夏美茹，张 青，孙志惠，朱效兵（河套学院农学系，内蒙古 巴彦淖尔 015000）Xia Meiru,Zhang Qing,Sun Zhihui,Zhu Xiaobing(Department of Agronomy,Hetao College,Bayannur 015000,China)摘要：内苁蓉具有较高的营养和保健功能，本文旨在分类总结内苁蓉功能国子的提取及其测定方法，为肉苁蓉功能因子的提取、测定及相关领域的进一步研究提供参考。关键词：肉苁蓉；功能国子；提取测定方法Abstract:Cistanche deserticola has high mutritional and healih functions.The purpose of this paper is to classify and summarize the extraction and determination methods of functional factors of Cistanche deserticola,and provide reference for further research in related fields.key words:Cistanche deserticola:Functional factor:Estraction and determination method中图分类号：5567.23＋9肉苁蓉，多年生草本列当科肉苁蓉属植物，多寄生于藜科梭梭属植物的根部”，生长于半荒漠和荒漠地区，主产于内蒙古自治区（阿拉善盟、巴彦淖尔市）、甘肃省、新疆维吾尔自治区等地。在历代中医补肾壮阳类药物中，使用肉苁蓉的频度很高，因为其功效显著，长于沙漠，被美誉为“沙漠人参”，2018年被列为药食同源类植物。资料显示，肉苁蓉有益肾壮阳門、润肠通便、护肝回、调节免疫力网、抗肿瘤、抗氧化、抗疲劳、抗福射，保护神经系统与改善健忘等作用，遂引起了国内外众多学者的探究。本文综合有关肉苁蓉功能因子检测技术文献，旨在为肉苁蓉功能因子测定方法及提取工艺提供参考。1 肉苁蓉的功能因子从20世纪80年代以来，国内外学者对肉苁蓉的功能因子进行了大量的研究吗，并取得了极大的进展。研究者们对肉苁蓉进行了分析，从中分离得到28种苯乙醇苷类成分（见表1）；周玉碧等叫采用气相-质谱联用法分析了肉苁蓉脂溶性提取物中的化学成分，共鉴定了73种化合物。另外，文献报道肉苁蓉中还检出多糖类、黄酮类、环烯醚萜甙、木脂素类、生物碱、氨基酸与微量元素等化学成分。2 肉苁蓉主要功能因子的提取及测定2.1 多糖类多糖是肉苁蓉的主要功能因子之一，其具有抗衰老、抗肿瘤、调节免疫力等作用叫。连乐等叫研究得出肉苁蓉多糖超声波提取工艺；料水比1：25，提取温度60℃，提取时间75min，含量为18.90％。肖星辉等探究得出水浸提法提取肉苁蓉多糖：料液甲醇体积分数55.14％，液料比46.39．提取时间38.50min。刘丽莎凹等研究肉苁蓉苯乙醇苷水溶媒提取最佳工艺：原料粒径＞40目，料液比1：15.80℃下浸提2h，提取率为（175.9±1.1）mgg刘朋龙等叫应用AB-8型大孔树脂分离纯化肉苁蓉苯乙醇苷：上样液浓度1.2mgmL，上样流速1.5BVh，吸附时间1.5h：解析时间4h，体积分数40％的乙醇洗脱，洗脱流速1.5BVh。装文静叫研究了高剪切均质化提取法纯化肉苁蓉苯乙醇苷：乙醇浓度50％，提取温度70℃，高剪切均质乳化机转速16000rmin，高剪切均质乳化2min，料液比1：9．提取1次。余逸凡等优化了大孔吸附树脂分离纯化荒漠肉苁蓉总苷的工艺条件。结果表明，D-101为纯化的较佳树脂，上样液浓度2.0mgmL，流速2mLmin洗脱液体积6BV为较佳吸附条件，该条件下纯化后总苷含量为纯化前的28.85倍。2.3.2 松果菊普周海燕等叫采用HPLC法，以C，为色谱柱，甲醇-0.1％甲酸为流动相。梯度洗脱，体积流量1.0mL-min，柱温35℃，检测波长330nm。松果菊苷在0.0255～0.6120mgmL范围内线性关系良好，平均回收率为100.59％。初侨等采用闪式技术提取肉苁蓉中松果菊管：60％乙醇，闪提转速5500rmin，提取90s，料液比1：30（g：mL），松果菊苷的提取率为8.87mgg。王怀煦探究采用大孔树脂纯化肉苁蓉中松果菊苷的工艺：大孔树脂运用HPD100,6BV的50％乙醇洗脱，气平均收率为91.4％。2.3.3 毛蕊花糖苷初侨等采用闪式技术提取肉苁蓉中毛蕊花糖苷，最佳提取工艺同初侨的松果菊普提取工艺，毛蕊花糖苷的提取率为6.60mgg＇、孔征等”优化提取肉苁蓉毛蕊花糖苷最优工艺为乙醇浓度63％、液料比8：1（mL：g）、浸泡2h、提取1.5h、提取2次。李明国”建立了肉苁蓉中毛蕊花糖苷的高效毛细管电泳测定方法：电压8kV，运行缓冲溶液30mmol-L硼酸-硼砂（pH＝9.0），室温，检测波长334nm。毛蕊花糖苷的浓度在0.015～0.375mgmL范围内线性关系良好，样品回收率为99.26％。孔征等州测定肉苁蓉毛蕊花糖苷含量，采用高效液相色谱法：色谱柱为Inertsil-ODS-3V，甲醇-0.2％甲酸水溶液（40：60，V：V）作为流动相，进样量10μL．流速1mLmin，柱温30℃，检测波长330mm。毛蕊花糖苷检测质量浓度的线性范围为18.65～932.4μgmL。2.3.4 红景天苷李明国等“建立高效毛细管电泳色谱法测定肉苁蓉中红景天苷含量的方法。采用毛细管区带电泳（CZE）：运行缓冲液30mmol-L＊硼酸-硼砂缓冲液（pH＝9.00），电压8kV，柱温25℃，波长278mm，红景天苷含量在0.007～0.140mgmL的浓度范围内线性关系良好。2.4 多酚类物质张春玲研究建立了紫外-可见分光光度法测定肉苁蓉中多酚类物质（以没食子酸计）含量的方法：70％的乙醇，料液比为1：20、60℃，提取30min，肉苁蓉中多酚类物质的提取效果最好，平均质量百分比为0.2422％。楽朝霞优化大孔树脂纯化肉苁蓉多酚提取物：适用HPD-400大孔树脂，上样溶液60mL．6mgmL，流速2mLmin＇；采用60％的乙醇180mL、1mL-min流速洗脱。3 结语肉苁蓉主要功能因子的提取及测定方法较多，笔者对常用方法进行了归纳总结，选出每种测定方法的最优工艺条件供读者参考。

摘要目的：为进一步开发利用肉苁蓉提供参考。方法：以“肉苁蓉”“产地加工”“采收加工”“炮制方法”“Cistanche deserticola”“Processing in production place”“Harvesting processing”“Processing methods”等为关键词，在中国知网、万方数据、维普网、PubMed、SpringerLink 等数据库中组合查询2008 年1 月－2018 年9 月发表的相关文献，对肉苁蓉产地采收加工及炮制方法进行论述。结果与结论：共检索到相关文献112 篇，其中有效文献33 篇。目前肉苁蓉多采用先蒸制后晾晒的产地加工方法，而利用冷冻干燥技术、气体射流冲击技术、超声真空干燥技术等干燥新技术，可提高干燥效率，提升药材品质；同时，不同的采收期、蒸制时间、初加工工艺等都会影响肉苁蓉的品质；肉苁蓉的炮制主要以酒制为主，酒的酒精度和种类对肉苁蓉品质的影响极大，常用的辅料酒有米酒、黄酒和白酒，而以米酒炮制的肉苁蓉品质最佳，黄酒次之。目前，肉苁蓉的产地加工研究多集中在蒸制对有效成分的变化上，炮制研究多集中在酒制对4种苯乙醇苷类成分含量的变化上，今后应加强炮制品活性成分的转化及作用机制研究。关键词肉苁蓉；产地加工；采收加工；炮制方法肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉（Cistanche deserticolaY. C. Ma）和德赢vwin登录 [Cistanche tubulosa（Schenk）Wight]的干燥带鳞叶的肉质茎[1]，通常在春、秋季进行采挖。《经史证类备急本草》曰：“五月五日采。五月恐已老不堪，故多三月采之”[2]。有研究表明，肉苁蓉总寡糖、去半乳糖醇总寡糖和半乳糖醇是肉苁蓉发挥通便作用的主要成分[3]。药理学研究结果表明，肉苁蓉具有抗衰老、免疫调节、抗病毒、促进造血、改善脾虚、提高学习记忆能力等多种作用[4-5]；此外，其还可用于治疗良性前列腺增生[6]、急慢性肝损伤及肝纤维化等症[7]。产地采收加工是中药材生产的第一个环节，也是最关键的一步，而炮制是药材成为饮片的最重要一步，合理的产地采收加工及炮制方法是影响药材品质的关键。为此，笔者以“肉苁蓉”“产地加工”“炮制方法”“Cistanche deserticola”“Processingin production place”“Processing methods”等为关键词，在中国知网、万方数据、维普网、PubMed、Springer-Link 等数据库中组合查询2008 年1 月－2018 年9 月发表的相关文献。结果，共检索到相关文献112 篇，其中有效文献33 篇。现对肉苁蓉产地采收加工及炮制方法进行论述，以期为进一步开发利用肉苁蓉提供参考。1 产地采收加工研究进展传统肉苁蓉干燥的过程不仅费时、费力，而且随着时间的推移及二次闷润，使得不少有效成分流失，从而影响了药材的品质。随着肉苁蓉研究的不断深入和一些新技术的不断发展，逐渐出现了产地加工蒸制后干燥、冷冻干燥技术等新的干燥技术，这些技术均在一定程度上提高了肉苁蓉的干燥效率，并保证了有效成分尽可能少的流失[8-10]。如，春天采挖的肉苁蓉通过半埋半露晒干的方式，干燥后即得“甜苁蓉”或“甜大芸”；而秋天采挖的肉苁蓉一般要先将块大者放入盐湖中腌1～3年，干燥后则得“咸苁蓉”或“盐大芸”[11]。在产地采收加工的过程中，任何一个环节的因素，如不同采收期、不同蒸制时间、不同的初加工方式等均会影响药材的品质。1.1 不同采收期对肉苁蓉品质的影响中药的采收季节、采收时间与药材的品质优劣有着密切的关系。