朱新安＇，小红，丁始安＇，赵经纬＇，邓盛齐＇，李楠＇，杜乐口（1成都大学四川抗菌素工业研究所，成都610052；2成都大学，成都 610052）摘要：新型冠状病毒（COVID-19）目前已呈现全球大流行的严峻态势，已对人类政治、经济与学习生活造成巨大影响。随着对COVID-19认知的不断深入，我国已经提出针对性的诊疗方案。肉苁蓉作为一种名贵药材已经具有超过2000年的使用历史，根据学术界已有的研究资料，可以认为中药肉苁蓉具有的润肠通便与免疫调节功能对处于康复期新冠患者具有一定的临床意义。关键词：肉苁蓉：新型冠状病毒：康复中图分类号：R978.7  文献标志码：A   文章编号：1001-8751（2020）04-0293-03DOI:10.13461/j.cnki.wna.005323Application of Cistanche in the Field of Treatment ofCOVID-19:a ForesightZhu xin-an',Xiao Hong,Ding Shi-an',Zhao Jing-wei',Deng Sheng-qi',Li Nan',Dulel2 (1 Sichuan Industrial Institute of Antibiotics,Chengdu University,Chengdu 610052,2 Chengdu University,Chengdu 610052)Abstract:The coronavirus disease(COVID-19)has presented severe global pandemic and has had a huge impact on human politics,economy and leaming life.With the continuous deepening of the recognition of COVID-19,China has proposed targeted diagnosis and treatment programs.Cistanche has been used as a valuable medicinal material for more than 2000 years.According to the existing research,it could be considered that the intestinal laxative and immunomodulatory functions of Cistanche deserticola have clinical significance for patients with COVID-19 in rehabilitation.Keywords:cistanche:COVID-19:rehabilitation据世界卫生组织最新统计数据，截止到2020年6月13日，全球累积感染新型冠状病毒的患者已累计740万例，造成约42万人死亡叫。虽然在我国党和政府的领导下，COVID-19在我国大陆、港澳台地区得到了有效的遏制，但由于其他国家文化与政治体制的差异，导致COVID-19未能在其他国家的得到有效控制，已呈现全球大流行的态势。2020年6月10日，国际顶级期刊《Nature》杂志刊登了关于瑞德西韦（Remdesivir）治疗新型冠状病的的研究报告，报告称在感染早期应用瑞德西韦具有一定的临床意义，但文章作者同时称，由于恒河猴与人类之间的差异，该结果尚有待商権叫。与此同时，我国与世界各国都在大力研发针对COVID-19的疫苗，但迄今为止尚未有疫苗上市。据国家中医药管理局报道，采用中西医结合治疗的有效率能达到92％以上，因而可以预见，中药材在COVID-19的防控工作方面具有一定的应用价值与实践意义。Cao等系统的总结了目前中药应用于COVID-19防控方面的进展，认为植物多糖是中药抗击新型冠状病毒的有效成分叫。国家卫生健康委员会在《新型冠状病毒诊疗方案（试行第六版）》（以下简称方案）中明确了新型冠状病毒感染患者的中医诊疗方案，方案中根据病情发展情况与程度将诊疗方案分为7类，含多种解表类中药。肉苁蓉作为药材使用历史已经超过2000年历史，自东汉《神农本草经》起，各个朝代本草著作均将其作为名贵药材收载。据东汉时期《神农本草经》所载，肉苁蓉“味咸。主治五劳七伤，补中，除茎中寒热痛，养五脏，强阴，益精气，多子，妇人癥瘕（音同争甲）。久服轻身，生山谷。”李时珍在《本草纲目》中记载肉苁蓉“甘、微温、无毒。主治劳伤，精败面黑。”虽方案中肉苁蓉未被列入，但肉苁蓉具有的生理活性使得其仍可考虑作为一种处于康复阶段的患者的备选方案。1 润肠通便方案中明确处在恢复期阶段的患者具有大便无力的症状，而肉苁蓉具有一定的泻下作用。范亚楠等通过盐酸洛哌丁胺制备小鼠便秘模型，同时对模型动物分别施与肉苁蓉总苷、肉苁蓉总多糖、肉苁蓉总寡糖，随后对动物排便情况及小鼠体内各项生理指标进行研究与平行对比发现肉苁蓉总寡糖是肉苁蓉润肠通便的主要活性成分。综合文献报道，结合当前方案中处在康复阶段患者的症状，可以认为，肉苁蓉具有的润肠通便作用有利于患者恢复肠道健康。2 免疫调节针对患者普遍存在的呼吸衰竭的情况，方案认为应当给予机械通气。气管切开插管留置是临床常见的缓解患者呼吸困难的手术之一，也是急救工作中重要的抢救技术，闻国华等认为，气管切开插管留置术在新冠治疗过程中具有一定的必要性叫。但值得注意的是，该手术不可避免的破坏患者呼吸道的防御功能，进而极易造成患者肺部再次感染，虽然可以使用抗生素对患者病情进行有效控制，但方案中指出，在进行抗菌药物治疗时，应当避免盲目或者不恰当的使用抗菌药物，尤其是联合使用广谱类抗菌药物。姚金茜用肉苁蓉多糖水溶液对气管切开插管留置小鼠给药后发现，相对于对照组，给药组小鼠肺部切片病变呈现明显好转趋势，综合其研究成果，作者认为肉苁蓉能够提高气管切开插管留置患者免疫力，进而对肺部感染产生积极的效果，产生提高免疫力功能的主要成分为肉苁蓉多糖の。针对肉苁蓉应用于预防肺部损伤的研究方兴未艾。尹刚等研究发现，肉苁蓉提取物能够有效降低因感染引起的肺部损伤，作者认为，肉苁蓉提取物对剂型肺损伤的保护作用与抑制炎性细胞肺内迁移、促进核酸与蛋白质的合成，同时增强吞噬细胞免疫功能等途径有关网。该课题组同时研究了肉苁蓉针对因败血症导致的急性肺损伤的保护作用，研究表明，肉苁蓉同样具有明确的保护作用国。此外，多项研究表明，肉苁蓉对因脂多糖致大鼠急性肺损伤、高原肺水肿具有明确的肺部保护作用，不过，毛新民与刘涛认为肉苁蓉预防肺损伤的机制在于其有效成分之一苯乙醇苷类化合物具有的抗炎、抗氧化应激活性司。Zhao等将肉苁蓉多糖作为疫苗佐剂展开研究，发现肉苁蓉多糖能够提高流感病毒疫苗的体液免疫应答和细胞免疫应答，作者认为，肉苁蓉多糖作为疫苗佐剂具有一定的可行性与安全性口。中药活性成分作为疫苗佐剂是中药研究领域的热点之一回，源于菊粉的多糖佐剂Advax现已开展多项临床试验，涵盖HIV、流感和乙肝等多项病毒性传染性疾病叫。因此可以认为，肉苁蓉多糖用于COVID-19疫苗的开发具有一定的可行性。3 抗疲劳李永超研究发现肉苁蓉具有明确的抗疲劳作用，其主要活性成分为肉苁蓉中含有的苯乙醇苷类化合物。方案中指明，处在康复期的患者多感倦怠无力，因此，以肉苁蓉作为食疗方案能够缓解这一症状。综上所述，感染新型冠状病毒的患者在康复期临床表现包括气短、倦息无力、大便无力等症状，而肉苁蓉作为一味名贵药材，已有2000多年的使用历史，根据文献报道，肉苁蓉多糖具有免疫调节、润肠通便等多种生理活性，因此对患者有一定的临床意义。目前，我国首都北京丰台区确诊多例新冠肺炎患者，多与新发地批发市场有关，可以预见，抗击新型冠状病毒将常态化，在日常生活中，不仅要提倡公民讲究卫生，更要做好易感人群的病毒防控工作。肉苁蓉作为一种药食同源的中药，可以在日常生活中适量食用，从而提高个人免疫力，对今后的防疫工作具有一定的意义。

周刚，高家敏2，曹进2（1．内蒙古自治区药品检验研究院，呼和浩特 010020,2．中国食品药品检定研究院，北京 100050）摘要：肉苁蓉其有多种保健功能，已批准的含有肉苁蓉为原料的保健食品共47种，其保健功能主要为缓解体力疲劳、延缓衰老、增强免疫力、通便等，以肉苁蓉为原料开发保健食品具有广阔的前景。本文总结了肉苁蓉作为原料在保健食品中的使用情况。介绍了肉苁蓉的化学成分与药理作用、安全性评价的相关内容，汇总了已批准的以肉苁蓉为原料的保健食品情况。分析了肉苁蓉在保健食品中的应用情况。以期为肉苁蓉作为保健食品原料开发利用提供参考。关键词：肉苁蓉；荒漠肉苁蓉，德赢vwin登录 ，保健食品DOL:10.19812/.cnki.jfsq11-5956/s.2021.03.02引言肉苁蓉始载于《神农本草经》，列为上品叫，有“补五劳七伤，久服轻身”等记载。《本草纲目》记载：“此物补而不峻，故有从容之号。从容，和缓之貌”。肉苁蓉为列当科（Orobanchaceae）肉苁蓉属（Cistanche Hoffing，et Link）多年生寄 生草本植物，常寄生于固沙植物梭梭、怪柳、盐爪爪、珍珠柴等植物根部，全球共约22种。中国高等植物科属检索表记载我国有本属植物6种，后据国内学者进一步调查，确定为4种1变种P一，分别为荒漠肉苁蓉Cstanchedesemicola Y.C.Ma、盐生肉苁蓉 Csalsa （C.A.Mey.）GBeck、白花盐苁蓉C.salsavar.albifloru PF.Tu et ZC.Lou、沙苁蓉 C.sinensis GBeck 和德赢vwin登录 。我国肉苁蓉主要分布于西北干旱地区，包含内蒙古、新疆、甘肃、青海等。荒漠肉苁蓉从1977年开始为历版《中国药典》的收载品种。近年来，由于资源稀少，加上长期不合理的采挖，野生肉苁蓉濒临枯竭，已被列为国家二级保护植物。2005年版《中国药典》首次将资源较丰富的德赢vwin登录 共同作为基原植物。2015年版《中国药典》收载的肉苁蓉为列当科植物荒漠肉苁蓉 CistanchedeserticolaY.C.Ma或德赢vwin登录 Cistanchetubulosa（Schenk）Wight的 干燥带鳞叶的肉质茎，味甘、咸，性温，归肾、大肠经，具补肾阳、益精血、润肠通便的功效，主要用于肾阳不足、精血亏虚、阳痿不孕、腰膝酸软、筋骨无力、肠燥便秘等症門。