推荐：广东省中医院临床营养科主要功效：补脾暖身、温中暖脾推荐理由：冬季手脚不温、怕冷，疲乏、腰膝酸软者。材料：肉苁蓉30g、莲子50克、羊肉250克、生姜5片（3-4人用量）。烹调方法：羊肉洗净切成块状，飞水去血水捞出，与药材、生姜同放入汤煲，加水2000ml，大火煲15分钟后改小火煲1小时，加少量食盐调味即可。喝汤之余，羊肉可捞起切小块，蘸酱油佐饭。汤品点评：今年的11月7日是立冬，立冬表示自此进入了冬季，意味着风雨、干湿、光照、气温等均开始从秋季向冬季气候过渡。今年由于拉尼娜现象的形成，可能将会成为40年以来最冷的冬天，时间甚至会持续到明年2月。这种时候，就应该来点暖身汤水。羊肉有温补之效，属于高蛋白质类食物，寒冬吃它既能进补又能御寒，非常合适。肉苁蓉是温阳类药材，生长在沙漠，被称为“沙漠人参”，常与杜仲、巴戟天、枸杞等同用以温补肾阳。肉苁蓉本身质润功能通便，也适用于老年人的肠燥便秘，汤里加入了莲子，补脾补心的同时也能避免脾虚腹泻。购买小提示，在购买羊肉的时候，要留心辨别真假。特别是切片羊肉，真正的羊肉纹理细腻，切片后可见肥瘦分布自然均匀，肥肉是一丝丝夹在瘦肉里，而不是互相分离的。（广州日报）

　肉苁蓉是很好的药草，可以滋润身体，很多人都不知道肉苁蓉的食用方法是什么，因为肉苁蓉比较硬，所以肉苁蓉可以和鸡肉炖汤，也可以和黄精泡水喝，用肉苁蓉泡酒也可以把肉苁蓉的功效发挥出来。　　肉苁蓉的食用方法是什么?　　1. 炖煮肉苁蓉　　肉苁蓉的食用方法有很多，但是肉苁蓉在完整时，都是比较长和硬的，所以肉苁蓉在食用时，比较适合用炖煮的方法，可以让肉苁蓉里面的有效成分释放出来，在炖肉苁蓉时，可以加一些鸡肉，羊肉和排骨也是很好的选择，先用猛火煮三十分钟，然后再用小火炖十分钟，放一点调料之后就可以享用，也可以在肉苁蓉里面加一点大米煮粥喝。　　2. 肉苁蓉泡酒　　想要食用肉苁蓉，可以先把肉苁蓉洗好阴干，放进带盖子的瓶子里面，再加入适量的酒，度数大概在五十度左右，放在阴凉的地方浸泡一个星期，肉苁蓉酒就可以喝了，每次少喝一点点即可，肉苁蓉大部分的营养都可以溶到酒中，需要注意的是，如果自己患有高血压和糖尿病，或者肝脏功能出现问题，就不适合喝肉苁蓉酒，因为酒精需要肝脏分解，会给患者的身体代谢增加负担，让病情更加严重。　　3. 肉苁蓉和黄精泡水喝　　肉苁蓉是药草，如果想要食用肉苁蓉时，需要先咨询医师，看看自己能否食用，肉苁蓉可以泡水喝，对视力也会有一定的好处，可以加一点黄精，因为黄精和肉苁蓉里面，含有一定的微量元素，包括镁等物质，可以让人体的细胞更有活力，可以缓解眼部的疲劳。　　在肉苁蓉里面，有很多特殊的物质，可以帮助大家对肺部位进行保护，尤其是氨基酸，含量会比较丰富，当身体吸收了这些物质之后，就可以让肺部得到湿润，不会出现干燥的现象，身体的抵抗能力也会得到加强，这时肝脏分解吸收的压力就会比较小，可以得到很好的养护，体内代谢产生的垃圾很快就可以排出到体外，如果自己经常会感觉到腰酸，可以用黄精和肉苁蓉泡水喝。

一、山药＋桑白皮山药具有补肺脾肾气阴，促进自身激素分泌，加上桑白皮清肺美白皮肤。特别适用于长有雀斑、黄褐斑、黑斑的人；皮肤晦暗、面部无光泽的人；注重自身风采的现代白领；工作节奏紧张、无暇保养的人；皮肤干燥的人；经常户外工作、常受紫外线辐射的人；头发干枯，指甲无光泽、易断裂的人。二、黑芝麻＋胡桃肉黑芝麻具有补血调经的作用，胡桃肉具有补肾添元气的作用。适用于注重自身风采的现代白领；希望保持青春状态之女士；工作节奏紧张，常感疲劳者；身体虚弱之人士，免疫力低下者；内分泌失调，更年期前后女士；也适用于用脑过度，常感困倦者；40 岁以上的中年人；爱打瞌睡之老年人。三、制首乌＋决明子制首乌具有补血通便的作用，决明子具有化痰降血脂的作用。适用于免疫力低下，经常进食高脂膳食者，高血脂的人群；便秘以及心血管疾病患者；工作紧张，饮食无规律者。也适用于高血压、高胆固醇、动脉硬化、心脏血管疾病患者；血脂症、肥胖症；记忆力减退、老年痴呆。四、薏米仁＋知母薏米仁具有清湿热、抗病毒的作用，知母具有清热滋阴的作用。所以适用于口腔有异味者；有青春痘，扁平疣等皮肤问题者；减肥人士；糖尿病患者。五、杜仲＋益智仁杜仲具有补肾除风湿降血压的作用，益智仁具有固肾的作用，所以适用于关节炎患者；尿频、夜间排尿次数增多；排尿困难，排尿感到疼痛，排尿时间延长；常感会阴部不适；尿液浑浊，尿中带血或带脓；尿流变细；常感排尿不尽（出现残余尿）；出现肾功能不全、肾性高血压等症状。六、肉苁蓉＋虎杖肉苁蓉具有温阳通便的作用，虎杖具有清热解毒、清肝利胆、活血化瘀、泻下通便、化痰止咳等作用。所以适用于饮酒过量的人；肥胖的人；有习惯便秘的人；适用于心肌供血不足，冠心病患者；常感困倦者；希望延缓衰老、保持青春者；长有雀斑、黄褐斑者；长有老年斑的中老年人。七、白菊花＋麦冬白菊花具有清肝明目的作用，麦冬具有滋阴利咽的作用，所以适用于长期受电脑、手机、电视辐射者；工作节奏紧张、无暇保养者；二目干涩、眩晕者；经常户外工作，常受紫外线辐射人士。以上中药均可各取10 克泡水代茶饮，大家不妨一试。

[摘要] 目的观察培本通便汤治疗老年习惯性便秘的临床疗效。方法采用自拟培本通便汤加减治疗40 例患者。结果总有效率95%。结论培本通便汤治疗老年习惯性便秘效果良好。[关键词] 习惯性便秘; 中医治疗; 培本通便汤; 老年习惯性便秘是老年人的常见疾病, 排除肠道及肛管器质性病变, 以大便秘结不通、排便艰涩不畅为主要症状[1]; 大多数患者长期服用缓泻剂或药物肛门导泻, 症状反复发作或无效, 严重地影响着老年人身体健康[2]。笔者自2001～2007 年6 月, 运用自拟培本通便汤加减观察治疗本病40 例, 收到了良好的效果, 总结如下。1 临床资料1.1 诊断标准采用《中医内科学》教材的诊断标准诊断[3]。1.2 一般资料本组病人40 例, 均为门诊病人, 年龄最小55 岁, 最大83岁, 其中55～65 岁23 例, 66～75 岁12 例, 76 岁以上5 例, 平均年龄68 岁。病程最长12 年余, 最短两月余。1.3 治疗方法方用自拟培本通便汤: 何首乌、核桃仁、黄芪、火麻仁各30g,白术20g, 肉苁蓉、当归、枳壳、桃仁各15g, 水煎, 每日1 剂, 分2～3 次服, 每次用蜂蜜30g 冲服, 糖尿病患者禁用。气虚甚者加入参10g, 舌红口渴加玄参、麦冬各15g, 大便燥结甚者加大黄10g, 肢凉腹冷加肉桂10g、补骨脂15g, 两周为一疗程, 患者须多食蔬果, 慎食辛辣温燥食物, 调节情志, 适度运动, 养成定时排便习惯。1.4 疗效标准痊愈: 排便1 日1 次, 便质转润、排便通畅、短期( 1 月) 内无复发; 好转: 2～3d 排便1 次, 便质转润、排便欠畅; 无效: 症状无明显改善。2 结果服药时间最短两周, 最长12 周, 痊愈22 例, 占55%; 好转16例, 占40%; 无效2 例, 占5%; 总有效率95%。3 典型病例肖X, 男, 66 岁, 退休干部, 2002 年3 月21 日初诊, 主诉反复大便干燥难解10 年余, 初则大便3～4 日1 次, 近两年5～7 日难得大便1 次, 便时艰涩。曾反复服果导片、蕃泻叶, 外用开塞露以及中医药等泻下通便, 疗效短暂; 症状逐渐加重, 经检查排除肠道器质性病变。就诊时, 大便10d 未解, 伴头晕目眩, 倦怠乏力, 腰膝酸软, 舌淡白, 脉沉细无力。诊断为老年习惯性便秘。辨证: 脾肾亏虚, 气血不足, 大肠传导功能失司。治宜补肾健脾, 益气养血, 润肠通便。方用自拟培本通便汤加减: 黄芪、核桃肉、何首乌、火麻仁各30g, 白术20g, 肉苁蓉、熟地、当归各15g, 人参、枳壳各10g, 每次冲服蜂蜜30g, 嘱患者调节饮食、精神、运动, 定时入厕蹲便, 服药1 周, 大便变软, 两日排便1 次, 至服药3 周,大便已能稳定1 日1 次, 质润便畅, 再巩固用药3 周, 随访一年未复发。4 讨论习惯性便秘, 属于功能性便秘。老年习惯性便秘由肺、脾、肾多脏器逐渐亏损为常见病因。因大肠仅为大便传导之器, 维持正常的排便, 有赖于肺、脾、肾等脏器的功能正常及相互协调[4]。肺主气、主肃降, 与大肠相表里。脾主运化, 为气血生化之源。肾主二阴, 藏五脏之精, 滋生五脏之阴阳。年老肾中精气枯涸, 五脏失养, 互失滋生, 气血阴精乏源。致大便气虚无力推动, 阳虚气化不行, 阴血亏损肠道干涩, 大肠传导功能失司, 形成老年习惯性便秘; 其正气易耗难扶, 应予培本扶正, 慎用破气攻下伐正, 亦慎滋腻寒凉伤脾。免犯虚虚之戒, 治疗宜补肾健脾益气, 滋阴养血润肠。培本通便汤中肉苁蓉、核桃仁、何首乌补肾益精、润肠通便;黄芪、白术补益肺脾, 化生气血, 白术还有良好的润肠通便作用;当归养血滑肠; 火麻仁、桃仁润肠通便, 桃仁还可行因虚和便秘日久之瘀; 蜂蜜滋养补中, 滑肠通便, 枳壳行气通便。诸药合用,使补正而不滋腻, 通便而不伤正。肺、脾、肾功能恢复, 五脏得以滋生, 气血充足流畅, 便秘之本得治。适宜于肺、脾、肾诸虚无明显实证兼夹者。[参考文献][1] 张伯叟. 中医内科学[M]. 第5 版. 上海: 上海科学技术出版社, 1985:170.[2] 刘彦玲. 急性心肌梗死患者便秘的辨证论治[J]. 中国现代医生, 2007,45( 11) : 93, 116.[3] 田德禄. 中医内科学[M]. 北京: 中国中医药出版社, 2005: 283.[4] 詹先蓉, 刘青. 通便汤治疗老年习惯性便秘30 例[J]. 四川中医, 2002,20( 10) : 42.