有研究表明，在春季采收的肉苁蓉中，松果菊苷和毛蕊花糖苷的总量达到秋季采收者的3 倍，且甜菜碱和2′-乙酰基毛蕊花糖苷的含量也较高；而秋季采收的肉苁蓉中半乳糖醇、可溶性多糖和肉苁蓉苷A的含量较春季采收者更高，但不含2′-乙酰基毛蕊花糖苷，因此该成分可用于区分鉴别春、秋季肉苁蓉[12-13]。春、秋季采收的肉苁蓉药材由于各自所含有效成分含量不同，其应用也有所差异。当需要发挥润肠通便作用时[3]，宜使用秋季采收品种；当需要发挥保肝、降压、保护神经等方面的作用时，则宜使用春季采收品种[14]。庞金虎等[15]研究结果表明，苯乙醇苷类活性成分的含量与生长年限有关，当生长年限≥3 年时，苯乙醇苷类成分含量较高，故在实际用药过程中，选用3 年及3 年以上生的肉苁蓉药材，可有助于更好地保证药材品质。1.2 不同蒸制时间对肉苁蓉品质的影响苯乙醇苷类作为肉苁蓉的主要活性成分，常作为药材品质的评价指标[16]。彭芳等[17]的研究结果表明，蒸制10 min 时，肉苁蓉中多糖的含量居高；当蒸制至20 min，此时苯乙醇苷类成分的含量达到最高，但继续蒸制苯乙醇苷类成分含量下降，而异毛蕊花糖苷的含量却有所升高。范亚楠等[16]的研究结果表明，蒸制时间对药材品质综合评分值（按松果菊苷、毛蕊花糖苷、异类叶升麻苷、甜菜碱的含量换算而得）具有极为显著的影响，以蒸制100 min 为佳。姜勇等[18]的研究结果表明，当蒸制120min 时，松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量达到最高，且比未蒸制者高。产地蒸制加工会大大提高药材有效成分的含量，但不同蒸制时间的药材有效成分含量亦有显著差别，临床药用或制剂制备宜根据具体需要进行加工处理。1.3 不同产地初加工方式对肉苁蓉品质的影响由于肉苁蓉块大，自然干燥往往需要很长时间，而在此过程中不可避免地会造成一些有效成分的损失[19]。李想[8]的研究结果表明，冷冻干燥技术能在很大程度上缩短干燥时间，防止有效成分的流失。杜友等[9]的研究结果表明，经气体射流冲击技术干燥后的肉苁蓉比经烘箱干燥的色泽更好，且半乳糖醇的含量也较自然干燥法和烘箱干燥法更高。蔡鸿等[20]的研究结果表明，肉苁蓉经过热水杀酶处理后，松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量均有所升高，但半乳糖醇的含量却有所下降。巩鹏飞等[10]的研究结果表明，随着温度的增加，水分有效扩散系数增加，药材干燥越容易，但对于活性成分的影响仍有待进一步研究。姜勇等[18]通过正交试验发现，将鲜肉苁蓉蒸制2 h 后，再切成6 mm厚片并置于70 ℃烘箱中烘干，其中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量较其他工艺加工者更高。范亚楠等[16]通过单因素筛选试验发现，鲜肉苁蓉蒸制100 min 后切6 mm厚片，并于80 ℃烘干，其中毛蕊花糖苷、松果菊苷、异类叶升麻苷和甜菜碱的含量均比在其他蒸制时间及烘干温度处理者高；而同一批肉苁蓉药材，蒸制并晒干处理组松果菊苷和毛蕊花糖苷的总含量比直接晒干组提高了4.23 倍，多糖含量提高了1 倍多[21]。药材在新鲜采收后的一段时间是处于应激状态下的，即新鲜采挖的肉苁蓉在最初的几天并未完全死亡，而是利用其储存的水分、营养等物质在体内发生一系列复杂的化学反应，从而使化学成分含量升高。梁淑燕等[22]将新鲜采挖的肉苁蓉进行放置，并每天取样观察，发现该药材在放置第4 天时的苯乙醇苷类含量最高，并在第6 天含量开始下降，此时再采用沸水蒸制10 min，切5 mm厚片，冷冻干燥，得到的药材饮片的品质较自然干燥者更好，有效成分的含量也更高。但上述研究[16，22]只是对单因素进行了直观分析，还需要进行进一步的理论分析予以验证，并得到最优加工工艺。2 炮制方法研究进展明代对肉苁蓉的炮制方法有较为详细的记载，李时珍《本草纲目》曰：“凡使先须清酒浸一宿，至明以棕刷去沙土浮甲，劈破中心，去白膜一重，如竹丝草样”[23]。可见，明代对肉苁蓉的净制已相当考究，其净制方法也是现代肉苁蓉最常用的处理方式。肉苁蓉炮制大多采用的辅料是酒，酒的种类有白酒、黄酒、清酒、烧酒、无灰酒等[24]。2.1 肉苁蓉的现代炮制方法肉苁蓉的炮制品种在2015 年版《中国药典》（一部）正式收载的有两种，即肉苁蓉片和酒苁蓉[1]。此外，还有黑豆复制法和四蒸四晒法[25]。2.2 肉苁蓉的现代炮制研究肉苁蓉经酒浸后苯乙醇苷类成分含量明显提高，且辅料酒的种类对其有很大影响。刘雯霞等[26]的研究结果表明，用不同种类的酒处理肉苁蓉，其中松果菊苷的含量由高到低依次为米酒＞黄酒＞白酒，但由于米酒成本较高，且米酒和黄酒炮制品质差别不大，因此通常采用黄酒炮制。段哲等[27]的研究结果表明，随着黄酒酒精度的增加，肉苁蓉润肠通便的作用亦有所增强，这可能是由于半乳糖醇的含量提高所致。一项关于不同酒蒸时间对苯乙醇苷类成分影响的研究结果表明，随着酒蒸时间的延长，苯乙醇苷类成分含量降低，提示可能存在向其他成分转化的质的变化，但具体机制有待进一步的研究[28]。黄林芳等[29]的研究结果表明，酒炙后肉苁蓉中苯乙醇苷类成分的含量相比生品均有明显增加。范亚楠等[30-32]的研究结果表明，肉苁蓉能明显改善便秘大鼠的便秘症状，增强润肠通便作用，且生品的效果强于酒制品、水提液的效果强于粉末。通过酒制后的肉苁蓉其抗氧化能力及免疫功能明显增强，但具体的机制还有待进一步研究和探讨[33]。3 结语传统肉苁蓉产地干燥主要以自然晾干为主，但该过程可能会导致苯乙醇苷类成分的损失且不卫生，因此科学合理的产地加工方法对肉苁蓉品质及疗效的保证具有重要意义[19]。目前肉苁蓉多采用先蒸制后晾晒的产地加工方法，不仅可起到杀酶、保苷的作用，提高有效成分的含量，同时还有助于缩短肉苁蓉的干燥时间[16]。蒸制时间的不同也会影响肉苁蓉活性成分的含量，故应根据具体需要进行加工处理。此外，结合干燥新技术，如“冷冻干燥技术”[8]、“气体射流冲击技术”[9]、“超声真空干燥技术”[10]也大大提高了干燥效率，提升了药材品质。肉苁蓉的炮制主要以酒制为主，通过酒制可明显提高有效成分的含量，增强其温补肾阳、抗氧化及免疫等功能[33]。但目前的文献研究大都报道酒制对4 种苯乙醇苷类成分的变化影响，较少涉及到其他成分的研究，对于引起质变的成分转化的机制研究尚未见有相关阐述。此外，关于肉苁蓉炮制品的研究，目前多集中在临床前动物研究阶段，对于主要成分的量效及药动关系研究则较少，仍有待进行更深入的临床研究及活性成分的追踪。参考文献[ 1 ] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].2015 年版.北京：中国医药科技出版社，2015：135-136.[ 2 ] 唐慎微.经史证类备急本草[M].北京：中国医药科技出版社，2011：203.[ 3 ] 高云佳，姜勇，戴昉，等.肉苁蓉润肠通便的药效物质研究[J].中国现代中药，2015，17（4）：307-310、314.[ 4 ] 高晓霞，陈君，彭艳丽.肉苁蓉多糖药理作用研究概况[J].食品与药品，2015，17（2）：136-139.[ 5 ] 罗兰，吴小川，高惠静，等.肉苁蓉总苷对阿尔茨海默病模型大鼠的保护作用研究[J].中国药房，2013，24（23）：2122-2125.[ 6 ] JEON HJ，CHUNG KS，AN HJ. 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摘要： ［ 目的］ 研究肉苁蓉茶对小鼠抗疲劳和耐缺氧能力的影响。［ 方法］ 分别以3 333、1 667、833 mg ／ kgBW剂量（以茶颗粒干品计） 的肉苁蓉茶提取液， 给小鼠连续灌胃35 d， 通过负重游泳试验、尿素氮和肝糖原测定评价其抗疲劳功能， 通过常压耐缺氧试验、亚硝酸钠中毒试验和急性脑缺血（断头） 试验评价其耐缺氧功能。［ 结果］ 在本实验条件下， 肉苁蓉茶能够延长小鼠的负重游泳时间， 增加小鼠的肝糖原的储备量， 减小小鼠运动后的血乳酸量， 对疲劳小鼠的血清尿素氮无明显影响； 肉苁蓉茶能够延长小鼠在常压下缺氧存活时间及硝酸钠中毒后的存活时间， 对急性脑缺血（断头） 后张口喘气时间无明显影响。［ 结论］ 肉苁蓉茶可以提高小鼠的抗疲劳能力和常压耐缺氧能力。关键词： 肉苁蓉茶； 抗疲劳； 耐缺氧； 小鼠中国有2000 多年的茶文化， 很多人有喝茶的习惯， 即使苦如苦丁茶， 也都有很多人喜欢长饮。喝茶不但可以修身养德， 还能提神醒脑， 裨益身心。随着社会的发展， 人们对茶的保健要求也越来越高。传统茶叶以茶科植物叶作为原料， 其功效面较窄且有限， 中国是中草药资源大国， 把具有保健功效的中药材开发成茶饮， 开始逐渐成为茶行业的研究热点。肉苁蓉茶提取自植物肉苁蓉， 肉苁蓉（Herba Cistanche）是列当科（Orobanchaceae） 肉苁蓉属（Cistanche） 植物肉苁蓉的干燥带鳞叶的肉质茎， 主产于我国内蒙古、新疆、甘肃和宁夏等地， 有补肾阳、益精血、润肠通便的功效， 常用于治疗阳痿、不孕、腰膝酸软、筋骨无力及肠燥便秘等［1］。本试验对肉苁蓉茶的抗疲劳及耐缺氧功能进行了研究， 为其开发为保健饮料或茶品提供理论和实验依据。1 材料和方法1.1 样品及处理由内蒙古某公司提供的肉苁蓉茶颗粒， 规格： 5 g ／ 袋， 人口服推荐用量为每人（成人） 每日2 次， 每次1 袋， 成人体重按60 kg 计算， 折合剂量为166.67 mg ／ kg BW。称取1 666.7 g样品， 加入10 倍量的80℃热水浸泡30 min， 过滤取滤液； 再以同样方法对滤渣浸泡提取1 次， 合并两次滤液， 置旋转蒸发仪中减压浓缩至1 000 ml， 即得1 666.7 mg ／ ml 浓度样品提取液（以干品计， 下同） 供试验用。1.2 实验动物及环境条件选用广东省医学实验动物中心繁殖的SPF 健康成年NIH种雄性小鼠336 只， 体重为18～22 g， 实验动物生产许可证号：NO.0047015。实验动物室温度： 22℃～25℃， 相对湿度： 55%～70%。