现代药理研究表明，肉苁蓉除作为传统的补肾壮阳中药外，还具有抗氧化、抗衰老、调节免疫等多种功能。以肉苁蓉为主要原料的保健食品逐渐发展起来，已批准的含有肉苁蓉为原料的保健食品共47种，其保健功能主要为缓解体力疲劳、延缓衰老、增强免疫力、通便等。本文介绍了肉苁蓉的主要化学成分与药理作用、安全性评价的有关内容，并汇总分析肉苁蓉作为原料在保健食品中的使用情况，为肉苁蓉作为保健食品原料的开发利用提供参考。1、 化学成分与药理作用由于肉苁蓉具有确切的临床疗效和保健功能，其有效成分和药理作用的研究一直是肉苁蓉研究的热点。肉苁蓉活性成分丰富，主要活性成分为苯乙醇苷类、环烯酸菇类、木脂素类、多糖、半乳糖醇、寡糖类等-7。松果菊苷和毛蕊花糖苷属于苯乙醇苷类成分，是2015年版《中国药典》规定的指标成分。肉苁蓉的药理作用有提高性功能、增强记忆力、免疫调节、抗衰老、抗氧化、润肠通便、保护肝脏等-。随着对肉苁蓉研究的不断深入，对于肉苁蓉有效成分的药效作用和作用机制也不断得到阐明。深人的研究肉苁蓉有效的物质成分、药理作用和作用机制是肉苁蓉产业发展的前提。目前关于肉苁蓉化学成分主要是对苯乙醇苷类、多糖类、半乳糖醇和寡糖类成分的药理作用研究较多。苯乙醇苷类成分具有补肾阳作用、调节免疫功能、增强记忆力、抗氧化、抗衰老等较为广泛的药理作用-7。赵微等对苯乙醇苷类化学成分如补肾壮阳、保护肝脏、抗衰老、改善记忆力等13个方面的药理作用进行了详细的论述。吴海虹等P对苯乙醇苷从还原能力、1,1-二苯基苦基苯肼自由基清除能力和亚油酸体系抗脂质过氧化能力3方面进行抗氧化活性评价研究，发现苯乙醇苷类化合物具有较强的抗氧化能力。吴煜等P研究发现松果菊苷对大鼠急性肝损伤的具有保护作用。张涛等27-2研究发现肉苁蓉总苷能明显增强 D-半乳糖致衰老小鼠的免疫机能，使其恢复或接近青年小鼠状态，具有延缓衰老的作用。刘美虹等2发现肉苁蓉苯乙醇苷具有提高学习、记忆能力。多糖类成分的主要作用是增强免疫功能制，曾群力等网对肉苁蓉多糖的免疫活性作用及机制进行研究发现多糖能促进细胞进入分裂期，并推断其对小鼠胸腺淋巴细胞增殖的促进作用与其促进小鼠胸腺淋巴细胞内钙释放有关。高晓霞等对肉苁蓉多糖增强免疫功能的药理作用进行了详细的闸述。半乳糖醇和寡糖类主要作用是润肠通便41，屠鹏飞等“-叫研究发现荒漠肉苁蓉、盐生肉苁蓉和德赢vwin登录 均可明显地促进小鼠大肠蠕动、抑制大肠水分吸收、缩短排便时间，三者作用强度相似。化学成分研究表明，肉苁蓉中含有大量的半乳糖醇，此类成分能提高肠内渗透压。3种肉苁蓉半乳糖醇的含量以盐生肉苁蓉最高，荒漠肉苁蓉次之，德赢vwin登录 最低，并且药理研究显示抑制大肠水分吸收的作用强度次序也同样为盐生肉苁蓉＞荒漠肉苁蓉＞德赢vwin登录 。张百舜等对半乳糖醇润肠通便量效关系研究发现肉苁蓉提取物半乳糖醇对正常动物在1.1％浓度时有润肠通便作用，随着剂量加大作用也逐步增强，但浓度在10％左右时量效曲线走平，通便作用不再随剂量增大商加强。高云佳等财肉苁蓉中总多糖、总苷、总寡糖（含半乳糖醇）、半乳糖醇、去半乳糖醇总寡糖等5个部位分别做润肠通便研究发现，总寡糖、半乳糖醇和去半乳糖醇总寡糖对便秘小鼠的小肠推进率有非常显著的影响，也说明肉苁蓉润肠通便的药效物质为总寡糖和半乳糖醇。2 、安全性评价《神农本草经》＂将肉苁蓉列为上品药，味甘，微温。《本草纲目》口等历代本草均明确指出肉苁蓉“无毒”。肉苁蓉自古便是药用兼食用物种，多年的食用和药用史均显示肉苁蓉的安全性是可靠的。民间流传着肉苁蓉的多种食用方法、有炖肉、煲汤、熬粥、泡酒、泡茶等，各种烹饪方法充分利用了其补肾强身、滋补五脏、提高免疫、延缓衰老的保健功效，营养价值高且无毒副作用。2019年11月25日国家卫生健康委员会与国家市场监管总局发布《关于对党参等9种物质开展按照传统既是食品又是中药材的物质管理试点工作的通知》（国卫食品函（2019］311号），其中将肉苁蓉（荒漠）作为试点按照传统既是食品又是中药材的物质，说明国家卫生健康委员会经过大量实验数据研究证明肉苁蓉（荒漠）可以作为人体直接食用的食品，其具有可靠的安全性。现代安全性科学实验表明肉苁蓉无毒副作用。黄宗锈等对肉苁蓉的食用安全性毒理学研究，其中对急性毒性实验结果表明肉苁蓉对雌，雄小鼠经口的最大耐受量均大于20g／kg体重，其剂量大于人体推荐量的600倍，说明肉苁蓉属于无毒级物质，白国辉等对肉苁蓉急性毒性和90d喂养实验毒性研究未发现肉从蓉有明显的毒性作用，林健等对肉苁蓉的大鼠生殖毒性及致畸研究结果发现肉苁蓉对孕鼠及胎鼠均未见毒性表现；胡余明等对肉苁蓉总苷急性。亚急性及遗传毒性实验研究发现急性毒性实验为无毒，遗传毒性实验均为阴性，体重、食物利用率、血常规、血生化、脏器系数及组织病理学检查等各项指标与对照组比较差异均无显著性，结论表明未见苁蓉总苷有明显的毒副用；彭亮等对肉苁蓉茶的毒理学安全性实验研发现肉苁蓉茶在本实验条件下为无毒物，未显示有急性、亚慢性毒性及遗传毒性。以及张娟等-对对德赢vwin登录 提取物安全性评价研缩短排便时间，三者作用强度相似。化学成分研究表明，肉苁蓉中含有大量的半乳糖醇，此类成分能提高肠内渗透压。3种肉苁蓉半乳糖醇的含量以盐生肉苁蓉最高，荒漠肉苁蓉次之，德赢vwin登录 最低，并且药理研究显示抑制大肠水分吸收的作用强度次序也同样为盐生肉苁蓉＞荒漠肉苁蓉＞德赢vwin登录 。张百舜等对半乳糖醇润肠通便量效关系研究发现肉苁蓉提取物半乳糖醇对正常动物在1.1％浓度时有润肠通便作用，随着剂量加大作用也逐步增强，但浓度在10％左右时量效曲线走平，通便作用不再随剂量增大商加强。高云佳等财肉苁蓉中总多糖、总苷、总寡糖（含半乳糖醇）、半乳糖醇、去半乳糖醇总寡糖等5个部位分别做润肠通便研究发现，总寡糖、半乳糖醇和去半乳糖醇总寡糖对便秘小鼠的小肠推进率有非常显著的影响，也说明肉苁蓉润肠通便的药效物质为总寡糖和半乳糖醇。究结果均显示肉苁蓉无毒、无害，对人体健康不会造成任何急性、亚急性、慢性或者其他潜在性危害。任克恭等严通过临床实验结果表明，连续服用肉从蓉40剂后，心、肝、肾功能均未发现任何损害。肉从蓉安全性评价研究结果为其作为保健食品原料的应用提供了科学依据。3、 以肉苁蓉为原料在保健食品中的应用情况目前市场上批准的保健食品中大量使用肉苁蓉作为原料。查阅国家食品药品监督管理总局已批准的保健食品信息，含有肉苁蓉为原料的国产和进口保健食品分别有45种和2种。汇总已批准含有肉苁蓉为原料的保健食品信息，批准文号包括国食健字（21条）、卫食健字（24条）和进口保健食品（2条）。已批准含有肉苁蓉的保健食品的功能声称有缓解体力疲劳、延缓衰老、增强免疫力、通便等，见表1。以肉苁蓉为主要原料的保健食品产品型态有酒类、茶类、片剂、颗粒、胶囊、口服液等。见图1。表1 已批准含有肉苁蓉的保健食品功能声称情况Table 1 Appraved dietary sapplemeat function caims containing Cimanchecontaining Cimanche功能类型 总数量 功能声称数量增强免疫力9条缓解体力疲劳5条抗疲劳11条单一功能 33条 免疫调节4条改善胃肠道功能（润肠通便）1条延缓衰老2条辅助改善记忆1条增强免疫力、缓解体力疲劳4条延缓意老、调节血脂1条免疫调节、延缓衰老2条抗疲劳、改善胃肠道功能(润肠通便)1条复合功能 14条免疫调节、抗疲劳3条增加骨密度、延缓衰老1条延缓衰老、抗疲劳1条缓解体力疲劳、抗氧化1条 图1 已批准含有肉苁蓉的保健食品形态分布统计Fig.l Statistics on dictary supplement distribution of Chranche health food have been approved已批准含有肉苁蓉为原料的保健食品中原料含肉苁蓉的有39个保健食品产品，原料含肉苁蓉提取物的有5个保健食品产品，原料含德赢vwin登录 提取物的有3个保健食品产品。肉苁蓉常与其他原料复配使用。肉苁蓉原料的单方保健食品产品仅1个，使用原料为（荒漠）病苁蓉。已批准含有肉苁蓉的保健食品的主要功效成分有松果菊苷、毛蕊花糖苷和粗多糖等，不同保健食品的主要功效成分含量差别较大，含量范围为每100g或100ml 保食品含松果菊苷13-7.55g、含毛蕊花糖苷08～1.8g，含粗多糖0.0736～35g不等。不适宜人群多为少年儿童、孕妇、乳母等。中国药典和日本药典将肉苁蓉作为中药材收录，中国药典中内苁蓉含量测定的指标项目为松果菊苷和毛蕊花糖苷。含内苁蓉原料的保健食品的功效成分或标志性成分也多为松果菊苷和毛蕊花糖苷，这与药典的指标成分一致。肉从蓉已作为保健食品原料应用于保健食品中，但缺乏统一的保健食品肉苁蓉原料质量标准和保健食品中内从蓉的相关检测方法，需要建立相关质量评价方法，以完善中药类保健食品的检测方法，促进中药类保健食品规范发展。4 结束语目前，肉苁蓉人工种植的成功和大面积推广不仅使肉苁蓉野生资源得到了保护，面且可以有效防风固沙，促进荒漠生态修复，有利于保护和改善生态环境。人工种植肉苁蓉可以提供来源稳定的肉苁蓉原料，为其相关保健食品产品的开发提供了良好物质基础。肉苁蓉具有广泛的药用和保健价值、安全无毒，以肉欢蓉为主要原料的保健食品具有多种保健功能，缓解体力疲劳、延缓衰老、增强免疫力、通便等。随着对肉苁蓉研究的不断深入和新药理作用的不断发现，肉苁蓉的应用不断增加，充分开发利用其保健特性。研制开发更多保健食品，可以为更多群众提供保健服务。开发肉苁蓉保健食品的同时，需要建立相关的保健食品原料质量标准和检测方法，保证保健食品的质量。随着人民健康意识的不断增强，肉苁蓉产业将得到快速发展，以肉从蓉为原料开发保健食品具有广阔的前景。

