摘　要：目的：对肉苁蓉药材中松果菊苷、毛蕊花糖苷含量进行测量不确定度评定。方法：参考《化学检测领域测量不确定度评定利用质量控制和方法确认数据评定不确定度（ＲＢ／Ｔ　１４１－２０１８）》，通过安达森－达林检验验证测量系统，应用期间精密度及方法确认数据，计算出期间精密度不确定度分量ｕＲ′、偏倚不确定度分量ｕｂ、合成标准不确定度ｕｃ与扩展不确定度Ｕ。结果：经过安德森－达林检验，证明测量系统符合正态性与独立性假设，质量控制数据与期间精密度数据可用于不确定度计算。结论：期间精密度和方法确认数据可用于检验实验室对肉苁蓉药材中松果菊苷、毛蕊花糖苷含量的测量不确定度评定，此评定方法也可用于其他药材的含量测量不确定评定。关键词：质量控制；方法确认数据；肉苁蓉；松果菊苷；毛蕊花糖苷；不确定度评定肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉Ｃｉｓｔａｎｃｈｅ　ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａ　Ｙ．Ｃ．Ｍａ或德赢vwin登录 Ｃｉｓｔａｎｃｈｅ　ｔｕｂｕｌｏｓａ （Ｓｃｈｅｎｋ）Ｗｉｇｈｔ的干燥带鳞叶的肉质茎［１］，被誉为“沙漠人参”，是中国传统的名贵中药材［２－５］。在２０１５年版《中华人民共和国药典：一部》中规定，松果菊苷、毛蕊花糖苷是肉苁蓉药材的含量测定指标，其含量检测采用高效液相色谱法进行测定。松果菊苷、毛蕊花糖苷作为肉苁蓉药材的质量控制指标，评定其含量测定不确定度对于评价肉苁蓉药材的质量有着重要意义。按照《化学检测领域测量不确定度评定利用质量控制和方法确认数据评定不确定度（ＲＢ／Ｔ　１４１　２０１８）》［６］，在期间精密度测量条件下，获得肉苁蓉的质量控制结果和方法确认数据，应用安德森－达林统计检验对测量系统正态性与独立性假设进行检验，对期间精密度不确定度分量ｕＲ′和偏倚不确定度分量ｕｂ进行合并，最终计算出样品水平下的合成标准不确定度ｕｃ与扩展不确定度Ｕ［７］，以一种相对简单的方法对肉苁蓉药材中松果菊苷、毛蕊花糖苷含量的测量不确定度进行了评定。２　肉苁蓉药材含量检测肉苁蓉药材的含量检测参照２０１５年版《中华人民共和国药典：一部》“肉苁蓉”项下“含量测定”进行：色谱条件与系统适用性试验：以Ｃ１８键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相Ａ，以０．１％甲酸溶液为流动相Ｂ，按表１中的规定进行梯度洗脱；检测波长为３３０ｎｍ。理论板数按松果菊苷峰计算应不低于３　０００［１］。　对照品溶液的制备：取松果菊苷对照品、毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加５０％甲醇制成每１ｍＬ各含０．２ｍｇ的混合溶液，即得［１］。供试品溶液的制备：取本品粉末（过四号筛）约１ｇ，精密称定，置１００ｍＬ棕色量瓶中，精密加入５０％甲醇５０ｍＬ，密塞，摇匀，称定重量，浸泡３０ｍｉｎ，超声处理４０ｍｉｎ（功率２５０Ｗ，频率３５ｋＨｚ），放冷，再称定重量，加５０％甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，滤过，取续滤液，即得［１］。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各１０μＬ，注入液相色谱仪，测定，得到对照品溶液与供试品溶液中各化合物的保留时间与峰面积，根据保留时间进行定性，峰面积进行定量，计算得到药材中松果菊苷、毛蕊花糖苷的含量［１］。