实验动物使用许可证号： SYXK 桂2007-0003。1.3 主要仪器与试剂仪器： 动物天平、分析天平、离心机、旋转蒸发仪、高速分散器、振荡器、恒温水浴锅、721 分光光度计、半自动生化分析仪、游泳箱（50 cm × 50 cm × 40 cm）、秒表等。试剂： 蒽酮、硫脲、浓硫酸、三氯乙酸、葡萄糖、氟化钠、硫酸铜、钨酸钠、对羟基联苯、乳酸锂（均为分析纯）、BUN 试剂盒（购自北京中生北控生物科技公司）、钠石灰、亚硝酸钠、凡士林等。1.4 抗疲劳功能实验方法1.4.1 负重游泳试验根据人口服推荐用量， 设3333、1667、833 mg ／ kgBW （分别相当于人体推荐用量的20、10、5 倍） 3个剂量组和1 个阴性对照组， 每组12 只动物。分别量取1 666.7 mg ／ ml 浓度的样品提取液20、10、5 ml， 各加蒸馏水水至200 ml， 配成166.67、83.33、41.67 mg ／ ml 浓度溶液， 以0.2 ml ／ 10 gBW 的体积分别给予相应剂量组动物灌胃对照组予以等体积的蒸馏水， 每天灌胃1 次， 连续35 d。末次给样30 min 后， 给小鼠尾根部负荷5%体重的铅皮，置水温25℃泳槽中游泳， 以小鼠开始游泳至死亡的时间作为负重游泳时间。若实验组游泳时间明显长于阴性对照组， 且差异有统计学意义（P﹤0.05）， 则判定该样品有延长小鼠负重游泳时间的作用。1.4.2 血清尿素氮测定动物分组及给样品方法同1.4.1 项。末次给样30 min 后， 将小鼠置30℃水中不负重游泳90min。游泳完休息60 min 后拔眼球采血， 测定血清尿素氮值。若实验组血清尿素氮含量明显低于阴性对照组， 且差异有统计学意义（P﹤0.05）， 则判定该样品有减少疲劳小鼠尿素氮产生的作用。1.4.3 肝糖原测定动物分组及给样品方法同1.4.1 项。末次给样30 min 后处死小鼠， 称取0.1 g 肝脏， 加入5%三氯乙酸匀浆、离心， 取上清液测定肝糖原含量（蒽酮法）。若实验组肝糖原含量明显高于阴性对照组， 且差异有统计学意义（P﹤0.05）， 则判定该样品有促进小鼠肝糖原储备的作用。1.4.4 血乳酸测定动物分组及给样品方法同1.4.1 项。末次给样30 min 后， 将小鼠置30℃水中不负重游泳10min， 分别在游泳前、游泳后0 min、游泳后休息20 min 采血进行乳酸测定。血乳酸曲线下面积用下式计算：血乳酸曲线下面积＝5× （游泳前血乳酸值＋3×游泳后0 min的血乳酸值＋2×游泳后休息20 min 的血乳酸值）若实验组血乳酸曲线下面积低于阴性对照组， 且差异有统计学意义（P﹤0.05）， 则判定该样品有减轻小鼠运动后血乳酸堆积的作用。1.5 耐缺氧功能实验方法1.5.1 常压耐缺氧实验动物分组及给样品方法同1.4.1 项。末次给样1 h 后， 将各组小鼠放入盛有5 g 钠石灰的250ml 磨口瓶内（每瓶1 只）， 用瓶塞和凡士林密封瓶口， 记录小鼠因缺氧而死亡的时间。若实验组小鼠的存活时间明显长于阴性对照组， 且差异有统计学意义（P﹤0.05）， 则判定该样品有延长小鼠常压下缺氧存活时间的作用。1.5.2 亚硝酸钠中毒存活实验动物分组及给样品方法同1.4.1 项。末次给样1 h 后， 给各组小鼠按240 mg ／ kgBW 剂量腹腔注射亚硝酸钠（注射量为0.1 ml ／ 10 g BW）， 注射完毕立即计时， 记录小鼠中毒后存活的时间。若实验组小鼠的存活时间明显长于阴性对照组， 且差异有统计学意义（P﹤0.05）， 则判定该样品有延长小鼠亚硝酸钠中毒后存活时间的作用。1.5.3 急性脑缺血性缺氧实验动物分组及给样品方法同1.4.1 项。末次给样1 h 后， 各组动物逐只自颈部快速断头， 记录小鼠自断头至张口喘气停止的时间。若实验组小鼠的喘气时间明显长于阴性对照组， 且差异有统计学意义（P﹤0.05）， 则判定该样品有延长小鼠断头后喘气时间的作用。1.6 实验数据统计应用SPSS13.0 统计软件中ANOVA 模块对试验数据进行单因素方差分析， 用Dunnett 模块进行试验数据的组间比较。2 结果2.1 一般情况各组小鼠的生长状况良好， 生理体征、外观、行为、大小便、皮毛等均未见异常。2.2 抗疲劳试验指标样品各剂量组小鼠的负重游泳时间均比阴性对照组长（F= 6.115， P = 0.002）， 其中高、中剂量组与对照组的差异有统计学意义（P﹤0.01）， 表明该样品能延长小鼠的负重游泳时间。各剂量组小鼠的肝糖原含量均高于阴性对照组（F =4.910， P = 0.006）， 其中高、中剂量组与对照组的差异有统计学意义（P﹤0.01 和P﹤0.05）， 表明该样品能促进小鼠的肝糖原储备。各剂量组小鼠不负重游泳过程中的血乳酸曲线下面积均小于阴性对照组（F = 3.551， P = 0.024）， 其中高、中剂量组与阴性对照组的差异有统计学意义（P﹤0.05）， 表明该样品能减少小鼠运动后的血乳酸堆积。各剂量组小鼠的血清尿素氮含量与对照组相近， 其差异无统计学意义（F = 0.509， P =0.679）， 故尚不能认为该样品能减少疲劳小鼠体内尿素的含量。结果见表1。2.3 耐缺氧试验指标样品各剂量组小鼠缺氧而死亡时间均大于阴性对照组（F= 4.457， P = 0.008）， 其中高、中剂量组与对照组的差异有统计学意义（P﹤0.01 和P﹤0.05）， 表明该样品能够延长小鼠缺氧状态下的存活时间。各剂量组小鼠亚硝酸钠中毒后存活时间均大于阴性对照组（F = 11.803， P﹤0.001）， 其中高、中剂量组与对照组的差异有统计学意义（P﹤0.01 和P﹤0.05）， 表明该样品能够延长小鼠亚硝酸钠中毒后的存活时间。各剂量组小鼠断头后喘气时间比阴性对照组有所延长， 但其差异无统计学意义（F = 1.309， P = 0.284）， 故尚不能判定该样品具有延长小鼠在急性脑缺血性缺氧（断头） 后张口喘气时间的作用。结果见表2。3 讨论现代社会大约有70%的人处于亚健康状态， 而导致亚健康状态的最大“亚病因”， 就是疲劳。已经有学者提出， 疲劳是当今社会最大的公共卫生问题。中国有喝茶养生的传统， 无论是在工作还是休息， 都有很多人喜欢茶， 因此， 开发具有抗疲劳功能的保健茶饮具有积极的意义。肉苁蓉在中国有两千年的使用历史， 在历代增力中药处方中出现率占首位［2］。据《本草纲目》记载， 肉苁蓉“补而不峻， 故有从容之号。” 现代药理学研究揭示， 肉苁蓉的功效成分为苯乙醇苷类、环烯醚萜类、木质素类、多糖和生物碱等， 可以改善细胞内线粒体能量代谢， 增强ATP 酶活性， 增加血红蛋白含量， 促进糖原合成，减少乳酸产生［3～5］， 从而增强体力， 缓解疲劳。肉苁蓉茶系由植物肉苁蓉加工提取制成， 保留了肉苁蓉的部分功效成分， 本实验对肉苁蓉茶提高抗疲劳和耐缺氧能力的作用进行了研究。运动耐力的提高是机体抗疲劳能力加强的直接表现， 能量储备充足是耐力增强的内因。肌肉中的三磷酸腺苷只能提供几十秒的运动需要， 在氧充足条件下， 糖原是机体最先动用的能源物质， 其次是蛋白质和脂肪。乳酸是糖无氧酵解的产物， 是导致机体疲劳感的直接因子。本研究结果显示， 肉苁蓉茶可以提高小鼠的运动耐力（负重游泳）， 增加小鼠的肝糖原储备，减少小鼠运动后体内乳酸堆积。长时间运动后， 体内糖原消耗殆尽， 此时如果要保持运动， 机体就开始动用蛋白质为供能物质， 蛋白质分解供能后生成尿素， 所以疲劳过度时血液尿素氮含量上升。在本研究中， 各组小鼠运动后血清尿素氮值接近，实验组与对照组的差异无统计学意义， 这可能是因为游泳90min 后， 实验组和对照组小鼠的糖原都已耗尽， 机体动用了大量蛋白质用以供能。综合各项试验结果， 依据《保健食品检验与评价技术规范》， 可判定肉苁蓉茶具有提高小鼠抗疲劳功能的作用。耐缺氧能力是间接反映抗疲劳能力的一组指标， 因为疲劳的过程中， 往往伴随着组织缺氧， 如果机体携氧、利用氧的能力强， 就能产生更多的能量， 同时减少无氧酵解产生的乳酸，延缓疲劳的出现。在本研究结果显示， 肉苁蓉茶可以延长小鼠在缺氧状态下的存活时间和亚硝酸钠中毒后的存活时间， 说明该样品可以增强小鼠机体携氧和利用氧的能力。在急性脑缺血缺氧（断头） 试验中， 由于供血终止， 脑组织只能利用自身存储的能量和氧气短暂的维持功能， 表现为张嘴喘气。由于脑组织内能量和氧气储备非常有限， 所以只有降低脑的氧耗， 才能维持更长时间的喘气， 在本研究中， 受试组小鼠的张嘴喘气时间表现出延长的趋势， 但是与对照组的差异无统计学意义， 提示肉苁蓉茶降低脑氧耗的作用不明显， 受试组小鼠喘气时间的延长趋势， 更主要的原因可能是脑内能量和氧气的储备利用高于对照组。综合各项试验结果， 依据《保健食品检验与评价技术规范》， 可判定肉苁蓉茶具有提高小鼠耐缺氧能力的作用。本研究结果表明肉苁蓉茶可以提高小鼠的抗疲劳和耐缺氧能力， 为肉苁蓉从药品走向保健品市场提供了实验依据， 随着肉苁蓉人工栽培的实现， 肉苁蓉茶在职业疲劳人群和老年人群中必将有广阔的市场前景。参考文献：［ 1 ］ 赵新杰， 夏华玲， 王苏静. 肉苁蓉的药理作用研究进展［J］. 中国药业， 2009 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摘　要　应用ＩＣＰ－ＡＥＳ技术测定了肉苁蓉不同生育阶段矿质元素含量。结果显示：（１）肉苁蓉药材的最佳采收期（肉质茎生长期），常量矿质元素中Ｋ含量高达９．４５ｍｇ·ｇ－１，五种常量矿质元素的含量比例为Ｋ∶Ｎａ∶Ｐ∶Ｃａ∶Ｍｇ＝１２∶３．４∶１．６∶１．４∶１，微量矿质元素中Ｆｅ含量最高为９７．３１μｇ·ｇ－１，五种微量矿质元素的含量比例为Ｆｅ∶Ｚｎ∶Ｃｕ∶Ｍｎ∶Ｂ＝２５∶３．７∶３．５∶１．２∶１。（２）生殖生长阶段，肉苁蓉入药部位肉质茎中Ｃａ，Ｍｇ，Ｆｅ，Ｚｎ，Ｃｕ，Ｍｎ，Ｂ矿质元素含量在出土后显著高于出土前，其中蒴果形成期微量矿质元素Ｆｅ和Ｍｎ含量依次为６９７．５５和３８．７５μｇ·ｇ－１，分别是肉质茎生长期的７．２和８．