刘荣，吴爱明盐城市妇幼保健院药事科，江苏 224002摘要：肉苁蓉补肾阳、益精血、润肠通便，主治男子阳痿、女子不孕、带下、腰膝冷痛、血枯便秘等。本文就肉苁蓉在妇科疾病中的应用作一总结，为临床治疗提供依据。关键词：妇科疾病：肉苁蓉中图分类号：R282 文献标志码：A 文章编号：1672-4208（2011）19-0019-02肉苁蓉是列当科植物肉苁蓉带鳞叶的肉质茎，又名大芸、纵蓉、肉松蓉、地精、金笋。性味：甘、成、温，归肾、大肠经。本品分布于内蒙古、宁夏、甘肃和新疆，素有“沙漠人参”之美誉，具有极高的药用价值，是我国传统的名贵中药材。近年来，我院以肉苁蓉为主药治疗有关妇科疾病，获得满意的疗效，现报道如下。1 、黄体功能不全性不孕症中医认为，肾主生殖，肾气盛是行经孕育的先决条件。而西医认为黄体功能不全是导致不孕症的重要原因之一，其发病与促性腺激素分泌不全有关口。患者，女，28岁，2008年6月8日初诊。患者结婚3年余，婚前曾流产1次，婚后一直未再受孕。平素月经周期24d左右，经量中等，色黯红夹少许血块，经期5～6d，经前感双乳胀痛，经来腰膝酸软，乏力。舌质淡红苔薄白，脉细弦，末次月经2008年5月22日。妇科检查未见异常，B超监测有排卵，输卵管造影检查提示通畅。基础体温连续监测3个月均为双相，高温相持续9d左右，且上升较慢。诊断：维发不孕（黄体功能不全）。治宜益肾疏肝，调补冲任。组成：肉苁蓉15g、菟丝子15g、黄芪15g、桑寄生15g、仙灵脾15g、当归10g、制香附10g、柴胡10g、郁金10g、覆盆子12g、川断12g、熟地12g、党参12g、炒白术12g、炒白芍12g、山药12g，水煎服，日1剂。服2个月经周期后基础体温已恢复正常，月经按期，高温相持续为13～14d，且排卵后体温上升较前改善，维守上法调治。8月27日复诊，服第3个月经周期后，月经未按期来，B超检查显示：早孕。孕期顺利，于2009年5月顺产1男婴。2 、继发性闭经继发性闭经是指正常月经周期建立后月经停止6个月以上者，或按自身原月经周期计算停经3个周期以上者。中医认为继发性闭经多为虚证，由精血不足，血海空虚，或因肾精亏耗，肝血不足，血枯血燥而成经闭。西药治疗多有不良反应。患者，女，27岁，2009年4月13日初诊。患者平素月经不规律，末次月经2008年10月12日，经行时量少，色暗红，质稠。近6个月来，月经闭止未行，尿妊娠试验阴性。头晕耳鸣，腰腿酸软，神倦，肢冷，纳少便溏。舌质淡苔白，脉沉细。诊断：继发性闭经。治宜温补肝肾、燥湿化痰。组成：肉苁蓉10g、仙茅10g、淫羊藿10g、苍术10g、香附10g、法半夏10g、陈皮10g、云茯苓15g、当归10g、山茱萸10g、山药10g、五味子10g、沙苑子10g、甘草5g，水煎服，日1剂。4月27日二诊，服上药9剂后月经仍未来湖，上方再加菟丝子15g、枸杞子15g维服。5月8日三诊，继服上方9剂后，于2009年5月18日月经来潮，经期7d，经量可，色暗红，无血块。3 、肾阳不足型更年期综合征更年期综合征属于中医“经断前后诸症”的范畴，中医认为肾藏精主生殖，女子七七之年，肾气渐衰，天癸将竭，冲任二脉虚衰，月经渐少而绝经。此本是妇女正常的生理变化，但由于妇女个体差异及生活环境等影响，不能适应这个阶段，阴阳失衡，脏腑气血失调，因而出现一系列症状。患者，女，48岁，2006年5月16日初诊。近1年来月经周期素乱，间隔3～4个月来潮，或1月2潮，面色晦黯，精神萎摩，腰膝酸冷，大便溏，经行量多，带下清稀。舌淡苔薄白，脉沉细无力。诊断：更年期综合征（肾阳不足。治宜温肾助阳，温中健脾。组成：肉苁蓉20g、淫羊藿20g、生地30g、紫河车25g、当归15g、女贞子15g、续断15g、早莲草15g、酸枣仁15g、夜交藤15g、枸杞10g、山药10g、山茱萸10g、丹皮10g、茯苓10g、泽泻10g、柴胡10g、香附10g，水煎服，日1剂。6剂后症状减轻，再服12剂症状消失。随访1年未复发。4、 阳虚血寒型痛经痛经是指妇女在月经前后或月经期出现下腹部疼痛，或伴腰骶部疼痛，严重者可出现恶心、呕吐、面色苍白、手足厥冷等，影响生活及工作。肾为冲任之本，肾阳虚弱，虚寒内生，冲任、胞宫失煦，虚寒血滞，故经期或经后小腹冷痛。患者，女，19岁，2009年7月18日初诊。经行腹痛4年，平素月经规律，加重伴月经量少1年。患者14岁初潮，月经周期28～31d，经期6～7d，量中色红，无异味。初潮时经行腹稍痛，1年前经行腹痛加重，经前12h开始疼痛，行经第1天疼痛最剧，持续2～3d缓解，疼痛呈痉挛性冷痛，影响学习，伴月经量少、色淡红，偶夹血块，肢冷，头晕乏力，腹痛时面色发白，出冷汗，服止痛药效果欠佳，故前来就诊。末次月经：6月25-30日，月经量少色淡，质清稀，伴小腹痛，冷感甚，喜按喜温，得热痛减，腰酸，面色白，头晕乏力，食欲差，纳眠正常，二便正常，舌淡红苔白，脉沉涩。诊断：原发性痛经（阳虚血寒证。治宜温经散寒，养血调经，行气止痛。方用艾附暖宫丸加减，组成：肉苁蓉15g、艾叶15g、炒香附15g、白芍15g、乌药15g、延胡索15g、黄芪30g．当归12g、白芷12g、川芎12g、肉桂5g（后下）、炒川续断20g、巴戟天20g水煎服，2d1剂，即日起连服8d，经净后服通脉大生片1周，下次经前1周复诊。8月19日二诊：自述服上方4剂后，7月月经按时来潮，经期小腹冷痛减轻，月经量较前略增多，头晕消失，食欲好转，但有腰酸，伴经前略腹胀，纳眠可，二便调。舌质淡红苔薄白，脉略沉。继用上方加菟丝子20g、枳壳15g，水煎服，2d1剂，服4剂。9月20日三诊，服上药后，于8月25日行经，经前乳房不胀，经期轻微小腹痛，能耐受，月经量较前明显增多，色红，面色红润，舌红苔薄白，脉微而滑。为巩固疗效维服前方4剂，随访半年，月经期量正常，痛经未再复发。5 、产后大便难产后大便数日不解，或大便艰涩，便时干燥疼痛者，称“产后大便难”，中医称为“产后便秘”。本病多因产后分娩失血，津液亏耗，不能濡润肠道；或阴虚火旺，内灼津液，肠道失于滋润，传导不利：或素体气虚，又因产时耗气，大肠无力传送；或产后伤食，热结肠道，腑气不通。患者，女，26岁，2009年4月18日初诊。初产妇，产后满月3d后就诊，自述产后17d出现排便困难，大便干燥，每日惧怕排便，伴有肛裂，在家中用开塞露维持治疗。面色无华，时而心悸头晕。唇舌淡，脉细。诊断：产后大便难。治宜补益气血。组成：肉苁蓉15g、生地15g、当归15g、火麻仁10g、桃仁10g、枳壳15g、白术15g、黄芪20g、茯苓20g、木香10g、酸枣仁15g，水煎服，日1剂，连用15剂，痊愈。肉苁蓉药用始载于《神农本草经》，并被列为上品：“味甘微温，主五劳七伤，补中，除茎中寒热痛，养五脏，强阴，益精气，妇人入瘕。”李时珍《本草纲目》中称它：“补而不峻，故有从容之号。”中国药典》中记载：“肉苁蓉，补肾阳益精血，润肠通便，用于治疗阳痿、不孕、腰膝酸软、筋骨无力、肠燥便秘。”由于肉苁蓉野生资源日益枯竭，已被我国列为二级保护物种，并被收入《国际野生植物保护名录》。现代医学研究认为：（1）肉苁蓉含有丰富的生物碱、结晶性的中性物质、氨基酸、微量元素、维生素等成分，可有效地预防、治疗男子肾虚阳痿、遗精早泄及女子月经不调、闭经不孕等疾病。（2）肉苁蓉能显著提高小肠推进速度，缩短通便时间，同时对大肠的水分吸收也有明显的抑制作用，从而促进粪便的湿润和排泄。（③）提高人体免疫功能。（4可调节循环系统。（5）肉苁蓉中所含有的苯炳醇糖是其他药物所没有的成分，可延缓衰老）。我院妇产科将肉苁蓉用于女子不孕症、经闭、绝经前后诸症、崩漏、经行水肿、胎萎不长、子肿、妊娠小便不通、产后大便难、产后排尿异常、乳汁自出等，疗效显著，值得临床推广使用。参考文献［1中华人民共和国卫生部药典委员会，中国药典P4北京：北京工业出版社，2000.103．［2］张玉珍．中医妇产科学D北京：中国中医药出版社，2007：114．3柳淑芹浅卵巢早衰的诊断与治疗具中华现代妇产科学杂志，2005,2（6）356-357.［4］许慧莉，韩桂珍，粪励俐，中药离子导入与内服诱发排卵的临床研究湖北中医学院学报，2000.201）28-2919刘金星刘敏如宋敏等，养精汤促排卵的临床及实验研究再中国中西医结合杂志，2001.21（2）94-98．

2.2 抗衰老衰老是生物界最基本的自然规律之一，是随着时间的推移所有个体都将发生功能性和器官性衰退的渐进过程。皮肤衰老与机体衰老同步发展，随着人们对皮肤衰老机制的认识不断深人，目前关于皮肤衰老的机制学说已有30多种。中药延缓皮肤衰老的作用主要体现在清除自由基、修复胶原等方面。YANG等研究发现肉苁蓉提取物可以清除DPPH自由基，具有抗氧化能力。同时，肉苁蓉提取物可以显著降低胶原酶和弹性蛋白酶mRNA的表达水平，并抑制胶原酶、弹性蛋白酶及透明质酸酶的活性，具有延缓皮肤衰老的作用。研究表明，肉苁蓉的活性成分苯乙醇苷、多糖等对延缓皮肤衰老均有一定的效果。肉苁蓉的不同活性成分对应的衰老作用途径如表1所示。表1 肉苁蓉活性成分与其抗意老作用途径Tabil Adtivengredents ofCetancheand trepatwayoftherartragngeflects 2.3 防晒随着光对皮肤损伤研究不断深入，人们的防晒意识不断提高。然而目前市场上防晒化妆品中的防晒剂，包括物理防晒剂及化学防晒剂均具有一定的危害，难以满足人们的需求。广谱、安全、天然的植物防晒剂成为当下研究的热点。肉苁蓉的主要活性成分苯乙醇苷分子中具有多个苯环和共轭结构，研究发现四，苯乙醇苷在280～380nm具有较强吸收，可用作天然防晒剂，缓解紫外线对皮肤的伤害。苯乙醇苷添加量为1％或2％的防晒霜无不良反应，且具有良好的稳定性和光保护作用。FACINO等研究发现，松果菊苷可以保护皮肤免受UVA／UVB诱导的氧化应激损伤，清除自由基，防止胶原蛋白的降解。ZHANG等采用UVB照射小鼠皮肤损伤模型和人永生化表皮细胞（HaCaT）损伤模型一步研究了松果菊苷对UVB诱导的皮肤损伤的光保护作用及潜在的作用机制。小鼠实验结果表明，外用松果菊苷乳膏可以明显改善UVB所致的小鼠皮肤病变，包括水肿、粗植、红斑、溃烂、皱纹、表皮增厚、真皮层组织排列素乱等，且改善作用与松果菊苷的含量呈正相关。HaCaT细胞实验结果表明，松果菊苷对UVB诱导的DNA损伤和细胞凋亡具有显著的保护作用。松果菊苷可以提高细胞中SOD、CAT、GSH-Px的活性，降低MDA、ROS的含量，发挥抗氧化作用，减少细胞的氧化损伤，阻止DNA碎片化，抑制细胞凋亡：另外，松果菊苷可以下调细胞中ATM／Rad3相关蛋白（ATR）、Chk1、p53、半胱天冬酶（Caspase-3）、多腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）的表达，减少细胞凋亡，并上调XPA蛋白的表达，促进DNA的修复。AVILA等研究毛蕊花糖苷的光保护作用，结果发现毛蕊花糖苷对UVB诱导的细胞调亡的保护作用优于防晒剂甲氧基肉桂酸乙基己酯，且采用豚鼠模型测定的SPF值是甲氧基肉桂酸乙基己酯的4倍多。