16 ]。肉苁蓉和寄主梭梭蔗糖代谢相关酶总体变化情况见表1。从表1可知,作为库贮藏组织的肉苁蓉,其体内分解酶类活性始终高于CK和HA体内的分解酶活性,且差异达极显著水平(F= 30. 989* * ) ,其中尤以蔗糖合成酶活性最为显著,而且随着肉苁蓉肉质茎的逐渐长大,其体内分解酶类活性表现出持续的上升趋势,使得肉苁蓉主要以积累己糖为主。与肉苁蓉相比, CK和HA的分解酶活性都大于其体内的合成酶活性,且HA的分解酶活性大于CK的,表现为HA体内的蔗糖代谢酶净活性高于CK的,即HA体内整体蔗糖分解水平高于CK的,且二者的差异达显著水平(F= 7. 838* ) ,这就促使糖分由寄主梭梭向寄生植物肉苁蓉的不断转移表现为HA> CK> CD。3　讨　论大量研究表明碳水化合物运输到植物特定的贮藏器官,是由库强和植物生产光合同化物的能力决定的,而库强在很大程度上又取决于库细胞的蔗糖代谢和贮藏能力。因此,蔗糖代谢相关酶活性就成为衡量库强大小的一个重要指标[ 18]。与植物体内糖积累关系密切的糖代谢相关酶主要有中性转化酶、酸性转化酶、蔗糖合成酶和蔗糖磷酸合成酶[18 ]。对果树的研究表明,在苹果[17 ]和葡萄[ 12]果实发育早期蔗糖含量与转化酶活性呈负相关; 在果实发育的过程中嫁接西瓜幼果组织中转化酶活性下降,蔗糖合成酶活性上升是导致果实中蔗糖含量降低的主要原因[13 ]。与果实相似,肉苁蓉作为一个强大的代谢库,在其生长发育的过程中从寄主组织获取大量的同化物,它获取同化产物的能力取决于代谢库的大小,而库强的大小常常决定与糖代谢相关酶的活性[ 12] ; 而且许多研究还表明,控制糖分积累的关键步骤是在于发育的果实内部而不是源叶输出光合产物的能力或者是韧皮部路径的运输效率。库细胞中糖代谢酶的成分与活力及糖的跨膜运输能力等因素决定了果实糖分的积累[20 ]。其中蔗糖代谢酶中的蔗糖合成酶和转化酶是影响果实库强的一个主要原因。蔗糖合成酶和转化酶调节蔗糖的合成与分解,使库细胞与韧皮部保持一定的蔗糖浓度梯度,便于蔗糖在库组织中积累。作者对肉苁蓉和寄主梭梭体内的蔗糖代谢酶研究后发现,梭梭同化枝内蔗糖磷酸合成酶活性较转化酶活性和蔗糖合成酶活性低,说明梭梭体内糖分积累主要以后两种酶的调控为主,而这两种酶活性的升高促进了梭梭同化枝内光合产物蔗糖的分解,进而运输到肉苁蓉体内,而使自身的生长受到抑制(这与谭德水等[ 9]的结果是一样的) ,表现为寄生肉苁蓉的梭梭的分解酶类(转化酶和蔗糖合成酶活性)高于未寄生肉苁蓉的梭梭的分解酶类活性(表1)。肉苁蓉体内转化酶活性却较低,而其蔗糖合成酶活性和蔗糖磷酸合成酶活性较高,其中蔗糖合成酶活性高于蔗糖磷酸合成酶活性,表现为肉苁蓉中的分解酶类活性高于合成酶类活性,较高的分解酶类活性促进了蔗糖的分解,从而促进了糖分由“源” (梭梭同化枝)向“库” (肉苁蓉肉质茎)的不断转移,表现为寄主梭梭同化枝主要以积累蔗糖和葡萄糖为主,而肉苁蓉肉质茎内以积累葡萄糖、果糖为主,其中在积累高峰期葡萄糖含量约占肉苁蓉肉质茎中可溶性糖含量的43. 84% ,果糖占到18. 61% ,而蔗糖只占极少一部分为4. 98% 。由于肉苁蓉的寄生使得HA的糖分积累较CK的糖分积累也发生了一定变化,表现为CK以积累葡萄糖为主,而HA在夏季休眠期以积累葡萄糖为主,进入秋季旺盛生长期时以积累蔗糖为主,而蔗糖的积累又促进了糖分由“源”向“库”的不断转移,从另一角度说明糖分由寄主梭梭向肉苁蓉的运输和转移主要以蔗糖为主,这与绝大多数植物体内糖分由“源”组织向“库”组织转移的结论一致[18 ]。肉苁蓉的糖分积累与梭梭不同,己糖含量约占可溶性总糖的62. 45% ,而蔗糖仅为可溶性总糖的4. 98% ,故肉苁蓉为糖积累类型中的“己糖积累型”。总体来看,控制梭梭和肉苁蓉体内糖分代谢的酶主要以蔗糖合成酶为主,其它2种酶为辅协同参与调控。

