摘要: 采用HE染色法、糖原染色法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法,研究肉苁蓉对负荷运动小鼠肝组织、糖原及乳酸脱氢酶同工酶( LDH)活性的影响.结果显示负荷运动小鼠肝组织结构损伤严重,糖原减少、LDH5 同工酶活性显著升高;服用肉苁蓉后负荷运动小鼠肝组织结构趋向正常,糖原丰富, LDH5 同工酶活性明显下降.研究表明肉苁蓉可增加负荷运动小鼠肝糖原含量,降低LDH5 同工酶活性,对肝脏具有保护作用。关键词: 肉苁蓉;糖原;乳酸脱氢酶同工酶;聚丙烯酰胺凝胶电泳法近几年的研究认为肉苁蓉可增强免疫功能〔1〕;促进记忆,提高智能; 调节神经系统,提高性功能及抗衰老等作用〔2〕. 它含有的D-甘露醇、壳甾醇、胡萝卜素等成份,具有保肝及助阳和增强活力的作用〔3〕.我们通过动物试验,对肉苁蓉进行了一系列研究,探讨了它对运动能力和疲劳恢复的作用. 本文主要介绍肉苁蓉对负荷运动小鼠肝脏组织结构、糖原及乳酸脱氢酶同工酶活性的影响,为肉苁蓉在运动医学领域的应用提供科学的实验依据.1　材　料1. 1　动物雄性健康小白鼠,由内蒙古大学实验动物研究中心提供(清洁级,许可证号码: SCX K(蒙) 2002-0001) .1. 2　药物肉苁蓉(Cistanche desert icola Y. C. Ma)产于内蒙古额吉纳旗,并符合国家药典规定,使用前将生药制成15% 的水煎液,灭菌备用.1. 3　仪器LD4-2离心机(北京医用离心机厂)、DY-W2型电泳仪(北京生化仪器厂)、UV P凝胶图象分析系统(美国)、OLYM PUS BX40荧光显微镜、ATAGO切片机(日本) .试剂: 乳酸脱氢酶同工酶试剂盒,内蒙古同日试剂有限公司.2　方　法2. 1　取40只小鼠,体重20～ 25 g ,随机分为对照安静组、对照运动组、实验安静组和实验运动组各10只. 对照组(对照安静组、对照运动组)灌胃服0. 2 mL /日生理盐水; 实验组(实验安静组和实验运动组)灌胃服肉苁蓉水煎液,日用量0. 2 mL,药物浓度为3 g /kg 体重,每日服药一次,连续给15日,末次给药1 h后将对照运动和实验运动两组小鼠尾部负重1 g,放入30± 0. 5℃水中游泳,以沉入水中不再浮起为竭力,取出后休息10 h,之后连同对照鼠,用脱颈法迅速处死小鼠取出肝脏〔4〕. 部分肝组织经10%的福尔马林固定液固定、石蜡包埋做组织切片, HE染色及糖原染色,部分肝组织用生理盐水冲洗后, - 20℃冷冻保存.测定时室温解冻,用滤纸吸干后称重,取肝组织按1∶ 9(g /mL)的比例在生理盐水中制备匀浆,离心( 3500 r /min, 4℃ , 15 min) ,取上清液- 20℃冷冻保存,用于乳酸脱氢酶同工酶活性测定.2. 2　观察指标2. 2. 1　肝组织形态学的观察　常规HE染色和糖原染色(高碘酸-Schi ff试剂法) .2. 2. 2　乳酸脱氢酶同功酶的测定　采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法,样品的分离胶浓度为7% , pH8. 9,浓缩胶浓度为4% , pH6. 8. 10 uL样品与一滴甘油及溴酚蓝指示剂混合加样. 电极缓冲液为Tri s-甘氨酸( pH8. 7) ,电泳开始时电压为100～ 150 V ,半小时后加到200～ 250 V ,电泳4 h〔5〕. 乳酸脱氢酶同工酶采用试剂盒染色, 37℃下染色30 min,呈现出蓝色的乳酸脱氢酶同工酶谱带,然后用清水漂洗,冰醋酸固定,用UV P凝胶图象分析系统进行数据处理,实验数据用x-± s表示,进行t 检验,运用SPSS软件进行统计学分析.3　结　果3. 1　光镜观察组织形态及糖原的显示对照安静组肝小叶结构清晰,细胞索排列整齐,肝窦正常,肝细胞无明显病变,核结构清晰, (见图1) ; 对照运动组正常组织结构消失,肝小叶界限不清,细胞索紊乱,大部分肝窦消失.肝细胞广泛性的空泡变性,表现为细胞体积增大,胞浆松、浅染,乃至清亮、透明,部分肝细胞呈典型的气球样变,可见少量灶性或点状坏死(见图2) ; 实验安静组肝小叶结构比对照安静组更为清晰,细胞核结构清晰,核膜、核仁、核质着色正常,细胞索排列整齐(见图3) ; 实验运动组肝细胞呈轻度浊肿,排列较为紧密,细胞内无明显空泡及疏松,细胞索排列较整齐,细胞核结构较清晰(见图4) .　肝糖原染色结果显示对照安静组肝细胞中糖原分布均匀,无空泡现象,如箭头所示(见图5) ; 对照运动组绝大多数糖原被挤到细胞边缘,肝细胞内广泛性的空泡变性,糖原含量相对减少(见图6) ; 实验安静组糖原颗粒丰富,在细胞中分布均匀,如箭头所示(见图7) ; 实验运动组中部分糖原被挤向边缘,但细胞内糖原仍较丰富(见图8) .3. 2　肉苁蓉对负荷运动小鼠肝乳酸脱氢酶同工酶活性的影响乳酸脱氢酶同功酶电泳显示,对照运动组肝脏乳酸脱氢酶同功酶第五带( LDH5 )活性显著增高,实验运动组LD H5活性较对照运动组低,对照安静组与实验安静组乳酸脱氢酶同功酶第五带( LDH5 )活性近似(附电泳扫描图9) . 经SPSS软件分析,对照安静组与其他三组相比LDH5 活性均有显著性差异( P < 0. 01) .4　讨　论　　近年来肉苁蓉的药理保健作用越来越引起人们的重视,学者们从不同的角度对其进行了研究,证实肉苁蓉具有抗氧化作用〔6〕、提高机体免疫力作用〔7〕和对心肌损伤的保护作用等〔8〕,并在超微结构和分子水平上对肉苁蓉在不同器官中的药理保健作用进行了探讨.肝脏是机体重要的器官之一,在体内的物质代谢中起着十分重要的作用,是联系和调节各组织、器官间物质代谢的枢纽.肝脏不仅通过糖原合成、糖原分解维持血糖水平恒定,还能将乳糖、氨基酸、甘油等物质异生为葡萄糖供给其他组织和器官.机体的供能物质有糖、脂肪和蛋白质,糖是肌肉活动时能量的重要来源.大强度运动2 h 左右,肌糖原近于耗竭.长时间紧张运动中体力的衰竭总是和肌糖原的耗竭同时发生〔9〕,因此糖原的含量能说明疲劳发生的快慢或程度. 肌糖原消耗的同时,为维持血糖水平,肝糖原储备量减少.如果用药后动物肝糖原明显高于对照组,且差异有显著性,则说明该用药的动物能够通过增加肝糖原储备或/和减少运动时肝糖原的消耗,从而为机体提供更多的能量来达到抗疲劳的目的.因此,肝糖原含量是一个较敏感的指标.在剧烈运动时,机体相对缺氧,糖酵解加快,产生大量乳酸,使肌肉中H+ 浓度上升, pH值下降,导致疲劳.因此,减少乳酸的产生或加快乳酸的消除,都可延缓疲劳发生和/或加速疲劳的消除. 乳酸可以从肌肉转运到肝脏,在肝脏乳酸脱氢酶同功酶的催化下使丙酮酸重新生成.丙酮酸即可在肝脏中经糖异生转变为葡萄糖〔10〕.乳酸脱氢酶同功酶的活性反映了乳酸产生的量,即疲劳的程度.本研究通过对负荷运动小鼠肝组织形态学,能量物质肝糖原及代谢调节物质乳酸脱氢酶同工酶( LDH)活性三项指标的检测来观察肉苁蓉的药理作用. 在光镜下观察肝组织结构及糖原染色的结果显示: 对照运动组肝脏组织结构损伤严重,糖原含量相对减少; 实验运动组小鼠服肉苁蓉后进行负荷运动,肝组织损伤明显好转,糖原较丰富; 实验安静组与对照安静组相比,肝小叶结构更为清晰,糖原颗粒丰富且分布均匀,提示肉苁蓉可使负荷运动小鼠肝脏的损伤减轻并提高了能源物质储备,对肝脏具有保护作用.乳酸脱氢酶( LDH)为含锌离子的金属蛋白,广泛分布于动物细胞的胞质液中,是机体运动时代谢调节的重要指标之一.不同组织中LDH同工酶的分布各不相同,肝脏是含LDH5 为主的代表,其LDH5占总活力的一半以上〔11〕.实验结果表明,对照运动组乳酸脱氢酶LDH5 活性最高,表明肝细胞损伤最为严重; 实验运动组肝细胞损伤相对较轻,且LDH5 的活性明显低于对照运动组. 进一步证实肉苁蓉对肝脏的保护作用,它能有效地清除剧烈运动后机体的代谢产物,能延缓疲劳的发生,亦能加速疲劳的消除.实验安静组与对照安静组相比, LDH5 的活性明显偏低,其机理还需更多实验数据证明.中药肉苁蓉作为营养补充品与运动能力相关的研究已被广泛开展〔12〕,在运动医学领域里肉苁蓉作为单方剂或复方剂被使用.有关肉苁蓉保护肝脏功能的作用机制还有待于进一步的研究.参考文献:[ 1]　罗尚凤.肉苁蓉化学成分的研究[ J].中药通报, 1986, 11( 11): 41.[ 2]　Lin LW, Hsieh M T, Tsai FH, et al. Anti-nociceptiv e and a nti-inflammato r y activity caused by Cistanche deserticolain r odents [ J]. Ethnopharmacol , 2002, 83( 3): 177～ 182.[ 3]　Ouyang J,Wa ng X, Zha o B, et al. Effects o f ra re ear th elements o n the g row th of Cistanche deserticola cells a ndth e pr oduc tion o f phenylethanoid g ly co sides [ J]. Biotechnol, 2003, 102( 2): 129～ 134.[ 4]　陈奇.中药药理研究方法学[M ].北京: 人民卫生出版社, 2000.[ 5]　何忠效,张树政.电泳(第二版) [M ].北京: 科学出版社, 2001.[ 6]　孙云,林安平,张洪泉.新疆肉苁蓉抗自由基损伤的研究[ J].中国中药杂志, 1994, 19( 7): 433～ 435.[ 7 ]　张涛,刘朝阳,王建杰,等. 肉苁蓉总苷对D-半乳糖所致衰老模型小鼠免疫功能的影响[ J].中国老年学杂志,2004, 5: 441～ 442.[ 8 ]　海力曼,依拉洪,邬利亚,等. 肉苁蓉总苷对阿霉素所致小鼠心肌线粒体损害的保护作用[ J].新疆医科大学学报, 2004, 27( 2): 128～ 130.[ 9]　浦钧宗,张敏,朱全,等. “多耐”运动保健饮料对动物和人体的影响[ J].中国运动医学杂志, 1992, 11( 4): 208.[ 10 ]　张楚原.生物化学原理[M ].北京: 高等教育出版社, 2003. 9.[ 11 ]　方允中,陈能乾.医学酶学[M ].北京: 人民卫生出版社, 1984.[ 12 ]　谢敏豪,于长隆,马建. 99美国运动医学会年会小结[ J].中国运动医学杂志, 1999, 18( 4): 383～ 386.