综上，肉苁蓉的苯乙醇苷成分不仅可以吸收紫外线，还具有抗氧化、修复DNA损伤和减少细胞调亡的作用，在防晒化妆品中具有潜在的应用价值。2.4 抑菌化妆品富含油脂、水分、蛋白质等营养物质，适宜微生物的生长和繁殖。因此，化妆品中需添加一定量的防腐剂来防止腐败变质。相对目前常用的化学合成防腐剂，中药防腐剂具有低毒、安全性高、天然来源等多种优势，更受消费者的欢迎。肉苁蓉有较好的扣菌效果。王晓琴等研究发现肉苁蓉多糖对四叠球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、啤酒酵母和保湿功效上，且主要以含肉苁蓉的复方原料为主，针对美白、防晒等功效的应用较少。以传统中医理论为指导，结合现代科学技术，肉苁蓉的单方及复方应用均值得深入系统的研究。综上所述，肉苁蓉具有多种护肤功效，值得学者进一步研究，为其在化妆品中的应用开拓更加广阔的天地。参考文献：国WANG L L，DING H，SHI Y，et al.Research progress on chemical constituents of Cistanches Herba and their pharmacological effects [EB/OLJ.[2015-07-01]http://www.tiprpress.com/chmen/ artide/abstracv/chm20150101.［2］毕萃萃，刘银路，魏芬芬，等，内苁蒙的主要化学成分及生物活性研究进展门．现代药物与临床，2019,42（9）1896-1900．［3］麻景梅，宋新波，张丽娟，等，荒溪内苁蒙多糖的研究［门。吉林中医药，2012,32（2）：199-201［4］屠鹏飞，何燕萍，楼之岑，内苁蒙类药源调查与资源保护［月．中草药，1994,25（4）；205-208,224．［5］屠鹏飞，玉部，出山天，等，内苁蒙类生药中苯乙醇式类成分的RP-HPLC分析［门．药学学报，1997,32（4）；294-300．［6刘雄，吴蓉，余晓晖，等，HPLC法测定不同产地内苁蒙中松果菊苷的含量门甘肃中医学院学报，2009,26（5）：42-44．松果葡苷含量的测定P］新疆中医药，2007,25（4）：85-86．［8］薛德钧，章明，三种内苁蒙糖类成分分析［］，中药材，1994.17(2):36-37.冈中国药典委员会，中华人民共和国药典［M］.北京：中国医药科技出版社，2020：140-141．［10］钱浩，喻芳君，耿宗成，等，不同季节采收的内苁蒙中4种苯乙醇普的含量比较研究］，药物分析杂志，2016,36（11）：1971-1976．［11］王雪媛，肖波，张治峰，等，不同采收期肉苁蒙中松果菊苷、毛蕊花糖苷、半乳糖醇、细菜碱及可溶性多糖量的测定及其道地性研究［月．中草药，2017,48（18）3841-3846［12］张烛，李鑫，热娜＊卡斯木，等，RP-HPLC法测定不同寄主和不同产地内苁蒙中松果葡苷和麦角器苷的含量［门，药物分析杂志，2003,23（4）：254-256．［13］任倩倩，吴华，金建明，化妆品植物原料（11）--抑制酪氨酸酶活性的植物美白原料的研究与开发［J］，日用化学工业。2021,51(3):178-185［4］杨建华，胡君萍，热·卡斯本，等，内苁蒙苯乙醇总苷对酪氨酸酶活性的抑制作用［］华西药学杂志，2010,25（5）533-535．

都姗姗＇，陈素梅，闫东海＇，陈明霞＇，韩雅慧，易斌（1．北京斯利安药业有限公司，北京 102600；2．建昌帮药业有限公司，江西 抚州 344099）摘要：综述了肉苁蓉在化妆品中的应用研究进展。介绍了肉苁蓉的主要活性成分，包括苯乙醇苷、多糖等，并通过对不同种、不同产地、不同采收期和不同寄主肉苁蓉主要活性成分的综述，阐明了不同条件下肉苁蓉主要活性成分的差异性。重点概述了肉苁蓉的美容护肤作用机制及肉苁蓉在化妆品中的功效，包括美白、抗衰老、防晒、抑菌、保湿。阐述了近年来肉苁蓉在化妆品原料及化妆品中的应用现状，并分析了肉苁蓉作为化妆品原料应用到化妆品中的开发缺陷以及技术上的不足。最后指出了肉苁蓉在化妆品领域今后的研究方向。关键词：化妆品；肉苁蓉；应用中国分类号：TQ658 文献标识码：A 文章编号：1006-7264（2021）09-036-06DOI:10.39694.issn.1006-7264.2021.09.009“沙漠人参”、“中华仙草”之美誉＂。肉苁蓉富含苁蓉在我国已有两干多年的使用历史，始载于《神农本草经》，列为上品。其味甘、咸、性温，素有多种活性成分，具有保健美容功效。古人对肉苁蓉在保健美容方面的记载有：“久服轻身”，“润五脏，长肌肉”，“益髓。悦颜色，延年”，“补精败，面黑，劳伤”等。近年来，肉苁蓉在化妆品领域的开发应用已逐步开展，相关的科学研究表明其在美白、抗衰老、防晒、抗炎、抑菌、保湿及防辐射方面具有良好的效果。本文从肉苁蓉的主要活性成分、美容护肤机制、在化妆品中的功效及应用现状等方面进行综述，为肉苁蓉在化妆品中的进一步应用提供一定的理论基础。1 肉苁蓉的主要活性成分肉苁蓉的活性成分中概有挥发性成分，也有100多种已分离出的非挥发性成分，包括苯乙醇苷、多糖、低聚糖、木脂素类、环烯醚萜类、黄酮、生物碱、氨基酸、微量元素等。苯乙醇苷和多糖是研究较为深入的主要活性成分，具有显著的神经保护、免疫调节、抗氧化等药理作用。目前，肉苁蓉共分离得到70个苯乙醇苷成分，其中松果菊苷和毛蕊花糖苷是衡量肉苁蓉质量标准的关键苯乙醇苷化合物口。松果菊苷和毛蕊花糖苷的结构式见图1。肉苁蓉中分离得到的多糖包括cistan A、CDA-IA、CDA-3B、CDP-4、ACDP-2、 SPA等，主要由葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖、果糖等单糖组成例。研究表明，不同种、不同产地等因素均会影响肉苁蓉中苯乙醇苷、多糖等活性成分的含量。 图1 松果装苷和毛蕊花糖目的结构式Fig1 Structure of echinacoside and acteoside1.1 不同种肉苁蓉的活性成分差异肉苁蓉属约20种，我国有4种1变种，分别为肉苁蓉（又名荒漠肉苁蓉，Cistanche deserticola Y.C.Ma）、德赢vwin登录 （C.tubulosa（Schenk）R.Wight）、盐生肉苁蓉（C.salsa，C.A Mey.）G.Beck）、沙苁蓉（C.sinensis G.Beck）和白花盐苁蓉（C.salsa var.albiflora P.F.TuetZ.C.Lou）。屠鹏飞等对我国 种肉苁蓉所含的苯乙醇苷成分进行了定性分析，并对松果菊苷和毛蕊花糖苷进行了定量分析。定性分析结果表明荒漠肉苁蓉、德赢vwin登录 、盐生肉苁蓉和白花盐苁蓉所含的苯乙醇苷成分相似，沙苁蓉差别较大。定量分析结果表明5种肉苁蓉中的松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量各不相同，其中盐生肉苁蓉含量最高，沙苁蓉含量最低。1.2 不同产地肉苁蓉的活性成分差异中药素有“道地性”，不同产地中药的活性成分具有一定的差异。刘雄等测定甘肃张掖、甘肃靖远、新疆、内蒙4个产地肉苁蓉中的松果菊苷含量，发现4个产地肉苁蓉中松果菊苷的质量分数在0.42％～1.52％。其中张掖的含量最高，靖远的含量最低。王果平等”发现南疆不同产地德赢vwin登录 中松果菊苷含量差异显著，质量分数介于2.78％～11.93％，并且同一产地栽培和野生的德赢vwin登录 中松果菊苷含量也有差异。薛德钧等”对不同产地肉苁蓉的多糖含量进行比较分析，发现不同产地肉苁蓉多糖含量存在差异，且组成多糖的单糖成分也不尽相司。1.3不同采收期肉苁蓉的活性成分差异中国药典2020年版一部肉苁蓉项下规定，肉苁蓉在春季苗刚出土时或者秋季冻土前进行采挖，但春秋两季采收的肉苁蓉的质量具有一定的差别。钱浩等“对比春秋两季采收的肉苁蓉中4种苯乙醇苷成分松果菊苷、肉苁蓉苷A、毛蕊花糖苷和2＇-乙酰基毛蕊花糖苷的含量。结果发现，不同季节采收的肉苁蓉中4种成分含量差异显著，其中秋季采收的肉苁蓉中松果菊苷和肉苁蓉苷A含量较高，春季采收的肉苁蓉中2＇乙酰基毛蕊花糖苷和松果菊苷含量较高。王雪媛等回考察春秋两季采收的肉苁蓉中松果菊苷、毛蕊花糖苷、多糖等活性成分的含量。结果发现春季采收的肉苁蓉中松果菊苷与毛蕊花糖苷的总量是秋季的3倍多，达12.21mg／g，而秋季采收的肉苁蓉中多糖的量显著高于春季。1.4 不同寄主肉苁蓉的活性成分差异肉苁蓉为多年生，根部全寄生草本植物，寄生于梭梭、盐爪爪等寄主植物的根部。肉苁蓉和寄主关系密切，寄主植物为肉苁蓉输送营养物质和水分。张烜等测定3个不同品种，5种天然寄主和2种栽培寄主肉苁蓉中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量，结果发现同一品种不同寄主肉苁蓉所含的松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量明显不同。对于盐生肉苁蓉，以松果菊苷含量为指标排序为：甜菜＞琵琶柴＞囊果碱蓬（栽培）＞盐爪爪；以毛蕊花糖苷含量为指标排序为：囊果碱蓬（栽培）＞甜菜＞琵琶柴＞盐爪爪。2 肉苁蓉的美容护肤作用机制及功效研究证明，肉苁蓉不仅具有广泛的药理作用，在皮肤改善及美容等方面也有很好的功效。2.1美白我国有句俗语“一白遮百丑”，白暂、光洁、细腻的肌肤一直是东方女性追求的目标。因此美白剂的研发一直是行业内的重点课题。目前，美白剂的研发主要以抑制酪氨酸酶活性为主导”。含苯环或酚羟基结构的化合物具有潜在的美白功效，如目前常用的美白剂熊果苷，可以通过抑制酪氨酸酶的活性发挥美白作用。肉苁蓉的主要活性成分苯乙醇苷是一类天然糖苷类化合物，由母核糖基、苯丙烯酸和部分苯乙醇通过酯键和糖苷键连接形成。杨建华等“研究发现纯度为48.2％的苯乙醇总苷能够有效抑制酪氨酸酶的活性，对酪氨酸酶的效应表现为竞争型可逆性抑制。之后杨建华团队“又考察了纯度为87.6％的苯乙醇总苷对酪氨酸酶活性和人表皮黑素细胞黑色素生成的抑制作用。结果发现，苯乙醇总苷对酪氨酸酶的抑制作用优于熊果苷，其C，为716.51gg／ml。进一步研究发现，400μg／mL的苯乙醇总苷能显著抑制黑色素的生成，抑制率达31.43％，与熊果苷相当。同时，通过单独比较10种苯乙醇苷化合物对黑色素生成的抑制作用，发现其扣制能力与酚羟基和苷元的数目、酚羟基的位置、空间位阻、母核糖基糖醛基上的取代基有关。且杨建华团队利用微乳技术回、传递体技术解决了苯乙醇苷溶解性能和透皮吸收差的问题，为苯乙醇苷在美白化妆品中的应用提供了指导。YANG等”也发现肉苁蓉提取物对酪氨酸酶活性有较强的抑制作用，10mg／mL的肉苁蓉提取物对酪氨酸酶活性的抑制率高达78.5％。