肠道是人体的一个极其重要的排毒器官，如果出现排便无力、便秘的时候，粪便就会在肠道内被反复吸收，如果经常排便不正常，人们不仅会出现面部痤疮、色素沉着、肥胖、体臭等不适，甚至还有可能诱发癌症。记得有一次，我跟一个肛肠科的大夫一起聊天，他说最近碰到一个直肠癌晚期的病人，是位38 岁的女士。在做手术的时候，主刀的大夫把她的直肠一打开—好家伙！一股刺鼻的臭味马上传遍了整个手术室，大家虽然都戴着医用口罩，仍然被熏得难以忍受。手术结束以后大家都在讨论，像这种慢性顽固性便秘的病人，怎么会不得癌症呢？因此，保持大便通畅非常重要。要想保持大便通畅，喝海参粥是个不错的方法。取海参10 克、木耳20 克、猪大肠50 克，把木耳用水泡发以后，将海参和猪大肠切成丁，一同加水放入锅中煲熟，加入调料即可。大约做成两三碗的样子，根据自己的饭量，早晚一顿，吃完就可以了。一位朋友说自己最近一段时间便秘，好几天都不怎么解大便。大便排不出来就像是垃圾堆在了肚子里，非常难受，让人整天都感觉肚子里边胀胀的。我当时就给他开了上面的食疗方。这个方法非常有用，第三天朋友便打来电话，告诉我大便通了之后，真是一身轻松，舒服极了。您知道海参的来历吗？因为它像人参一样珍贵，所以才起名叫海参。海参同人参、燕窝、鱼翅等齐名，被列为世界八大珍品之一。海参性温，滋阴健阳，阴阳双补。当然，除了具有补益之功外，它还可以润肺通肠、通便排毒。猪大肠性寒，味甘，也有润肠，去下焦风热的作用。黑木耳则富含膳食纤维和植物胶原，可有助于有益菌的生长，软化粪便，促进胃肠蠕动，加速肠道食物运动进程，有效帮助体内有毒物质及时清除和排出，治疗便秘。很多人不认为便秘是一种疾病，认为不解大便就不解大便，反正积攒久了早晚要排出来。其实，大便对于人体来说就是垃圾，垃圾堆在屋子里不清理就会滋生细菌，影响屋内环境。如果大便停滞在肠道长时间排不出，毒素和细菌就会通过血液循环流窜到身体各部位，威胁我们的身体健康。肠道有大量的废物，比如硫化物、细菌、毒素，奇臭无比。古语说：“要想长生，肠中常清，要想不死，肠中无滓。”讲的就是这个道理。所以，有便秘的人千万不要再掉以轻心了。除了排便不畅外，还有很多老年朋友还容易出现排便无力的情况。社区的张大娘这几天便秘，自己去药店买了一瓶果导片，吃了不见效，以为是买到假药了，便前来找我核实。我看包装盒上写着主要成分是“酚酞片”，又查了产品批号和防伪码，便对张大娘说：“这药没有质量问题，确实是用来治疗急性便秘的。”张大娘听我这么一说，挠了挠头说：“咦，这就奇怪了，为什么我吃了没有用呢？”我说：“便秘有很多证型，在没有正确诊断前是不能乱吃药的。”随即，我拉起张大娘的手说：“来，我给你号号脉。”我见张大娘舌淡苔白，脉象细沉无力，明显是虚证的表现。而张大娘买的果导片，其主要成分是具有刺激性的酚酞。我们都知道，虚证之人是不能用攻下药的。虚弱的肠道再经历一番折腾，肯定是更没力气排出大便了。所以，我当时便对张大娘说：“大娘，您这便秘得养着治，就像小孩。你得顺着它性子，用药的时候不能跟它唱反调。我给您说个方子，您回家试一试，不行的话再来找我。”大娘听了说：“行，行，你是大专家，开的方子怎么能不行呢。”我笑了笑说：“行不行，得等您实践后才知道。您回去啊，每天晚上喝一碗汤。但是我这不是一般的汤，您得准备阿胶6克、肉苁蓉15 克、葱白3 根，外加蜂蜜2 勺。做的时候把阿胶砸碎，先用一碗水煮葱白和肉苁蓉，煮沸后捞去葱白和肉苁蓉，加入阿胶、蜂蜜溶化，睡前温服一碗。”张大娘听了说：“这不难，我退休了，在家里没什么事做，就喜欢在厨房里折腾。”果然，张大娘当天就从药店买回来了1 斤阿胶、2 斤肉苁蓉，准备打一场“持久战”。喝了10 天左右，张大娘排便就通畅了，但她看着剩下的阿胶、肉苁蓉，有了新问题。她心疼地对我说：“我这病好了，这汤还能继续喝吗？”我笑了笑，说：“可以可以，阿胶本来就是滋补气血的药，肉苁蓉是温润肠道的，特别适合老年人服用。更何况，您现在身体还虚着呢，可以再补一段时间。”很多人一见便秘，便以为是肠道积滞，开始吃一些泻药。其实，在临床上，很多中老年人，或久病新愈者、产妇等的便秘是由于气血亏虚引起的。这类患者除了排便困难外，还有一些面黄、心悸气短、失眠多梦、神疲懒言等虚证的表现。气虚则无力推动大便，血虚则肠道失去濡润，从而造成大便排泄困难。对于这类便秘，如果再用药力竣猛的泻下药，无疑是抱薪救火，雪上添霜。所以，大家以后便秘的时候不要急着买药，先确认自己属于虚证还是实证，如果是虚证，睡前一碗阿胶葱白汤就能解决问题。

很多女性由于身体素质等原因，婚后性生活比较冷淡。以下食谱有助于女性改善性冷淡的状况。1.猪腰子2 个，枸杞子30 克。将猪腰子去筋膜、切片，放入枸杞子同煮汤，调味食用。2.肉苁蓉15 克，煎水，去渣取汁，与羊肉、粳米各100 克同煮， 肉熟、米烂、汤稠时，加葱、姜、盐煮片刻，寒冬时食用最佳。3.麻雀2 只，去毛及内脏，放入菟丝子、枸杞子各15 克，共煮熟去药渣，食肉喝汤。4.枸杞子30 克，鸽子1 只。鸽子去毛及内脏后与枸杞子同放炖锅内，加适量水，隔水炖熟，吃肉喝汤。5.公鸡1 只，去内脏、切块，加油和少量盐放锅中炒熟， 盛大碗内，加糯米酒500 克，隔水蒸熟食用。6.青虾250 克，韭菜100 克。青虾洗净切段后，先以素油煸炒，然后加入黄酒、酱油、醋、姜片等调料，再加入韭菜煸炒嫩熟，即可食用。

关键词: 主脉赫依病; 蒙药; 加味十味肉苁蓉汤1　临床资料本组153例患者中男性58例, 女性95例; 20～30岁13例, 31～ 40岁32例, 41～ 50岁43例, 51岁以上65例。诊断依据: ①主脉异常跳动、头晕失眠、心神不宁、身体颤抖、胃后部有力跳动。②失眠日久、悲伤忧愁、出血过多、正精衰惫。③脉象芤虚而数、舌躁苔少。④ECG: 正常或大致正常。2　治疗方法十味肉苁蓉汤3g 加檀香1g, 冰糖水煎, 早晚各服1次; 或十味肉苁蓉汤3g 加等量三味檀香汤、冰糖水煎, 早晚各服1次, 15日为1疗程。十味肉苁蓉汤药方: 肉苁蓉50g、丁香40g、甘草40g、木香35g、广枣35g、肉豆蔻30g、土沉香30g、北沙参20g、草果30g、拳参30g。研末备用。3　疗效标准及结果痊愈(主脉异常跳动、失眠、头晕、心神不宁、身体颤抖、胃后部有力跳动等症状消失, 脉平、舌体柔润、颜色淡红) 131例, 占85. 6% ; 好转(主脉异常跳动缓解、头晕、失眠、心神不宁、身体颤抖、胃后部有力跳动减轻) 16例, 占10. 4%; 未愈6例, 占3. 9% , 总有效率为96%。4　体会主脉赫依病是赫依偏盛, 尤以司命赫依与血相搏而侵及主脉所致, 以沿主脉异常跳动为特征, 失眠多梦、头晕、无故恐慌、心神不宁、多思善虑、身体颤抖、胃后部有力跳动冲逆而怔忡, 个别患者恰在进食之间突然出现吸气困难、咽喉梗塞症状。主脉赫依病之本质虽属赫依, 由于主脉位于人体胸腹之间, 据蒙医理论“总希拉虽遍布于全身, 但主要赖横膈、位于心脏到脐部的身体中部及肝、胆、小肠处”, 故主脉赫依与血(心)相搏, 赫依热邪稽留。所以在治疗原则上以镇治赫依为主并清血热、平气血不和。十味肉苁蓉汤出自《鄂尔多斯常用蒙药方剂》, 方中选用肉豆蔻、草果、丁香、木香等性温味辛药抑制赫依, 肉苁蓉性温有抑制希拉功效, 土沉香、甘草、北沙参、拳参等性凉药和广枣平气血相搏、治热邪赫依的扩散, 加檀香则清血热平气血不和功效甚佳。参考文献〔1〕中国医学百科全书— 蒙医学〔M〕. 上海: 上海科学技术出版社, 1992. 16, 50.〔2〕鄂尔多斯常用蒙药方剂〔M〕. 呼和浩特市: 内蒙古人民出版社, 1998. 154.