中国科学院西北高原生物研究所，西宁81000L青海民族学院药学系，西宁 810007中国科学院兰州寒区早区环境与工程研究所，兰州730000阿拉善盟林业治沙研究所，阿拉善盟 750306摘要：采用气相质谱联用法分析了肉苁蓉的脂溶性提取物中的化学成分，通过柱色谱将脂溶性提取物分为三部分：非极性，弱极性和极性，共73种化合物得到鉴定，总鉴定比例为9722％，并用面积归一法确定其相对含量，本实验使肉苁蓉脂溶性成分得到全面分析，井发现含有多种活性化合物。关键词：肉苁蓉：脂溶性成分：气质联用肉苁蓉亦为列当科植物肉苁蓉（Cisanche desr.ticop YCM干燥的肉质茎，亦称苁蓉、大芸、金笋、地精。肉苁蓉分布于北纬36～37度范围内的沙漠，沙地和戈壁河滩。从东向西包括内蒙古、陕西、宁夏、甘肃、青海、新疆等省区、以内蒙西部乌兰察布高原、阿拉善高原荒漠区所产肉苁蓉最为著名，此地年降水量不足100m为极端干旱区．肉苁蓉已列入我国第一批珍稀濒危植物，属国家二级保护植物、肉苁蓉味甘、咸，性温，具有补肾益精、润燥滑肠等功效”，有“沙漠人参”之称，肉苁蓉除作为传统的补肾壮阳中药外，更兼具有抗衰老及提高免疫力 等多种功能。本研究采用GC-MS对内蒙阿拉善肉苁蓉的脂溶性成分进行了全面分析，共鉴定了73种化合物，并用面积归一法确定其相对含量，发现了一些已知活性的化合物，为进一步利用肉苁蓉资源提供了科学依据。1 材料与方法11 仪器与试剂GG6890N／MSD5973N联用仪（美国 Angilnt公 司）：石油醚（30～60℃，分析纯，西安试剂厂）。12 样品提取肉苁蓉于2005年五月采自内蒙古阿拉善盟，寄主为白梭梭（Hajkxvpn persjcum Bunge ex Boiss et Buh9，样品及其寄主由卢学峰副研究员鉴定，样品采回后用清水洗干净，阴干、粉碎机粉碎，过20目筛。精密称取20 置于圆底烧瓶中，加入经100ml石油醚静置2过滤，将滤液在旋转蒸发仪中50℃蒸发，得浅黄色透明油状物，即为肉苁蓉脂溶性成分，测得含脂溶性成分02％．1.3 样品预处理所得脂溶性成分再经硅胶和氧化铝（比例31）柱色谱做组分分离，分别以正己烷、二氯甲烷和甲醇做冲洗剂，将其分为非极性馏分、弱极性馏分和极性馏分.非极性馏分和弱极性馏分直接做 GC／MSD分析，极性馏分经 BF3-CH3OH（1：4）甲酯化24b再经乙醚萃取后进行 GC／MSD分析。1.4 测定条件GC条件：美国 ＆W．HP-5（30 mx0 25 mmx025μm弹性石英毛细管柱；汽化室温度250℃．柱温以4℃／mn的升温速率由80℃程序升温至290℃，恒温30m）载气为99.999％高纯氢。MS条件：MSD离子源为E源，离子源温度230C；四极杆温度150℃离子源电离能70 质谱与色谱接口280℃；使用美国 NISI021谱库。肉苁蓉的肉质茎经石油醚冷浸法提取获得其脂溶性成分，脂溶性提取物在进行气质联用分析之前经过了柱色谱分离，获得了非极性、弱极性和极性馏分．其中极性馏分经 BE3-CHOH甲酯化。将分离得到的三部分馏分分别进行 GCMSD分析.所鉴定的成分分别占各部分色谱峰总峰面积的94 05％、97.12％、97.83％，总鉴定比例为97.22％。其余成分因其含量甚微，质谱信息量不足而未确认其结构。21.1 非极性馏分非极性馏分进行 GCMSD分析得到总离子流图.各色谱峰的质谱图经计算机谱库检索鉴定了它们的结构，鉴定了其中的22个峰，见表L．非极性馏分主要检出：正构烷烃、类异戊二烯烷烃两个系列和相度很高的豆甾二烯（17号峰），以正构烷烃系列占绝多优势为特征。从表1发现，该部分含有的正构烷烃从正十七烷至正三十五烷没有间断。2 结果与讨论21 肉苁蓉油脂的全面 GC-MS分析表1 肉苁蓉非极性馏分化合物成分分析结果Tabki Anayss of chen kal amponents from nan pojar ction ofC deengop oil峰号化合物名称相似度分子式相对含量（％）Pork NoConpandSiMoeular pmupReptve conant1正十七烷 HPeone9450 0092姥敏烧 Prissre91"H"50 0073正十八烷 nOcBjeone86"H50 0334机 Paasee78H50 0175正十九烧 Nomalocane85H50 0486正二十烷 Exome60H"50 2507正二十一烷 Hme josme89H'50 2318正二十二烷 aDcne92H50 3359正二十三烷 nTcoe65H50 38710正二十四烷 nTemnane70H50 414日正二十五烷 n-Penscone7750.55112正二十六烷 nHexaconane64H50 52113正二十七烷 nHPacone80H50 91314正二十八烷 nOcpcoane92H50 47915正二十九烷 Nonacmane67"1"50 42716正三十烷 nTrpconme73H50 200173.5豆围二烯 S1 5-dime965H0 501

李 楠 白宏英 娄季宇【摘要】目的探讨肉苁管对轻度阿尔笑海政病（AD）患者的脑保护作用，方法轻度AD患者随机分为3组，用MMSE和ADAS-cog量表评价治疗前后认知改交，15TMRI扫描分析海马体积的变化，结果48周后，药物治疗组的MMSE和ADAS-cog评分优予对照组，治疗组海马体机进最性萎缩的变化不明显，同时药物治疗组脑身液中t-tun，TNF-a和11-1β的平与时照组橘比降低，结论经肉苁蒙制剂治疗后，轻度AD患者的认知状况得到了改善，肉苁蒙能够减缓海马的萎编，对轻度AD态者游在的脑保护作用。【关键词】阿尔旅海政病：肉苁蓉：认知功能：T-tam：TNF-a：I1-1β【中图分类号】R28【文献标识码】B【文章编号】1674-9316（2015）20-0115-02dol:10.3969/.ssn.1674-9316.2015.20.088Cerebral Protective Effect of Cistanche in Alzheimer's PatientsLI Nan BAI Hongying LOU Jiyu Department of Intermal Medicine,the Second Affiliated Hospital of Zhengzhou Univenity,Zhengzhou 450014.Chma【Abstraet】Objective To mvestigate the cerebral protective elfect of catanche on mald aleheimer's dese (AD)pattens.Methods Mild AD patiens were randomly divided into 3 groups.The changes of and ADAS-cog were evalnated by MMSE and 1.5 TMRI.Results Drag treament go f MMSE and ADAS cog score was signiticantly berer than the control group atter 48 weeks.treatment group in the hippocampal volme in the progressive atrophy of the change was not olwious,and drug treatment group in ceebrospinal thud(CSF)t-uu,TNF alpha and I1-1 beta levels compared with the control group compared with decreaned igniticantly.Conelusion Afer agens treatment of chtanche deserticola,the cognitive sratus of mild AD patients has been signiticantly impeored.chunche can slow the hippocampus atroplay of the cerebral protective eflects of mild AD patients with potenial.[Key words|Alzheimer's dee,Counche,Coputice fmcton,T-un.TNF-a,IL-1B阿尔茨海默病（AD）是神经退化的一系列的临床综合您、表现为进行性的认知能力和个人生活能力的下降，AD患者超脊液中增高的tau蛋白已成为其诊断的重要指标之一口，内其蓉是一种全寄生的沙溴植物，其主要化学物质苯乙醇苷类，被认为对中枢神经系统有作用，本研究分析内苁要对AD带在的神经保护作用。1材料和方法24名参与者均来自郑州大学第二附属医院，拥有相似的教育程度，人选标准为Mini-mental state cxamination（MMSE）量表 （21～26分）和Alzheimer＇s Disease Assessment Scale-cognitive subscale（ADAS-cog）量表（7～17分）；排除标准为急慢性的感染，肿瘤，多奈哌齐、美金刚、银杏叶制剂的使用，抗感染药物、类固醇药物的使用，C反应蛋白≥10mg／L，所有的患者均签署了知情同意书，本研究得到了郑州大学第二附属医院伦理委员的批准，参与者被随机分为3组：内苁要治疗组（n-10）：口服肉苁蓉胶囊（国药准字Z20080047）0.9g／d，服用48周；多奈账齐治疗组（n-8）：口服多奈聚齐片（安理申，国药准字H20050978）5mg／d，服用48周；对照组（n-6）：未进行药物治疗。每一个参与者均进行MMSE和ADAs-cog量表评估，数据经One-wayANOVA test检验组间差异。MRI扫描应用GE 1.5 TMRI扫描仪。双则海马体积和全脑体积应用统计参数图（SPM99）9计算。所有效据经SPSS 13.0教据包分析，One-way ANOVA test 用作组间比较，Bonfemoni被用作两组间比较，P＜0.05为差异具有统计学意义。2结果服药48周后，西物治疗组与对照组相比，认知水平有改善（P＜0.05），但在用两24周时，该指标差异性还不明显。两个用药组之间无统计学差异（P＞0.05）；西物组MMSE成绩改善（P＜0.05）：西物组ADA-cog成绩改善（P＜0.05）；对照组的双削海马体积在48周内发生了持续性的萎缩（P＜0.05），而药物治疗组患者的海马体积变化不明显（P＞0.05）。3讨论研究揭示肉苁蓉制剂能够改善轻度AD患者的认知能力，减缓患者海马体积的姜缩，认为肉苁蓉制剂通过减少TNF-a和IL-1β的量而抑制-au的聚集。阴阳理论是传统中医理论的经典部分。人体被认为是由两种相对的部分：阴和阳构成的整体，根据阴阳理论。气属于阳，血，体液属于阴，共同构成了人体的根本。中医学应用阴阳的概念来揭示疾病的发生和治疗。阿茨海默病（AD）被认为阳气不足。内苁蓉被认为是补肾阳的西物，它有可能对AD产生影响。苯乙醇营类是肉苁蓉中重要的活性物质，体外实验证实其可以抑制腹膜巨噬细胞中IL-10和TNF-a的生或，我们的研究显示经过48周肉苁蓉的治疗，t-tm，TNF-a和IL-1β的表达均出现下降。说明肉苁蓉的活性或分可以透过血脑屏障而参与到AD的病理过程中。我们的发现还显示-aw，TNF-a和IL-1β之间联系，内苁蓉能够减少TNF-a和IL-1β的最继而降低tu蛋白的裂集，肉苁蓉治疗后AD患者额脊液-au的水平随着TNF-a和IL-1β的降低而得到有效的清除，暗示肉苁蓉制剂可能通过抑制脑脊液中TNF-a和IL-1β的表达而影响taw蛋白的聚集。不管怎样，我们的实验并未分离及针对肉苁蓉的某种生物成分，更深人的对肉苁蓉的研究应着重于对其重要成分的分析。综上所述，肉苁蓉制剂能够改善轻度AD患者的认知功能。减缓海马的萎缩，其治疗效果与多奈哌齐相比无统计学差异，其价格低廉，或许更适用于中国及一些发展中国家。