　【摘要】　目的　研究肉苁蓉多糖(CDPS)对小鼠淋巴细胞增殖的影响。方法　MTT 法检测小鼠脾淋巴细胞的增殖。环磷酰胺(Cy)复制免疫功能低下的动物模型, 分别测定正常及免疫低下动物脾脏、胸腺指数。胸腺细胞增殖法测定白细胞介素-2(IL-2)活性。结果　CDPS 对丝裂原(ConA 及LPS)活化淋巴细胞及未活化正常细胞均有明显促增殖作用, 并促进淋巴细胞IL-2 的分泌。腹腔给药显示CDPS 具明显提高正常及免疫低下小鼠的脾指数, 对因Cy 所致胸腺指数的降低也有显著的对抗作用。结论　CDPS 可显著促进小鼠脾淋巴细胞增殖, 该作用可能与其促IL-2 分泌有关。【关键词】　肉苁蓉多糖;脾指数;胸腺指数;淋巴细胞增殖;白细胞介素-2植物多糖因其普遍具有的免疫调节作用及其相对低毒的特点引起人们的广泛关注[ 1] 。肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉(Cistanche deserticola Y .C .Ma)的带鳞片的干燥肉质茎, 具有广泛的药理作用。其水煎液可显著提高巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数[ 2] , 进一步的研究显示其物质基础为肉苁蓉总多糖(C .deserticola polysaccharide , CDPS)[ 3] , 曾群力等[ 4] 发现CDPS 中的某单一组分在体外对小鼠胸腺淋巴细胞具明显增殖作用。本文从体内及体外观察了CDPS 对(脾)淋巴细胞增殖作用。1 　材料与方法1.1 　药品与试剂CDPS 由医科院药植所植化室提供, 多糖含量87 %。体内实验用前以生理盐水溶解并稀释至所需浓度, 煮沸灭菌。体外实验用前以RPMI-1640 培养基溶解稀释, 高压灭菌。脂多糖(LPS), 刀豆蛋白(ConA), 地塞米松(DEX),MTT 均为Sigma 公司产品。环磷酰胺, 中美合资山西泰盛制药有限公司。胎牛血清、RPMI1640 培养基、胰蛋白酶均系Gibco 产品。其他试剂为国产分析纯。1.2 　动物BALB c 幼鼠(SPF 级)由维通利华实验动物技术有限公司提供[ SCXK(京)2002-2003] 。SPF 级动物房中饲养, 自由采食和饮水。1.3 　仪器Multiskan Ascent 酶标仪, 美国Thermo Electron 公司产品。雷磁PHS-3B 型精密pH 计, 上海精密科学仪器有限公司。Napco 5410 型二氧化碳孵箱, 美国NAPCO 。BCN-1360 型超净工作台, 北京东联哈尔仪器制造有限公司。XDS-1B 倒置显微镜, 重庆光电仪器公司。1.4 　方法1.4.1 　对淋巴细胞增殖的影响[ 5] :常规制备BABL c小鼠脾淋巴细胞, 用RPMI-1640 调整细胞浓度为1 ×107 个 mL , 接种于96 孔培养板, 每孔加入细胞悬液100 μL, 与不同浓度CDPS(对未活化淋巴细胞增殖作用所用CDPS 终浓度依次为:6.25 、12.5 、25 、50 、100 mg L ;对ConA 活化的T 淋巴细胞增殖所用CDPS 终浓度依次为:3.9 、7.8 、15.6 、31.2 、62.5 mg L ;对LPS 活化的B 淋巴细胞增殖所用CDPS 终浓度依次为:1.56 、3.13 、6.25 、12.5 、25 mgL)及ConA 或LPS 共培养, 并以RPMI-1640 培养基作为对照。每孔的总体积为200 μL , 加入丝裂原ConA 、LPS 时(其对照为含相应浓度ConA 或LPS 的RPMI-1640), 二者的终浓度分别为2.5 mg L 和10mg L 。各种处理均作3 个平行孔。将培养板置于37 ℃,5 % CO2 饱和湿度培养箱中培养68 h , 加入MTT 继续培养4 h , 以MTT 法用酶标仪测定A540nm值,检测增殖情况。各组比较时将A540nm 值按下式转化为淋巴细胞增殖率:淋巴细胞增殖率=A样品 A对照×100 %。1.4.2 　对正常小鼠免疫器官重量影响[ 6 , 7] :BALB c幼鼠(雄性, 4 周龄, 体质量10 ～ 15 g)按体重随机分组, 分为空白对照(生理盐水)组, 不同给药剂量组[ 125 mg (kg·bw)和250 mg (kg·bw)] , 每组11 只, 每日腹腔注射给药一次, 连续给药7 d , 颈椎脱臼处死小鼠, 取脾脏和胸腺, 剔除脂肪及筋膜组织, 滤纸吸干表面液体后称重, 按脾指数=100 ×脾重(mg) 体重(mg);胸腺指数=100 ×胸腺重(mg) 体重(mg)分别计算每100 mg 体重的脾脏指数和胸腺指数。1.4.3 　对免疫功能低下小鼠免疫器官重量影响[ 7 , 8] :BALB c 幼鼠(雄性, 6 周龄, 体质量15 ～ 20 g)按体重随机分组, 每组12 只, 除正常对照组(腹腔注射等体积生理盐水)外, 其余各组每日腹腔注射Cy50mg (kg·bw), 并分别腹腔注射给予受试药液[ 125和250 mg (kg·bw)] , 正常对照组及模型组给予相同体积生理盐水, 连续13 d , 每日1 次, 实验中观察动物体重变化情况。末次给药后24 h , 同1.4.2 方法测定并计算脾脏和胸腺指数。1.4.4 　对IL-2 活性影响:①IL-2 的诱生[ 9] :96 孔细胞板中每孔加入50 μL 不同浓度的CDPS(终浓度依次为:3.91 、7.82 、15.63 、31.25 、62.5 、125 mg L , 对照孔加入50 μL 培养液)和50 μL ConA(终浓度5 mgL), 每孔再加入1 ×106 个脾细胞。于37 ℃, 5 %CO2饱和湿度培养箱中培养24 h , 2500 r min 离心20min , 取细胞上清-20 ℃保存备用。②IL-2 活性检测[ 9 , 10] :基本方法按文献[ 9] , 并据文献[ 10] 进行适当调整。常规制备BALB c 小鼠胸腺细胞悬液, 96孔细胞培养板每孔接种1 ×106 个胸腺细胞, 同时每孔加入50 μL ConA(终浓度2.5 mg L), 再加入制备好的IL-2 上清50 μL(空白对照孔加入50 μL 培养液), 共同孵育54 h , 加入MTT , 继续孵育4 h , 1000 rmin 离心10 ～ 15 min , 弃上清, 每孔加DMSO 100 μL ,微型振荡器振摇8 min , 酶标仪测定A540nm 值。1.5 　统计分析数据用均值和标准差( x ± s )表示, 应用Microsoft Excel 软件进行数据整理, 并进行t 检验, P<0.05 和P <0.01 为差异有显著性, 均具有统计学意义。2 　结果2.1 　对淋巴细胞增殖的影响由表1 可见, 在体外培养的小鼠脾淋巴细胞培养液中加入CDPS , 其浓度在25 mg L 以上即可显著刺激淋巴细胞增殖, 说明CDPS 本身有丝裂原样作用。同时, 由表2 和表3 可以看出CDPS 对ConA 诱导的T 淋巴细胞或LPS 诱导的B 淋巴细胞增殖均有显著的促进作用。2.2 　对正常小鼠免疫器官重量影响由表4 可见,CDPS 可使正常BALB c 幼鼠脾指数显著提高, 但对胸腺无作用。2.3 　对免疫功能低下小鼠免疫器官重量影响由表5 可见,Cy 免疫抑制组小鼠脾和胸腺脏器指数均比对照组降低,CDPS(125 、250 mg kg)可显著提高脾指数和胸腺指数。2.4 　对IL-2 活性影响由表6 可见,CDPS 剂量达7.82 mg L 时即可使小鼠脾细胞IL-2 释放显著增加。3 　讨论　　ConA 和LPS 诱导小鼠脾淋巴细胞增殖反应分别是检测机体T 和B 淋巴细胞功能的体外实验, 是反映特异性免疫能力的重要指标。研究显示当CDPS 在终浓度25 mg L 以上时, 可显著促进淋巴细胞增殖, 显示其本身具有一定有丝分裂原样作用。在有丝分裂原(ConA 或LPS)存在的条件下, 更小剂量CDPS 即可显示出明显的促增殖活性。我们知道,ConA 及LPS 分别以诱导T 淋巴细胞或B 淋巴细胞增殖为主, 研究表明CDPS 既可促进T 淋巴细胞的增殖, 又可促进B 淋巴细胞增殖, 但对B 淋巴细胞促增殖作用明显强于T 淋巴细胞。胸腺、脾脏是动物体内主要的免疫器官, 脾脏中免疫细胞以成熟的B 淋巴细胞为主, 胸腺则以未成熟T 淋巴细胞为主。胸腺和脾脏指数能反映免疫器官的发育和免疫细胞的功能状况。腹腔注射CDPS能明显提高正常及免疫抑制小鼠的脾指数, 对Cy 导致的小鼠胸腺萎缩也有显著对抗作用。CDPS 对正常动物胸腺指数无明显影响与体外实验CDPS 促B淋巴细胞增殖强于T 淋巴细胞结果是吻合的。IL-2 是T 淋巴细胞从细胞周期G1 期进入S 期产生的细胞因子, 是一个主要的T 细胞生长因子, 起一种自分泌生长因子的作用, 此外IL-2 可促进B 细胞增殖与抗体合成[ 11 , 12] 。CDPS 促进淋巴细胞IL-2释放, 该作用显然与CDPS 促脾淋巴细胞增殖相关。参考文献[ 1 ] 　Schepetkin I A,Quinn M T .Botanical polysaccharides :Macrophagesimmunomodulation and therapeutic potential [ J ] . 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Promotion of sophora subprosratepolysaccharide on nitric oxide and interleukin-2 production in murineT lymphocytes :impli cated Ca2+ and protein kinase C [ J] .IntImmunopharmacol ,2004 , 4(1):109 -118 .