３倍。（３）生殖生长阶段地上部分生殖生长中心对Ｎａ元素有排斥作用同时对Ｋ，Ｐ，Ｃａ，Ｍｇ，Ｆｅ，Ｍｎ，Ｂ，Ｚｎ，Ｃｕ有吸收富集作用。本研究结果为肉苁蓉的质量评价和合理施肥提供了新的科学依据。关键词　ＩＣＰ－ＡＥＳ技术；肉苁蓉；矿质元素引　言　　中草药中的矿质元素与其疗效密切相关，并且是中药材质量的重要评价指标之一，因此矿质元素在中草药药效中的作用及对人体健康的影响已引起人们的极大关注［１，２］。全寄生药用植物肉苁蓉（Ｃｉｓｔａｎｃｈｅ　ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａ　Ｍａ）为著名的补益类药物，其内含的矿质元素备受关注［３，４］，但是各生育阶段肉苁蓉体内的矿质元素的含量及比例尚不清楚。本文采用电感耦合等离子体原子发射光谱法（ＩＣＰ－ＡＥＳ方法），测定并分析了肉苁蓉各生育阶段矿质元素含量、比例及差异，目的是明确不同生育期肉苁蓉药材中矿质元素，特别是微量元素含量及其比例的变化，从而为研究施肥对梭梭－肉苁蓉寄生体系的生长调控提供依据。１　实验部分１．１　仪器与工作参数仪器：电感耦合等离子体原子发射光谱仪（ＩＣＰ－ＡＥＳ，美国ＰＥ公司ＯＰＴＩＭＡ　３３００ＤＶ型）；工作参数：高频发生器功率为１　３００Ｗ；冷却器流量为１５．０Ｌ·ｍｉｎ－１；载气流量为０．８Ｌ·ｍｉｎ－１；辅助气流量为０．５Ｌ·ｍｉｎ－１；样品提升量为１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１。１．２　材料和试剂采样地点：试验所需的肉苁蓉样品均采自内蒙古王爷地苁蓉生物科技有限公司架子滩基地（内蒙古自治区巴彦淖尔市磴口县）。试验材料特征、采样时间及样品分解处理方式如表１所示。　　样品处理：分解好的肉苁蓉样品用去离子水将表面冲洗干净后在９０℃水浴锅中杀酶１ｍｉｎ，然后置于６０℃烘箱中烘干至恒重，并将样品粉碎过４０目筛备测。元素标准溶液由国家标准物质中心标准物质稀释配得；浓硝酸和高氯酸均为优级纯；试验用水为去离子水。１．３　矿质元素提取称取样品１ｇ（精确至０．０００１ｇ）于开氏瓶中，加入浓硝酸、高氯酸混合液（体积比４∶１）１５ｍＬ。消煮至溶液接近无色时取下冷却，过滤，定容。用同样的方法制备样品空白。１．４　数据处理采用Ｅｘｃｅｌ２００３和ＤＰＳ７．０５软件进行数据处理和统计分析。２　结果分析２．１　营养生长阶段肉苁蓉肉质茎矿质元素含量肉苁蓉地下肉质茎做为入药部位，在营养生长阶段富含多种矿质元素（表２和表３），并且常量和微量矿质元素含量均表现为接种寄生期高于肉质茎生长期。肉质茎生长期作为肉苁蓉药材的最佳采收时期，其体内常量矿质元素中Ｋ含量最高，Ｍｇ含量最低，五种元素含量大小顺序为：Ｋ＞Ｎａ＞Ｐ＞Ｃａ＞Ｍｇ，比例约为１２∶３．４∶１．６∶１．４∶１；微量矿质元素方面Ｆｅ含量最高，Ｂ含量最低，并且不同元素间含量差异较大，表现为：Ｆｅ＞Ｚｎ＞Ｃｕ＞Ｍｎ＞Ｂ，各元素比例约为２５∶３．７∶３．５∶１．２∶１。２．２　生殖生长阶段肉苁蓉体内矿质元素含量生殖生长阶段肉苁蓉地下肉质茎中仍含有丰富的矿质元素（表４和表５），并且Ｃａ，Ｍｇ，Ｆｅ，Ｚｎ，Ｃｕ，Ｍｎ，Ｂ含量较营养生长阶段均明显提高，其中蒴果形成期常量矿质元素中的Ｃａ和Ｍｇ含量分别高达３．８８和２．７４ｍｇ·ｇ－１，是肉质茎生长期的３．６３和３．５１倍；微量矿质元素中的Ｆｅ和Ｍｎ含量依次为６９７．５５和３８．７５μｇ·ｇ－１，分别是肉质茎生长期的７．２和８．３倍。　　肉苁蓉地上部分在此阶段矿质元素的含量也非常丰富（表４和表５）。常量矿质元素中Ｋ和Ｃａ含量较高，Ｎａ含量较低，并且在生殖生长全部阶段Ｋ 和Ｃａ含量分别达到１８．０８和５．７５ｍｇ·ｇ－１以上，而Ｎａ含量最高仅为０．８７ｍｇ·ｇ－１；微量矿质元素中Ｆｅ含量极其丰富，在蒴果形成期达到含量的最高峰，为５　３３４．２０μｇ·ｇ－１。相比之下，Ｂ含量相对较低，出土现蕾期含量最高仅为２１．９８μｇ·ｇ－１，并且随着肉苁蓉地上部分开花结实Ｂ含量有逐渐降低的趋势。由表４和表５同样可以看出，生殖生长阶段肉苁蓉不同部位矿质元素含量差异明显。其中Ｎａ在生殖生长全部阶段均表现为地下部分含量显著大于地上部分含量（ｐ＜０．０５），而Ｋ，Ｐ，Ｃａ，Ｍｇ，Ｆｅ，Ｍｎ，Ｂ等矿质元素则恰好相反，表现为地上部分含量较地下部分有所提高，并且Ｐ，Ｃａ，Ｆｅ，Ｍｎ，Ｂ五种矿质元素含量在生殖生长全部阶段差异均达到显著水平（ｐ＜０．０５）。此外，Ｚｎ和Ｃｕ从出土现蕾期一直到蒴果形成期也表现为地上部分含量显著高于地下部分（ｐ＜０．０５）。说明，在肉苁蓉生殖生长阶段，作为生殖生长中心的地上部分对矿质元素有选择性吸收和富集的作用。３　讨　论　　中草药中的矿质元素，不仅与中草药的功效密切相关，而且对生物体特别是人类有极其重要的生理和病理意义［５］。作为中草药重要评价指标的矿质元素会受到产地、药用部位、采收时间等多因素的影响和调节［６］。相关研究表明，产地及生长时期对肉苁蓉有效成分有明显的影响［７，８］，而作为肉苁蓉生长发育和有效成分形成所必需的矿质元素同样会受到生育时期和生长部位的影响。应用ＩＣＰ－ＡＥＳ技术分析了肉苁蓉全生育期地下肉质茎及生殖生长阶段地上部分矿质元素的含量，并对生殖生长阶段肉苁蓉不同部位矿质元素的含量进行了对比分析，结果表明：（１）肉苁蓉体内含有多种矿质元素，并且矿质元素含量与其生长发育过程密切相关。（２）肉苁蓉不同生育期矿质元素含量棍异，作为入药部位的地下肉质茎在全生育期均富含多种矿质元素，并且Ｃａ，Ｍｇ，Ｆｅ，Ｚｎ，Ｃｕ，Ｍｎ，Ｂ含量在生殖生长阶段较营养生长阶段明显提高；作为生殖生长中心的肉苁蓉地上部分Ｋ，Ｃａ，Ｆｅ含量较高，含量最高时分别达到了２６．４７，８．７９和５．３３ｍｇ·ｇ－１，相比之下Ｂ元素含量较低，并且地上部分Ｂ含量随着肉苁蓉开花结实逐渐降低，这可能与Ｂ元素主要参与花粉的萌发和花粉管的伸长有关［９］。（３）从肉苁蓉地上部分和地下部分矿质元素的含量对比来看，生殖生长阶段肉苁蓉各部位对矿质元素的需求不同，矿质元素在肉苁蓉体内存在选择性转运，并且地上部分生殖生长中心对Ｎａ元素有排斥作用同时对Ｋ，Ｐ，Ｃａ，Ｍｇ，Ｆｅ，Ｍｎ，Ｂ，Ｚｎ，Ｃｕ有吸收富集作用。从试验结果来看，肉苁蓉不同生育阶段和不同生长部位所含有的矿质元素差异应引起人们的重视。与肉苁蓉药效密切相关的矿质元素含量及分配除了受矿质元素的性质和肉苁蓉的吸收特性影响外，还与土壤条件和肥料供给有密切的关系，关于施肥对肉苁蓉体内矿质元素含量的影响还需进一步研究探讨。

施亚平南通市名中医1956 年生，江苏南通人，专科学历，副主任中医师，中华中医药学会生殖分会委员，江苏省中医药学会妇科专委会常务委员，江苏省中西医结合学会生殖医学专委会副主任委员。单位：南通市中医院（邮码：226001）最擅长治疗的疾病：不孕症、围绝经期综合征、月经不调、盆腔炎、痛经、子宫肌瘤等。主要学术成就及获奖情况：发表医学论文10 余篇，主持和参与多项市级科研项目，获南通市科技进步三等奖2 次，曾获“南通市卫生系统先进个人”、“南通市巾帼建功先进个人”、“南通市三八红旗手”、“江苏省巾帼示范标兵”等荣誉称号。方名：补肾化瘀逐痰汤组成：淫羊藿10g，肉苁蓉10g，山茱萸10g，续断10g，制黄精10g，女贞子10g，丹参10g，莪术10g，皂角刺10g，川楝子10g，片姜黄10g，炮山甲10g，海藻10g，昆布10g，浙贝母10g，法半夏10g，制大黄10g，石菖蒲10g。功能：补肾逐痰、活血化瘀。主治：多囊卵巢综合征、子宫肌瘤。用法：每日1 剂，水煎，分2 次口服。方解：方中以淫羊藿、肉苁蓉补肾阳，女贞子补肾阴、滋阴润燥为君；山茱萸、川断续补肝肾通血脉，制黄精养阴润肺、补脾益气为臣；丹参活血祛瘀，理气调经，疏通血脉；莪术行气破血消积；皂角刺活血化瘀；川楝子疏肝行气；片姜黄破血行气、通经；炮山甲滋阴清热潜阳；海藻消痰、昆布软坚散结；浙贝母清热化痰散结；法半夏燥湿化痰、消痞散结；制大黄泻痰瘀之热，与肉苁蓉润肠通便共逐火下行；石菖蒲化湿开胃、开窍豁痰。全方重补肾之阴阳，辅以补肝健脾，加之理气活血药通调气血，散结化坚以祛痰。

摘要: 目的制备肉苁蓉标准汤剂并为其质量控制提供可靠方法。方法依照标准汤剂的制备要求，制备14 批肉苁蓉标准汤剂，采用HPLC法测定标准汤剂中松果菊苷和毛蕊花糖苷含量，计算其转移率，测定汤剂的出膏率和pH 值，并建立肉苁蓉标准汤剂的UPLC 指纹图谱。结果14 批肉苁蓉标准汤剂中松果菊苷和毛蕊花糖苷平均转移率分别是22. 99%、17. 09%，出膏率范围为25. 1% ～ 56. 6%，pH 值范围为4. 30 ～ 5. 15。指纹图谱中有6 个共有峰，指认了其中的1 号峰为松果菊苷、3 号峰为管花苷A、4 号峰为毛蕊花糖苷、5 号峰为异毛蕊花糖苷。对14 批肉苁蓉标准汤剂进行相似度评价，其相似度范围在0. 789 ～ 0. 999 之间。结论肉苁蓉标准汤剂制备规范，整体均一性良好，质量可控，测定方法精密度、稳定性和重复性良好，指纹图谱相似度高，可为肉苁蓉标准汤剂的质量控制提供参考。关键词: 肉苁蓉; 标准汤剂; 松果菊苷; 毛蕊花糖苷; 指纹图谱; 质量评价肉苁蓉为列当科肉苁蓉属植物肉苁蓉Cistanche deserticolaY. C. Ma 或德赢vwin登录 Cistanche tubulosa ( Schenk )R. Wight 的干燥带鳞叶的肉质茎〔1〕，具有补肾阳，益精血，润肠通便的作用〔1〕，广泛应用于阳痿，不孕，腰膝酸软，筋骨无力，肠燥便秘等症〔2〕。主要含有苯乙醇苷类、苯甲醇苷类、环烯醚萜及其苷类、木质素及其苷类、其他类化合物等〔3〕。其中，苯乙醇苷类化合物被认为是肉苁蓉中的主要有效成分〔4〕。中药饮片标准汤剂( 即标准煎液) 是以中医理论为指导、临床应用为基础，参考现代提取方法，经标准化工艺制备而成的单味饮片水煎液〔5〕。由于标准汤剂没有辅料干扰，没有经过干燥过程，保持与临床应用传统汤剂的一致，且标准汤剂易于通过饮片或提取液的调配试验各种理想浓度。