老年性耳聋是衰老在听觉功能上的表现。中医认为，肾开窍于耳。人的肾精充足，则听力正常：肾精不足，则听力下降。老年耳聋的实质是肾虚，当肾之精气虚衰，精亏髓空，耳失濡养，则可能出现耳聋。肉苁蓉是补肾中药，主产于内蒙古、宁夏、新疆等地，素有“沙漠人参”之誉。肉苁蓉味甘、咸，性温，有补肾阳、益精血、润肠通便等功效，常用于治疗肾虚阳痿、遗精、早泄、腰膝冷痛、筋骨痉弱、肠燥便秘等症。研究表明，肉苁蓉中富含生物碱、氨基酸、微量元素、维生素等成分，具有增强免疫功能、降压、抗动脉粥样硬化、延缓衰老等多种功能。羊肾为山羊或绵羊的肾，性温，能补肾气、益精髓，食疗可治肾虚劳损、腰脊酸痛、足膝软弱、耳聋、阳痿、尿频等。有研究认为，老年耳聋与体内缺锌有关，而羊肾含锌丰富，还含蛋白质、铁、磷、硒等营养元素。肉苁蓉、羊肾均为补肾佳品，合用能使补肾益精功效倍增。老人适当选用本食疗方，对防治肾阳虚引起的耳鸣、耳聋、腰膝酸软、夜尿频多等症，能起到一定效果。不过，老年性耳聋多属自然衰老现象，患者也不宜对此方的疗效寄予过高的期望。成都中医药大学中医药情报研究部副研究员 蒲昭和有辛辣味，这种物质能抗寒，抵御流感病毒，有较强的杀菌作用：洋葱中含有植物杀菌素如大蒜素等，也有很强的杀菌能力。平日嚼生洋葱的确可以预防感冒，就是将洋葱切开生吃，直至鼻窍通、发汗为止。其对治疗风寒感冒、鼻窍不通、无汗症状非常有益。中医学认为，感冒是否发生主要取决于人体正气的强弱，若体质虚弱，卫外之气不固，感受外界风寒之邪，即可发为感冒。因此，平时要加强体育锻炼，增强机体适应气候变化的调节能力，并应该随气候变化增减衣服，注意防寒保暖。感冒后要注意适当休息，多饮水，饮食以素食流质为宜，慎食油腻难消化之食物。卧室空气应流通，但不可直接吹风。全国名老中医、教授韦绪性

肉苁蓉概况肉苁蓉（Cistanche deserticola Ma），别名疆芸、寸芸、苁蓉，分布在以内蒙古阿拉善高原和新疆北疆为中心的两大生产区。肉苁蓉属植物为寄生植物，其寄主为防沙固沙植物梭梭、柽柳属植物、盐爪爪、红砂、珍珠柴等。《神农本草经》最早记录了肉苁蓉的作用“主五劳七伤，补中，除茎中寒热痛，养五脏，理阴，益精气，妇人癥瘕。”唐代甄权所著的《性论》记载肉苁蓉“益髓，悦颜色，延年，治妇人血崩，壮阳，大补益，主赤白下”。《中华人民共和国药典》收载的肉苁蓉的基源鉴定为列当科植物肉苁蓉（Cistanche deserticola Y.C.Mal 或德赢vwin登录 ［Cistanche tubulosa（Schrenk）Wight］的干 燥带鳞叶的肉质茎，多于春季苗未出土或刚出土时采挖，除去花序，切段，晒干。肉苁蓉味甘、咸、性温，归肾、大肠经，功效补肾阳、益精血，润肠通便。2 肉苁蓉的化学成分肉苁蓉的主要化学成分包含苯乙醇苷类（phenylethanoid glyeosides，PhGs）化合物松果菊苷 echinacoside，Ech）、毛蕊花糖苷（acteoside，Act）、肉苁蓉多糖（polysacchrides of cistanche deserticola.CDPS） 甜菜碱、木质素类、环烯醚萜及其他苷类、氨基酸、丁香酚、挥发油等。肉苁蓉还含有丰富的微量元素，包括铁、锰、锌、铜、钙、镁、钼、钴等。PhGs是肉苁蓉的主要有效活性成分，不同品种肉苁蓉的化学成分有明显差异，德赢vwin登录 松果菊苷的含量较高，几乎是其他品种的6倍：德赢vwin登录 有效成分种类也更丰富，如苯乙醇苷类在德赢vwin登录 中可分离出19种之多，而其他品种肉苁蓉只能得到12种。不同采收和加工方法影响肉苁蓉不同活性成分的含量，如切片杀酶的方法可获得较多的松果菊苷和毛蕊花糖苷：直接干燥的方法可获得较多的半乳糖醇。炮制方法也是影响肉苁蓉成分和作用的因素，肉苁蓉酒炙增加苯乙醇苷类化合物松果菊苷、毛蕊花糖苷含量，而8-表马钱酸、丁二酸、京尼平苷的量则下降。肉苁蓉经酒炙后可避免滑肠致泻的副作用，同时增强温肾助阳功能。3 肉苁蓉的药理作用现代生物医学研究显示，肉苁蓉有抗氧化、调节免疫和延缓衰老的作用，还有保肝、抗癌、抗辐射4 、降血糖、抗变态反应、抗炎、抗恶性细胞增殖 ，以及改善造血等功能。肉苁蓉的化学组分苯乙醇苷类可以通过增加氧化酶的酶活性从而预防高原肺水肿和高原脑水肿，肉苁蓉也用于治疗骨质疏松和促进骨折愈合。这里主要总结肉苁蓉神经保护方面的作用。3.1 抗氧化作用 氧化应激是AD的主要病理生理学过程之一，抗氧化剂通常被认为对AD有保护作用。肉苁蓉总苷｜Glycosides of cistanche，GCs）在体内、体外均具有抗氧化活性。GC保护小鼠脑缺血／再灌注引起的脑损伤，可以提高脑组织超氧化物歧化酶Superoxide Dismutase，SOD）活性，并降低丙二醛（Malondialdehyde，MDA）含量。GCs改善血管性痴呆模型大鼠的空间学习记忆能力及D-半乳糖和铝诱导的小鼠记忆能力减退；改善Aβ所致的AD模型大鼠学习记忆能力叫。GCs进海马区神经细胞的分化、轴突生长和突触形成。Ech 可增加胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophie factor，GDNF）和脑源神经营养因子 （brain-derived neurotrophie factor，BDNF）的表达四。 Ech 还可以活化神经营养因子受体Trk A，激活其下游信号通路，抑制细胞色素C的释放和Caspase-3的活化网。另有研究表明，Ech可抑制活性氧引起的细胞内游离Ca的累积，从而保护神经元。GCs可通过减少tau蛋白的磷酸化，增加二氢嘧啶酶相关蛋白-2的表达而保护海马神经元。肉苁蓉可抑制AD小鼠模型β-淀粉样蛋白斑沉积，修复胆碱能神经元的功能，并改善认知功能障碍。4 小结目前，食品药品监督管理局批准的治疗AD的药物主要是胆碱酯酶抑制剂和NMDA受体拮抗剂。这类药物只是调节脑内的神经递质含量，改善早期AD的症状。有希望发展为保护神经元而延缓AD发展的药物包括神经营养因子，改善神经细胞新陈代谢的药和传统中医药。含肉苁蓉的经典复方有济川煎、地黄饮子、无比山药丸、加味四斤丸、菟丝子丸、苁蓉丸、参茸丸、润肠丸等：此外，现代制剂肉苁蓉总苷胶囊、红芸口服、杞芸口服液、苁蓉四倍丸、还少丹、金匮肾气丸、聪愚汤等都是目前临床常用的含肉苁蓉制剂。GCs的急性和遗传毒性试验，没有发现异常：GCs未表现出致突变性，且对动物血液生化指标、器官的正常生长发育等均无明显不良影响，肉苁蓉对孕期大鼠也没有毒性或致畸作用随着对肉苁蓉研究的不断深入，肉苁蓉在防治神经退行性疾病方面的神经保护作用显示出了良好的前景。肉苁蓉的活性成分Act可以通过血脑屏障，但Act和Ech的生物利用率低。参照中医的理法方药，改进中药传统制剂，如采用PhGs脂质体、纳米颗粒、磷脂复合物等方法，可以提高肉苁蓉的生物利用度、对肉苁蓉和含肉苁蓉复方的深入研究将为防治AD提供有效思路。也可通过提高自由基清除酶活性，降低脂质过氧化反应，以及脑组织钙含量，从而抑制喹啉酸诱导的脑细胞凋亡。GCs还可通过调节脑内氧化代谢水平，改善随年龄增加而恶化的SAMP8小鼠空间学习记忆能力和海马椎体细胞的存活率［25-。GCs在体外可保护细胞毒1-甲基-4-苯基-1.2.3.6四氢吡啶（MPTP）引起的神经元凋亡项。3.2 抗炎与免疫调节作用 AD的炎症假说日益受到关注，小胶质细胞激活、大量的细胞因子和免疫补体蛋白释放是AD的另一重要病理生理过程。苯乙醇苷类（Pheylethanoid Glycosicles，PbGa）和毛蕊花糖苷（Acteoside， Act）均能有效抑制脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）诱导的炎症因子的产生，包括肿瘤坏死因子-a（TNF-α）、前列腺素E2（PGE2）和一氧化氮（NO）等。松果菊苷（Echinacoside，Ech）能促进衰老小鼠胸腺和脾脏质量的增加。GCs能显著加强D-半乳糖诱导的衰老小鼠淋巴细胞转换能力、腹腔巨噬细胞吞噬功能、NK细胞活性、CD4＇T细胞和CD8＊T细胞含量、外周血IL-2含量，这些表明肉苁蓉具有增强免疫力的作用。Ech可通过调节脑内NF-xB通路而保护MPTP引起的脑内多巴胺能神经元死亡叫。临床研究表明，肉苁蓉总苷胶囊治疗48周可以延缓中度AD患者的认知能力减退、海马体积萎缩，并降低AD患者脑脊液中总tau蛋白和炎症因子的水平。3.3 神经保护作用 AD的主要病理特征是内侧隔核、海马、题叶和内嗅皮质等学习记忆相关脑区的神经元和突触丢失，保护神经、延缓神经元死亡和突触丢失是防治AD的最终目标。作为补阳中药，肉苁蓉的甲醇浸出物中80％为碳水化合物，这种粗提物按每千克体质量1克的量给小鼠连续灌胃3天，心肌ATP的产生可增加100％。肉苁蓉多糖保护大鼠双侧海马注射Aβ2s3引起的神经元死亡和学习记忆能力减退。毛蕊花糖苷可保护兴奋性氨基酸引起的大脑皮质神经元死亡和1-甲基4-苯基吡啶离子（MPP＋）引起的中脑多巴胺能神经元毒性作用D％。Act 还可抑制 Caspase-3 活性保护鱼藤酮引起的神经元死亡。Act也可保护Aβ诱导的神经元死亡。Act／Ech 预处理可以调节神经营养因子的表达，保护MPP＋引起的氧化应激、内质网应激所导致的中脑多巴胺能神经元死亡-肉苁蓉提取物能增加C6细胞中神经生长因子（nerve growth factor，NGF）的水平，促进PC12细胞的神经突起的延伸，刺激小鼠皮质和海马区NGF的产生，促进海马区神经细胞的分化、轴突生长和突触形成。Ech 可增加胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophie factor，GDNF）和脑源神经营养因子 （brain-derived neurotrophie factor，BDNF）的表达四。 Ech 还可以活化神经营养因子受体Trk A，激活其下游信号通路，抑制细胞色素C的释放和Caspase-3的活化网。另有研究表明，Ech可抑制活性氧引起的细胞内游离Ca的累积，从而保护神经元。GCs可通过减少tau蛋白的磷酸化，增加二氢嘧啶酶相关蛋白-2的表达而保护海马神经元。肉苁蓉可抑制AD小鼠模型β-淀粉样蛋白斑沉积，修复胆碱能神经元的功能，并改善认知功能障碍。4 小结目前，食品药品监督管理局批准的治疗AD的药物主要是胆碱酯酶抑制剂和NMDA受体拮抗剂。这类药物只是调节脑内的神经递质含量，改善早期AD的症状。有希望发展为保护神经元而延缓AD发展的药物包括神经营养因子，改善神经细胞新陈代谢的药和传统中医药。含肉苁蓉的经典复方有济川煎、地黄饮子、无比山药丸、加味四斤丸、菟丝子丸、苁蓉丸、参茸丸、润肠丸等：此外，现代制剂肉苁蓉总苷胶囊、红芸口服、杞芸口服液、苁蓉四倍丸、还少丹、金匮肾气丸、聪愚汤等都是目前临床常用的含肉苁蓉制剂。GCs的急性和遗传毒性试验，没有发现异常：GCs未表现出致突变性，且对动物血液生化指标、器官的正常生长发育等均无明显不良影响，肉苁蓉对孕期大鼠也没有毒性或致畸作用随着对肉苁蓉研究的不断深入，肉苁蓉在防治神经退行性疾病方面的神经保护作用显示出了良好的前景。肉苁蓉的活性成分Act可以通过血脑屏障，但Act和Ech的生物利用率低。参照中医的理法方药，改进中药传统制剂，如采用PhGs脂质体、纳米颗粒、磷脂复合物等方法，可以提高肉苁蓉的生物利用度、对肉苁蓉和含肉苁蓉复方的深入研究将为防治AD提供有效思路。