［关键词］肉苁蓉/ 化学；多糖类；光谱分析［摘 要］ 目的：研究从中药肉苁蓉（Cistanche deserticola）肉质茎中得到的中性多糖CDP-4 的化学结构。方法：利用化学方法和谱学方法分析其结构特征。结果：CDP-4 的平均相对分子质量为1. 4 X 104，由葡萄糖组成，由1，4-linkage glcp 和1，6-linkage glcp 以31 1 的比例连接组成。结论：CDP-4 为直链葡聚糖，空间结构与直链淀粉不同，为新的葡聚糖。肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉Cistanche deserticolaY. C. Ma 的带鳞叶的肉质茎，又名金笋、地精。始载于《神农本草经》，列为上品。本品具有补肾壮阳、填精补髓、养血润燥、悦色延年等功效，在历代补肾阳处方中使用频度最高。文献报道肉苁蓉含有苯乙醇苷类、环烯醚萜及其苷类、木脂素及其苷类以及多糖类成分［1，2］，肉苁蓉多糖具有调节免疫、抗肿瘤、延缓衰老等药理作用。为了阐明肉苁蓉多糖的结构特征和生物活性，我们对肉苁蓉多糖进行了系统的研究，本文报道从肉苁蓉多糖的免疫活性部位中分离得到的CDP-4 多糖的结构特点。1 实验部分1. 1 仪器和材料仪器有Agilent 1100 高效液相色谱系统，ELSD检测器，Shodex KS-805 凝胶色谱柱；GC 色谱仪为Agilent HP6890N 型（ FID 检测器）。GC-MS 用Finnigan Trace GC-MS 仪，核磁共振波谱仪为INOVA-500 型，红外光谱仪为Perkin Elmer 599B 型，UV光谱仪为UV-2401（ PC）S220V 型，WZZ-1S 数字式自动旋光仪为上海精密科学仪器有限公司产。单糖对照品（鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸）均为分析纯，购于Merck 公司。多糖相对分子质量测定用标准品Dextran T 系列，均为pharamacia 公司产品。硼氢化钠、三氟醋酸和DMSO 等均为AR 级，其他试剂为国产。肉苁蓉药材采自内蒙古阿拉善左旗，经北京大学药学院屠鹏飞教授鉴定为列当科植物荒漠肉苁蓉Cistanche deserticola Y. C. Ma 的肉质茎。1. 2 提取和分离肉苁蓉药材1. 5 kg，用95%（体积分数）乙醇提取3 次，脱脂，过滤，药渣于室温下置通风处晾干。然后用冷水浸泡3 次，浸泡时间为8 h，合并水提液，浓缩至适当的浓度，加入无水乙醇使该溶液乙醇浓度为80%，进行醇沉，沉淀物加蒸馏水溶解至适当的浓度后用sevage 法脱蛋白［3］，水溶液减压蒸干，蒸馏水溶解后进行透析。先用对流水透析3 d，再用蒸馏水透析2 d，浓缩至干得粗多糖26. 0 g。首先经DEAE-纤维素分离，以0 ~ 2 mOI / L NaCI 梯度洗脱，其中蒸馏水洗脱部位经Sephedex G-150 和SephacryS-300 柱色谱，得到均多糖CDP-4（320. 2 mg）。1. 3 结构鉴定1. 3. 1 纯度及相对分子质量测定［4，5］ 先采用标准葡聚糖Dextran T 系列制作标准曲线，然后根据多糖样品在相同色谱条件下的洗脱体积或保留时间，用标准曲线计算该样品的相对分子质量。流动相为蒸馏水，流速为1 mI / min，柱温为60 C。1. 3. 2 糖组分分析 取5. 0 mg CDP-4，放入10 mL试管中，加入三氟醋酸（TFA）4 mL，充N2后封管，110 C下水解2 h。将水解液减压蒸干（ < 40 C），除尽TFA，再加入蒸馏水约0. 5 mL 使样品溶解。取少量样品液在5%（质量分数）碳酸氢钠硅胶板上分析，初步检测样品所含单糖残基，并验证是否含有糖醛酸。展开剂为正丁醇= 乙酸乙酯= 异戊醇= 甲酸= 吡啶= 3. 5= 10= 6= 3. 5= 3（体积比），苯胺-邻苯二甲酸显色［6］。完全酸水解产物用NaBH4还原，经醋酐乙酰化制备阿尔迪醇酯衍生物后进行GC 分析。1. 3. 3 甲基化分析 取8 mg CDP-4 按Ciucanu法［7］甲基化，IR 检测CDP-4 甲基化完全后，将甲基化产物以甲酸解聚，加入4 mL TFA，充N2后封管，110 C下水解2 h 后用NaBH4还原，醋酐乙酰化制备阿尔迪醇酯衍生物后进行GC-MS 分析。1. 3. 4 过碘酸盐氧化和Smith 降解反应 取7. 6mg CDP-4 溶解在25 mL 0. 01 mOI / L NaIO4中，在4C避光氧化，每天依时取样，用紫外分光光度计在223 nm 处测定消耗量，直至不再氧化为止。在氧化完全的反应液，加乙二醇分解未反应的NaIO4，透析24 h，浓缩后用NaBH4还原，放置12 h，用乙酸调至pH = 5，透析24 h，低温冷冻至干。用2 mOI / L TFA100 C密封水解8 h，中和后浓液进行纸层析，展开剂为正丁醇= 乙酸乙酯= 异戊醇= 甲酸= 吡啶=3. 5= 10= 6= 3. 5= 3（体积比），苯胺-邻苯二甲酸显色。3. 5 部分酸水解 28. 2 mg CDP-4 溶解于0. 1mOI / L TFA 溶液中，充氮封管，100 C反应1 h，透析。袋内部分用sephacryI S-300 凝胶柱纯化，得次级多糖组分（CDP-4-1），该次级组分进行甲基化3次、甲酸水解、TFA 水解、NaBH4还原及醋酐乙酰化制备阿尔迪醇酯衍生物后进行GC-MS 分析，分析方法同前（ 表1）。袋外部分用sephadex G-25 凝胶柱纯化，得到1 个相对分子质量小的多糖组分（CDP-4-2-1），对其进行甲基化、甲酸水解、TFA 水解、NaBH4还原、醋酐乙酰化制备阿尔迪醇酯衍生物后进行GC-MS 分析，分析方法同前（表1）。1. 3. 6 多糖和碘的颜色反应 在多糖水溶液（1g / L）1 mL 中加入碘试剂1 mL 及水1 mL，用水作参比，测定200 ~ 700 nm 的吸收光谱。1. 3. 7 NMR 测定 取56 mg CDP-4 加入0. 5 mLD2O 放置过夜，蒸干后再加入0. 5 mL D2O 溶解，用核磁共振仪INOVA-500 型测定13 C NMR，1H NMR，HMOC 和HMBC。2 结果与讨论CDP-4 为无色粉末，HPGPC 分析结果显示为单一对称峰，表明CDP-4 为均一多糖。用标准葡聚糖系列制作矫正曲线，测得其相对分子质量为1. 4 X 104。红外光谱无810 及870 cm - 1 特征吸收峰，表明不含甘露糖。通过LO ry 方法［8］测定，表明CDP-4 不含蛋白质。茚三酮反应阴性，进一步确证CDP-4 不含蛋白质。以CDP-4 完全酸水解产物进行TLC 分析，与标准单糖对照，苯胺邻苯二甲酸显色，结果表明该多糖仅在葡萄糖标准品相同的Rf值位置有斑点出现。将CDP-4 完全酸水解产物制备阿尔迪醇酯衍生物进行GC 分析，结果表明该多糖只含有葡萄糖，其结果与TLC 分析的结果相同。将CDP-4 进行甲基化3 次，IR 表明3 000 ~3 600 cm - 1 处强而宽的羟基吸收峰基本消失，而2 940 cm - 1处甲基的特征吸收峰显著增强，说明已经完全甲基化。完全甲基化产物经甲酸解聚、酸水解、水解产物还原、醋酐乙酰化，制备部分甲基化阿尔迪醇酯衍生物。GC-MS 分析结果表明，CDP-4 是由1，4-linkage glcp 和1，6-linkage glcp 组成，它们的物质的量比是31 1，没有分支链残基，说明CDP-4 是直链葡聚糖。高碘酸氧化产物经降解，产物水解衍生，进行纸层析检测含有甘油、葡萄糖和少量的赤藓醇，说明CDP-4 含有1-4 和1-6 键型的葡萄糖。这与CDP-4甲基化的结果相符。从部分酸水解结果可以看到在0. 1 mol / L TFA 部分酸水解样品经透析后获得两部分多糖：相对分子质量较大多糖CDP-4-1 和较小多糖CDP-4-2。CDP-4-2 经sephdex G-25 纯化后得到CDP-4-2-1，HPLC 检测CDP-4-2-1 为单一对称峰。CDP-4-1 和CDP-4-2-1 的甲基化结果见表1，从甲基化结果可以看到CDP-4-1 与CDP-4-2-1 都是由1，4-linkage glcp 和1，6-linkage glcp 组成，与CDP-4 的甲基化结果基本相同，CDP-4-1 和CDP-4-2-1 与CDP-4有相同的结构特征。在CDP-4 的13 C NMR 中，S 100. 3、S 98. 4、S96. 4处的吸收为葡萄糖端基碳的吸收，表明所含葡萄糖都是以O 吡喃型存在［9］。在HMOC 谱我们可以看到，S 5. 3 ~ S 5. 4 与S 100. 3 相关，S 4. 9 与S98. 4 相关。根据HMOC、HMBC、TOCSY 和COSY 可以观察到，S 100. 3 和S 77. 4 分别为1，4-linkage glcp的C-1 和C-4 信号［9］，S 98. 4 和S 66. 2 分别为1，6-linkage glcp 的C'-1 和C'-6 信号［10］。此外，在1HNMR 谱中，S 5. 3 ~ S 5. 4 与S 4. 9 积分物质的量比为6. 9 1 2. 0，说明1，4-linkage glcp 与1，6-linkageglcp 以31 1 的比例存在，与甲基化的结果基本相同。同时，在HMBC 谱中有1，4-linkage glcp 的C-4 和1，6-linkage glcp 的H'-6 相关信号以及1，4-linkage glcp的C-4 和H-1 的相关信号，表明1，6-linkage glcp 的C'-6 连接在1，4-linkage glcp 的C-4 位，而1，4-linkageglcp 之间是以1、4 的方式连接。其他信号的归属根据HMOC 和HMBC 进行。以上分析结果说明CDP-4 是1，4-linkage glcp 与1，6-linkage glcp 以31 1的比例组成的葡聚糖。此外，CDP-4 水溶液与碘反应后呈无色溶液，而且在200 ~ 700 nm 之间几乎没有吸收，说明该多糖有与直链淀粉完全不同的空间结构。参考文献1 Karasawa H，Kobayashi H，Takizawa N，et al. 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[摘要] 目的 研究肉苁蓉总苷(GCs)对脂多糖（LPS）诱导的BV2 细胞炎症反应的机制。方法 采用小鼠小胶质细胞BV2 细胞株作为研究对象。将BV2 细胞随机分为对照组、LPS 组和GCs 组。对照组正常培养。LPS 组用 LPS 诱导BV2 细胞建立炎症模型。GCs 组加入不同浓度GCs 与LPS 共培养。CCK8 检测各组细胞活性。qRT-PCR 检测各组炎症因子IL-1β、COX-2 mRNA 的表达，WB 检测SIRT1、NF-κB 蛋白水平的变化。结果 CCK8 结果显示，GCs 各组细胞活性与对照组之间无差异（P>0.05），LPS 组细胞活性显著低于对照组和GCs 各组（P<0.05）。qRT-PCR 结果显示，LPS 组IL-1β、COX-2 mRNA 表达水平显著高于对照组和GCs 与LPS 共孵育组（P<0.05）。WB 结果表明与对照组和GCs 各组相比，LPS 组SIRT1 表达下调（P<0.05），磷酸化p65 的表达上调（P<0.05）。结论 GCs 能够抑制LPS 诱导的BV2 细胞的炎症反应，其机制可能与SIRT1/NF-κB 信号通路相关。[关键词] 肉苁蓉总苷；脂多糖；BV2 细胞；SIRT1/NF-κB围术期神经认知紊乱(perioperative neurocognitive disorders,PND)与神经炎症反应密切相关，高龄、手术创伤应激、麻醉药物等均可能诱发神经炎症反应，小胶质细胞活化是其重要的推进过程，在PND 的发生和发展中发挥重要的作用[1]。