因此中药饮片标准汤剂，作为经典明方制剂的质量基准和衡量中药配方颗粒的标准参照物，以期实现临床疗效的一致性，是目前保障中药安全、有效、稳定的有效形式。目前，暂无关于肉苁蓉饮片标准汤剂研究的文献报道。本实验对14 批肉苁蓉制备相应的标准汤剂，并进行肉苁蓉标准汤剂研究，以期建立肉苁蓉质量标志物的核心标本，为肉苁蓉配方颗粒的开发提供实验依据。1 仪器与材料1. 1 仪器及设备Waters e2695 高效液相色谱仪( 沃特世公司) ; ME204E 万分之一天平( 梅特勒-托利多公司) ; XP26 百万分之一天平( 梅特勒-托利多公司) ; Waters Acquity UPLC 超高效液相色谱仪( 沃特世公司) ; KQ-500E 超声波清洗器( 昆山市超声仪器有限公司) 。1. 2 试剂与材料松果菊苷对照品( 批号: S-003-190403) 、管花苷A 对照品( 批号: G-066-181216) 、毛蕊花糖苷对照品( 批号: M-011-181106) 、异毛蕊花糖苷对照品( 批号: Y-073-170325) 均购自成都瑞芬思生物科技有限公司，纯度均大于98. 0%。色谱纯甲酸，天津市科密欧化学试剂有限公司; 色谱纯甲醇，默克股份有限公司; 实验用水为实验室超纯水系统，默克股份有限公司; 其它试剂均为分析纯。本研究共收集市售14 批肉苁蓉饮片，经暨南大学马志国教授鉴定为列当科肉苁蓉属植物肉苁蓉Cistanche deserticolaY. C. Ma 或德赢vwin登录 C. tubulosa( Schrenk) Wight 的干燥带鳞叶的肉质茎。样品信息( 见表1) 。2 方法与结果2. 1 标准汤剂和供试品溶液制备2. 1. 1 肉苁蓉标准汤剂的制备: 根据《医疗机构中药煎药室管理规范》、《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求》、《中药饮片标准汤剂》规定，取肉苁蓉饮片100 g，置电陶瓷壶中，加水煎煮两次，第一次煎煮加水9 倍，浸泡30 min，武火( 500W) 加热煮沸后，改文火( 200W) 保持微沸，继续煎煮60min，煎液经350 目筛网趁热过滤。第二次加水7 倍量，武火加热煮沸后，改文火保持微沸，继续煎煮40 min，煎液用350目筛网趁热过滤，合并两次煎液。将煎液转移至2000 mL 圆底烧瓶中，采用旋转蒸发仪减压低温浓缩( 温度: 60 ℃; 真空度: － 0. 10 MPa) 定容至500 mL，摇匀。2. 1. 2 肉苁蓉饮片供试品溶液的制备: 取肉苁蓉饮片粉末( 过四号筛) 约1 g，精密称定，置100 mL 棕色量瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，摇匀，称定重量，浸泡30 min，超声处理40 min( 功率250 W，频率35 kHz) ，放冷，再称定重量，加50%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，以0. 22 μm微孔滤膜滤过，即得。2. 1. 3 肉苁蓉标准汤剂供试品溶液的制备: 取肉苁蓉标准汤剂，摇匀，精密量取5 mL 至50 mL 量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，以0. 22 μm 微孔滤膜滤过，即得。2. 1. 4 对照品溶液的制备: 取松果菊苷对照品、毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，置10 mL 棕色量瓶中，用50% 甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成上述2 个成分浓度分别为0. 0200、0. 02100 mg·mL － 1 的溶液，即得混合对照品溶液。2. 2 松果菊苷和毛蕊花糖苷成分的含量测定按照《中国药典》2015 年版一部肉苁蓉项下含量测定方法，采用AgilentZORBAX SB-C18色谱柱( 4. 6 × 150 mm，5 μm) ，以甲醇为流动相A，以0. 1% 甲酸溶液为流动相B，梯度洗脱( 0 ～ 17 min，26. 5% A; 17 ～ 20 min， 26. 5%→29. 5% A; 20 ～ 27 min， 29. 5%A) ; 流速1. 0 mL·min － 1 ; 柱温30 ℃; 检测波长330 nm; 理论板数按松果菊苷峰计算应不低于3000。测定肉苁蓉饮片及其标准汤剂中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量，结果( 见表2) 。2. 3 肉苁蓉饮片标准汤剂评价特征参数的测定2. 3. 1 出膏率: 将2. 1. 1 项下制得的肉苁蓉标准汤剂进行摇匀，精密吸取100 mL，置已恒重的蒸发皿( 重量为m1) 中进行水浴蒸干，蒸干后在105 ℃ 的烘箱中干燥3 h，取出后放置于干燥器中冷却干燥30 min，称定重量，记录其重量为m2，药材重量为M，按公式“出膏率= ( m2 － m1) × 500 /( 100 × M) ×100%”计算出膏率，每份样品均平行2 份后取平均值。结果( 见表2) 。2. 3. 2 转移率: 根据以上松果菊苷和毛蕊花糖苷成分含量测定结果，按照转移率的公式分别计算松果菊苷和毛蕊花糖苷成分转移率( 转移率= 肉苁蓉标准汤剂中指标成分质量/饮片中指标成分质量× 100%) ，每份样品平行2 份。结果( 见表2) 。2. 3. 3 pH 值: 将2. 1. 1 项下制得的肉苁蓉标准汤剂进行摇匀，取适量，用pH 计测定pH 值后取平均值，每份样品平行2份。结果( 见表2) 。2. 4 肉苁蓉标准汤剂UPLC 指纹图谱的建立2. 4. 1 色谱条件: 采用Waters HSS T3色谱柱( 2. 1 × 100 mm，1. 8 μm) ; 以甲醇为流动相A，以0. 1% 甲酸溶液为流动相B，梯度洗脱( 0 ～ 4 min， 34% A; 4 ～ 10 min， 34%→40% A; 10 ～15 min，40% →46% A; 15 ～ 17 min，46% →34% A; 17 ～ 20min， 34% A) ; 流速0. 3 mL·min － 1 ; 柱温30 ℃; 检测波长330nm; 参比溶液进样量1 μL，供试品溶液进样量0. 4 μL。2. 4. 2 参比溶液的制备: 取对照品松果菊苷、管花苷A、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷适量，精密称定，置10 mL 棕色量瓶中，用50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成上述4 个成分浓度分别为0. 196、0. 234、0. 228、0. 213 mg·mL － 1 的溶液，即得混合对照品溶液。2. 4. 3 供试品溶液的制备同2. 1. 3 项。2. 4. 4 精密度试验: 取同一批肉苁蓉标准汤剂( GH-3) 的供试品溶液，按2. 4. 1 项下色谱条件连续进样6 次，以毛蕊花糖苷( 4 号峰) 为参照峰，计算各共有峰相对保留时间的RSD 均小于0. 2%，相对峰面积的RSD 均小于5. 0%，表明仪器精密度良好。2. 4. 5 稳定性试验: 取同一批肉苁蓉标准汤剂( GH-3) 的供试品溶液，按2. 4. 1 项下色谱条件，分别于制备后在0，2，4，8，12， 16， 20， 24， 28 h 进样，以毛蕊花糖苷( 4 号峰) 为参照峰，计算各共有峰相对保留时间的RSD 均小于0. 3%，相对峰面积的RSD 均小于4. 8%，表明供试品溶液在28 h 内稳定性良好。2. 4. 6 重复性试验: 取同一批肉苁蓉标准汤剂( GH-3) ，按2. 1. 3 项下方法平行制备6 份溶液，按2. 4. 1 项下色谱条件分析，记录色谱图，以毛蕊花糖苷( 4 号峰) 为参照峰，计算各共有峰相对保留时间的RSD 均小于0. 2%，相对峰面积的RSD均小于3. 8%，结果表明方法的重复性良好。2. 4. 7 指纹图谱的建立: 按2. 1. 3 项制备14 批肉苁蓉标准汤剂的供试品溶液，按2. 4. 1 项下色谱条件进样测定，得到14批肉苁蓉标准汤剂的UPLC 指纹图谱。将14 批供试品溶液的UPLC 指纹色谱图导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”( 2012 版) 软件以SI 为参照图谱，以0. 1 的时间宽度进行峰匹配，采用中位法生成肉苁蓉标准汤对照指纹图谱R( 见图1) ，同时计算相似度，结果( 见表3) 。由匹配图谱可以看出在肉苁蓉标准汤剂中有6 个共有峰。根据6 个共有峰的峰面积及保留时间计算出相对保留时间〔峰号( 平均相对保留时间) 〕分别为峰1 ( 0. 434) 、峰2 ( 0. 643) 、峰3 ( 0. 919) 、峰4( 1. 000) 、峰5( 1. 635) 、峰6( 1. 858) ; 相对峰面积，〔峰号( 平均相对峰面积) 〕分别为峰1 ( 6. 340 ) 、峰2 ( 0. 890 ) 、峰3( 0. 295) 、峰4( 1. 000) 、峰5( 0. 674) 、峰6( 0. 0190) ，指认了其中的1 号峰为松果菊苷、3 号峰为管花苷A、4 号峰为毛蕊花糖苷、5 号峰为异毛蕊花糖苷; 相似度分析表明， 14 批标准汤剂与对照图谱之间相似度在0. 789 ～ 0. 999 之间( 见图2) 。3 讨论3. 1 标准汤剂的制备中药饮片标准汤剂作为一种质量基准，标化不同临床用药形式，是当前中医药界的研究热点之一。标准汤剂的制备首先要求饮片来源具有地道性和代表性，故选择《中国药典》收载列当科肉苁蓉饮片9 批，德赢vwin登录 饮片5 批制备标准汤剂。制备前对饮片进行检测，均符合2015 年版《中国药典》各项规定。3. 