【摘要】目的： 探讨毛蕊花糖苷对血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)诱导的大鼠肝星状细胞(HSC)活化、迁移、胶原沉积、纤维化作用的影响，并进一步探讨其对ERK1/2、Akt信号通路表达的影响。方法：HSC细胞分为毛蕊花糖苷(1.5、3.0、6.0 mg/L)组[重组大鼠PDGF-BB(rrPDGF-BB)预处理24 h后，不同浓度的毛蕊花糖苷干预]，PDGF-BB组(rrPDGF-BB预处理24 h，无毛蕊花糖苷干预)，对照组(无rrPDGF-BB预处理，无毛蕊花糖苷干预)；分别采用划痕实验检测细胞迁移能力，ELISA法检测Ⅰ型胶原(Col-I)含量，Western blot检测纤维化HSC活化标志物α-SMA蛋白、凋亡效应分子caspase-3，及ERK1/2、Akt信号通路相关蛋白的表达水平。结果：与对照组比较，PDGF-BB组能促进HSC的迁移(P<0.01)，毛蕊花糖苷(1.5、3.0、6.0 mg/L)组能明显抑制HSC的迁移(P<0.01)，且毛蕊花糖苷抑制HSC的迁移有明显的剂量依赖性(r=0.894，P=0.038)；随着受试物浓度的增加，Col-I分泌呈现降低趋势，其中毛蕊花糖苷6 mg/L组抑制胶原产生的作用效果最明显(P<0.01)；毛蕊花糖苷(1.5，3.0，6.0 mg/L)组能够抑制α-SMA蛋白的表达、激活caspase-3的活性，使ERK1/2、P-ERK1/2、Akt、P-Akt蛋白表达明显降低，且测定蛋白的表达在毛蕊花糖苷各剂量组间也呈现一定的剂量-效应关系(0.826<r<0.997，P<0.01)。结论：毛蕊花糖苷可抑制rrPDGF-BB诱导的HSC的活化、迁移和纤维化作用，其机制可能与毛蕊花糖苷激活caspase-3，阻断ERK1/2、Akt信号通路，抑制HSC中细胞外基质过度沉积及胶原形成有关。【关键词】毛蕊花糖苷；肝星状细胞；肝纤维化；活化肝纤维化发生与发展的核心环节是肝星状细胞(hepatic stellate cells，HSC)激活后的迅速增殖，分泌过量的细胞外基质(extracellular matrix，ECM)。本课题组[1-3] 前期研究结果表明，肉苁蓉苯乙醇总苷(phenylethanolglycosides from Cistanche tubulosa，CPhGs)对牛血清白蛋白(bovine serum albumin，BSA)所致的肝纤维化大鼠及HSC细胞的活化均具有显著抑制作用，呈现出一定的抗肝纤维化及抗炎的生物活性。由新疆维吾尔自治区药物研究所植物化学室提取纯化的CPhGs(纯度为70%)，经鉴定其主要成分为毛蕊花糖苷和松果菊苷，[4] 且毛蕊花糖苷诱导HSC细胞的凋亡最为显著。同时，文献研究显示，血小板衍生生长因子(platelet derivedgrowth factor，PDGF)是刺激HSC细胞最强的有丝分裂原，它有3种不同形式的二聚体：PDGF-AA、PDGFBB和PDGF-AB。目前认为，PDGF-BB是刺激HSC细胞活化，激活相关基因及蛋白的表达，对肝纤维化的形成最为有效的促有丝分裂因子。毛蕊花糖苷是否能够参与PDGF-BB因子诱导的肝纤维化并调节及抑制HSC细胞的活化仍然值得继续深入研究。本研究拟采用重组大鼠血小板衍生生长因子-BB(recombinant ratplatelet derived growth factor-BB， rrPDGF-BB)刺激HSC细胞，观察不同浓度的毛蕊花糖苷对PDGF-BB因子诱导的HSC细胞增殖的抑制作用，及其对HSC细胞迁移能力和肝纤维化形成过程中的标志性基因表达的影响，如HSC细胞活化标志基因α-SMA、凋亡效应分子caspase-3、最重要的促增殖和凋亡的MAPK信号通路中的关键基因ERK1/2、P-ERK1/2、Akt、P-Akt等，以探讨毛蕊花糖苷对HSC细胞的调控作用及可能的作用机制，以期为抑制HSC细胞活化、寻找防止肝纤维化的新靶点提供实验依据。1 材料与方法1.1 材料与试剂肉苁蓉苯乙醇总苷及毛蕊花糖苷，由新疆和田帝辰生物医药有限公司提供，以DMEM(高糖)完全培养液将毛蕊花糖苷配置成3种混悬液，浓度分别为1.5、3.0、6.0 mg/L；HSC细胞购自中国武汉普诺赛(Procell)公司；大鼠Ⅰ型胶原ELISA试剂盒(CUSABIO)购自武汉华美生物工程有限公司；重组大鼠PDGF-BB(rrPDGFBB)购自美国Peprotech公司； p44/42 MAPK(Erk1/2)、phospho-p44/42 MAPK(p-Erk1/2)、Akt、P-Akt抗体购自美国CST公司；α-SMA抗体购自美国Abam公司；caspase-3抗体、β-actin抗体购自中国武汉三鹰(Proteintech)公司。1.2 HSC细胞培养及分组[4] HSC细胞分为5组：对照组、PDGF-BB组、毛蕊花糖苷(1.5、3.0、6.0 mg/L)组。将HSC细胞以5×4 10 /mL接种于6孔板，含10％胎牛血清DMEM高糖培养基培养24 h后，对照组不施加任何干预，PDGF-BB组仅用rrPDGF-BB刺激(10 ng/mL)，作用24 h。3个毛蕊花糖苷组均加入rrPDGF-BB(10 ng/mL)刺激24 h，再分别加入(1.5、3.0、6.0 mg/L)的毛蕊花糖苷处理。1.3 划痕实验检测毛蕊花糖苷对HSC迁移能力的影响将消毒好的直尺置于6孔板上，用200 μL无菌枪头沿直尺在培养板底部划3条平行直线，分别于培养0、24 h后采集图像，拍照图像采集点尽量保持前后一致。Image J分析细胞迁移距离，划痕宽度用l表示，迁移率=(l -l )/l ×100%。 0h 24h 0h1.4 ELISA法检测Ⅰ型胶原(Col-I)含量采用ELISA法定量测定不同组别的细胞培养上清液中Col-I含量。用大鼠Col-I抗体包被微孔板，制成固相载体，依次加入标准品、生物素化的抗Col-I抗体、HRP标记的亲和素，TMB显色(TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色)。颜色的深浅和样本中的Col-I呈正相关。用酶标仪下测定吸光度D(450)值，并计算样本浓度。1.5 Western blot法检测α-SMA、caspase 3、ERK1/2、P-ERK1/2、Akt、P-Akt蛋白表达HSC细胞培养、分组同上，48 h后收集细胞并分别提取各组细胞总蛋白，BCA法测定蛋白含量。取各组细胞总蛋白20 μg进行SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳实验，根据目的蛋白的大小将包含目的蛋白的凝胶切下，以恒压100 V、60~90 min进行转膜，5%脱脂奶粉的1×TBST溶液封闭1 h，根据目的蛋白分别加入一抗， 具体的一抗及浓度为： ERK1/2、P-ERK1/2、Akt和P-Akt均为1∶1 000，α-SMA、caspase-3和β-actin均为1∶ 5 000， 4 ℃ 过夜。TBST洗膜3次， 每次10min。加入碱性磷酸酶标记的抗兔/鼠二抗(Invitrogen)，孵育2 h，β-actin作为内参显色剂显影，凝胶成像系统分析结果。1.6 统计学方法应用SPSS 16.0软件进行数据分析，计量资料以 x-±s表示，多组比较采用单因素方差分析，两两比较采用t检验LSD法。2.2 毛蕊花糖苷对HSC迁移能力的影响细胞划痕法检测毛蕊花糖苷对HSC迁移能力影响的结果显示，正常对照组细胞迁移率为(38.05±1.95) %，PDGF-BB组细胞为(93.16±3.28)%，可见与对照组比较，PDGF-BB能够促进HSC的迁移(P<0.01)；毛蕊花糖苷(1.5、3.0、6.0) mg/L组细胞的迁移率分别为(33.11 ±1.20)%、(42.12± 1.24)%、(66.55± 1.51)%， 与PDGFBB组比较，毛蕊花糖苷1.5、3.0、6.0 mg/L组能明显抑制HSC的迁移(P<0.01)(图2)；且毛蕊花糖苷抑制HSC的迁移有明显的剂量-效应关系(r=0.894，P=0.038)。2.3 毛蕊花糖苷对HSC中Col-I含量的影响肝纤维化时大量ECM在Disse间隙沉积以胶原为主，尤以Col-I为主，这些间质成分的改变不但激活HSC，也影响肝细胞的功能，因此我们通过ELISA法对Col-I的含量进行测定，结果显示：与正常对照组比较，PDGF-BB组HSC中Col-I含量增加，与PDGF-BB组比较，毛蕊花糖苷(1.5、3.0、6.0 mg/L)组Col-I含量均有一定程度的减少，差异具有统计学意义(P<0.01)；且随着毛蕊花糖苷浓度的增加，胶原分泌呈现逐渐降低的趋势，毛蕊花糖苷各剂量组间呈现剂量-效应关系(r=0.397，P=0.027)，见图3。