３　测量系统的安德森－达林检验实验室根据高效液相色谱法（通则０５１２），将肉苁蓉药材样品（ＱＣＳ样品）纳入日常检测中，在期间精密度测量条件下，对肉苁蓉药材中的松果菊苷、毛蕊花糖苷含量进行不确定度评定。实验室在近２个月的时间内，得到２４个测试结果（ｍ＝２４，单位为％），统计受控检验按下式计算，结果见表２。４　期间精密度不确定度分量ｕＲ′的评定当所用ＱＣＳ样品的测量涵盖全部分析过程时，样品水平下的ｕＲ′评定采用ｕＲ′＝ＳＲ′，式中：ＳＲ′为期间精密度标准差。根据表２的统计信息，求得ｕＲ′松＝ＳＲ′松＝０．１１５％。根据表３的统计信息，求得ｕＲ′毛＝ＳＲ′毛＝０．０６％。５　偏倚不确定度分量ｕｂ的评定偏倚不确定度分量的评定采用加标回收实验分析进行。实验室进行了肉苁蓉药材中５０％、８０％、１００％、１２０％、１５０％、２００％加标量的加标回收试验，每个水平加标量做三平行。回收率数据见表４。多水平的偏倚不确定度分量ｕｂ的评定采用公式进行计算，式中ｂｉ为第ｉ个回收率与平均回收率的差值。由表４的数据计算得到ｕｂ松＝０．０２３　１％；由表５的数据计算得到ｕｂ毛＝０．０２６　１％。６　扩展不确定度分量Ｕ 的评定在９５％概率下，扩展不确定度按Ｕ ＝２ｕｃ＝２计算。式中：Ｕ 为扩展不确定度；ｕｃ为合成标准不确定度。已知ｕＲ′松＝０．１１５％，ｕｂ松＝０．０２３　１％，由上式求得肉苁蓉药材中松果菊苷含量的测量不确定度合理估计值为：Ｕ＝２＝０．２４％。已知ｕＲ′毛＝０．０６％，ｕｂ松＝０．０２６　１％，由上式求得肉苁蓉药材中毛蕊花糖苷含量的测量不确定度合理估计值为：Ｕ＝２＝０．１３％。７　讨论本研究按照《化学检测领域测量不确定度评定利用质量控制和方法确认数据评定不确定度（ＲＢ／Ｔ　１４１－２０１８）》的方法，在期间精密度测定条件下，分别获得肉苁蓉中２４个松果菊苷数据及２４个毛蕊花糖苷数据，应用安德森－达林检验分别对２４个松果菊苷数据及２４个毛蕊花糖苷数据进行计算，得到松果菊苷的Ａ２＊Ｓ ＝０．３４６　２，Ａ２＊ＭＲ＝０．６５０　３，毛蕊花糖苷的Ａ２＊Ｓ ＝０．３６８　９，Ａ２＊ＭＲ＝０．６６８　３，结果均小于１．０，表明在９９％概率下接受测量系统的正态性与独立性假设。在期间精密度测定条件下，基于质量控制结果和方法确认数据，可算出期间精密度不确定度ｕＲ′，同时根据加标回收实验结果，可以算出偏倚不确定度分量ｕｂ，即可得出合成标准不确定度ｕｃ和扩展不确定度Ｕ。此种不确定度评定方法要求有充分的重复测量次数，所得到的不确定度具有统计学的严格性，更为客观。期间精密度实验数据为劲牌有限公司不同实验室在不同时期检测得到，且ｕＲ′的评定数据经过安德森－达林检验，证明整个检测系统处于稳定受控状态。从扩展不确定度的评定结果看，测量不确定度主要来源于期间精密度不确定度分量。而期间精密度不确定度分量采用的是期间精密度条件下的标准差，表明实验室环境条件的变化对检测结果的影响较大，提示实验室在日常质量控制工作中应加强此方面的控制，从而确保检测结果真实、可信。参考文献：［１］　国家药典委员会．中华人民共和国药典：一部［Ｓ］．北京：中国医药科技出版社，２０１５：１３５－１３６．［２］　刘鹏，刘华．肉苁蓉研究进展［Ｊ］．宁夏农林科技，２０１９，６０（１１）：９－１２，５６．［３］　毕萃萃，刘银路，魏芬芬，等．