2 供试品溶液进样量的考察标准汤剂中指标成分的含量测定试验中，供试品进样量为10 μL 时，肉苁蓉标准汤剂图谱中毛蕊花糖苷均未出峰，仅有松果菊苷出峰，德赢vwin登录 标准汤剂图谱中虽松果菊苷和毛蕊花糖均出峰，但是松果菊苷和毛蕊花糖苷峰面积均较小，且发现供试品色谱图在溶剂峰位置出一个很高的峰。经分析是因为供试品定容为无水乙醇不含水，且与对照品的配制溶剂50% 甲醇不一致，导致明显的溶剂效应，使得松果菊苷和毛蕊花糖苷无保留，部分样品松果菊苷和毛蕊花糖苷出峰是因为其含量相对较高，有部分保留。分别调整供试品进样量为5、3 μL 考察溶剂效应的消除效果，结果表明供试品进样量为3 μL 时，可完全消除溶剂效应，松果菊苷可正常出峰，故供试品进样量定为3 μL。同样地，通过供试品溶液进样量的考察消除了标准汤剂指纹图谱测定时产生的溶剂效应，确定最佳进样量为0. 4 μL。3. 3 肉苁蓉标准汤剂指纹图谱相似度低的原因探讨14 批肉苁蓉及德赢vwin登录 标准汤剂指纹图谱的相似度范围在0. 789 ～ 0. 999 之间。相似度最低批次是RCR-9 标汤为0. 789。其他批次相似度均0. 98 以上。RCR-9 标汤与其他样品比较，其整体的相似度都不高。从RCR-9 标汤的指纹色谱图可看出其相对其他样品在保留时间12. 278、15. 466 处有两个较明显的峰。由于中药中化学成分复杂，因此生长环境、采收时间、加工方式等的不同导致饮片的物质积累不同、成分含量均会存在差异。RCR-9 标汤相似度较低可能是因为种种因素导致该批饮片的物质积累与其他批次有所不同。3. 4 肉苁蓉标准汤剂的质量控制本实验分析了14 批肉苁蓉标准汤剂的出膏率、pH 值以及松果菊苷和毛蕊花糖苷的转移率。14 批肉苁蓉标准汤剂的出膏率范围为25. 1% ～56. 6%，其中由于德赢vwin登录 饮片相对肉苁蓉饮片含糖量低，所以德赢vwin登录 标准汤剂的出膏率均较肉苁蓉标准汤剂的出膏率低一些。14 批肉苁蓉标准汤剂的pH 值范围在4. 30 ～5. 15之间，由此可见肉苁蓉标准汤剂的酸碱度较稳定。14 批肉苁蓉及德赢vwin登录 标准汤剂松果菊苷转移率平均值为22. 99%，毛蕊花糖苷转移率平均值为17. 09%，其中德赢vwin登录 饮片制备标准汤剂指标成分转移率相对较稳定，而肉苁蓉饮片制备标准汤剂指标成分转移率批间差异相对较大一些。4 结论本研究采用UPLC 法建立了肉苁蓉标准汤剂的指纹图谱，可全面反映和评价肉苁蓉标准汤剂的内在质量。肉苁蓉标准汤剂的出膏率、指标成分转移率、指纹图谱分析结果均表明制备得到的14 批肉苁蓉标准汤剂整体均一性良好，其制备方法与临床一致，质量可控，有助于标准化肉苁蓉不同用药形式，保障药物临床疗效的一致性，解决因生产工艺、制备方法的不同而造成的质量差异问题。参考文献〔1〕国家药典委员会编. 中国药典( 一部) 〔S〕. 北京: 中国医药科技出版社，2015，135.〔2〕李承花，刘婧慧，徐珍霞，等. RP-HPLC 同时测定德赢vwin登录 中4种苯乙醇苷的含量〔J〕. 药物分析杂志，2010，30( 06) : 1003-1006.〔3〕丁燕，张开梅，苍小鑫，等. 肉苁蓉属化学成分及生物活性研究进展〔J〕. 大连工业大学学报，2016， 35( 06) : 395-402.〔4〕高妍，过立农，马双成，等. 基于UPLC 特征图谱及主要成分含量的3 种肉苁蓉比较研究〔J〕. 中国中药杂志，2019，44( 17) : 3749-3757.〔5〕陈士林，刘安，李琦，等. 中药饮片标准汤剂研究策略〔J〕. 中国中药杂志，2016，41( 08) : 1367-1375.

1 实验部分1.1 实验仪器H、H、S、21-型电热恒温水浴锅（上海医疗器械五厂）：TG328A 电光分析天平（上海天平仪器厂）：40目筛子（浙江宏兴仪器厂）KQ-250B型超声波提取器（昆山市超声仪器有限公司）；索氏提取器（浙江宏兴仪器厂）：766-2型远红外辐射干燥（上海阳光仪器有限公司）：HX-200A型高速中药粉碎机（浙江永康溪岸五金药具厂）；TU-1201型紫外分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）：PHS-3C精密数显酸度计（上海天达仪器有限公司制造）；荧光分光光度计（VARIAN）。1.2 实验试剂与药品肉苁蓉（实验室提供）：无水乙醇（分析纯）（沈阳市新化试剂厂：芦丁（标准品）（实验室提供）：50g／L亚硝酸钠溶液（自制）：100gL硝酸铝溶液（自制）；40gL氢氧化钠溶液（自制）：pH＝6.5的混合磷酸盐溶液：0.1mol／L磷酸氢二钠，0.1mol／L磷酸二氢钾：苯甲酸溶液：0.4000g苯甲酸（AR沈阳试剂厂），用pH＝9.5的混合磷酸盐溶液溶解后，用水稀释定容至100mL，避光保存备用：Cu溶液：1.0x10g／mL；过氧化氢（AR，沈阳第一试剂厂）：30％：0.1mol／L混合磷酸盐（磷酸氢二钠，AR，沈阳市新城化工厂；磷酸二氢钾，AR，沈阳市合富化学试剂经销）溶液：水为二次蒸馏水。1.3 肉苁蓉中总黄酮类化合物的提取1.3.1肉苁蓉中黄酮类化合物的提取（超声波法）精确称取2.0000g（过40目筛）的肉苁蓉放入100mL锥型瓶中，在常温下，按固液比1：15，加入95％的乙醇试剂，进行超声提取，每次进行超声震荡30min之后进行抽滤，将滤渣回收，再加入95％的乙醇试剂进行超声震荡，抽滤，超声提取3次，合并3次滤液，得到所需的提取物，加入95％的乙醇试剂定容于100mL容量瓶中，备用。13.2 肉苁蓉中黄酮类化合物的提取（索氏提取法）精确称取10.0000g（过40目筛）的肉苁蓉，用脱脂滤纸包好，一端扎好，放入索氏提取器的提取管内，将提取剂95％的乙醇试剂加入到提取瓶中约为容积的1／2，然后安装索氏提取器，用略高于提取剂（乙醇）沸点的恒温水浴进行索氏提取4h，之后冷却，进行旋转蒸发，浓缩，用95％的乙醇试剂定容于100mL的容量瓶中，备用。1.3 提取物质含量的测定和回收率实验1.3.1 含量测定及回收率实验取6个25mL的容量瓶，从用超声法提取的肉苁蓉样品液中吸取0.10、0.20、0.30mL于前3个容量瓶中，后3个容量瓶中加入同样多的样品液，然后分别加入1.0mL的芦丁标品液，向这6只容量瓶中依次加入50gL的亚硝酸钠溶液1mL，摇匀，静置7min；加入100g／L硝酸铝溶液1mL，摇匀，静置7min：加入40g／L氢氧化钠溶液10mL，同样摇匀静置7min：用95％的乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，静置15 min：以加显色剂的空白液为参比，在503nm 处测定吸光度A，通过标准曲线计算出浓度C.表1 肉苁蓉中黄酮类化合物的含量加标苗吸取的洋慧肉中黄酮平均值(7831)样品量／mL（33）盖(,33*)21.122010260958.7341.476256214.48256.753.9762.3450.30256753.97取6个25mL的容量瓶，从用索氏提取法提取的肉苁蓉样品液中吸取15mL重新定容于100mL容量瓶中，在其中移取 0.40、0.50、0.60mL 于前3个容量瓶中，后3个容量瓶中加入同样多的样品液，然后分别加入1.0mL的标品液，加入50gL的亚硝酸钠溶液1mL，摇匀，静置7min：然后加入100g／L硝酸铝溶液1mL，摇匀，静置7min：再加入40gL氢氧化钠溶液10mL，摇匀，静置7min；用95％的乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，静置15min，以其空白液为参比，在503nm处测定吸光度A，通过标准曲线计算出浓度C.13.2 稳定性实验的测定移取样品液0.2mL 依次加入显色剂50gL的亚硝酸钠溶液1mL，摇匀，静置7min：加入100gL硝酸铝溶液1mL，摇匀，静置7min；加入40g／L氢氧化钠溶液10mL，同样摇匀静置7min；用95％的乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，静置15min；以加显色剂的空白液为参比，然后用紫外可见分光光度计进行测定，时间设置2h，结果发现样品液吸光度在2h内很稳定基本保持不变。表2 肉苁蓉中黄酮类化合物的含量加标前(,33)吸取的样品量／mL洋慧肉中黄酮含量（）平均值(s)29.4850.40122715.5036.6630.50122072.06122302.63440130.60122120.341.4 肉苁蓉中黄酮类化合物抗氧化性的分析催化动力学荧光法测定中草药对羟基自由基的清除率1.41 实验方法在一系列25mL的比色管中加入苯甲酸溶液，再依次加入一定量的Co和过氧化氢，用pH＝6.5的混合磷酸盐溶液稀释定容至25mL，摇匀，于沸水浴中放置45min后测定各溶液的荧光强度。中草药对羟基自由基的清除率公式可表达为：清除率＝［1-（1-）／（1-4）］x100％其中：去一加入中草药后催化动力学体系中溶液的荧光强度：一加入中草药前催化动力学体系中溶液的荧光强度：4一事保化动力学体系中只有苯甲酸存在洛液荧光强度。1.42 样品对羟基自由基的清除率的测定样品液的制备：准确称取粒度为450μm的样品1.0000g，在常温下，用60mL无水乙醇超声波提取3次，每次所用试剂20mL，时间间隔为10min，将3次提取液合并过滤，滤液用无水乙醇定容至100mL容量瓶中。试剂制备：称取磷酸氢二钠7.16g，加入200mL水得0.1molL 溶液：称取磷酸二氢钾2.72g，加如200mL水 得0.1mol／L溶液。将两溶液混合，用pH酸度计调制成pH＝6.5的混合磷酸盐称取0.4000g苯甲酸（AR沈阳试剂厂），用pH＝9.5的混合磷酸盐溶液溶解后，用水稀释定容至100mL，避光保存备用：称取0.1547gCu，用1mol／L的盐酸溶解，制得100mL的1mol／LCu溶液配制30％的双氧水溶液。取样品液0.2mL于25mL的比色管中，依次加入苯甲酸 过氧化氢Cu，用pH＝6.5的混合磷酸盐溶液稀释定容至25mL，摇匀，按清除率公式测得样品对羟基自由基的清除率。1.4.3 计算结果表3 计算结果样品名备62浓度(,70.30)清除率％肉成蓉48845 292.906951.3500.080.5491.5结论：肉苁蓉中黄酮类化合物的抗氧化性很强。2 结果与讨论（1）利用“超声波法”和“索氏提取法”分别对肉苁蓉中的总黄酮进行提取，这两种方法比较得出：超声波法大大缩短了提取时间，提高了有效成分的提出率，原料的利用率从而节省原料。相反索氏提取法既费时又费力，提取效果又不好，因此采用超声波法提取总黄酮是最佳的提取工艺，具有很强的现实意义。（2）对总黄酮类化合物进行紫外光谱定性分析，得出芦丁是很合适的标准品，通过实验计算得肉苁蓉中总黄酮的含量很高，精密度较高，回收率在96.85％～99.46％，样品在2h之内基本保持稳定。（3）应用荧光法对肉苁蓉中的总黄酮进行抗氧化性的分析测定，结论：计算清除率为91.5％，说明肉苁蓉自身具有很强的抗氧化作用，可清除自由基，抑制脂质氧化等，这在医学领域中对抗衰老、癌变、炎症、辐射组织缺血等疾病的研究具有很高的价值。