提示毛蕊花糖苷能够抑制HSC的ECM过度沉积及胶原的形成。2.4 毛蕊花糖苷对HSC活化标志物α-SMA蛋白表达的影响α-SMA作为HSC激活的标志， 因此我们通过Western blot法对α-SMA蛋白表达进行测定，结果发现：rrPDGF-BB作用于HSC细胞后，α-SMA蛋白的表达较对照组明显增强；与PDGF-BB组比较，毛蕊花糖苷(1.5、3.0、6.0 mg/L)组α-SMA蛋白的表达有所降低，差异具有统计学意义(P<0.01)；同时，毛蕊花糖苷(1.5、3.0、6.0 mg/L)组α-SMA蛋白表达呈现剂量-效应关系(r=0.975，P<0.01)，见图4。由此结果预测，毛蕊花糖苷可以抑制HSC由静止表型向表达α-SMA的肌成纤维细胞样表型转化，抑制HSC在肝损伤部位的移行和增殖。2.5 毛蕊花糖苷对HSC凋亡效应分子caspase-3表达的影响Caspase-3被视为最重要的凋亡效应分子，Westernblot法对caspase-3蛋白表达进行测定，结果发现：与对照组比较，PDGF-BB组呈低表达；毛蕊花糖苷干预HSC后，与PDGF-BB组比较，caspase-3 蛋白的表达量升高，并且随着毛蕊花糖苷的浓度增加，其表达量逐渐升高(r=0.982， P<0.001)， 呈现药物剂量-效应关系。见图5，说明毛蕊花糖苷可以激活caspase-3的活性，促进caspase-3发挥凋亡执行作用。2.6 毛蕊花糖苷对ERK1/2、Akt信号通路的影响ERK1/2、Akt激活可促进HSC细胞增殖，PDGF激活的信号通路中ERK1/2、Akt信号通路存在着广泛的“cross talk”，具有相互协同或抑制作用。Westernblot结果表明： PDGF-BB作用于HSC 48 h后可以使ERK1/2、P-ERK1/2、Akt、P-Akt蛋白表达明显增强，而毛蕊花糖苷可以明显抑制ERK1/2、Akt的活化，PERK1/2、P-Akt蛋白表达水平明显降低，且不同浓度间呈现药物剂量-效应关系(0.826<r<0.997，P<0.01)，见图6，表明毛蕊花糖苷促进HSC的凋亡可能与抑制ERK1/2和Akt细胞存活信号通路有关。3 讨论肝纤维化时HSC是ECM过度沉积的关键细胞，并在肝纤维化的启动过程中发挥重要作用，ECM的合成[5] 累积循环变化能活化HSC ，其中大量的ECM成分以胶[6] 原和PDGF等细胞因子为主；而PDGF又可进一步激活HSC，使其演化为肌成纤维母细胞并表达α-SMA，因此，诱导活化的HSC凋亡并抑制其活化、增殖是防治[7-9] 肝纤维化的有效途径。[10-12] α-SMA与HSC关系密切，被广泛用于HSC活化的标志。本研究结果显示，rrPDGF-BB刺激HSC细胞48 h后，迁移能力显著增加，α-SMA蛋白的表达明显增强，同时，酶联免疫ELISA定量法检测HSC中Col-I含量也呈现明显增加趋势，表明HSC活化的过程常常伴随着侵袭能力的增强；而不同浓度的毛蕊花糖苷组干预后，与PDGF-BB组比较，HSC迁移能力明显下降，α-SMA蛋白表达明显降低，Col-I含量显著减少，证实毛蕊花糖苷可以抑制HSC的侵袭能力、减少PDGF产生、降低HSC活化、降低胶原纤维含量、阻遏肝纤维化的形成。研究指出，通过药物防治来促进活化的HSC凋亡[13] 或将成为具有前景的抗肝纤维化手段。天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)的激活是细胞凋亡发生机制的关键元件，在级联反应中能够呈现放大效应，caspase抑制剂可逆转肝纤维化的发生。在caspase 家族介导的凋亡信号传导通路中， caspase-3是执行型caspase，处于各条通路的枢纽环节，被视为最重要的凋亡效应分子，活化后可特异性地裂解底物并切割下游的蛋白激酶、核酸酶以及细胞骨架等，诱导细胞凋亡。本研究结果显示，rrPDGF-BB诱导HSC活化后，caspase-3蛋白的表达量显著降低，毛蕊花糖苷干预后，其表达量增加，且剂量越高caspase-3蛋白的表达越高，提示毛蕊花糖苷参与了HSC细胞的凋亡，增加caspase-3的活性可促进活化的HSC凋亡。MAPK信号通路是细胞内最重要的促增殖和凋亡[14] 通路之一，在HSC的增殖和凋亡中能够影响其下游细胞周期调节蛋白、凋亡相关蛋白等效应分子的活[15] 性， caspase-3被视为最重要的凋亡效应分子；caspase-3的活化可调控ERK1/2、Akt信号通路，这其中， PDGF-BB的作用尤为突出； PDGF-BB与受体PDGFR β偶联后诱导酪氨酸残基的自体磷酸化，引起受体相关蛋白的募集和激活，进一步激活如ERK、[16-17] Akt、P38这3个MAPK家族中的主要亚群，调节细胞的凋亡、免疫反应、增殖、基因表达等多重功能。本次实验结果证实了PDGF-BB对HSC的增殖、活化及促肝纤维化作用的同时，也发现毛蕊花糖苷能使caspase-3激活，减少ERK1/2、Akt的磷酸化水平，阻断ERK1/2、Akt信号通路，进而抑制HSC中ECM过度沉积及胶原形成，减少肝纤维化的发生。毛蕊花糖苷是一类生物活性很强的化合物，具有消炎、增强免疫、抗缺氧、清除自由基、DNA碱基修复等多种生理作用，同时，肝纤维化是由一类复杂的细胞因子和生长因子系统调节的慢性、渐进的病理过程，具有可逆性，其病理发生机制与毛蕊花糖苷的药理学防治机制具有很强的相关性。而对于肝纤维化，至今仍然没有公认的有效治疗方案，因此深入研究毛蕊花糖苷抑制HSC的迁移作用，使ECM分泌减少，促进ECM降解，抑制HSC的增殖并诱导其凋亡可为毛蕊花糖苷的抗肝纤维化作用提供更多的理论依据。综上，本研究表明，毛蕊花糖苷可以抑制PDGFBB诱导的HSC的迁移，降低I型胶原的分泌，抑制α-SMA蛋白的表达降低HSC的活化， 并且可以激活HSC最重要的凋亡效应分子caspase-3的表达，及通过抑制ERK1/2、P-ERK1/2、Akt、P-Akt蛋白的表达发挥抗肝纤维化的作用。参考文献[1] YOU S P， ZHAO J， MA L， et al. Preventive effects ofphenylethanol glycosides from Cistanche tubulosa on bovineserum albumin induced hepatic fibrosis in rats[J]. Daru，2015，23：52.[2] 木克热木·吐地买提，由淑萍，赵军，等. 肉苁蓉苯乙醇苷类成分对BSA致大鼠肝纤维化影响的实验研究[J]. 新疆医科大学学报，2015，38(5)：567-570.[3] 由淑萍，赵军，马龙，等. 肉苁蓉乙醇提取物抗大鼠免疫性肝纤维化的作用及其机制[J]. 中国药理学与毒理学杂志，2016，30(5)：504-510.[4] YOU S P，ZHAO J，MA L，et al. Phenylethanol glycosidesfrom cistanche tubulosa suppress hepatic stellate cell activationand block the conduction of signaling pathways in TGF-β1/smadas potential anti-hepatic fibrosis agents[J]. Molecules，2016，21(1)：102.[5] 陈振，许君望，严肃，等. 重组人松弛素-2对肝星状细胞增殖、Ⅰ型胶原合成及TGF-β1与CTGF mRNA表达的影响[J].西安交通大学学报(医学版)，2017，38(1)：44-47，57.[6] FRIEDMAN S L. Hepatic stellate cells： Protean，multifunctional， and enigmatic cells of the liver[J]. PhysiolRev，2008，88(1)：125-172.[7] 丁茜，李振，刘滨，等. 卡维地洛抑制血小板衍生因子BB诱导的人肝星状细胞活化和纤维化的作用机制[J]. 临床肝胆病杂志，2017，33(3)：485-491.[8] JIAO J， FRIEDMAN S L， ALOMAN C. Hepatic fibrosis[J].Curr Opin Gastroenterol，2009，25(3)：223-229.[9] QU K，HUANG Z，LIN T，et al. New insight into the antiliverfibrosis effect of multitargeted tyrosine kinase inhibitors：from molecular target to clinical trials[J]. Front Pharmacol，2016，6：300.