高宇宏，柯尊记上海中医药大学生物化学教研室，神经科学研究中心，上海市健康辨识与评估重点实验室（上海 201203）【摘要】 从肉苁蓉的概况、化学成分、药理作用方面综述肉苁蓉治疗阿尔茨海默病研究进展。中医治疗阿尔茨海默病多以补肾为主，肉苁蓉补肾阳、益精血，是中医治疗阿尔茨海默病的常用药。肉苁蓉具有抗氧化、抗炎与调节免疫、促进代谢和保护神经等作用，在防治阿尔茨海默病方面有良好的应用前景。【关键词】肉苁蓉：阿尔茨海默病：补肾阳：抗氧化：抗炎与调节免疫：神经保护：综述Research progress onpharmacological effects of Roucongrong( Cistanches Herba) in the treatment of Alzheimer's DiseaseGAO Yuhong,KE ZunJiDepartment of Biochemistry,Research Center for Neurasciences,Shanghai Key Laboratory for Health Identification and Assessment,Shanghai Uninrersity of Traditional Chinese Medicine,Shanghai 201203,ChinaAhstract This paper reviews the eeanh peagress of Rearenging(Cotanches Hebal in the teatment of Alaheimer'Disease.inchaling its general sitmation chemical omposition-pharmacnlopical effete The Chinese mdical thesapy foe AlheimerDseane mainly bave on tonifying kidnry.Rerangnang(Cintanhes Herhal shows the efferts of tomifying kidnry yang and benefiting eurnce and ood.which is commenly ed in Chinese melical theray for Aleheier'Diseane. Reucongrong Citanches Heal shows the efeete of anti-idation,anti-inflammation.immame egulation-peomtingmetallim.petecting.nenes and so on,which shows gond application prompect in the peevention and treatment of Alahrimer'sdivee.Keywerds:Roucingrong(Cistanches Herta)Albrimer'sDise omifying Eitry yan anti-onidation: anti -infammation and immmme egulation:neuraprotection阿尔茨海默病（Alzheimer disease，AD）是最常见中枢神经系统的退行性疾病之一。临床上以认知衰退、进行性记忆丧失、性情改变、语言不协调，最终导致痴呆进一步发展，失去自主生存能力为主要表现。AD在病理学上的表现主要有β淀粉样多肽（β-amyloidpeptide）积聚成的淀粉样蛋白斑，大量的高度磷酸化的微管相关蛋白（tau protein）组成的神经纤维缠结，以及胆碱能神经元的死亡。目前认为，AD的发病机制包括β淀粉样蛋白（β-amyloid protein，Aβ） 沉积、Tau蛋白过度磷酸化、细胞凋亡、炎症反应、神经细胞钙稳态失调和自由基代谢异常、AD相关基因突变及多型性假说等。此外，全基因组扫描（GWAS）研究显示，数十个基因与AD相关，但位于21号染色体上的淀粉样蛋白前体蛋白（APP），14号染色体上的早老素1（PSENI），1号染色体上的早老素2（PSEN2），以及19号染色体上的载脂蛋白E（Apolipoprotein E，ApoE），是与AD致病性关系最密切的易感基因。肉苁蓉补肾阳、益精血，是中医治疗大脑神经病变的常用药。现代研究发现，肉苁蓉对脑神经有保护作用，不仅可用于阿尔茨海默病，还常用于治疗帕金森、血管性痴呆等疾病。本文通过综述相关研究进展，对肉苁蓉脑神经保护作用进行总结，进而为阿尔茨海默病的防治提供科学依据及借鉴。

摘　要　目的：观察肉苁蓉对负重游泳小鼠肝脏组织结构和糖原的影响‚探讨其抗疲劳效应的相关分子机制。方法：将昆明小鼠随机分为正常对照组、运动对照组和肉苁蓉实验组。正常对照组和运动对照组每只每日灌胃生理盐水0．2ml‚肉苁蓉实验组每只每日灌胃肉苁蓉水煎液0．2ml（3g／Kg）‚共15天；末次给药1小时后运动对照组和肉苁蓉实验组小鼠尾部负重5％游泳90分钟‚10小时后连同正常对照组小鼠处死取肝脏‚用中性甲醛固定制备石蜡切片；常规HE 染色观察肝脏组织结构‚糖原染色法显示肝脏糖原‚S－P 免疫组织化学染色法检测小鼠肝脏一氧化氮合酶3的表达。结果：运动对照组与正常对照组比较肝脏结构损伤严重‚糖原含量减少‚一氧化氮合酶3表达下降（P＜0．05）；肉苁蓉实验组与运动对照组比较肝小叶结构较清晰‚糖原丰富‚一氧化氮合酶3表达上调（P＜0．05）。结论：肉苁蓉可保护负重游泳小鼠肝脏肝细胞和内皮细胞受损‚上调一氧化氮合酶3的表达‚促进肝糖原合成‚从而发挥抗疲劳作用。主题词　肉苁蓉／药理学　肝／药物作用　疲劳／病理学　小鼠肉苁蓉‚又名大芸‚为列当科二年寄生草本植物。性味甘、咸、温‚入肾、大肠经‚主要功用是补肾壮阳、益精血、润肠通便‚常用于治疗阳痿‚不孕‚腰膝酸软‚筋骨无力‚肠燥便秘等症状‚在历代增力的中药古方中‚出现率最高［1］ ‚素有“沙漠人参”之称。明代李时珍说：“补而不峻‚故有苁蓉（从容）之号”。肝糖原含量是检测保健食品抗疲劳作用的重要指标［2］ 。本研究旨在通过小鼠负重游泳试验‚观察肉苁蓉对负重游泳小鼠肝脏组织结构及肝脏糖原的影响‚并首次通过检测肝脏一氧化氮合酶3（nitric oxide synthase3‚NOS3）的表达量‚研究NOS3 和糖原合成的关系‚探讨肉苁蓉提升运动能力的可能分子机制。1　材料1∙1　动物　30只雄性昆明种小鼠‚清洁级‚体重（20±0．5）g‚由内蒙古大学动物中心提供。1∙2　药品及试剂　肉苁蓉（Cistanche deserticola Y．C．Ma）产于内蒙古额吉纳旗并已鉴定。水煎浓缩成相当于每毫升含生药1g 的水煎液原液‚4℃ 冰箱保存。一氧化氮合酶3（NOS3）多克隆抗体：武汉博士德生物工程有限公司。S－P试剂盒：福建迈新试剂公司。1∙3　仪器　JD－80彩色图像分析仪：南京。2　方法2∙1　动物分组、给药及处理　昆明种小鼠适应饲养3天后‚随机分为正常组、运动组、肉苁蓉组3组‚每组10只。正常组和运动组灌服生理盐水‚肉苁蓉组灌服肉苁蓉水煎液‚每日1次‚0．2ml／次‚连续15天。末次给药1小时将运动组、肉苁蓉组两组小鼠尾部负重1g（5％W）铅坠‚放入高50cm、长50cm、宽35cm 的水池中游泳‚温度保持在（30±0．5）℃‚观察小鼠‚小鼠停止游泳用木棍刺激其运动‚持续90分钟‚运动后正常饮食。2∙2　肝脏组织学观察　休息10小时后连同正常组小鼠脱颈法处死‚取出肝脏‚10％中性甲醛固定‚经脱水、透明、浸蜡、包埋制成4μm 厚的连续切片‚切片采用HE 染色法观察各组肝脏组织结构。2∙3　糖原染色　4μm 厚的连续切片常规脱蜡至水‚入1％过碘酸液37℃15分钟‚流水冲洗后入Schiff 液作用60分钟‚流水冲洗‚梯度乙醇脱水‚二甲苯透明‚中性树胶封片‚镜下观察染色结果。2∙4　NOS3 表达的测定　免疫组织化学染色法检测。分析方法：在光镜下以目测半定量法初步观察‚NOS3 阳性产物呈深棕黄色或棕黄色‚阳性产物定位于肝细胞的胞浆内或肝细胞间的内皮细胞的胞浆内‚蓝色背景为阴性。然后采用彩色图像分析系统分析‚测量阳性反应物的灰度值‚在40倍物镜下每张片子随机测量4个视野的参数取其平均值‚用此参数反映NOS3 染色强度的变化。2∙5　统计分析　数据以（x±s）表示‚采用SPSS11．0统计软件包进行t 检验。3　结果3∙1　肝脏组织结构变化　正常对照组肝小叶结构清晰‚细胞索排列整齐‚肝窦正常‚肝细胞无明显病变‚核结构清晰。运动组正常组织结构消失‚小叶界限不清‚细胞索紊乱‚大部分肝窦消失；肝细胞广泛性的空泡变性‚表现为细胞体积增大‚胞浆疏松、浅染‚乃至清亮、透明‚部分肝细胞呈典型的气球样变‚可见少量灶性或点状坏死。肉苁蓉组肝细胞呈轻度浊肿‚但排列规整‚细胞内无明显空泡及疏松‚细胞索排列较整齐‚细胞核结构较清晰。3∙2　肝糖原染色结果　正常肝细胞中均有糖原存在‚分布均匀‚无空泡现象（见图1－1）。运动组糖原较少‚散在分布在肝细胞‚部分区域出现空泡现象（见图1－2）。肉苁蓉实验组糖原丰富‚但在细胞的一侧聚集很多（见图1－3）。3∙3　光镜观察NOS3 的表达及图像定量分析正常组肝细胞的细胞质中有强阳性表达呈弥散状分布尤其在双核细胞中有强阳性表达‚内皮细胞有阳性表达（见图2－1）。运动组肝细胞和内皮细胞的细胞质中表达均减弱（见图2－2）。肉苁蓉组肝细胞的细胞质有阳性表达‚内皮细胞中有强阳性表达（见图2－3）。分析结果见表1。4　讨论糖是维持人体运动能力的主要能源物质‚糖原是可以迅速动用的葡萄糖贮备‚机体内糖贮备减少‚必将引起运动能力下降。