摘 要: 目的: 为了阐明德赢vwin登录 是否可以作为肉苁蓉代用品使用。方法: 根据其主治功效, 对肉苁蓉和德赢vwin登录 水煎液对小鼠通便作用及对/ 肾阳虚0小鼠体重、耐寒时间等进行了实验研究。结果: 二者均具有一定的通便润燥和温补肾阳的作用。结论: 初步认为在目前肉苁蓉地道药材资源急骤减少时, 德赢vwin登录 可以代肉苁蓉使用。关 键 词: 肉苁蓉; 德赢vwin登录 ; 药理作用研究肉苁蓉是常用的补肾壮阳中药, 具有补肾益精、润燥的功能。5中国药典62000 年版收载以列当科植物肉苁蓉( Cistanchedeserticola Y. C. Ma) 干燥带鳞片的肉质茎为正品入药。由于肉苁蓉寄生生长繁殖的特殊性, 加之疗效显著而被人为的滥挖以及大批砍伐其寄主梭梭, 使肉苁蓉的资源急骤减少, 已属濒危植物112。由于药源紧缺, 本属其它品种也在各地使用, 其中德赢vwin登录 ( Cistanche tubulosa ( Schenk) R.Wight) 主产于我国新疆, 资源比较丰富, 为目前中药肉苁蓉的主要基源植物122。为了阐明德赢vwin登录 是否可以作为肉苁蓉代用品使用, 我们根据其主治功效, 对肉苁蓉和德赢vwin登录 水煎液对小鼠通便及对/ 肾阳虚0 小鼠的药理作用进行了比较研究。1 实验材料药 材 肉苁蓉和德赢vwin登录 药材分别从内蒙古阿拉善旗和新疆和田购得并已鉴定。试 剂 1%的苯酚红水溶液及0. 8mg /ml 的氢化可的松溶液均用生理盐水配制。样品的处理 分别取肉苁蓉和德赢vwin登录 药材各100g切片, 研成粗粉, 水煮3 次, 分别为2 小时、1 . 5 小时、1 小时,合并三次滤液, 分别浓缩成每ml 相当于1g 生药和每ml 相当于0. 5g 生药二个浓度。实验动物 昆明种小鼠, 由广州医学院实验动物中心提供。2 方法和结果对小鼠排便作用的比较 将药物水煎液加入1%的苯酚红。取体重20 ? 2g 昆明种小鼠60 只, 雌雄各半, 随机分成5 组: 即模型、肉苁蓉和德赢vwin登录 组。禁食不禁水24 小时, 对照组灌胃1% 苯酚红溶液, 其它4 组分别灌胃肉苁蓉0. 5g /ml、1g /ml 水煎液, 德赢vwin登录 0. 5g /ml、1g /ml 水煎液, 每只动物给药0. 2g /10ml, 给药后立即计时, 各组分别记录每只小鼠从给药完到排出第一粒红色粪便的时间, 并观察粪便的硬度、性状等。服药后, 动物均很快有红色的尿液排出, 给药组动物排出红色粪便的时间较短, 粪便表面有油光、较软、成形。肉苁蓉和德赢vwin登录 0. 5g /ml 剂量组, 排便时间均比对照组短,有显著性差异( P < 0. 05) ; 1g /ml 剂量组, 排便时间同对照组比较均有非常显著性差异( P < 0. 