[10] 张季，宋嬿，王巧晗，等. 生醋莪术对大鼠免疫性肝纤维化及HSC-T6增殖和α-SMA，ProcollagenⅠ表达的影响[J]. 中国中药杂志，2017，42(13)：2538-2545.[11] 梁昊，代勇，孙雪英，等. 中医药针对肝星状细胞抗肝纤维化作用机制研究综述[J]. 云南中医中药杂志，2015，36(7)：78-79.[12] 唐桂连. 肝星状细胞与肝纤维化[J]. 国际消化杂志，2012，10(5)：270-272.[13] 郑艳华，王建彬. 肝星状细胞的凋亡与肝纤维化的研究进展[J]. 现代中西医结合杂志，2011，20(6)：772-773.[14] 张琴，黄涛，卓强. 肝纤维化中MAPK信号转导通路对肝星状细胞活性的影响[J]. 成都医学院学报，2014，9(4)：493-495.[15] 王一丹，韩涛，何金荣. 中药提取物治疗肝纤维化的研究进展综述[J]. 医学综述，2012，18(24)：4228-4230.[16] CHEN P， LI J， HUO Y， et al. Orphan nuclear receptorNR4A2 inhibits hepatic stellate cell proliferation through MAPKpathway in liver fibrosis[J]. Peer J， 2015，3：e1518.[17] FANG L， ZHAN S， HUANG C， et al. TRPM7 channelregulates PDGF-BB induced proliferation of hepatic stellatecells via PI3K and ERK pathways[J]. Toxicol Appl Pharmacol，2013，272：713-725.

摘要:目的　观察肉苁蓉提取物毛蕊花苷对MPP+诱导的SHSY5Y细胞损伤的影响。方法　用MTT法检测细胞存活率, 以流式细胞仪检测细胞内活性氧的产生和线粒体膜电位的变化, 以及细胞凋亡的发生, 并用荧光酶标仪测定caspase-3的活性, 蛋白印迹测定Bcl-2 的表达水平。结果　200μmol· L-1 MPP+处理细胞24 h降低细胞的存活率;诱导细胞发生凋亡, 凋亡率达38.9%;细胞内活性氧水平及caspase-3的活性升高;而线粒体膜电位却明显降低。而预先给予0.1、1或者10 mg· L-1浓度的毛蕊花苷处理细胞12 h,可提高细胞存活率;流式细胞仪检测凋亡率分别降低到29.5%, 15.3%和8.6%, 而且细胞内活性氧的水平明显降低, 并可逐渐恢复线粒体的高能量状态;caspase-3 的活性不断降低, Bcl-2的表达水平增高, 并呈现一定的剂量依赖性。结论　毛蕊花苷能抑制MPP+诱导的SHSY5Y细胞凋亡, 其神经细胞保护作用可能与其降低细胞内活性氧水平, 维持线粒体膜电位的高能状态和抑制caspase-3的活性有关。关键词:毛蕊花苷;细胞凋亡;过氧化氢;SHSY5Y细胞;线粒体膜电位;活性氧;半胱氨酸蛋白酶3　帕金森病(Parkinsonsdisease, PD)是一种中老年人常见的神经系统变性疾病, 主要是由于黑质多巴胺能神经元坏死、凋亡, 使黑质—纹状体通路多巴胺释放减少, 造成多巴胺—乙酰胆碱失衡。人们早已证实神经元凋亡是帕金森病神经细胞死亡的主要机制[ 1] , 而且病灶周围都要产生大量的活性氧自由基(reactiveoxygenspecies, ROS)[ 2] 。近来研究发现, 细胞内ROS累积、线粒体膜电位(MMP)下降是氧化应激诱导细胞凋亡、引起细胞损伤的关键因素,因此可以把减轻氧化应激作为药物作用的靶点之一, 用于神经保护药物的筛选。　　肉苁蓉(HerbaCistanches)为肉苁蓉属植物干燥带鳞叶的肉质茎, 具有补肾阳、益精血、润肠通便之功效, 有“沙漠人参”之美誉[ 3, 4] 。一系列研究表明肉苁蓉可以提高多种中枢神经递质的含量, 具有很强的抗氧化作用, 还可延长动物寿命和抗衰老作用,而苯乙醇苷类化合物被认为是肉苁蓉的主要活性成分[ 5, 6] 。毛蕊花苷(verbascoside)是从德赢vwin登录 (Cistanchetubulosa)中分离、纯化的一种苯乙醇苷类化合物(Fig1)。本文以SHSY5Y细胞为研究对象, 用1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP+)诱导建立PD的体外细胞损伤模型, 观察毛蕊花苷对SHSY5Y细胞的保护作用及其可能机制。1　材料与方法1.1　材料1.1.1　试剂　MPP+、胰蛋白酶(trypsin)、4-甲基偶氮唑蓝(MTT)为Sigma公司产品;MEM培养基和胎牛血清为Gibco公司产品;荧光标记的钙结合蛋白(AnnexinV-FITC)和碘化丙啶(propidum iodide, PI)BoehringerMannheim产品;检测细胞内自由基的荧光探针2′7′-二氯荧光素乙酰乙酸盐(2, 7-dichlorodihydrofluoresceindiacetate,H2 DCFDA)和线粒体膜电位的RH123 为MolecularProbes公司产品;Caspase-3检测试剂盒为Promega公司产品;毛蕊花苷由北京大学药学院屠鹏飞教授提取, 易溶于水, 经HPLC检测纯度>98%。1.1.2　细胞株　SHSY5Y细胞(人神经母细胞瘤株)由首都医科大学宣武医院北京脑老化重点实验室惠赠。1.1.3　主要仪器　2487双波长紫外-可见分光光度检测器;倒置荧光相差显微镜:德国LEICA公司;CO2 孵箱; SANYO 公司图像分析系统:SPOT22CooledCCD;配置Metamorph图像分析软件;德国LEICA公司;流式细胞仪:美国BD公司;多功能读板机:美国WallacVictor2TM公司。1.2　方法1.2.1 　SHSY5Y细胞的培养与药物处理　用含10%(体积分数)胎牛血清的MEM培养液培养细胞, 每2 ～ 3 d换液1次。待细胞增长至80%融合时, 用0.25%胰酶消化细胞, 加含血清培养基终止反应。用滴管吹打使其成为单细胞悬液, 1 ∶3 分瓶传代。细胞先经200 μmol· L-1的MPP+作用不同时间点, 分别于24、48、72 h后用倒置显微镜和MTT法观察细胞存活情况, 发现48 h和72 h组的细胞绝大部分死亡, 而24 h组的细胞存活率适于进行药物干预实验, 故均采用MPP+作用24 h后进行如下实验。毛蕊花苷(0.1、1、10 mg· L-1 )预处理SHSY5Y细胞12 h后, 加入200 μmol· L-1的MPP+ , 24 h后收获细胞。凋亡诱导组只加入200 μg· L-1的MPP+ , 正常对照组加入等体积PBS。1.2.2　MTT法检测细胞活性　以1 ×104 浓度接种SHSY5Y细胞于96孔板中, 24 h后进行实验。每孔加入含5 g· L-1的MTT培养液, 培养4 h后弃培养基, 每孔加入DMSO200 μl, 充分震荡, 待蓝色颗粒完全溶解后用全自动酶标仪测定570 nm处的吸光度值(A570 nm), 用于定量反映细胞的存活率。1.2.3　细胞内活性氧定量检测　细胞内活性氧的测定采用荧光探剂H2DCFDA, 该荧光探剂在乙酰乙酸盐的帮助下进入细胞内, 在胞内水解、氧化、脱氢后形成荧光素发光, 荧光发光强度和细胞内活性氧的水平成正比。因此该荧光探剂可定量检测细胞内活性氧。收集正常对照组、MPP+组、毛蕊花苷组1×106 细胞, 悬浮于含10 μmol· L-1的DCFH-DA荧光探剂的无血清DMEM, 37℃, 5%CO2 孵箱内孵育20 min, 用无血清DMEM洗3次, 以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。用FACScan流式细胞仪测定DCF的平均荧光强度, 激发光波长为488 nm, 发射波长为525 nm, 以各处理组/正常对照组的比值作为ROS的数值。1.2.4　细胞内线粒体膜电位测量　罗丹明123(Rh123)是一种亲脂性的阳离子荧光探针, 可穿过活细胞的线粒体基质, 由于线粒体膜间隙具有负电位, 而Rh123 具有正电位, 电性相吸, 因此可用Rh123标记线粒体。通过检测Rh123的荧光强度来反映细胞MMP。收集正常对照组、MPP+组、毛蕊花苷组1 ×106 细胞, 加入终浓度10 mg· L-1 的Rh123, 37℃避光孵育1 h;PBS漂洗1 min×2次, 以去除未结合的染料, 用FACScan流式细胞仪测定其平均荧光强度(meanfluorecenceintensity, MFI)代表细胞MMP的状态。