糖在人体内的总量一般不超过500g‚在体内分布：肝糖原有70～100g；体液糖20g‚主要是葡萄糖‚其中血糖约6g‚肌糖原350～400g。大量运动时‚肌糖原分解供肌肉收缩‚当肌糖原耗竭时‚为维持血糖水平‚肝糖原迅速分解成葡萄糖并将其释放入血‚当肝糖原贮备耗竭时‚葡萄糖的产生会明显下降‚导致低血糖。血糖是包括大脑在内的中枢神经系统的主要能源物质‚若血糖水平很低‚便会出现低糖症‚致使脑机能下降‚大脑不能维持正常功能‚出现疲劳和虚弱表现［3］ ‚过度疲劳会使运动员不仅表现为疲乏无力、精神萎靡、头脑思维混乱等症状‚甚至被迫停止训练‚有的甚至出现心肾功能的改变。运动员大量运动后如何促使运动员体能迅速恢复成为运动学界研究的重点课题。大量研究证明机体大量运动后‚会产生大量H＋ 、自由基、乳酸等影响细胞正常代谢的物质‚同时由于细胞内葡萄糖的匮乏导致机体发生运动性疲劳和细胞损害。本研究结果显示‚大量运动后肝脏组织结构损害非常严重‚同时也影响到细胞的合成代谢‚如肝糖原减少。服用肉苁蓉的小鼠在大量运动后可观察到肝脏损害减轻‚且肝糖原含量显著多于运动组‚显示肉苁蓉具有肝脏保护作用‚可促进糖原合成‚维持机体正常的生理机能。NO 是近几年被运动界高度重视的一个小分子物质‚一氧化氮合酶（NOS）是NO 生成的主要限速因子‚目前已经确认NOS 有3种类型的同工酶‚它们分别为NOS1（nNOS）、NOS2（iNOS）、NOS3（eNOS）。eNOS：即NOS3‚内皮型一氧化氮合酶‚主要分布于内皮细胞、肝细胞‚生成的NO 主要参与生理功能‚如保持血管舒张、增加血流量、调节血压、抑制血小板凝集、维持细胞的正常代谢等［4］ ；nNOS：即NOS1‚被称为神经元型一氧化氮合酶‚它存在于神经元细胞、骨骼肌细胞等‚主要参与神经发育、神经分泌、学习和记忆过程；iNOS：即NOS2‚被称为诱导型一氧化氮合酶‚主要存在于平滑肌细胞、巨噬细胞、淋巴细胞中‚此酶一旦诱生‚可持续合成NO‚直至底物耗尽或细胞死亡‚目前认为参与细胞损伤［5］ 。本研究结果表明大量运动后内皮细胞和肝细胞NOS3 表达减弱‚由此产生的NO 减少‚使血管不能有效扩张‚血流量减少‚合成糖原的原料不能运输到肝细胞‚故糖原合成减少；肉苁蓉可上调内皮细胞和肝细胞的NOS3 表达‚反应性扩张血管、增加血流量、加快运输糖原合成原料的能力‚加速糖原合成‚维持机体处于正常生理代谢水平。故上调NOS3 的表达可能是肉苁蓉提升运动能力、保护肝脏和减轻运动性疲劳的重要作用机制。　　参考文献1　周志锦∙肉苁蓉的研究进展∙中医药信息‚1995‚13（5）：28∙2　何米英‚严卫星∙抗疲劳试验中肝糖原测定的意义探讨∙中国食品卫生杂志‚1998‚10（6）：1∙3　陈岷‚叶子坚‚李琼∙运动中糖的分解代谢∙中国临床康复‚2004‚8（33）：7519∙4　徐健方‚张漓‚冯连世∙运动与NO/NOS 系统和CO/HO 系统的研究进展∙中国运动医学杂志‚2004‚23（4）：453∙5　吴惺‚陈彦克‚马廉亭∙诱导型一氧化氮合成酶在迟发性血管痉挛中的作用∙中华实验外科‚2005‚22（2）：203∙

摘要: 目的vwin.com 是否具有生殖毒性或引起胎儿致畸。方法将SD 孕鼠随机分为4 组，分别为阴性对照组( 蒸馏水) 和肉苁蓉0. 83 g / ( kg·BW) 、1. 66 g / ( kg·BW) 和3. 33 g / ( kg·BW) 3 个剂量组，在受孕第7 ～ 16 天连续10 d 给大鼠灌胃，第20 天解剖取出胎鼠，观察肉苁蓉对母体及胎鼠的影响。结果孕鼠及仔鼠各项指标与阴性对照组比较，未见明显差异。结论肉苁蓉对孕鼠及胎鼠均未见毒性表现。关键词: 肉苁蓉; 生殖毒性; 致畸; 大鼠肉苁蓉( Cistanche deserticola Ma) 别名大芸、寸芸、苁蓉，是一种寄生在沙漠树木梭梭、红柳根部的寄生植物。传统医学认为肉苁蓉具有补肾阳、益精血、润肠通便的作用，现代药理研究证明肉苁蓉及其有效成分具有抗疲劳、抗衰老、抗肿瘤、增强机体免疫力等药理作用，备受人们的关注。尤其是传统医学认为妇女带下、不孕症、四肢不温、月经不调、腰膝酸痛等症状时，适合服用肉苁蓉，提示必须关注妇女在孕期服用肉苁蓉是否对生殖有影响，以及是否会有致畸的可能性。为此，本研究对肉苁蓉对大鼠生殖毒性及致畸作用进行分析，结果如下。1 材料与方法1. 1 药品肉苁蓉粉研磨成粉，临用前加蒸馏水配至所需浓度，供试。1. 2 动物实验选用上海斯莱克实验动物有限责任公司提供的清洁级SD 未交配过雌性大鼠100 只，体重249 ～ 345 g; 雄性大鼠60 只，体重300 ～ 350 g。许可证号: SCXK ( 沪) 2012 － 0002。1. 3 饲料购于上海斯莱克实验动物有限责任公司，合格证号: 沪饲审( 2008) 04002。1. 4 饲养环境福建省疾病预防控制中心SPF 级动物实验室，许可证号: SYXK ( 闽) 2012 － 0008。1. 5 检测仪器电子天平、游标卡尺。1. 6 实验方法1. 6. 1 大鼠的选择性成熟雌、雄大鼠按1∶1 同笼后，每日早晨观察阴栓，查出阴栓的认为该鼠已经交配，当日作为“受孕”0 d。检出的孕鼠随机分到各组，称重并编号，每组孕鼠12 ～ 15 只。1. 6. 2 药品的配制及分组试验设3 个剂量组，分别为0. 83 g / ( kg·BW) 、1. 66 g / ( kg·BW) 和3. 33 g / ( kg·BW) ，低、中、高剂量分别称取样品加蒸馏水配成83. 3 g /L、166. 0 g /L 和333. 0 g /L 浓度，各组大鼠均按10 ml / ( kg·BW) 灌胃; 对照组给予等量蒸馏水。1. 6. 3 检测方法在受孕的第7 ～ 16 天，每天经口给予灌胃受试物。受孕的0、7、12、16、20 天称重。于大鼠妊娠第20 天直接断头处死，剖腹，取出子宫连胎称重，去除子宫记录并检查吸收胎、死胎及活胎数。逐一记录活胎胎盘重、胎仔体重、身长、尾长，检查胎鼠外观有无异常。将每窝1 /2 的活胎用剥皮法制作成胎鼠骨标本，检查枕骨、脊柱骨、盆骨、四肢骨、腕骨、掌骨、趾骨、肋骨、胸骨; 将每窝另外1 /2的活胎放入Bouins 液中固定2 周，做头部( 脊髓) 、胸部、腹部内脏检查。1. 7 数据统计各种率的统计用χ2 检验，孕鼠体重、体重增重、胎盘重、卵巢重、胎鼠身长、体重、窝平均活胎数、子宫连胎重量用方差分析。胎鼠生长发育的数据以窝为单位进行统计。2 结果2. 1 对妊娠大鼠体重的影响样品各剂量组孕鼠体重、体重增重、子宫连胎重与阴性对照组比较，差异均无统计学意义( P ＞ 0. 05) ( 见表1) 。2. 2 对胚胎形成的影响样品各剂量组活胎率、死胎率、吸收胎率与阴性对照组比较，差异均无统计学意义( P ＞ 0. 05) ( 见表2) 。2. 3 对胎仔生长发育的影响样品低剂量组胎盘重低于对照组，差异有统计学意义( P ＜ 0. 05) ; 中、高剂量组无重量降低的趋势。样品各剂量组胎仔胎盘重、体重、身长、尾长与阴性对照组比较，差异均无统计学意义( P ＞ 0. 05) ( 见表3) 。2. 4 对胎仔外观形态、内脏、骨骼的影响样品各剂量组外观畸形率、内脏畸形率、骨骼畸形率与阴性对照组比较，差异均无统计学意义( P ＞0. 05) ( 见表4) 。3 讨论祖国诸多传统经典医学典籍如《本草纲目》、《本草正义》等对肉苁蓉都有记载。从20 世纪80 年代开始，国内外学者对肉苁蓉的化学成分进行了大量研究，目前已分离鉴定的肉苁蓉化学成分主要有苯乙醇苷类、环烯醚萜苷类、木质素类、氨基酸、糖类等。现代药理研究也证明肉苁蓉除具有补肾壮阳、润肠通便作用外，还具有抗疲劳、抗衰老、增强机体免疫力及增强记忆力等作用［1 － 11］。近年来，肉苁蓉应用于各类药品及保健品的开发，临床上以肉苁蓉为主药的药物制剂应用也逐渐增多。随着科学的发展、认识的加深，现代医学对毒性和不良反应范围的扩展，使得传统中药材的毒理学问题越来越得到人们的重视，肉苁蓉的传统毒性研究已取得了不少的进展。彭亮等［12］对肉苁蓉茶进行了急性毒性试验、遗传毒性试验和亚慢性毒性试验，结果证实肉苁蓉茶未显示毒性反应。本研究针对孕期妇女可能摄入肉苁蓉的特点，在孕期给予肉苁蓉进行了大鼠生殖和致畸研究。结果显示，肉苁蓉各剂量组孕鼠生长与对照组没有差异。胚胎形成及胎仔发育诸项指标中，仅低剂量组胎盘重低于对照组，且统计P 值只是略低于0. 05; 同时，中、高剂量组胎盘重无降低的趋势，与对照组比较差异也无统计学意义。因此，考虑可能是实验误差导致的，综合判断，这种差异没有生物学意义。在胎仔的致畸试验中，肉苁蓉各剂量组胎仔外观畸形率、内脏畸形率、骨骼畸形率与阴性对照组比较，差异均无统计学意义。以上结果表明在本试验剂量下，未见肉苁蓉具有明显的生殖或致畸毒性。参考文献［1］ 陈飞，陈卓，邢雪飞，等. 肉苁蓉的研究进展［J］ . 药物评价研究，2013，36 ( 6) : 469 － 475.［2］ 沈敬华，杨丽敏，张林娜，等. 五种中药提取物抗肿瘤作用的研究［J］ . 内蒙古医学院学报，2005，27 ( 4) : 300 － 302.［3］ 龚梦鹃，刘新民，王立为. 肉苁蓉对肾阳虚小鼠抗疲劳作用的研究［J］ . 中医药导报，2007，13 ( 11) : 8 － 10.［4］ 倪慧，张娟，卿德刚，等. 复方德赢vwin登录 片抗疲劳作用研究［J］ . 新疆医科大学学报，2012，35 ( 7) : 867 － 869，873.［5］ 吴波，付玉梅. 肉苁蓉总苷对亚急性衰老小鼠抗脂质过氧化作用的研究［J］ . 中国药理学通报，2005，21 ( 5) : 639.［6］ 徐辉，魏晓东，张鹏霞. 肉苁蓉多糖对衰老大鼠肝线粒体保护作用的研究［J］ . 中国老年学杂志，2008，28 ( 9) : 866 － 867.［7］ 玄国东，刘春泉. 肉苁蓉苯乙醇苷对D － 半乳糖致衰老模型小鼠的抗衰老作用研究［J］ . 中药材，2008，31 ( 9) : 1385 － 1388.［8］ 胡余明，胡怡秀，刘秀英，等. 肉苁蓉总苷对正常小鼠学习记忆功能的影响研究［J］ . 中国预防医学杂志，2007，8 ( 4) : 370 －373.［9］ 皋聪，王传社，巫冠中. 肉苁蓉总苷对血管性痴呆大鼠学习记忆的影响及机制研究［J］ . 中草药，2005，36 ( 12) : 1852 － 1855.［10］ 尹刚，龚道恺，刘帮会，等. 肉苁蓉多糖对阿尔茨海默病模型大鼠的学习记忆能力及海马神经元Bcl － 2 和Caspase － 3 表达的影响［J］ . 时珍国医国药，2013，24 ( 5) : 1091 － 1092.［11］ 张涛，柳朝阳，王建杰，等. 肉苁蓉总苷对D － 半乳糖所致衰老模型小鼠免疫功能的影响［J］ . 中国老年学杂志，2004，24( 5) : 441 － 442.［12］ 彭亮，赵鹏，李彬，等. 肉苁蓉茶的毒理学安全性实验研究［J］ . 应用预防科学，2011，17 ( 1) : 47 － 49.