肉苁蓉总苷(general cistanosides,GCs)的化学成分主要包括苯乙醇苷类、环烯醚萜类、木脂素类等，具有明确的抗氧化和神经保护作用[2, 3]。本实验以LPS 诱导的BV2 细胞炎症反应模型为基础，采用GCs 干预，通过检测IL-1β、COX-2、SIRT1、NF-κB-p65 的变化，研究GCs 对围术期神经炎症的影响，为肉苁蓉的进一步开发应用提供理论和实验依据。1 材料与方法1.1 材料小鼠小胶质细胞株（BV2）由上海复旦大学附属肿瘤医院朱敏敏教授惠赠。GCs（西安昊轩生物科技有限公司）；脂多糖（美国 Sigma 公司）。1.2 实验方法1.2.1 细胞培养及分组BV2 细胞以高糖DMEM+10 %FBS 为细胞培养基，置于37℃，5 %CO2的细胞培养箱中培养。BV2 细胞随机分为对照组、LPS 组和不同浓度GCs组。将LPS 加到96 孔板中，使其终浓度为1 ug/mL, 依据分组加入不同浓度的GCs，与LPS 共培养。1.2.2 CCK8 检测细胞活性细胞接种于96 孔板，待贴壁后更换培养基，不同浓度GCs（5 ug/mL、25 ug/mL、50 ug/mL、75 ug/mL）和终浓度为1 ug/mL LPS 共培养，加入CCK8，酶标仪测定吸光度值并计算细胞活性。1.2.3 qRT-PCR 检测各组炎症因子IL-1β、COX-2 的mRNA 表达用试剂盒提取RNA，并按照说明书进行反转录。qRT-PCR 实验数据运用2-△△Ct 公式计算。1.2.4 WB 检测各组SIRT1、NF-κB-p65 蛋白表达情况按照说明书提取蛋白,电泳，转膜，一抗孵育，加入二抗,采用化学发光法进行显影，运用ImageJ 软件分析灰度值。1.3 统计学方法采用SPSS19.0 软件进行统计分析，计量资料采用均数加减标准差（ x ± s）表示，组间比较采用单因素方差分析。2 结果2.1 GCs 对BV2 细胞活性的影响同对照组相比，不同浓度的GCs 对BV2 细胞的活性未见明显的影响。结果见图1。2.2 GCs 对LPS 诱导的BV2 细胞活性的影响结果表明，与对照组相比，LPS 组细胞活性明显降低（P <0.01）; 与LPS组相比，GCs 组的细胞活性明显升高（P<0.05）。结果见图2 。2.3 GCs 对LPS 诱导BV2 细胞炎症因子IL-1β，COX-2 mRNA 表达的影响qRT-PCR 结果表明，与对照组相比，LPS 组中IL-1β，COX-2 的mRNA表达明显提高（P<0.05）。GCs 与LPS 共孵育各组炎症因子的mRNA 的表达显著下降（P<0.05）。结果见图3。2.4 GCs 对LPS 诱导的BV2 细胞SIRT1/NF-κB 通路关键蛋白表达的影响WB 结果表明，LPS 诱导后，P-P65 的表达明显上升（P<0.05），SIRT1的表达明显降低（P<0.05）。GCs 与LPS 共孵育各组P-P65 的表达明显降低，S IRT1 的表达升高（P<0.05）。这在GCs 高剂量组更为明显。见图4。3 讨论PND 是常见的中枢神经系统并发症。目前认为神经系统炎症是PND 的主要发生机制之一。手术应激、全麻药物、衰老等可诱发神经系统炎症触发并加重PND。因此，围术期神经保护、神经系统炎症管理可能有助于改善PND。目前研究表明，GCs 中的松果菊苷、毛蕊花糖苷等成分具有明确的抗氧化及神经保护的作用，但具体机制尚不明确。本研究以BV2 为研究对象，在细胞水平探讨了GCs 对 NF-κB 信号通路的影响。实验结果表明，本实验采用的GCs 浓度对细胞活性没有影响，LPS 组细胞活性降低及炎症因子增加表明神经炎症造模成功，LPS 与GCs 共同孵育的结果表明GCs 可以改善炎症状态下的细胞活性。SIRT1 是一种进化高度保守的NAD+依赖性蛋白去乙酰化酶，与炎症反应密切相关。 2004 年Yeung 等人的研究［4］首次证实SIRT1 可与 NF-κB 的RelA/p65 亚基相结合影响NF-κB 的转录活性，抑制 NF-κB 介导的炎症信号通路。本研究结果发现LPS 诱导的BV2 细胞中SIRT1 表达降低，NF-κBp-65 的磷酸化水平升高，下游炎症因子的表达增加。GCs 与LPS 共孵育组细胞内SIRT1 表达上调，NF-κB P65 的磷酸化水平下降，下游炎症因子的表达减少。结合上述实验结果，我们推测GCs 可能通过激活BV2 细胞中的SIRT1/NF-κB 信号通路来抑制炎症因子的表达。本实验的不足之处是未研究GCs 对经SIRT1 抑制剂处理后的细胞中的炎症介质产生的影响。这有待于我们下一步进行探究。综上，我们的研究表明：GCs 可能通过激活SIRT1/NF-κB 信号通路，进而抑制LPS 诱导的BV2 小胶质细胞炎症反应，为后期开发肉苁蓉在神经炎症相关疾病的应用提供了参考。参考文献[1] Dj C, M B, R Y, et al. The memory effects of general anesthesia persist forweeks in young and aged rats.[J]. Anesthesia and analgesia,2003, 96(4):1004-1009.[2] Yh W, Zh X, S T, et al. Echinacoside Protects against 6-Hydroxy dopamine-Induced Mitochondrial Dysfunction and Inflammatory Responses in PC12Cells via Reducing ROS Production.[J]. Evi Based Complement AlternatMed, 2015,2015:189239.[3] Jk W, Lc W, Y J, et al. [Neuroprotective effects and mechanism of ethanolextract of Cistanche tubulosa against oxygen-glucose deprivation/ reperfusion].[J]. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi, 2019,44(13): 2686-2690.[4] Yeung F, Hoberg JE, Ramsey CS, et al. Modulation of NF-kappaB-dependent transcription and cell survival by the SIRT1 deacetylase. EMBOJ. 2004, 23(12): 2369-80.

提　要　目的：观察肉苁蓉对雄性正常大鼠及“肾阳虚”大鼠排尿的影响。方法：给正常雄性大鼠一次ig 肉苁蓉‚收集测量给药后不同时间内的排尿量；用im 氢化可的松造成“肾阳虚”大鼠模型‚同时连续ig 肉苁蓉‚末次给药后收集测量给药后不同时间内的排尿量‚并称量体重及体内部分脏其重量。结果：雄性正常大鼠一次ig 肉苁蓉10g／kg 和20g／kg 明显增加给药后0～1h 及1～2h的排尿量。与对正常大鼠的作用相反‚给大鼠连续ig 肉苁蓉10d‚明显减少“肾阳虚”大鼠末次给药后0～1h‚1～2h 内的排尿量增加‚并增加“肾阳虚”大鼠的体重和部分脏器重量。结论：肉苁蓉对正常大鼠和“肾阳虚”大鼠的排尿具有不同的调节作用。关键词　肉苁蓉；排尿；氢化可的松肉苁蓉（Cistanche deserticola Y．C．Ma）为列当科植物肉苁蓉的肉质茎‚是传统补益壮阳药‚具有补肾益精及润肠作用。《本草经疏》称之为补精血‚滋肾之要药‚对肾虚所致倦怠、健忘、听力减退及遗尿等症状有较好疗效‚民间也有用肉苁蓉治疗老年性尿失控（尿频、尿急、尿淋漓不尽等）。现代研究表明肉苁蓉具有一定的抗衰老作用［1‚2］‚其总提物具有增强机体免疫功能［3‚4］和抑制脂质过氧化［4‚5］ 等作用。已有肉苁蓉壮阳作用的实验研究报道［6］‚但并未见有其对动物排尿影响的报道。本文探讨了其对“肾阳虚”大鼠排尿的影响。1　材料1∙1　试验药物　肉苁蓉清膏2∙5g 生药／ml‚批号901127‚由中国医药研究开发中心天然药物研究室提供。1∙2　动物　♂Wistar 大鼠‚从北京医科大学动物部购进。2　方法与结果2∙1　对正常大鼠排尿量的影响　为减少动物排尿的个体差异‚大鼠ig 常水2∙5ml／100g 后收集2h 内的排尿量‚以排尿量达到灌胃量的40％以上者选为实验用动物。体重231±19g 的雄性大鼠30只‚按体重分3组‚禁食不禁水24h 后ig3．0ml／100g 生理盐水负荷‚30min 后挤压大鼠下腹部‚使膀胱尽可能排空。然后‚各组动物均按2∙0ml／100g 体重灌服药液或等体积生理盐水。将动物置代谢笼中‚每笼一只‚分别收集给药后0～1、1～2、2～4、4～6h 的尿液‚量取体积。结果表明‚肉苁蓉组在给药后的2h（0～1h、1～2h）内的排尿量明显多于对照组‚见表1。2∙2　对“肾阳虚”大鼠排尿的影响　体重350±40g的雄性大鼠40只‚按体重分4组‚除空白对照组每日im 灭菌生理盐水0∙3ml／100g 外‚其它各组均im 等体积的0∙5％氢化可的松注射液‚同时灌服药物或等体积生理盐水1∙0ml／100g10d。末次给药前30min‚ig3∙0ml／100g 生理盐水负荷‚30分钟后挤压大鼠下腹部‚使膀胱尽可能排空后给药‚给药后每笼一只将动物放置于代谢笼中‚分别收集给药后的0～1h、1～2h、2～4h 和4～6h 的尿量。然后称取体重‚宰杀后取胸腺、肾上腺、前列腺、精囊腺、睾丸以及膀胱称重。结果表明‚肉苁蓉在0～1h、1～2h 的排尿量同氢化可的松组比较明显减少；肉苁蓉10g／kg 组在2～4h 和4～6h 的排尿量比氢化可的松组有所增加（见表2）；氢化可的松“肾阳虚”组大鼠的体重及胸腺、肾上腺、睾丸等脏器重量明显减少‚肉苁蓉能明显增加“肾阳虚”大鼠体重及肾上腺、精囊腺和睾丸的重量（见表3）。3　讨论　　中医认为‚肾主水‚膀胱的气化、三焦决渎、水液排泄功能均依赖肾气温照。尿失控（尿频、尿急、排尿淋漓不尽、夜尿等）是由于肾阳不足‚下焦虚冷所致‚多见于中老年患者‚因此‚尿失控的治疗应以温补肾阳为主。大鼠肌肉注射氢化可的松后造成了明显的“肾阳虚”模型：体重减轻、肾上腺及性腺系数明显降低等‚且在第0～1h 内的换算排尿量（各组间动物体重差别显著‚故需按体重进行换算）较正常对照组大鼠有所增加。 肉苁蓉有明显对抗体重减轻、肾上腺及性腺系数下降等“肾阳虚”症状‚肉苁蓉两个剂量组在给药后0～1h、1～2h 内的排尿量同“肾阳虚”组比较明显较少‚并具有一定的剂量负相关。肉苁蓉10g／kg 组在2～4h 和4～6h 的排尿量比氢化可的松组有所增加‚可能是药效减弱所致。用正常大鼠研究的结果表明‚肉苁蓉对正常大鼠有促进排尿的作用‚这与我们以前报道［7］ 的肉苁蓉促进膀胱尿液排空的结果是一致‚而与对“肾阳虚”大鼠排尿作用的结果相反。肉苁蓉对正常大鼠和“肾阳虚”大鼠的排尿出现了两种截然不同的作用结果‚首先应从“肾阳虚”后大鼠的排尿量增加进行解释：大鼠im 氢化可的松造成“肾阳虚”‚出现了排尿量增加‚这可能与临床尿失控某些症状相吻合‚肉苁蓉使“肾阳虚”动物排尿量减少‚这与传统中医认为肉苁蓉温补肾阳的功效一致。当然‚对于氢化可的松造成大鼠“肾阳虚”后排尿量增加是否与临床尿失控症状相关‚还需要进一步的试验证实‚如果结果肯定‚这可能也是一个很好的尿失控中医病症动物药理模型。其次‚对正常动物的促进作用‚虽然应用的动物为清醒大鼠‚与以前报道中用的麻醉大鼠［7］状态不同‚但这两个试验都是整体动物、急性短期试验‚因此在作用机理上应该是一致的‚得到相同的结果也是在预料之中。肉苁蓉对不同动物（一种为正常、一种为病态动物模型）得到两种相反的作用结果‚这也可能是传统中医药讲究辨证施治的一个佐证。参考文献1　薛德钧‚章　明‚吴小红‚等∙中国中药杂志‚1995；20（10）∶6872　李巧如‚李石蓝∙上海中医药杂志‚1990；（11）∶223　高海谦∙中成药研究‚1984；23（9）∶344　施大文‚何松春‚蒋　莹‚等∙上海医科大学学报‚1995；22（4）∶3065　王晓雯‚李琳琳‚木胡牙提‚等∙中国中药杂志‚1998；23（9）∶5546　何　伟‚舒小奋‚宗桂珍‚等∙中国中药杂志‚1996；21（9）∶5347　沈连忠∙仲晓燕‚王淑仙∙中药新药与临床药理‚1999；10（2）∶82～83