肉苁蓉的主要化学成分及生物活性研究进展［Ｊ］．药物评价研究，２０１９，４２（９）：１８９６－１９００．［４］　高妍，过立农，马双成，等．基于ＵＰＬＣ特征图谱及主要成分含量的３种肉苁蓉比较研究［Ｊ］．中国中药杂志，２０１９，４４（１７）：３７４９－３７５７．［５］　谯明，朱毅，杨建华，等．肉苁蓉尿囊素提取物安全性毒理学评价［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，２０１９，２５（９）：９５－１０２．［６］　国家认证认可监督管理委员会．化学检测领域测量不确定度评定利用质量控制和方法确认数据评定不确定度：ＲＢ／Ｔ１４１－２０１８［Ｓ］．北京：中国标准出版社，２０１８：１－９．［７］　赵蕊，于毅涛，杜美玲．利用质量控制和方法确认数据评定汽油中ＭＴＢＥ含量的测量不确定度［Ｊ］．石油工业技术监督，２０２０，３６（１）：９－１１．

摘要：德赢vwin登录 产于新疆全疆，但以南疆的民丰分布较集中，生于水分较充足的柽柳丛中及沙丘地，属列当科肉苁蓉属多年生草本寄生植物，常寄生于柽柳属植物的根上。广泛分布于非洲北部、阿拉伯半岛、巴基斯坦、印度及前苏联中亚地区，是药典收载的肉苁蓉药材的主要基源植物，为满足市场对肉苁蓉的需求，更好地实现“以药养林”的目的，本文结合柽柳林的成功栽植，对栽培德赢vwin登录 技术进行了初步探讨，供读者参考。关键词：柽柳林；德赢vwin登录 ；方法德赢vwin登录 （Cistanche tubulosa(Schenk)Wight）属列当科肉苁蓉属多年生草本寄生植物，是药典收载的肉苁蓉药材的主要基源植物，全草可入药，味甘、咸，性温，无毒，有补精血、益肾壮阳、润肠通便的功效。为满足市场对肉苁蓉的需求，更好地实现“以药养林”的目的，结合黄河三角洲区域柽柳林的成功栽植，对栽培德赢vwin登录 技术进行了初步探讨，供读者参考。1 适宜种植的自然条件德赢vwin登录 适应性较强，在冬季低温不低于10℃、年降水量低于100mm（在降水量大的区域，要做好排水工作）、年均相对湿度要在50%左右的气候条件下均可生长。德赢vwin登录 适于在通透性、渗水性良好（含水量3%~18%）、pH8.0~9.5 的沙土中生长，对土壤中有机质的含量要求不高，黏重土壤不适宜种植。2 种子的筛选具备采收条件的可以自行采收，也可以到市场上采购。市场上德赢vwin登录 的种子质量参差不齐，无论是自行采收还是采购，为提高种子萌发率和接种率，要筛选粒大（直径大于0.5mm的为佳）、饱满、有光泽和成熟度较高的种子进行播种。3 种子处理种子处理可供选择的方法比较多，可以采取化学药剂、植物生长调节剂、低温沙藏及热水、暴晒、丸粒化等处理方法。在种植生产中，如果要当年播种，至少要将采收或采购的种子经过10℃左右的低温冷藏处理30d左右。最简便的方法：在北方将种子放置在室外或无供暖的室内，经过冬季自然低温保存后，次年即可用于种植。4 栽培管理德赢vwin登录 为寄生植物，其寄主为柽柳属植物。种植德赢vwin登录 必须要选择条件适宜的柽柳林。在北方尤其是黄河三角洲区域，有大面积人工栽植的柽柳林即可用于种植德赢vwin登录 ，种植户也可以先按照柽柳造林技术栽植柽柳，柽柳定植一年后再种植德赢vwin登录 。德赢vwin登录 栽培分为规范化栽培、仿野生栽培等方式。在柽柳林面积大、立地条件差的区域，适于采用仿野生栽培模式；在面积小、立地条件和管理条件好的地区可以选择规范化栽培模式。