宋阳（鞍山市产品质量监督检验所，辽宁鞍山 114006）摘 要：利用“超声波震荡法”和“索氏提取法”分别提取了肉苁蓉中的总黄酮类化合物。并对其含量及抗氧化性能进行了分析，测定结果表明超声波振荡法提取肉苁蓉中总黄酮类化合物的含量高于索氏提取法提取的含量。通过实验测定回收率在96.85％～99.46％，精密度较高，样品液在2h内很稳定，说明紫外可见分光光度法准确度较高，偏差小，实验条件易控制，用荧光法对肉苁蓉中黄酮类化合物抗氧化性的分析和测定，清除率为91.5％，说明肉苁蓉中黄酮类化合物具有很强的抗氧化性。实验中发现用荧光分析法测定提取物中总黄酮类化合物的抗氧化性具有快速、简便、灵敏度高、重现性好等优点。关键词：肉苁蓉：黄酮：超声波：抗氧化性中图分类号：TQ 028   文献标识码：A   文章编号：1004-0935（2013）01-0013-03肉苁蓉作为一味补益良药，应用广泛。肉苁蓉的药理作用和化学成分的研究近年来取得了很大进展。内蒙古阿拉善苁蓉集团开发出了滋阴补阳、润肠通便、增强人体免疫功能、调节内分泌、延缓衰老的系列苁蓉酒、苁蓉养生液。日本将肉苁蓉苷作为性机能障碍和健忘症的改善剂或治疗剂，在美国松果菊苷也被制成保健品，用于提高机体免疫力。在此基础上，我们应对其药理作用的有效成分及其作用机理进行深入研究，在保证药效的前提下，改进中药传统制剂，提高质量控制水平，发展疗效确切，使用安全质量可控的中药新产品：另一方面，我们也应加强肉苁蓉栽培技术的研究，实现肉苁蓉规范化种植和产业化生产，人工种植建立起肉苁蓉及其寄主植物产业化栽培基地，在解决了资源短缺问题的同时还会进一步实现西部荒漠地区的环境治理。随着各方面研究的不断深入，必将推动我国这一传统中药迈向国际市场，加速我国中药现代化进程。

张青，夏美茹，孙志惠（内蒙古河套学院 农学系，内蒙古 临河 015000）摘要：肉苁蓉中含有多种生物活性物质，具有较高的营养和保健功能。通过分类总结肉苁蓉活性物质及其体外抗氧化活性评价方法，为肉苁蓉抗氧化活性研究及相关领域的研究提供依据。关键词：肉苁蓉；活性物质；抗氧化活性；体外抗氧化评价中图分类号：R282    文献标志码：A    doi:10.16693/j.enki.1671-9646(X).2018.11.016Research Progress of Antioxidant Function Evaluation in Vitro ofBioactive Substances in CistancheZHANG Qing,XIA Meiru,SUN Zhihui(Agriculture Department,Hetao College,Linhe,Inner Mongolia 015000,China)Abstract:Cistanche contains a variety of bioactive substances,high nutritional and health care function.The aim of this paperwas to classify and summarize the active substances of cistanche and the evaluation methods of antioxidant activity in vitro.Thisreport provided the reference for the antioxidant activity research of cistanche and related fields.Key words:cistanche;the bioactive substance;antioxidant function;antioxidant evaluation in vitro肉苁蓉始载于《神农本草经》，享有“沙漠人参”之美誉，为列当科肉苁蓉属多年生草本植物，多寄生于藜科梭梭属植物的根部，主要分布于欧洲、亚洲温暖的干燥地区，我国的肉苁蓉主要分布于内蒙古（阿拉善盟、巴彦淖尔市）、新疆、甘肃等地。从20世纪80年代至今，国内外学者对肉苁蓉的化学成分及生物活性进行了深入研究并取得较大的成绩，已从中分离到苯苷类、环烯醚萜类及其苷类、木质素、黄酮类等活性成分，其具有益肾壮阳＂、通便润肠、保护肝脏口、免疫调节、抗衰老、抗肿瘤、提高学习记忆力间、抗骨质疏松＂、促进创伤愈合、保护缺血心肌、改善微循环等作用。从肉苁蓉活性物质、体外抗氧化活性评价方法及抗氧剂的应用等方面介绍了近年来肉苁蓉活性物质的研究进展。1 肉苁蓉抗氧化活性物质1.1 苯乙醇苷类苯乙醇苷化合物具有较强的生物活性和显著的药理活性特性网。从肉苁蓉中共分离鉴定出苯乙醇苷类61个，包括肉苁蓉苷、松果菊苷、毛蕊花糖苷、类叶升麻苷、异类叶升麻苷、红景天苷等。屠鹏飞等人研究肉苁蓉成分，结果表明其主要的活性成分是苯乙醇总苷（主要指标性成分是松果菊苷和毛蕊花糖苷），苯乙醇总苷是肉苁蓉质量控制的主要检测指标。曾克武等人口利用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻断模型，考查肉苁蓉苯乙醇苷的脑保护作用，结果表明，从靶点源头上解释了肉苁蓉苯乙醇苷发挥抗痴呆、缓解疲劳、抗肿瘤、免疫调节等诸多作用的潜在药理机制。1.2 环烯醚萜及其苷类环烯醚萜类化合物具有多种生物活性，从肉苁蓉中共分离鉴定出环烯醚萜及其苷类25个”。京尼平苷酸又称梔子苷酸，是一种环稀醚萜葡萄糖苷，具有消炎利胆等功效成分，因此在临床上用于降血压、止痛、镇静等。李莉等人口采用高效液相色谱法对肉苁蓉中京尼平苷酸的含量进行测定，结果表明在5.0～100.0 μg／mL范围内线性关系良好（R＝0.9999），平均回收率在95％～101％，RSD为0.55％～1.95％。1.3 黄酮类黄酮类化合物具有重要的生物活性，王慧“研究发现黄酮类化合物具有抗肿瘤、抗心血管疾病、抗氧化、抗衰老、抗菌、抗病毒、免疫调节等作用，徐常永等人采用大孔吸附树脂对肉苁蓉总黄酮的吸附作用，通过吸附试验和正交试验得到肉苁蓉总黄酮分离纯化较佳的工艺条件，分离纯化前后总黄酮的质量分数由6.63％提高到72.35％。1.4 其他目前，国内外的专家和学者已从肉苁蓉中已分离并鉴定出100种以上化学成分和微量元素，除上述成分外，还有木脂素及其苷类、多糖、生物碱、烃类、氨基酸类、菇类、挥发性成分、无机微量元素等成分。2 肉苁蓉活性物质体外抗氧化活性的评价方法2.1 肉苁蓉活性物质对DPPH·清除率评价方法的研究DPPH·（1.1-二苯基-2-三硝基苯肼）在517nm处有最大吸收峰，是一种较为稳定的自由基，因其稳定性好、灵敏度高、设备要求不高面成为检测抗氧化能力首选。DPPH·的醇溶液呈深紫色，当自由基清除剂存在时，其吸收逐渐消失即颜色变浅，它的褪色程度与自由基清除剂接受的电子数成定量关系。DPPH·清除率最常用的检测方法是分光光度计法，还可用高效液相色谱、电子核共振、薄层层析等技术进行检测。肖星辉等人采用乙醇-盐双水相萃取法对荒漠肉苁蓉总黄酮的体外抗氧化性进行研究。结果表明，荒漠肉苁蓉总黄酮对DPPH·具有有效的清除作用，其对DPPH·清除率最高可达91.8％，具有较好的抗氧化活性。王国卫等人”通过试验表明肉苁蓉多糖对DPPH·的清除能力与其浓度呈正相关，且清除能力大于抗坏血酸。2.2 肉苁蓉活性物质对羟基自由基清除率评价方法的研究羟基自由基（·OH）在510mm处有最大吸收峰，是氧化能力较强的自由基，可与体内的脂肪等有机物大分子发生连续反应，引起机体损伤。抗氧化剂用量与·OH清除能力成正比，一般以水杨酸作为捕捉剂。·OH清除率最常用的检测方法是紫外可见分光光度法，目前还可用荧光法、电子自旋共振法、化学发光法，高效液相色谱法等方法。肉苁蓉活性成分具有清除·OH的能力，肖星辉等人研究荒漠肉苁蓉总黄酮对·OH的体外抗氧化性，结果表明，荒漠肉苁蓉总黄酮可以有效清除·OH，其对·OH清除率最高可达35.9％。宋阳采用荧光法对肉苁蓉中黄酮类化合物抗氧化性进行测定，其对·OH清除率为91.5％，结果表明肉苁蓉中黄酮类化合物具有很强的抗氧化性。王国卫等人”通过试验表明肉苁蓉多糖对·OH有良好的清除作用，且随浓度增大而增大。2.3 肉苁蓉活性物质对ABTS·清除率评价方法的研究ABTS［2,2＇-联氮双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐］在414nm或734nm处有最大吸收峰，具有还原性，易被氧化成相对稳定的蓝绿色水溶性ABTS，ABTS·与抗氧化剂反应后溶液褪色，褪色越强，吸光度越低。溶液退色程度与溶液的抗氧化能力成正比。黄靖等人“采用超声酶法对肉苁蓉多糖ABTS·的清除能力的测定，通过试验表明在50～1000mg／L范围内，肉苁蓉多糖锌配合物对ABTS·的清除能力高于肉苁蓉精制多糖；当质量浓度为1000mg／L时，肉苁蓉多糖锌配合物对ABTS·清除率达到36.83％。