［摘要］ 目的: 研究肉苁蓉对大鼠运动能力及心肌线粒体抗氧化能力的影响。方法: 7 周龄清洁级雄性Wistar 大鼠120只随机分为静止ig 水组( C 组) 、静止ig 肉苁蓉组( M 组) ，运动ig 水组( T 组) 、运动ig 肉苁蓉1 ～ 4 组( TM1 ～ 4 组) 。每天ig 1次。TM1 ～ 4 组ig 剂量依次为6. 01，9. 97，13. 94，17. 90 g·kg － 1，ig 体积为5 mL·kg － 1 ，C，T 2 组ig 等量蒸馏水。4 周力竭游泳训练后，测定体重、力竭游泳时间及心肌线粒体中丙二醛( MDA) 、超氧化物歧化酶( SOD) 、谷胱甘肽过氧化物酶( GSH-Px) 含量等与疲劳作用相关的指标。结果: TM 各组体重大于T 组( P ＜ 0. 05) ，力竭游泳时间均长于T 组( P ＜ 0. 01) ，TM 各组间无显著性差异。力竭游泳导致大鼠心肌线粒体中MDA 含量显著升高，T 组及TM 1 ～ 4 组分别升高至( 5. 96 ± 0. 71) ，( 5. 05 ± 0. 36) ，( 5. 05 ± 0. 92) ，( 5. 06 ± 0. 16) ，( 5. 05 ± 0. 25) μmol·L － 1 ，且TM 各组明显低于T 组( P ＜ 0. 01) ; SOD，GSH-Px 活性显著下降( T组及T1 ～ T4 组SOD 分别下降至( 209. 7 ± 817. 21) ，( 249. 85 ± 10. 93) ，( 253. 98 ± 9. 64) ，( 259. 311 ± 4. 57) ，( 259. 461 ± 5. 73)U·mL － 1 ，GSH-Px 分别下降至( 57. 95 ± 11. 95) ，( 68. 58 ± 6. 01) ，( 70. 63 ± 5. 83) ，( 70. 78 ± 7. 04) ，( 72. 56 ± 4. 34) U·mg － 1 ，且TM 各组明显高于T 组( P ＜ 0. 01) ; TM 各组间各项指标无显著性差异。结论: 肉苁蓉具有提高大鼠运动能力和心肌线粒体抗氧化酶活性的作用，从而减轻自由基对心肌线粒体膜和肌浆网膜造成损伤，抑制大强度力竭运动造成的心肌线粒体氧化损伤，延缓疲劳发生; 有显著作用的剂量为6. 01 g·kg － 1。［关键词］ 肉苁蓉; 运动能力; 抗自由基; 心肌; 线粒体肉苁蓉为列当科肉苁蓉属多年寄生草本植物。主产于我国内蒙、新疆等省( 区) 及伊朗、蒙古、印度等国［1-3］。因其生长在荒漠中，具有极好的药用价值，素有“沙漠人参”之美誉。李时珍曰: “此物补而不峻，故有从容之兮”。其味甘、咸、性温。有补肾阳、益精血、润燥滑肠、抗疲劳之功效。在我国，其药用历史有1 800年之久，始载于《神农本草经》，列为上品。历代药书均有记载。据统计，在历代增力中药处方中肉苁蓉的出现率占第一位，而在抗老防衰类方剂中仅次于人参居第二位［4］。目前已知肉苁蓉中化学成分主要为肉苁蓉总苷( GCs，主要活性成分为苯乙醇苷类) ; 烃类; 生物碱; 黄酮类; 氨基酸;环烯醚萜类; D-甘露醇、β-谷甾醇; 多糖及无机微量元素等［5-12］。当前主要应用其补肾壮阳及润肠通便之功效，而针对缓解运动性疲劳功效的应用相对较少。本文拟通过对大鼠ig 不同剂量的肉苁蓉提取物以观察其对大鼠运动能力以及心肌线粒体抗氧化能力的影响，探索其清除大鼠力竭运动后心肌线粒体自由基代谢产物，减轻自由基对心肌线粒体的损伤，消除疲劳，增强运动能力的作用，从而为肉苁蓉更好的应用于运动营养食品领域提供理论依据。1 材料1. 1 动物清洁级雄性Wistar 大鼠120 只，7 周龄，平均体重( 256. 9 ± 15. 2 ) g，北京大学医学部实验动物科学部提供，合格证编号SCXK ( 京) 2006-0008。在整个实验过程中，实验室内温度保持在( 22 ± 2) ℃，相对湿度55% ～ 75% ，光照时间随自然变化。所有实验大鼠均以基础饲料( 北京大学医学部实验动物科学部提供) 和蒸馏水常规饲养，自由饮食。实验时间为35 d，正式训练时间为4 周。1. 2 用药肉苁蓉Cistanche deserticola Y． C． Ma，产地内蒙，北京同仁堂购得，并经天津中瑞药业有限公司高占友高级工程师鉴定。提取方法: 将干燥带鳞叶的肉苁蓉粉碎成粗粉，用60% 乙醇水浴提取3次，每次2 h。合并提取液冷藏24 h 过滤，滤液减压回收乙醇，浓缩成浸膏( 2 g 生药/1 g 浸膏) ，备用［13］。1. 3 试剂丙二醛( MDA) ，采用比色法测定; 超氧化物歧化酶( SOD) ，采用黄嘌呤氧化酶法测定; 谷胱甘肽过氧化物酶( GSH-Px) 采用化学比色法测定，均采用南京建成生物工程研究所提供试剂盒，并严格按照使用说明操作。2 方法2. 1 动物分组为使实验大鼠适应新环境，首先将购回的大鼠分笼适应性饲养7 d，适应期的第4 天下午以随机分组法，分为7 组，即静止ig ( 灌胃) 水组( C 组) 、静止ig 肉苁蓉组( M 组6. 01 g·kg － 1 ) ，运动ig 水组( T 组) 、运动ig 肉苁蓉1 ～ 4 组( TM 1 ～ 4组) ，每组15 只( 剔除不符合实验要求的大鼠) 。2. 2 训练及测试方案T 组及TM 各组大鼠均采用游泳运动。采用长100 cm，宽50 cm，高60 cm 的玻璃泳槽作为大鼠游泳训练装置，水深50 cm，水温( 31 ± 2) ℃，为防止大鼠在水面漂浮不动，特在游泳箱底部放置佳宝“AP1500”型水泵形成流动水。训练4 周，第1 周不负重，第2 周负2% 体重，第3 周负4% 体重，第4 周负5% 体重，每次游泳训练至力竭。训练期间，采用专业灌胃器，每天ig 1 次。TM 1 ～ 4组ig 剂量依次为6. 01，9. 97，13. 94，17. 90 g·kg － 1 的肉苁蓉提取物，ig 体积为5 mL·kg － 1 ，C，T 2 组ig 等量蒸馏水。大鼠的ig 剂量是根据人体用量综合确定。据《全国中草药汇编》( 上册) ［14］查得人体的肉苁蓉用量为2 ～ 6 钱( 约为66. 78 ～ 198. 9 g) ，根据人与实验动物药物剂量的换算方法，计算得出大鼠的肉苁蓉高低剂量区间为: 6. 01 ～ 17. 90 g·kg － 1。力竭标准以动物下沉后10 s 不露出水面为度。处死前的最后1 次为无负重力竭游泳训练，力竭判断标准同上，记录达力竭的游泳时间。测定大鼠开始游泳至力竭所用时间为大鼠力竭运动能力［15］，运动后即处死。处死时采用戊巴比妥钠65 mg·kg － 1 麻醉，冰盘暴露腹腔，迅速取心室肌组织，加入分离介质后在冰浴中剪碎，匀浆器匀浆后置离心管，据Vaghy 报道方法在0 ～4 ℃下采用差速离心分离线粒体［16］。2. 3 统计学方法采用SPSS 12 软件对所有数据进行处理，数据用珋x ± s 表示，显著性检验为t 检验。P ＜ 0． 05 有统计学意义。3 结果3. 1 体重及运动能力各组大鼠体重均呈上升趋势。其中C 组大鼠体重最大; M 组与C 组接近，但无显著性差异; TM 各组间接近，但无显著性差异，且均少于M 组( P ＜ 0. 05 ) ，大于T 组( P ＜ 0. 05) 。TM 各组力竭游泳时间均长于T 组29. 45 min 以上( P ＜ 0. 01) ; 而TM 各组间无显著性差异。见表1。3. 2 心肌线粒体MDA［17］，GSH-Px［18］，SOD［17］ 含量力竭运动引起大鼠心肌线粒体MDA 含量升高，T组高于C 组( P ＜ 0. 01 ) ; TM 各组高于M 组( P ＜0. 05) ; TM 各组均低于T 组( P ＜ 0. 01) 但仍高于C组; GSH-Px 含量下降，T 组低于C 组( P ＜ 0. 01) ，TM各组低于M 组( P ＜ 0. 05) ; TM 各组高于T 组( P ＜0. 01) ，但仍低于C 组; SOD 含量下降，T 组低于C 组( P ＜ 0. 01) ，TM 各组低于M 组( P ＜ 0. 05) ; TM 各组高于T 组( P ＜ 0. 01) ，但仍低于C 组; TM 各组间各项指标无显著性差异。见表2。4 讨论4. 1 肉苁蓉对大鼠体重及力竭运动能力的影响体重方面，在整个实验过程中，M 组呈逐渐增长的趋势，与C 组无显著性差异，说明补充肉苁蓉不会对大鼠的生长发育产生不良影响。T 组小于C 组( P ＜ 0. 01) ，TM 各组小于M 组( P ＜ 0. 05) ，说明负重力竭性游泳对大鼠的生长发育产生了一定的影响。TM 各组大于T 组( P ＜ 0. 05) ，说明补充肉苁蓉对于大鼠负重力竭性游泳过程中的生理机能调节和促进生长发育具有一定作用。而TM 各组间未出现显著性差异，则说明补充肉苁蓉虽然对负重力竭性游泳过程中大鼠的生理机能调节和生长发育具有一定功效，但根据人体用量综合确定服用的不同剂量之间无显著差异。TM 各组未出现疲劳症状; T 组只有部分出现一定疲劳症状，但未出现体形瘦弱，皮毛杂乱无光泽甚至脱落等症状说明递增负荷的训练未对大鼠造成过度疲劳。力竭运动能力方面，力竭时间是机体的抗应激能力、抗疲劳能力等多种作用的综合体现，是衡量机体运动能力的重要直接指标［19］。TM 各组比T 组延长了29. 45 ～ 32. 43 min( P ＜ 0. 01) ，而TM 各组间无显著性差异。说明服用肉苁蓉可以有效延长大鼠力竭游泳时间，缓解运动性疲劳，但根据人体用量综合确定服用的不同剂量之间无显著差异。肉苁蓉延缓运动性疲劳的机制可能为以下几方面: 肉苁蓉可以提高抗氧化酶活性，从而提高大鼠运动时自由基的消除［20-21］; 肉苁蓉中含有多种多酚类、苷类物质，其直接具有消除自由基的功能［20-22］;肉苁蓉具有补肾壮阳作用，可以改善大负荷运动造成的下丘脑-垂体-性腺轴机能，促进大鼠睾酮的分泌，有利于机体合成代谢，具有抗疲劳功效［23］; 肉苁蓉中含有多种有效成分促进机体能量代谢，起到抗疲劳作用［24-26］。4. 2 肉苁蓉对心肌线粒体的抗氧化能力的影响在正常情况下体内自由基的产生和清除处于一个动态平衡状态［27］。力竭运动时，机体耗氧量增加1 020倍，而肌纤维的耗氧量是安静时的100 倍，其中大部分的氧气在心肌线粒体呼吸链中被氧化成水，但有2% ～ 5% 的氧气被还原成自由基［28］。自由基与70 多种疾病有关，也是诱发疲劳和致使疲劳不易恢复的原因之一。