1.2.5　流式细胞仪检测细胞凋亡　细胞凋亡用AnnexinV-FITC试剂盒进行检测, 方法按试剂盒说明书进行, 简述如下:药物处理24 h后, 收集1 ×106细胞, PBS洗2 ～ 3次, 500 r· min-1离心5 min后重悬于200 μl的缓冲液中, 加入10 μl的AnnexinVFITC和5 μl的PI, 轻轻混匀, 避光室温反应15 min,再加入300 μl缓冲液, 立即上机检测。1.2.6　caspase-3活性测定　采用Apo-ONETM Homogeneouscaspase-3试剂盒测定caspase-3活性, 方法按试剂盒说明书进行。简述如下:104 细胞/孔接种于96孔板, 不同药物处理细胞24 h后, 冰PBS冲洗, 每孔加入caspase-3反应液100 μl震荡混匀, 室温避光反应4 h后在多功能荧光读板仪测定ZDEVD-R110的荧光强度, 激发波长498 nm, 发射波长为521 nm, 单位以relativefluorescence units(RFU)表示。1.2.7　Bcl-2蛋白印迹测定　收集不同组的25 cm2培养瓶内细胞, 400 μl细胞裂解液冰上裂解5 min,收集并离心, 取上清, 考马斯亮蓝G250蛋白定量;SDS-PAGE电泳, 湿法转膜, 5%脱脂奶粉室温封闭2h, 分别加入1 ∶200稀释的Bcl-2多克隆Ⅰ 抗4℃过夜;辣根过氧化物酶标记的羊抗兔Ⅱ抗反应1 h;膜上加1 mlluminolA+luminolB的混合液, 暗室反应1 min, X胶片爆光15 s, 常规显影、定影, 扫描, 用HPIAS-1000图像分析软件进行蛋白表达的半定量分析, 结果用吸光度值表示。1.3　数据处理和统计学检验　所有结果以 x±s表示, 多组间比较采用完全随机设计方差分析(ANOVA),两组间比较采用Student′st检验, 应用SPSS统计软件处理。2　结果2.1　毛蕊花苷明显拮抗MPP+对SHSY5Y细胞的毒性作用　MTT检测发现MPP+作用24 h后导致SHSY5Y细胞的存活率下降为42.6%, 而毛蕊花苷预处理12 h后(0.1、1、10 mg· L-1 )明显抑制MPP+所造成的细胞死亡, 并呈现一定的剂量依赖型, 细胞死亡率分别为38.2%、23.6%和10.0%(Fig2)。2.2　毛蕊花苷降低SHSY5Y细胞活性氧的水平　200 μmol· L-1的MPP+处理细胞24 h, 可使细胞内活性氧水平明显升高, 荧光强度明显增加。而0.1、1或者10 mg· L-1毛蕊花苷预处理细胞12 h可拮抗活性氧的形成, 荧光强度从4.96(MPP+组/对照组)分别下降低到4.12、2.67和1.82(毛蕊花苷组/对照组)。见Fig3。2.3　毛蕊花苷抑制MPP+诱导SHSY5Y细胞线粒体膜电位的下降　流式细胞仪分析结果显示, 经过MPP+作用24 h后, SHSY5Y细胞内Rh123荧光强度下降(P<0.01), 表明线粒体跨膜电位下降, 提示MPP+对SHSY5Y细胞的线粒体造成了损伤。经过不同浓度的毛蕊花苷预处理后, 细胞相对线粒体跨膜电位有明显的提高, 表明毛蕊花苷可抑制MPP+引起的细胞MMP下降。见Fig4。2.4　毛蕊花苷抑制MPP+诱导的细胞凋亡　经AnnexinV-FITC和PI双标活细胞, 流式细胞仪可检测细胞的凋亡率。200 μmol· L-1的MPP+作用SHSY5Y24 h可诱导细胞凋亡, 凋亡率达38.9%;而加入0.1、1.0和10 mg· L-1的毛蕊花苷后, 凋亡率分别降低为29.5%, 15.3%和8.6%。见Fig5。2.5 　毛蕊花苷抑制MPP+诱导SHSY5Y细胞caspase-3活性的升高　200 μmol· L-1的MPP+处理细胞24 h使SHSY5Y细胞的caspase-3的活性增强了约7倍, 但0.1、1.0和10 mg· L-1的毛蕊花苷预处理细胞, 可降低caspase-3的荧光强度, 并且呈现一定的剂量依赖性。见Tab1。2.6　毛蕊花苷增强Bcl-2 的表达　200 μmol· L-1的MPP+处理细胞24 h后, SHSY5Y细胞的Bcl-2蛋白表达与对照组比较无明显变化;但经0.1、1.0和10 mg· L-1的毛蕊花苷预处理细胞, Bcl-2蛋白表达水平高于对照组及MPP+组(P<0.01)。见Fig6。3　讨论　　许多中枢神经系统疾病常导致组织细胞活性氧、自由基代谢异常, 脑组织细胞由于富含不饱和脂肪酸, 易产生氧化损伤[ 7] 。因此活性氧对脑组织细胞的氧化损伤及防护研究受到广泛关注。SHSY5Y细胞衍生于人的神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH, 它能表达儿茶酚胺能神经元特有的酪氨酸羟化酶、多巴胺-β-羟化酶和多巴胺转运体[ 8] , 该细胞系被广泛运用于PD发病机制的研究。1-甲基-4-苯基-12, 3,6-四氢吡啶(MPTP)是一种神经毒素, 通过其活性代谢产物MPP+对多巴胺能神经元的毒性作用引起细胞变性坏死, 在人类和其他哺乳动物能引起不可逆的严重的帕金森病症状[ 9] , MPP+作用于SHSY5Y细胞可以作为一个比较理想的PD细胞模型。本文就以MPP+诱导SHSY5Y细胞损伤, 观察毛蕊花苷的神经保护作用。结果证实, 毛蕊花苷可以有效地减轻MPP+诱导细胞凋亡的发生, 在0.1 ～ 10 mg·L-1的剂量范围内, 其神经细胞保护作用呈现一定的剂量依赖关系。毛蕊花苷可能是通过抑制细胞内活性氧自由基的生成和caspase-3活性的升高, 并维持线粒体膜电位的高能状态, 这几个环节相互联系, 共同抑制细胞凋亡, 实现神经保护作用。　　自由基是线粒体氧化磷酸化系统的副产品, 可对生物膜产生脂质过氧化作用, 使生物膜受损, 线粒体膜通透性增加, 导致凋亡诱导因子释放而引起凋亡[ 10] 。很多研究证实苯乙醇苷类化合物具有明显的抗氧化作用, 并且可以对抗氧化应激所造成的DNA损伤及有效地清除超氧阴离子和羟自由基[ 6] 。本研究发现毛蕊花苷预处理可明显抑制SHSY5Y细胞内自由基的生成, 而毛蕊花苷属于苯乙醇苷类化合物, 因此, 清除自由基可能与其抑制MPP+所致的细胞凋亡有密切关系。　　线粒体与Caspase蛋白酶家族被认为是凋亡过程中的两个调控点, 线粒体膜电位和caspase-3起着极为重要的作用, 而Bcl-2是Bcl-2家族中是最重要的凋亡调节因子, 是主要的抗凋亡因子。Bcl-2蛋白分布于线粒体的外膜胞质表面, 稳定线粒体膜并通过蛋白相关转换孔维持膜的通透性[ 11] 。当细胞受损时, 线粒体的电子传递链被打破, 膜电位崩解;随之线粒体内外膜间的凋亡因子, 如细胞色素C, 释放到胞质, 激活Caspase蛋白酶家族, 启动凋亡级联反应[ 12] 。当caspase-3 被激活后, 它可以水解多聚ADP核糖多聚酶(PARP), 影响DNA的修复, 最终导致细胞凋亡的发生[ 13] 。本实验通过线粒体膜电位高低和caspase-3活性等指标来了解细胞线粒体功能变化, 结果发现MPP+可明显降低线粒体膜电位, 并使caspase-3活性升高;而毛蕊花苷预处理后,Bcl-2的表达明显增加, 并且有效拮抗MPP+对线粒体的毒性作用, 这提示促进Bcl-2的表达、维持线粒体膜电位于正常状态以及降低caspase-3 活性是毛蕊花苷行使其抗凋亡作用的另一机制。　　由于大量研究表明PD的发病机制与细胞凋亡有关, 毛蕊花苷对MPP+致多巴胺能神经元损伤的保护作用可能具有抗PD的潜在功效, 这可能为临床治疗神经退行性疾病带来新的希望。参考文献:[ 1] 　MandemakersW, MoraisVA, DeStrooperB.AcellbiologicalperspectiveonmitochondrialdysfunctioninParkinsondiseaseandotherneurodegenerativediseases[J] .JCellSci, 2007, 120(10):1707-16.[ 2] 　GibsonGE, HuangHM.Mitochondrialenzymesandendoplasmicreticulumcalciumstoresastargetsofoxidativestressinneurodegenerativediseases[J] .JBioenergBiomembr, 2004, 36(4):335 -40.[ 3] 　侯志华, 常国文.肉苁蓉的药理学研究进展[ J] .中国民族医药杂志, 2003, 10(4):50 -1.[ 3] 　HouZH, ChangGW.OntheresearchingadvanceinthepharmacologicaleffectsofcitancledeserticolaYCMa[ J] .JMedPharmChinMinor, 2003, 10(4):50 -1.