2.4 肉苁蓉活性物质其他体外抗氧化活性的研究方法肉苁蓉活性成分除了以上体外抗氧化研究方法外，还常用到总还原力测定（铁氰化钾法）、氧自由基吸收量的测定、抗氧化当量的测定、超氧自由基（02）清除能力的试验等体外抗氧化研究方法。3 结语近年来，专家学者们对肉苁蓉抗氧化活性进行了大量的研究，结果表明肉苁蓉在体内外可清除各种自由基，提高机体内抗氧化酶的活性，体外抗氧化活性是用以评价抗氧化剂抗氧化活性的一种快速、简便、灵敏可行的方法叫。肉苁蓉作为一种传统中药材，多年来的试验研究表明，肉苁蓉有重要的药用价值和经济价值，根据肉苁蓉所具有的药理作用等已研制出肉苁蓉产品有苁蓉总苷胶囊、苁蓉四倍丸严、复方苁蓉益智胶囊等用于临床应用。据阿拉善盟科技技术局获悉，从2014年正式启动了荒漠肉苁蓉申报新食品原料项目工作；2018年1月，国家卫计委下发通知公开征求意见，将肉苁蓉（荒漠）、党参等9种物质增补一批既是食品又是中药的物质进入食药物质目录，阿拉善荒漠肉苁蓉被列入拟重点研究的物质名单要求荒漠肉苁蓉试生产2年。未来可以通过一定的加工技术、微生物技术等来实现肉苁蓉有效成分的工业化生产，满足实际需要，解决资源破坏和浪费问题。因此肉苁蓉可以借鉴之前药品的开发经验发展保健类食品，其开发方面具有着广阔的前景。参考文献：[1] 王德俊，盛树青，梁虹，肉苁蓉对小鼠睾丸和附翠形态学与组织化学的影响J），解剖学研究，2000,22（2）：101-103.[z] 王丽卫，孙健、赵兵，等，肉苁蓉膳食纤维润肠通便功能研究．食品安全质量检测学报，2016（7）：3.740-37443] Wu Y.Li L.Wen T, et al. Protective effects of echinacoside on carbon tetrachloride induced hepatotoxicity in rats [J.Toxicology,2007(1/2):50-56.张涛，许文胜，贾彦斌，等，肉苁蓉多糖对THP-1细

1 材料与方法1.1 材料Hela 细胞（人宫颈癌细胞），购自上海细胞生物研究所：松果菊苷（echinacoside）由本实验室从荒漠肉苁蓉中分离纯化得到，经HPLC-ELSD检验，以松果菊苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111670）为对照，测得纯度为95.1％；毛蕊花糖苷（acteoside）由本实验室从荒漠肉苁蓉中分离纯化得到，经HPLC-ELSD检验，以毛蕊花糖苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111530）为对照，测得纯度为96.4％：质粒 ERa、ERβ、EREtue、Renila（本实验室提取）：雌二醇（E2），Sigma 公司：胎牛血清（FBS），PAA公司：活性炭处理胎牛血清（CS-FBS），PAA公司：无酚红DMEM.Sigma公司：二甲基亚砜（DMSO），Amresco 公司：LB培养基，上海生工生物科技公司：Passive Lysis 5X Buffer，Promega 公 司：Lipofectamine 2000．Promega 公司：质粒提取试剂盒，TIANGEN公司：荧光素酶报告基因检测试剂盒为Promega公司产品。1.2 细胞培养Hela细胞培养于含10％胎牛血清的DMEM培养液中。实验前至少提前一代换为含1％活性炭处理的胎牛血清的DMEM培养液。1.3 转染及荧光素酶活性测定将Hella细胞以70％～80％密度接种到24孔板，待细胞贴壁后，细胞密度为90％时，按照 lipo-fectamine2000转染试剂说明转染ERa、ERβ表达质粒和ERE、Renila报告质粒，8h后换液并加入不同浓度的受试药物，培养过夜后，用多功能读板机分别检测雌激素应答元件ERE荧光素酶的活性，计算药物对荧光素酶活性的相对影响。1.4 数据处理和统计学分析采用SPSS18.0统计软件，数据以平均值±标准差（x±s）表示，组间比较采用单因素方差分析（ANOVA）和Dunnett多重比较：检验对数据进行分析，P＜0.05被认为有统计学意义。2 实验结果2.1 毛蕊花糖苷对雌激素应答元件ERE荧光素酶活性的影响结果显示，由ERa、ERβ介导时与对照组相比，E2110nmol）能显著上调雌激素应答元件ERE荧光素酶活性，毛蕊花糖苷在10、100、1、10、50 μmol时均能上调雌激素应答元件ERE荧光素酶活性，当浓度达到50μmol时对ERE荧光素酶活性的上调作用与雌二醇相当，且有计量依赖性，但是对雌激素受体ERa、ERβ的选择性不明显（图2）。 图2 毛蕊花糖苷以浓度依赖方式对ERE荧光素酶活性的影响Fig.2 Effects of different concentrations of acteonide on the Inciferase activity of ERE注：与对照维比较，P＜0.05与E组比较．P＜0.05．n＝4Nate: comprnd wih conted grp.P<0.05.ompared wih E gmup-P<0.05:m=42.2 松果菊苷对雌激素应答元件 ERE荧光素酶活性的影响结果显示，由ERa、ERβ介导时与对照组相比，E2（10nmol）能显著上调雌激素应答元件ERE荧光素酶活性，松果菊苷在10、100、1、10、50 μmol 时均能上调雌激素应答元件ERE荧光素酶活性，当浓度达到50μmol时对ERE荧光素酶活性的上调作用略低于雌二醇，且也有计量依赖性，但是对雌激素受体ERa、ERβ有微弱的选择性差异（图3）。 图3 松果菊苷以浓度依赖方式对雌激素应答元件 ERE荧光素酶活性的影响Fig 3 Efects of different concentrations of echinacoside on the haciferase activity of ERE注与对照组比较，P＜0.05与E2组比较，P＜0.05：n＝4Note mmpund wih mntral gruup.P<0.05 cumpured with E pap,P<0.05.n=42.3 毛蕊花糖苷和雌二醇对雌激素受体的竞争性结合作用结果显示毛蕊花糖苷能与雌二醇竞争性结合雌激素受体，拮抗雌二醇对雌激素应答元件ERE荧光元件ERE的荧光素酶活性，且毛蕊花糖苷表现出剂量依懒性，当浓度达到50μmol时对雌二醇的拮抗作用素酶活性的上调作用。与E2（10nmol）组相比，毛蕊花糖苷在1、10、50 μmol时均能不同程度的下调雌二醇对雌激素应答最明显（图4）。 图4 毛蕊花糖苷以剂量依赖方式拮抗雌二醇对雌激素应答元件ERE荧光素酶活性的影响Fig.4 Acteoside can stop estradiol to up mgulation the lu-cifease activity of ERE注：与对照组比较，P＜0.05：与E组比较．P＜0.05．m＊4Nate companel wih tl gpP<0.05.ompard wih E map.P<0.05.n=42.4 松果菊苷和雌二醇对雌激素受体的竞争性结合作用结果显示松果菊苷同样能与雄二醇竞争性结合雌激素受体，拮抗雌二醇对雌激素应答元件ERE荧光素酶活性的上调作用。与E2（10nmol）组相比，毛蕊花糖苷在1、10.50μmol时均能不同程度的下调雌二醇对雌激素应答元件ERE的荧光素酶活性，且松果菊苷表现出剂量依懒性，当浓度达到50μmol时对雌二醇的拮抗作用最明显（图5）。 图5 松果菊苷拮抗练二醇对雄激素应答元件ERE荧光素酶活性的影响Fig 5 Echinacuside can stop estradiol to up replation the Inciferase activity of ERE注：与对照组比较，P＜0.05：与E组比较，P＜0.05m＝4Nate: compamd with contel guup.P<0.05 mpand wih E moup-P<0.05.n=43 讨论本实验首次通过明确数据显示肉苁蓉中主要有效成分松果菊苷和毛蕊花糖苷能结合雌激素受体ERa、ERB.上调ERE的荧光素酶活性而发挥雌激素作用，表现出SERMs活性。对上述实验数据进行分析后表明，在ERa体系中毛蕊花糖苷在50μmol时对雌激素应答元件ERE荧光素酶活性的上调作用相当于E2（10mmol）时的0.977倍，在ERβ体系中相当于0.970倍：同样，在ERa体系中松果菊苷在50 μmol时对雌激素应答元件ERE荧光素酶活性的上调作用相当于E2（10nmol）时的0.874倍，在ERβ体系中相当于0.937倍，固毛蕊花糖苷对对雌激素应答元件ERE荧光素酶活性的上调作用略微高于松果菊苷，且对雌激素受体ERa、ERB的选择性不明显，而松果菊苷对雌激素受体ERa、ERβ有微弱的选择性差异，这些差异可能和毛蕊花糖苷和松果菊苷的R4位连接的基团不同有关。维激素主要通过雌激素受体发挥作用，维激素受体主要有两种亚型ERα、ERB，雌激素和有雌激素作用的物质和雌激素受体结合形成二聚体，然后二聚体与雌激素应答原件ERE结合，进而发挥雌激素效应口m。植物雄激素和维激素具有相似的结构和功能。，研究表明植物雌激素能调节骨代谢，对于维持骨吸收和骨形成的平衡具有极其重要的作用，对老年性机能减退患者的骨质疏松有一定的临床防治作用。故推测肉苁蓉促进骨再生、抑制妇女绝经后期骨质疏松形成的作用是通过其植物雌激素作用而发挥疗效的。本实验还表明松果菊苷和毛蕊花糖苷能与雌二醇竞争性的结合雌激素受体，拮抗雌二醇对ERE荧光素酶活性的上调作用，此作用机制和白藜芦醇等已知植物雌激素成分作用相似。进一步说明松果菊苷和毛蕊花糖通过结合雌激素受体ERa、ERB而发挥雌激素作用。上述对肉苁蓉的植物雌激素活性及其发挥雌激素作用机理的研究，为肉苁蓉可能通过改善机体雌激素水平发挥延缓、抑制妇女绝经后期骨质疏松的形成或者治疗由于机体雌激素水平下降而引起的骨质疏松提出了可能，为扩大肉苁蓉的临床药用范围提供了理论依据