骨骼肌特别是心肌组织有较高的基础代谢率，且心肌抵御氧自由基的能力较差，对过氧化作用具有高敏感性，容易受到自由基的攻击产生自由基损伤。组织线粒体中MDA 是细胞脂质过氧化的一种主产物，生物膜脂质不饱和脂肪酸极易受到自由基的攻击而发生过氧化，所以组织线粒体MDA 含量是目前公认的衡量机体自由基代谢的敏感指标［29］。其生成量不仅反映氧自由基生成与否，而且还反映脂质过氧化程度，因而测定MDA 含量可推测脂质过氧化程度。机体内存在清除自由基、减轻其危害的主要物质是抗氧化酶，其中SOD 是处于自由基防御前沿的抗氧化酶之一［30］。SOD 是需氧生物体内数千种酶中以氧自由基为底物的唯一酶，该酶对底物显示很强的专一性，而且催化效能很高。其通过催化超氧阴离子形成过氧化氢而清除超氧阴离子，保护机体免受损伤，同时在一定范围内，自由基代谢增强时，SOD 会代偿性增加。另外，SOD 使超氧阴离子成为细胞内自由基的排污槽，Koppeno［31］ 以热水学理论支持了“排污槽”的设想，并研究发现SOD 清除超氧阴离子自由基，正好适合超氧阴离子自由基充当为电子转移的自由基“排污槽”。故SOD 活性的高低是机体抗氧化能力强弱的标志。GSH-Px 是机体广泛存在的一种重要的抗氧化酶，主要存在于细胞液与线粒体内，与SOD，CAT 一同构成了对抗机体活性氧的三道防线，可催化GSH对过氧化氢的还原反应，从而起到保护细胞膜结构和功能完整的作用［32］。从实验结果分析: T 组与C 组相比较: 大鼠心肌线粒体中MDA 含量显著升高( P ＜ 0. 05 ) ，SOD，GSH-Px 含量显著降低( P ＜ 0. 01) ; TM 各组与M 组相比较: 大鼠心肌线粒体中MDA 含量显著升高( P ＜ 0. 01) ，SOD，GSH-Px 活力显著降低( P ＜0. 05) 。说明肉苁蓉一方面通过改善机体供氧能力，改善运动机体微循环，增强机体免疫力，使SOD增加，活力增强，降低心肌的过氧化脂质( LPO) 含量; 另一方面可以通过减少机体超氧阴离子自由基的生成，而使SOD 的消耗相应降低。两方面的共同作用能够调节机体维持SOD 的动态平衡，非常显著提高大鼠力竭运动心肌组织SOD 活性，对清除机体自由基、减轻自由基对线粒体膜和肌浆网膜造成损伤，以及减轻对酶蛋白的氧化损伤起到积极作用，从而延缓疲劳发生。TM 各组间MDA 含量，SOD，GSH-Px 活力差别较小，无显著性差异。说明肉苁蓉具有改善大鼠因大强度力竭运动引起的自由基代谢紊乱、抑制心肌线粒体氧化损伤、缓解疲劳的作用; 有显著作用的剂量为6. 01 g·kg － 1 ，超过此剂量的肉苁蓉并不能进一步显著提高大鼠运动能力和抗自由基的能力。［参考文献］［1 ］ 程齐来，陈君． 肉苁蓉属植物研究概况［J］． 中药材，2004，27( 10) : 789．［2 ］ 罗廷彬，陈亚宁，任崴，等． 肉苁蓉研究进展［J］． 干旱区研究，2002，19( 4) : 56．［3 ］ 张勇，吴焕，王顺年，等． 中药肉苁蓉商品药材和原植物资源调查［J］． 植物资源与环境，1993，2( 1) : 10．［4 ］ 孟庆艳，谢枰飞，罗锋，等． 德赢vwin登录 中苯乙醇苷类成分的提取工艺优选［J］． 中国实验方剂学杂志，2011，17( 2) : 28．［5 ］ 朱咏华，罗泽民． 肉苁蓉的研究进展及前景分析［J］．湖南林业科技，2000，27( 4) : 19．［6 ］ 李丽，时东方，桂语歌，等． 肉苁蓉中苯乙醇苷化合物的抗氧化活性研究［J］安徽农业科学，2007，37( 32) : 15835．［7 ］ Hirmi Kobayashi，Hiroko Karasawa，Toshio Miyase，etal． Studies on the constituents cistanchis herba． Ⅲ．isolation and structures of new phenylpropanoidglyeosides，cistanosides A and B［J］． Chem Pharm Bull，1984，32( 10) : 3009．［8 ］ Hiromi Kobayashi，Hiroko Karasawa，Toshio Miyase，etal，Studies on the constituents cistanchis herba． Ⅳ．isolation and struetures of two new phenylpropanoidglycosides，cistano sides C and D［J］． Chem PharmBull，1 984，32( 10) : 3880．［9 ］ Hiromi Kobayashi，Hiroko Karasawa，Toshio Miyase，etal． Studies on the constiuents cistanchis herba． Ⅴ．isolation and struetures of two new phenylpropanoidglyeosides，cistanoside E and F［J］． Chem Pharm Bull，1985，33( 4) : 1452．［10］ Hiromi Kobayashi，Hiroko Oguchi，Nonuo Takizawa，etal． New phenylethanoid glyeosides from Cistanosidetubulosa( SCHRENK) Hook． f［J］． Chem Pharm Bull，1987，35( 8) : 3309．［11］ 徐朝晖，杨峻山，吕瑞绵，等． 肉苁蓉化学成分的研究［J］． 中草药，1999，30( 4) : 244．［12］ 罗尚夙，顾莹，刘永和． 肉苁蓉化学成分的研究［J］．中国中药杂志，1986，11( 11) : 681．［13］ 薛德钧，刘能俊，胡福泉，等． 肉苁蓉提取物对人体抗衰老作用研究［J］． 中国现代应用药学，1997，14( 5) : 17．［14］ 全国中草药汇编编写组． 全国中草约汇编［M］． 北京: 人民卫生出版社，388．［15］ Voces J． Effects of administration of the standardizedPanax ginseng extract G115 on hepatie antioxidantfunction after exhaustive exercise［J］． Comp BiochemPhysiol C Pharmacol Toxicol Endocrinol， 1999，123( 2) : 175.［16］ Vághy P L，Johnson J D，Matlib M A，et al． Selectiveinhibition of Na + -induced Ca2 + release from heartmitochondria by diltiazem and certain other Ca2 +antagonist drugs ［J］． J Biol Chem， 1982，257( 11) : 6000．［17］ Dekkers J C． The role of antioxidant vitamins andenzymes in the prevention of exercise-induced muscledamage［J］． Sports Med，1996，21( 3) : 213．［18］ Lawrence C H． Effect of Ginseng Saponins on Exerciseperformance in non-trained rats ［J］． Planta Med，1998，64( 2) : 130．［19］ 王丛笑，周军． 对中药抗运动性疲劳研究中动物模型的一些思考［J］． 中国实验方剂学杂志，2009，15( 3) : 83．［20］ 王晓雯，李琳琳，木胡牙提，等． 肉苁蓉总甙对小鼠组织的抗氧化作用［J］． 中国中药杂志，1998，23( 9) : 554．［21］ 王晓雯，蒋晓燕，邬利娅·伊明，等． 肉苁蓉总苷体外清除自由基及对OH·引发的DNA 损伤的保护作用［J］． 中国药学杂志，2001，36( 1) : 29．［22］ 周海涛，曹建民，林强． 红景天对大鼠力竭游泳能力和心肌线粒体的抗氧化能力的影响［J］． 沈阳体育学院学报，2010，10: 57．［23］ 常波． 中医药与运动性疲劳［J］． 西安体育学院学报，2005，5: 64．［24］ 王耀光． 小鼠力竭运动后GSH 变化及MDA、ATP 与肌肉机能恢复关系的研究［J］． 山东体育学院学报，1997，13( 3) : 35．［25］ 李素琴． 运动训练与糖与蛋白质营养补充［J］． 南京体育学院学报，2001，19( 2) : 18．［26］ 冯春． 中长跑运动员运动性血红蛋白下降和运动性贫血的诊断及其营养恢复的探讨［J］． 运动医疗站，2004( 11) : 56．［27］ Husain K，Somani S M． Response of cardiac antioxidantsystem to alcohol and exercise training in the rat［J］．Alcohol，1997，14( 3) : 301.［28］ Urso M L，Clarkson P M． Oxidative stress，exercise andantioxidant supplementation ［J］． Toxicology， 2003;189: 41.［29］ Chen P J，Hirata F． The effects of long-term training atvarious loads on immunity and neuroendocrine responsesin rats［J］． J NIFS KJ，1998，9: 19．［30］ 孙存普，张建中，段绍瑾，等． 自由基生物学导论［M］． 合肥: 中国科学技术大学出版社，1999: 6.［31］ 刘俊，秦志峰，刘运莲，等． 运动训练对小鼠肌肉组织自由基损伤的影响［J］． 南华大学学报: 医学版，2003，31 ( 1) : 22.［32］ Dillard C J． Effects of exercise vitamin E and ozone onpulmonary function and lipid peroxidation［J］． J ApplPhys，1978，45: 927.