01) , 显示肉苁蓉和德赢vwin登录 均有明显的通便作用; 且随着剂量的增大, 其排便时间也有显著性差异( P < 0. 05) , 但肉苁蓉和德赢vwin登录 同等剂量的排便时间相比, 无显著性差异( P > 0. 05) 。结果见表1。对氢化可的松引起的/ 肾阳虚0 小鼠耐寒作用的比较132选取体重28 ? 2g 的雄性昆明种小鼠60 只, 随机分成6组, 每组10 只。除空白( 正常) 对照组外, 其余各组均肌注氢化可的松0. 8mg /10g. d, 连续给药10 天, 至/ 肾阳虚0模型组小鼠大部分出现毛发疏松或脱毛、消瘦、神疲乏力和形寒尾冷等典型的/ 肾阳虚0 症状为止。造型同时空白( 正常) 对照组和模型组灌胃0. 20ml /10g. d 的生理盐水, 其它4 组分别灌胃0. 20ml /10g. d, 浓度为0. 5g /ml、1 . 0g /ml 肉苁蓉水煎液, 浓度为0. 5g /ml、1 . 0g /ml 德赢vwin登录 水煎液。末次给药1h 时后将动物根据分组, 分别放于不同的大纸盒中, 置于恒温冰箱( - 5~ - 7e ) 中, 记录动物在低温下的生存时间, 结果见表2。+ + + ) 动物毛发疏松、消瘦、神疲少动、精神及食欲较差+ + ) 动物毛发较乱、消瘦、活动较少、精神及食欲一般+ ) 动物毛发稍乱、活动较正常对照组少、精神及食欲正常3 讨 论由上述结果表明: 二个品种肉苁蓉的水提取物均有一定的通便润燥的作用, 随着剂量的增加对排便时间也有一定的影响; 但二个品种在相同的剂量下, 对小鼠排便时间差异的比较, 二者无统计学差异( P > 0. 05) 。二个品种均有一定的温补肾阳的作用, 肉苁蓉和德赢vwin登录 水煎液均可明显增加/ 肾阳虚0 模型小鼠的体重, 也能使/ 肾阳虚0模型小鼠的耐寒时间明显延长, 并对其体症有一定程度的改善。可见二者均有一定的壮阳作用。已有资料研究表明: 在肉苁蓉和德赢vwin登录 中均含有苯丙苷类、木脂素苷类、甜菜碱及多糖类等化合物。14、52其中甜菜碱及多糖类等成分已被证明为肉苁蓉壮阳的活性成分。162肉苁蓉类药材品种和原植物资源调查结果表明: 德赢vwin登录 的年收购量基本上与全国肉苁蓉的购销量相近, 此药作为肉苁蓉的代用品已列为新疆地方标准, 不仅在当地使用,而且大量销往内地, 同时有一定数量的出口。在目前肉苁蓉地道药材资源急骤减少时, 我们初步认为: 德赢vwin登录 可作肉苁蓉使用或两者混用。参考文献112何松春, 施大文. 中药肉苁蓉类的药源调查及原植物鉴别1J2. 上海医科大学学报, 1995, 22( 3) : 186122屠鹏飞, 何燕, 楼之岑. 肉苁蓉类药源调查及资源保护1J2. 中草药, 1994, 25( 4) : 205132徐文豪, 邱声祥, 沈连忠, 等. 肉苁蓉和盐肉苁蓉化学成分和药理作用的比较1J2. 中草药, 1995, 26( 3) : 143142徐文豪, 邱声祥, 沈连忠, 等. 肉苁蓉化学成分的研究1J2. 中草药,1994, 25( 10) : 509152宋志宏, 莫少红, 陈燕, 等. 德赢vwin登录 化学成分的研究1J2. 中国中药杂志, 2000, 25( 12) : 728162薛德钧, 章明, 吴小红, 等. 肉苁蓉抗衰老活性成分的研究1J2. 中国中药杂志, 1995, 20( 11) : 687