[ 4] 　LeiL, YangFQ, ZhangTY.Preparativeisolationandpurificationofacteosideand29-acetylacteosidefrom Cistanchessalsa(C.A.Mey.)G.Beckbyhighspeedcounter-currentchromatography[ J] .JChromatogrA, 2001, 912(1):181 -5.[ 5] 　ThuanND, HadoT, ThuongPT, etal.AphenylpropanoidglycosidewithantioxidantactivityfromPicriatelferae[J] .ArchPharmRes, 2007, 30(9):1062 -6.[ 6] 　WuY, LiL, WenT, etal.Protectiveeffectsofechinacosideoncarbontetrachloride-inducedhepatotoxicityinrats[ J] .Toxicology,2007, 232(1):50 -6.[ 7] 　MoriH, OikawaM, TamagamiT, etal.Oxidizedproteinsinastrocytesgeneratedinahyperbaricatmosphereinduceneuronalapoptosis[J] .JAlzheimersDis, 2007, 11(2):165 -74.[ 8] 　TakahashiT, DengY, MaruyamaW, etal.Uptakeofaneuro-toxincandidate,(R)-1, 2-dimethyl-6, 7-dihydroxy-1, 2, 3, 4-tetra-hydrohydroisoquinolineinto human dopaminergic neuroblastomaSHSY5Ycellsbydopaminetransportsystem[ J] .JNeuralTransmGenSect, 1994, 98(2):107 -18.[ 9] 　TattonN A, KishSJ.Insitudetectionofapoptoticnucleiinthesubstantianigracompactaof1-methyl-4-phenyl-1, 2, 3, 6-tetrahydropyridine-treatedmiceusingterminaldeoxymucleotidyltransferaselabellingandacridineorangestaining[J] .Neuroscience, 1997,77(4):1037 -41.[ 10] 张惠勤, 徐森洲, 陈爱芳.环维黄杨星D对培养大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用[ J] .中国药理学通报, 2007, 23(10):1338 -41.[ 10] ZhangHQ, ChenSZ, ChenAF, etal.ProtectiveeffectsofCyclovirobuxineDonneonatalratcardiomyocytesexposedtohypoxiareoxygenationinjury[J] .ChinPharmacolBull, 2007, 23 (10):1338 -41.[ 11] AntoRJ, MukhopadhyayA, DenningK, etal.Curcumin(diferuloylmethane)inducesapoptosisthroughactvationofcaspase-8, BIDcleavageandcytochromecrelease:itssuppressionbyectopicexpressionofbcl-2 andbcl-xl[ J] .Carcinogenesis, 2002, 23(1):143-50.[ 12] 张　翼, 左文丽, 何玉玲, 周智广.1, 25-二羟基维生素D3 抑制K562细胞增殖及其机制[ J] .中国药理学通报, 2006, 22(10):1215 -8.[ 12] ZhangY, ZuoW L, HeY L, ZhouZG.Effectsof1α, 25-DihydroxyvitaminD3 ontheproliferationandapoptosisofK562 leukemiacellsanditsmechanism[J] .ChinPharmacolBull, 2006, 22(10):1215 -8.[ 13] 谢松强, 吴英良, 程鹏飞, 等.新型多胺缀合物NNAMB诱导B16 细胞凋亡及分化作用[ J] .中国药理学通报, 2007, 23(10):1285 -90.[ 13] XieSQ, WuYL, ChengPF, etal.NNAMB, anovelhomospermidineconjugate,inducesapoptosisanddifferentiationinB16 Melanomacells[J] .ChinPharmacolBull, 2007, 23(10):1285 -90.

慢性功能性便秘是临床常见病, 临床既可表现为排便次数减少、粪便干结, 也可表现为排便困难或有便后不尽感等。便秘既会影响患者食欲及肠道营养的吸收, 而且还是诱发或加重结肠癌、心脑血管疾病的重要因素[ 1] 。据国外资料报道, 慢性便秘的发病率, 年轻人为3 %, 中年人为8%, 老年人为20%[ 2] 。据流行病学调查显示, 我国慢性功能性便秘的发病率为6.07%[ 3] 。随着我国老龄化进程的加快和临床泻药的滥用, 慢性功能性便秘的发病率呈明显升高趋势。中医药治疗便秘, 展现出巨大潜力, 但也存在诸多值得反思的问题。现就中医药防治便秘的研究现状, 综述如下。1 　病因病机中医学认为, 便秘系因各种病因引起的大肠传导功能失常所致。中医称之为“ 阳结” 、“ 阴结” 、“ 脾弱” 和“ 风秘” 、“ 气秘” 、“ 热秘” 、“寒秘” 、“ 湿秘” 及“ 风燥” 、“ 热燥” 等。病因多由大肠燥热内结、气机郁滞或气血津液亏虚、年高体弱等引起腑气壅遏而成。临床治疗以通下为主, 但不宜滥施大黄、芒硝、番泻叶等通下药物。笔者临床体会到, 慢性便秘以气阴亏虚为多, 故在谴方用药时以益气固阴为法, 每收良效。如陆氏[ 4] 认为老年性便秘多因肾气不足、气血两虚、津液枯少, 导致脾失健运、大肠干涩、传导无力。于氏[ 5] 认为, 肝气郁结是慢性功能性便秘发病的主要病机。林氏[ 6] 认为, 脾肾亏虚是便秘的病机关键。刘氏认为[ 7] , 便秘病机当以脾虚为主。常氏认为[8] , 老年慢性便秘迁延难愈, 多虚滞兼瘀。潘氏[9] 等认为, 便秘以肝郁气滞为本, 肝郁化热、阴亏肠燥为主要病机。王氏[ 10] 认为, 湿邪在便秘的发病过程中占有重要地位, 以感受湿热、过食肥甘厚味、恣饮酒浆, 或情绪不遂, 湿邪内生, 导致湿邪阻滞大肠为主。可见, 慢性便秘的病位虽在下焦大肠, 但发病与脾胃、肺、肝、肾等脏腑关系密切, 病机虽关乎气、热、湿、燥、虚、瘀, 但气阴不足、大肠干涩、传导无力为主要发病机制。2 　中医治疗( 1) 辨证分型:路氏[ 11] 从虚实分治便秘。气虚者用补中益气汤, 血虚者用八珍汤, 脾虚兼食滞者用六君子汤合保和丸, 脾虚兼湿邪者用宣清导浊汤, 肾阴虚者用六味地黄丸, 肾阳虚用右归饮或半硫丸。陆氏[ 12] 将本病分为虚实两类。气血两虚型用健脾养血润肠汤( 生黄芪、路党参、生首乌、当归、生地、火麻仁、白芍、杏仁、黑苏子、玄参、麦冬、决明子) ;阳虚阴寒型用壮阳温通开结汤( 肉苁蓉、麻仁、当归、沉香、肉桂、熟附子、乌药、生地、生首乌、杏仁, 黑苏子、决明子) ;胃肠积热型用清胃泻火生津汤( 石膏、知母、枳实、厚朴、火麻仁、杏仁、郁李仁、瓜蒌仁、玄参、生地、麦冬、生大黄) ;肝郁气滞型用疏肝散结导滞汤( 柴胡、当归、生首乌、生地、杏仁、黑苏子、木香、乌药、火麻仁、枳实、槟榔、决明子) 。陈氏[ 13] 分二型论治, 血虚型用四物汤加枳实、莱菔子、半夏、陈皮;气虚型用黄芪汤加火麻仁、郁李仁、核桃仁。包氏[ 14] 等分四型论治, 阴血虚损型用四物汤与一贯煎加减;脾肾阳虚型用理中汤加减;中气不足型用补中益气汤加减;实热蕴结型用黄连解毒汤加减。钟氏[ 15] 治疗老年功能性便秘分别用益气温阳以调衡, 养阴润肠以增效, 理气通便以促动三法治疗。( 2) 基本方加减　刘氏[ 16] 用小柴胡汤加减( 柴胡、半夏、人参或党参、炙甘草、生姜、炒莱菔子、当归、白芍、桃仁、木香、大枣) 治疗48 例, 全部有效。