　［摘　要］　目的：探讨肉苁蓉提取物对败血症休克大鼠胸腺细胞凋亡的影响及其可能机制。方法：盲肠结扎穿孔术（CLP）造成大鼠败血症休克。防治组术前14d 开始给药（1∙25g／kg）‚分别于术后12h、24h 取材。流式细胞仪检测细胞凋亡率和线粒体膜电位‚分光光度法测定细胞线粒体ATP 酶活力。结果预先给予肉苁蓉提取物的大鼠‚行CLP 术后12、24h 胸腺细胞凋亡率均低于模型组（P＜0∙01）‚线粒体膜电位和ATP 酶活力则显著上升（P＜0∙01）。结论：肉苁蓉提取物对败血症休克时胸腺细胞有保护作用‚其机制可能是提高ATP 酶活力‚维持了细胞线粒体膜电位。［关键词］　肉苁蓉；脓毒症；胸腺；线粒体败血症休克是临床上常见的危重病例‚病死率居高不下。在其病理损伤中‚胸腺细胞凋亡的作用日益受到重视。胸腺中T－淋巴细胞的过早异常凋亡‚是引起机体免疫抑制的主要原因之一。研究表明‚肉苁蓉能有效的提高机体免疫功能和应激能力‚清除自由基反应‚对细胞具有保护作用［1］。本实验拟观察了肉苁蓉对CLP 诱导的败血症动物模型中胸腺细胞凋亡及细胞线粒体膜电位、ATP 酶的影响。材　料　和　方　法1　材料1∙1　动物　健康雄性Wistar 大鼠‚由华中科技大学同济医学院动物中心提供‚体重180－200g。1∙2　试剂与仪器　Annexin－Ⅴ及PI 双标试剂盒购自Immunotech（France）公司‚ATP 酶活性测定试剂盒购自南京建成生物研究所‚Rhodamine123为Sigma 公司产品‚其他试剂均为国产分析纯。流式细胞仪型号：EPICS（Beckman Coulter 公司）。2　药物的提取　　生药肉苁蓉（Cistanches deserticola Y．C．Ma）水煎3次‚煎液合并‚浓缩至适当体积‚加入一定量的乙醇‚静置24h 后过滤‚滤液放至无乙醇味。用前加蒸馏水配成所需浓度。3　模型与动物分组　　动物按体重随机分3组（n＝28）：假手术组＋生理盐水‚CLP 术＋生理盐水‚CLP 术＋肉苁蓉提取物（CDYC）。均于术前14d 开始灌胃‚每天1∙25g／kg。CLP 诱导败血症动物模型的建立‚参照文献［2］ 进行。各组动物分别于术后12h 和24h 处死‚处死后行病理解剖学检查‚并留取内脏备用。4　方法4∙1　凋亡细胞百分率测定　在不同时点处死动物后‚迅速分离完整胸腺‚取其中一半制作胸腺细胞悬液‚光镜下调整细胞浓度至（2－5）×106cells／L。应用Annexin－Ⅴ及PI 双标试剂盒检测‚流式细胞仪分析‚检测10000个细胞‚计数位于凋亡区内的细胞数量‚得到凋亡细胞的百分率。4∙2　DNA 断裂百分率　取300μL 胸腺细胞悬液与等量低张细胞膜裂解缓冲液混匀‚致细胞膜破裂‚13000r／min 离心10min‚将上清液倒入另一支试管‚将二苯胺法略加变动后测定［3］。计算DNA 断裂百分率的公式：［上清液DNA 含量／（上清液DNA 含量＋沉淀DNA 含量）］×100％。4∙3　线粒体膜电位测定　取胸腺细胞2×106个‚加入Rhodamine123染液（终浓度10mg／L）‚避光于37℃染色30min‚立即用流式细胞仪分析。4∙4　线粒体ATP 酶活性测定　将另一半胸腺组织‚加入匀浆介质用玻璃匀浆器手工匀浆‚制成10％的组织匀浆。差速离心得到乳白色胸腺细胞线粒体悬液。按说明书的要求测定Na＋ －K＋ －ATP 酶和Ca2＋－ATP 酶的活性及蛋白含量。4∙5　大鼠在进行CLP 术后不同时点‚断颈处死‚取胸腺‚固定‚常规石蜡切片‚HE 染色‚光镜观察并拍照。5　统计学处理　　实验数据用﹣x±s 表示‚采用SPSS10∙0分析软件‚计量资料用方差分析。结　　果1　染色片观察　　CLP 后12h 和假手术各组的胸腺无明显病理改变‚胸腺细胞密集分布于胸腺皮质‚细胞核呈圆形‚深蓝色着染‚胞质少；过渡到髓质后‚逐渐以核较大而着色浅的上皮网状细胞为主。生理盐水组在CLP术后24h 动物胸腺皮质区细胞成分稀疏‚淋巴细胞减少‚巨噬细胞增多‚局部可见灶状坏死及散在的细胞碎片。胸腺髓质淋巴细胞无明显减少‚细胞分布较皮质区密集‚形成所谓“皮髓倒置”现象。CLP 术后24h＋肉苁蓉提取物组动物胸腺细胞碎片明显减少‚“皮髓倒置”现象也有显著改善。2　肉苁蓉对败血症大鼠胸腺细胞凋亡率的影响　　染色后将细胞分为3个亚群：Annexin－Ⅴ－／PI－亚群为活细胞；Annexin－Ⅴ＋／PI－亚群为凋亡细胞；Annexin－Ⅴ＋／PI＋亚群为坏死细胞（图1）。流式细胞仪检测结果表明‚与假手术组相比‚CLP 术后12h胸腺细胞凋亡即显著增加‚24h 更加明显‚而肉苁蓉提取物可有效降低凋亡率（表1）。图1　流式细胞仪检测败血症大鼠胸腺细胞凋亡率3　肉苁蓉对败血症大鼠胸腺细胞DNA 断裂百分率的影响　　DNA 断裂百分率的发生情况与流式细胞仪检测的结果基本一致（表1）。4　肉苁蓉对败血症大鼠胸腺细胞线粒体膜电位的改变　　细胞经Rhodamine123染色‚流式细胞仪检测‚固定一标尺可分为两群细胞：荧光强度低（△Ψmlow）的和荧光强度高（△Ψmhigh）的细胞。图1表明CLP 术后12h 荧光强度低的细胞显著增多‚由假手术（2∙02±0∙77）％增加到（16∙66±1∙48）％‚给药组的线粒体膜电位为（10∙32±1∙54）％；24h 组由（5∙60±0∙63）％增加到（32∙46±1∙40）％‚给药组为（20∙40±0∙44）％。5　肉苁蓉对败血症大鼠胸腺细胞线粒体ATP 酶活性的改变　　败血症大鼠胸腺细胞线粒体Na＋－K＋－ATP 酶和Ca2＋－ATP 酶的活性与sham 组相比均有显著下降（P＜0∙01）。讨　　论　　线粒体是细胞内能量合成的主要场所‚对维持细胞正常的生理功能起着重要作用。细胞缺血缺氧‚加以内毒素的直接攻击‚首先受损的是线粒体。近年来细胞凋亡机制研究的一重大突破就是对线粒体重要性的认识‚大量实验证实许多因素诱导的细胞凋亡都存在线粒体功能紊乱［4］。线粒体的功能障碍在整个细胞损伤过程中起重要作用‚寻求保护细胞器（包括溶酶体、线粒体等）的药物‚可望对“难治性休克”的防治开辟一条新途径。实验表明［5］‚内毒素中毒性休克能引起线粒体Ca2＋、Mg2＋含量改变‚功能受损。正常情况下‚Na＋－K＋－ATP 酶具有精确平衡细胞内外Na＋、K＋浓度的作用；Ca2＋－ATP 酶则是一种维持细胞内外Ca2＋浓度平衡的Ca2＋泵‚它同Na＋／Ca2＋交换共同维持细胞内Ca2＋稳态。败血症休克时‚细胞内线粒体受累而引起Na＋－K＋－ATP 酶活性下降‚可导致细胞内Na＋滞留‚使细胞水肿。而Ca2＋－ATP 酶活性下降可严重影响膜内外Ca2＋的转运‚导致细胞内Ca2＋超载‚损害线粒体结构、功能‚促进自由基生成。本研究提示‚败血症休克后胸腺细胞ATP 酶活性显著下降（P＜0∙01）。预先使用肉苁蓉防治后明显提高各组Na＋－K＋－ATP 酶和Ca2＋－ATP 酶活性‚且同时间点的流式细胞仪检测胸腺细胞凋亡率、DNA 断裂百分率有明显降低‚提示保护细胞线粒体可能是肉苁蓉保护败血症休克胸腺细胞的机制之一。　　罗丹明123是一种亲脂性阳离子荧光染料‚其荧光信号主要集中于线粒体‚荧光强度的变化反映了线粒体膜电位的变化。在大多数情况下‚线粒体膜电位的降低［6］‚表明线粒体膜通透性转运孔（mitochondrialpermeability transition pore‚MPTP）的开放。MPTP 的开放导致线粒体释放caspase 活化物‚活化caspase‚引起细胞凋亡。本实验研究发现肉苁蓉提取物显著地抑制CLP 术后12h 和24h 胸腺细胞线粒体膜电位的下降‚因而保持线粒体膜电位可能是肉苁蓉降低胸腺细胞凋亡率的机制之一。［参　考　文　献］［1］　顾海欧‚阴　健．药理作用［A］．见：阴　健‚郭力弓‚主编．中药现代研究及临床应用［M］．第1版．北京：学菀出版社‚1993．298－230．［2］ 　Wichteman KA‚Baue AE‚Chaudry IH．Sepsis and septicshock：A review of laboratory models and a proposal ［J］．JSurg Res‚1980‚29（2）：189－201．［3］　何维敬‚李　伟‚毕　正‚等．检测白血病细胞凋亡的二苯胺法［J］．上海医学检验杂志‚2001‚16（3）：160．［4］　Searlett JL‚Sheard PW‚Hughes G‚et al．Changes in mitochondrialmembrane potential during staurosporine inducedapoptosis in Jurkat cells［J］．FEBS Lett‚2000‚475（3）：267－272．［5］　黄启福‚朱陵群‚许文忠‚等．大鼠内毒素休克肝线粒体含量变化与线粒体损伤［J］．中国病理生理杂志‚1994‚10（5）：507－510．［6］ 　Green DR‚Reed JC．Mitochondria and apoptosis ［J］．Science‚1998‚281（28）：1309－1312