摘要: 目的研究肉苁蓉对运动训练大鼠睾酮含量、物质代谢及抗运动疲劳能力的影响。方法以大强度耐力训练大鼠为模型。将7 周龄雄性Wistar 大鼠65 只为对象随机分为4 组: 静止ig 服水组( C 组) 、静止ig 肉苁蓉组( M 组) 、运动ig 水组( T组) 、运动ig 肉苁蓉组( TM 组) ，每组15 只( 剔除不符合实验要求的大鼠) 。采用专业灌胃器每天ig 一次，M、TM 组剂量为6. 01 g·kg － 1 ，ig 体积为5 mL·kg － 1 ，C，T 2 组ig 等量生理盐水。42 d 力竭游泳训练后，测定体重、力竭游泳时间及血睾酮等生化指标。结果TM 组体重大于T 组( P ＜ 0. 05) ，力竭游泳时间长于T 组( P ＜ 0. 01) 。力竭游泳导致大鼠血清睾酮下降，T组与C 组比较，下降了40. 53%( P ＜ 0. 01) 。TM 组与T 组比较，上升了44. 35%( P ＜ 0. 01) ; 血清皮质酮水平各组间均无显著差异，血清睾酮与皮质酮比值变化与睾酮变化较为一致; 肝糖原、肌糖原储量下降，T 组与C 组比较，肝糖原下降25. 85%( P ＜ 0. 01) ，肌糖原下降44. 94%( P ＜ 0. 01) 。TM 组与T 组相比，肝糖原高出19. 41% ( P ＜ 0. 05) ，肌糖原高出58. 05% ( P ＜0. 01) ; FSH 无明显影响; 血尿素上升，血红蛋白下降，T 组与C 组比较，血尿素上升了59. 30% ( P ＜ 0. 01) ，血红蛋白下降28. 72%( P ＜ 0. 01) ; TM 组与T 组相比，血尿素低出20. 70%( P ＜ 0. 05) ，血红蛋白高出24. 22% ( P ＜ 0. 05) 。结论肉苁蓉可以减轻血睾酮受高强度运动量的影响，并维持在正常生理水平; 可以促进蛋白质合成，抑制氨基酸和蛋白质分解，提高运动训练大鼠血红蛋白含量和糖原的储备。关键词: 肉苁蓉; 睾酮; 抗疲劳; 大鼠; 肝糖原; 肌糖原; 血尿素; 血红蛋白肉苁蓉( Cistanche deserticola Y. C. Ma) 为列当科( Orobanchaceae) 肉苁蓉属( Cistanche) 多年寄生草本植物，主产于我国内蒙古、新疆等地。因其生长在荒漠中，具有极好的药用价值，素有“沙漠人参”之美誉。药典记载:“一般补阳物多燥，滋阴物多腻，但是本品补而不燥，滋而不腻，其力和缓，故有苁蓉( 与“从容”谐音) 之称”。其味甘、咸，性温，具有补肾阳、益精血、润燥滑肠、抗疲劳之功效，在我国药用历史有1 800 年之久，列为上品。历代药书均有记载。据统计，在历代增力中药处方中肉苁蓉的出现率占第一位，而在抗老防衰类方剂中仅次于人参居第二位［1］。已有研究表明，长时间大运动量训练造成的运动性低血睾酮是机体运动能力下降和恢复过程延长的主要因素。本实验以大强度耐力训练大鼠为模型，研究肉苁蓉对运动训练大鼠睾酮含量、物质代谢与抗运动疲劳能力的影响，旨在为其抗运动疲劳功效的应用提供理论依据。1 材料清洁级雄性Wistar 大鼠65 只，7 周龄，平均体重( 256. 9 ± 15. 2) g［北京大学医学部实验动物科学部，合格证编号SCXK( 京) 2006-0008］。在整个实验过程中，实验室内温度保持在( 22 ± 2) ℃，相对湿度55% ～ 75%，光照时间随自然变化。所有实验大鼠均以基础饲料( 北京大学医学部实验动物科学部) 和蒸馏水常规饲养，自由饮食。实验时间为49d，正式训练时间为42 d。肉苁蓉( Cistanche deserticola Y. C. Ma) ，产地内蒙古，北京同仁堂购得，并经天津中瑞药业有限公司高占友高级工程师鉴定。将干燥带鳞叶的肉苁蓉粉碎成粗粉，用10，6，6 倍量体积分数60%乙醇水浴提取3 次，每次2 h，合并提取液冷藏24 h，过滤，滤液减压回收乙醇，浓缩成浸膏( 相当于每1 g 浸膏2. 0 g 生药) ，备用［2］。2 方法2. 1 动物分组为使实验大鼠适应新环境，首先将购回的大鼠分笼适应性饲养7 d。适应期的第4 天下午将实验大鼠以随机分组法分为4 组: 静止灌服水组( C组) 、静止灌服肉苁蓉组( M 组) 、运动灌服水组( T组) 、运动灌服肉苁蓉组( TM 组) ，每组15 只( 剔除不符合实验要求的大鼠) 。训练期间，各组自由摄食饮水，采用专业灌胃器，每天ig 1 次。M、TM 组ig剂量为6. 01 g·kg － 1·d － 1的肉苁蓉提取物， ig 体积为5 mL·kg － 1，C，T 2 组ig 等量生理盐水。2. 2 实验方法2. 2. 1 训练及测试方案C、M 组不进行任何运动。T 组及TM 组进行负重游泳运动，均采用100cm × 50 cm × 60 cm 的玻璃泳槽作为大鼠游泳训练装置，水深50 cm。水温( 31 ± 2) ℃，为防止大鼠在水面漂浮不动，特在游泳箱底部放置佳宝“AP1500”型水泵形成流动水。训练42 d，第1 周不负重，第2周负2%体重，第3 周负4% 体重，第4 ～ 6 周负5%体重，每次游泳训练至力竭。大鼠开始游泳至力竭所用时间为大鼠力竭运动能力［3］。力竭标准以大鼠下沉后10 s 不露出水面为度。处死前的最后1次为无负重力竭游泳训练，记录力竭时的游泳时间。2. 2. 2 指标测定C、M 组在安静状态下，T，TM 组在末次训练24 h 后称重，乙醚适度麻醉，摘眼球采血，加入枸橼酸钠溶液抗凝， 37 ℃水浴中30 min 后，4 ℃ 3 000 r·min － 1 离心10 min，分离制备血清，并迅速取肝脏、双侧睾丸和深层股四头肌，剔除筋膜，置于预冷的生理盐水中洗净血污，再用滤纸吸干后置于－ 20 ℃冰箱保存备用。组织匀浆的制备: 称取适量组织( 0. 2 ～ 1 g) 按W( g) 组织块重量/V( mL)匀浆介质为1 /9 的比例加取预冷的匀浆介质( 0. 9%的NaCl 溶液) 于烧杯中，迅速剪碎组织块( 以上全部操作在冰水浴中进行) 。匀浆经3 000 r·min － 1低温离心15 min，分离提取上清液，在4 ℃冰箱冷藏即用或－ 20 ℃冰箱冰冻备用［3］。血清睾酮、血清皮质酮、黄体生成素和尿促卵泡素采用放射免疫分析法测定。试剂盒由天津九鼎医学生物工程有限公司提供。肝糖原、肌糖原采用南京建成生物工程研究所的试剂盒所提供的方法测定。血清尿素采用UVGLDH法测定。血红蛋白采用高铁氰化钾氧法测定，蛋白质定量采用双缩脲法［4］。2. 3 数据统计采用SPSS12. 0 软件对所有数据进行处理，数据用平均数标准差( 珋x ± s) ，显著性检验为t 检验。P ＜0. 05 有统计学意义。3 结果3. 1 肉苁蓉对大鼠体重及运动能力的影响肉苁蓉对大鼠体重及运动能力的影响结果见表1。在整个实验过程中，M 组大鼠体重呈增长趋势，且与C组大鼠比较无显著性差异; T 组大鼠体重小于C 组大鼠( P ＜0. 01) ; TM 组大鼠体重小于C、M 组大鼠( P ＜0. 05) ; TM 组大鼠体重大于T 组大鼠( P ＜ 0. 05) 。TM组大鼠力竭游泳时间明显长于T 组( P ＜0. 01) 。3. 2 运动及肉苁蓉对大鼠血清睾酮、皮质酮水平的影响力竭运动引起大鼠血清睾酮下降，T 组与C 组比较，血清睾酮下降了40. 53% ( P ＜ 0. 01) ，而M组、TM 组与C 组比较，未见显著性差异。TM 组与T组比较，血清睾酮水平上升了44. 35% ( P ＜ 0. 01) ，血清皮质酮水平各组间均无显著差异，血清睾酮与皮质酮比值变化与睾酮变化较为一致，与C 组比较，T 组下降了40. 75% ( P ＜ 0. 01 ) ，TM 组下降19. 52%( P ＜ 0. 05 ) 。TM 组与T 组比较，上升了35. 81%( P ＜ 0. 01) ，见表2。3. 3 运动及肉苁蓉对大鼠肝、肌糖原储量的影响力竭运动引起大鼠肝糖原、肌糖原储量下降。T组与C 组比较，肝糖原下降25. 85%( P ＜ 0. 01) ，肌糖原下降44. 94%( P ＜ 0. 01) 。M 组与C 组比较，未见显著性差异。TM 组与C 组比较，肝糖原下降11. 46%( P ＜0. 05) ，肌糖原下降12. 98%( P ＜ 0. 05) 。TM 组与T 组相比，肝糖原高出19. 41% ( P ＜0. 05) ，肌糖原高出58. 05%( P ＜0. 01) ，见表3。3. 4 运动及肉苁蓉对大鼠血清LH 和FSH 水平的影响运动及肉苁蓉对大鼠血清LH 和FSH 水平的影响结果见表4，除T 组FSH 略有下降( 与C 组比较P ＜ 0. 05) ，其余各组LH，FSH 水平都较为接近，各组间均未见明显差异。3. 5 运动及肉苁蓉对大鼠血尿素和血红蛋白水平的影响运动及肉苁蓉对大鼠血尿素和血红蛋白水平的影响实验结果见表5，T 组与C 组比较，血尿素上升了59. 30%( P ＜ 0. 01) ，血红蛋白下降28. 72%( P ＜0. 01) 。M 组与C 组比较，未见显著性差异。TM 组与C 组比较，血尿素上升了26. 31% ( P ＜ 0. 05) ，血红蛋白下降11. 46% ( P ＜ 0. 05) 。TM 组与T 组相比，血尿素低出20. 70% ( P ＜ 0. 05) ，血红蛋白高出24. 22%( P ＜ 0. 05) 。4 讨论与分析实验表明，42 d 力竭游泳训练后，灌服肉苁蓉提取物组大鼠体重和力竭游泳时间显著提高; 同时与运动组大鼠比较TM 组大鼠睾酮、肌糖原和肝肌糖元以及Hb 水平显著上升，BUN 显著下降。睾酮是机体内促合成代谢的激素，其水平高低与其恢复能力关系密切［5］; 肌糖原和肝糖原是体内最主要的糖原储备形式，其储量多寡决定长时间运动能力，同时运动后糖原的恢复状况是影响其再运动能力的关键因素之一; BUN 是评价机体承受体力负荷能力的重要指标。通过给运动大鼠灌服肉苁蓉提取物使得运动大鼠的上述指标明显得到改善，表明肉苁蓉具有良好的抗疲劳、促进恢复的作用。其主要机制可能为肉苁蓉中所含毛蕊花糖苷和甜菜碱具有雄性激素样作用，可以对运动大鼠下丘脑-垂体-性腺轴起正向调节作用，缓解由于运动对大鼠下丘脑-垂体-性腺轴的抑制作用，促进睾酮分泌增加［6］，使得TM组大鼠睾酮显著高于运动组; 睾酮是促进糖原合成加强的重要因素，使得TM 组大鼠肌糖原和肝糖原显著高于运动组，能量代谢得到恢复和再生，从而降低对蛋白质的利用。因此TM 组的BUN 显著低于运动组。睾酮的升高可以促进肾脏EPO 的合成和分泌，刺激红细胞的生成增加，从而使TM 组大鼠的Hb 显著高于运动组。5 结论补充肉苁蓉可以减轻大鼠血睾酮受高强度运动量的影响，维持在正常生理水平，同时促进蛋白质合成，抑制氨基酸和蛋白质分解，提高运动训练大鼠血红蛋白含量和糖原的储备，从而增强大鼠抗疲劳能力。REFERENCES［1］ TU P F，JIANG Y，GUO Y H，et al. 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