蔡氏[ 17] 用济川煎加味( 当归、杏仁、泽泻、枳壳、肉苁蓉、菟丝子、怀牛膝、火麻仁、升麻、炙甘草、炒白术、薏苡仁) 治疗29 例。2 个月治疗, 总有效率是89 .66 %, 6 个月治疗, 总有效率为82 .76 %。董氏[ 18] 以增液通便汤( 生地黄、玄参、麦冬、何首乌、肉苁蓉) 治疗52 例, 全部治愈。冯氏[ 19] 用增味增液汤加减( 制黄芪30g, 淮山药、玄参各20g , 生地、当归、麦冬、生白芍、生白术、火麻仁各15g) 治疗122 例, 总有效率是89 .3%。钟氏[ 20] 认为老年性慢性便秘与血瘀有关, 治宜活血化瘀,药用红花、枳壳、川芎、当归、赤芍、丹参, 治疗42 例, 结果痊愈26例, 好转12 例, 无效4 例, 总有效率是90.48 %。李舒敏[ 21] 以益气补肾法( 北黄芪、怀山药、杏仁、制大黄、黄精、牛膝、菟丝子、桔梗、当归、甘草, 并随症加减) 治疗38 例, 总有效率为94 .74 %。黄氏[ 22] 用温肾法, 药用缩泉丸( 益智仁、乌药、当归、桑螵蛸、山茱萸、党参、菟丝子、肉苁蓉、熟地、淮山药) 加减治疗66 例, 总有效率达95 .5 %。黄氏[23] 以补肾益气养血、润肠通便导滞为法, 用温补润下方加减( 肉苁蓉、黄芪、白芍、何首乌, 粪便干燥者加玄参、生地, 兼粘液者加槟榔、莱菔子) 治疗41 例, 共治疗7 天, 总有效率为92 .7 %。其中50 岁以上患者100%有效。苏仁意[ 24]采用补肾润肠汤( 肉苁蓉20g, 当归、首乌、生地、生白术、大腹皮各15g 、火麻仁、桃仁、枳壳各10g ) 加减:津枯血少者加女贞子,生黄芪各15g 、白芍30g ;内热炽盛者加玄参30g , 麦冬、黄芩各10g ;脾肾阴虚者加升麻10g 、牛膝15g 、肉桂5g 。治疗38 例, 总有效率为73 .68%。( 3) 单方、验方:刘氏[ 25] 以大量白术( 每剂30 ～ 60g) 治疗各种便秘, 能使干硬大便变润变软, 容易排出。李红[26] 发现用中等剂量( 20 ～ 30g) 车前子具有较弱通便作用, 总有效率为38 .46%;大剂量( 40 ～ 60g ) 有明显通便作用, 总有效率达82.35 %。徐勇等[ 27] 用决明子治疗老年性便秘100 例, 15 ～ 20 天为1 个疗程,平均治疗4 个疗程, 总有效率为93%。戚氏[ 28] 以牵牛子粉2g ～3g 每晚睡前服, 治疗老年性便秘23 例, 总有效率达96.5 %。杜氏等用生首乌60g 煎煮口服, 共治疗45 例, 总有效率为93.5%。李氏[ 30] 以滋补润肠膏( 黄芪、白术、当归、肉苁蓉、黑芝麻、桑椹、火麻仁) , 张氏[ 31] 用参椹丸( 太子参、桑椹、生何首乌、桃仁、肉苁蓉) 治疗便秘, 均获较好疗效。李氏[ 32] 用便乃通茶( 由何首乌、黑芝麻等组成) , 每日1 包, 2 次/d, 治疗便秘精血亏虚型, 总有效率为92 .2 %。( 4) 其他治疗:姚氏等[ 33] 取合谷、复溜穴治疗便秘20 例, 5天为1 个疗程, 治疗1 ～ 3 个疗程, 总有效率达100%。张氏[ 34]等取大肠俞、天枢、支沟、上巨虚为主穴, 随证配穴, 治疗慢性便秘36 例, 有效率达100%。武氏等[ 35] 取神阙穴, 采用拨罐法和贴药法( 大黄、山药、元胡、黄芪等适量研成糊状) 治疗老年性慢性便秘40 例, 总有效率是97 .5 %。3 　问题与展望综上所述, 中医药治疗慢性功能性便秘方法多样, 疗效肯定, 副作用少。但也存在一些问题。笔者认为, 中医防治慢性功能性便秘的研究, 应在如下几个方面有所发展和突破:( 1) 应加强对防治慢性功能性便秘中医文献的整理工作, 积极开展相关文献理论的创造性研究。目前, 有关“ 便秘” 的中医文献研究甚少, 影响了中医防治本病的深入开展, 今后, 应注重相关文献中理论与经验的挖掘整理, 以拓展临床思路。( 2) 运用循证医学观点, 规范慢性功能性便秘中医证候诊断与疗效评价标准。目前对本病的治疗, 多局限于一般临床治疗, 且多为回顾性研究, 辨证分型和疗效标准不统一, 临床研究设计不够严谨, 缺乏采用随机、多中心、对照和盲法的临床研究, 临床与实验研究结合的研究也较少。为此, 应严格科研设计, 运用循证医学观点, 规范辨证分型及疗效评定标准, 开展多中心、大样本的随机对照试验, 确切评价临床疗效, 以利于临床有效药物和方法的筛选。( 3) 加强中医药治疗慢性功能性便秘的基础研究。目前有关中医药治疗慢性功能性便秘的基础研究较少。主要表现在:①证型的实质性研究不够深入, 缺乏客观参数, 具有一定的主观性, 重复性差;②作用机理研究不多;③中药有效成分研究缺乏。今后, 应在中医整体观念的指导下, 面向临床, 运用现代科技手段, 借鉴现代科研技术和成果, 揭示慢性功能性便秘的中医证的实质;同时, 应进行中药有效成分研究, 为中医辨证及对中药有效组分和临床有效中药复方的研究提供依据。参考文献:[ 1] 　刘宝华.便秘的诊断及治疗[ M] .北京:军事医学科学出版社,2002 .18 .[ 2] 　Mull er-Liss ner S .Di agn osi s and therapy of const ipati on .Schw eizRu ndsch Med Prax, 1998, 87( 48) :1645-8 .[ 3] 　郭晓峰, 柯美云, 潘国宗, 等.北京地区成人慢性便秘整群, 分层、随机流行病学调查及其相关因素分析[ J] .中华消化杂志, 2002, 22( 10) :637-638 .[ 4] 　陆维娜, 陆永昌.治疗老年便秘的经验[ J] .北京中医杂志, 1994,( 2) :46 .[ 5] 　于金源, 孙长岗, 尹国富.从肝论治慢性功能性便秘[ J] .山东中医杂志, 2002, 21( 2) :85-86 .[ 6] 　林谦平.健脾补肾法治疗便秘57 例[ J] .云南中医杂志, 1992, 147 :20 .[ 7] 　刘重, 胡小勤, 陈利国.谈便秘与血瘀的关系[ J] .福建中医药, 1981,( 1) :36 .[ 8] 　常向明.胡中民.补虚润降汤治疗老年性便秘临床探讨[ J] .贵阳中医学院学报, 2000, 22( 4) :11 .[ 9] 　潘志恒, 杨跃武, 陈琰碧, 等.疏肝润肠治疗便秘型肠易激综合征46例疗效观察[ J] , 新中医, 1998, 30( 11) :12-14 .[ 10] 　王彦辉.湿秘诊治探要[ J] , 江苏中医, 2000, 21( 7) :4-5 .[ 11] 　路志正.路志正医林集腋[ M] .北京:人民卫生出版社, 1990 .129-131 .[ 12] 　陆修坤.老年性便秘诊治体会[ J] .江苏中医.1996 .17( 12) :23 .[ 13] 　陈曦.老年便秘治验[ J] .中医研究, 1997, 10( 5) :39 .[ 14] 　包广勤, 黄礼.辨证分型治疗老年性便秘173 例[ J] .黑龙江中医药.2000, ( 5) :22 .[ 15] 　钟洪, 吴绪祥, 臧垫堂.老年功能性便秘辨治心法[ J] .湖北中医杂志, 2000, 22( 5) :25 .[ 16] 　刘坤旺.小柴胡汤加减治疗老年性便秘48 例[ J] .山西中医, 1996,12( 5) :33 .[ 17] 　蔡行平.济川煎加味治疗功能性便秘29 例[ J] .实用中医药杂志,2003, 19( 2) :71 .[ 18] 　董华.增液通便汤治疗老年性便秘52 例[ J] .广西中医药, 1997, 20( 4) :22 .[ 19] 　冯年荣.增味增液汤治疗老年虚证便秘122 例[ J] .陕西中医,1999, 20( 6) :249 .[ 20] 　钟传珍.活血化瘀法治疗老年性便秘42 例[ J] .实用中医药杂志,1999, 15( 7) :15 .[ 21] 　李舒敏.益气补肾法治疗老年性便秘38 例[ J] .实用中医药杂志.1999, 15( 8) :21 .[ 22] 　黄彬.温肾缩尿法治疗老年性便秘[ J] .四川中医, 2000, 18( 9) :31 .[ 23] 　黄义李, 陈蔚文.温补润下方治疗慢性功能性便秘41 例临床观察[ J] .新中医, 2002, 34( 8) :17-19 .[ 24] 　苏仁意.补肾润肠汤治疗老年性便秘[ J] .湖北中医杂志, 2005 .27( 10) :45 .[ 25] 　刘重.白术治疗便秘34 例疗效观察[ J] .福建中医药, 1981, ( 1) :36 .[ 26] 　李红.不同剂量车前子对老年人功能性便秘的治疗作用[ J] .中国中医药信息杂志, 2001, 8( 11) :70 .[ 27] 　徐勇, 刑乐友.决明子治疗老年性便秘100 例[ J] .中国中西结合外科杂志, 2003, 9( 1) :14 .