在干旱区域用接种纸膜效果好，在非干旱区可以不用接种纸膜。4.1 播种除冬季土壤结冻后至春季土壤解冻前的季节外均可播种，但最佳播种期是3~6 月，也可以在秋季边采挖边播种。秋季播种的种子一般会到第2 年春季才能成功萌发。播种可采用沟播和穴播，有灌溉条件的采用沟播，没有灌溉条件的可采用穴播。4.1.1 穴播在距离柽柳主干50cm左右处挖1~2个深50cm左右的穴，将10~20 粒处理过的德赢vwin登录 种子直接撒播于穴底，用沙土回填至穴深一半后灌水，待水完全渗透后，再将余土回填踩实。4.1.2 沟播在距离柽柳主干30cm处开挖宽30cm、深50cm的接种沟，将德赢vwin登录 种子按照4kg/hm2 的接种量撒播于沟中，回填土踩实后灌溉。无论是穴播还是沟播，可以事先用生根剂或生根粉水溶液喷洒柽柳毛根及周围沙土，然后将种子与适量沙土和有机肥混匀，撒播于沟内，再回填土、灌水、覆土踩实，这样可以提高接种率。4.2 田间管理4.2.1 浇水春季接种后，需要及时灌溉浇水，降雨少的月份每月灌溉1 次，最迟9 月中旬再灌溉1 次，之后为防止冻害不宜再浇水。由于德赢vwin登录 接种后有当年接种出土和二三年后接种出土的，可以视情况在2~3 年后继续参照上述方法补种，但是补种的接种沟最好与第一次接种时挖的沟保持20~30cm的距离，以保持连续不断地产出德赢vwin登录 。4.2.2 施肥为提高德赢vwin登录 的品质，应尽可能给柽柳施用厩肥等有机肥，尽量不使用化肥。4.2.3 除草可结合柽柳林管理，及时清除林间杂草及杂灌木等。4.2.4 病虫害防治除了要加强柽柳的病虫害防治外，还要注意种蝇及老鼠等对德赢vwin登录 的直接危害。4.2.5 人工授粉由于德赢vwin登录 是异花受粉植物，自然受粉率较低，在德赢vwin登录 开花季节，应当进行人工辅助授粉或放养蜜蜂等传粉昆虫。留作采种的植株，为提高种子质量在初花期可以人工摘除花序顶端4~5 层花。5 种子和德赢vwin登录 的采收5.1 种子的采收可以选择果序饱满的果实留种。德赢vwin登录 果实变黑、剥开果实后种子呈现黑褐色说明已经成熟，应及时采收。在黄河三角洲区域一般在6 月底至7月底这个阶段成熟，要经常对果序进行观察，发现成熟的可立即采收。采收时用刀从果序的基部砍断，将收集到的果序集中置于阳光下曝晒，待果实自然开裂，碾压或用木棍敲打出种子，去除杂质，再将种子集中晾晒至干保存。5.2 德赢vwin登录 的采收与种子采收时间不同，一般待德赢vwin登录 出土开花后第3 年的春季或秋季当有花序顶出地面时采收，采完种子的德赢vwin登录 一样可以整株采收。人工采挖时，在接种区外侧50cm向接种区刨挖，但是一定注意保护好接种盘。如果不留接种盘，可以采取机械采收，直接将寄主根切断，翻出德赢vwin登录 。6 德赢vwin登录 的加工将采收的德赢vwin登录 除去泥沙等杂质后，若顶头变色须去除变色部分，整株曝晒或机械干燥。干燥过程中，要注意将茎尖部分除去以防生长开花降低质量，同时也要注意防霉腐烂。由于德赢vwin登录 体积较大，整株干燥困难，可以将整株用切片机切成6mm左右的切片，再干燥包装。

肉苁蓉是一种非常珍贵的中药材。肉苁蓉可以用来辅助男性疾病，也具有极高的保健功效。将肉苁蓉泡酒，每天喝一点，可以补肾壮阳，还可以辅助腰酸腿疼的毛病，不仅如此，肉苁蓉泡酒还可以安神。下面就随小编一起来看看肉苁蓉泡酒的功效与作用，肉苁蓉泡酒的正确方法吧！肉苁蓉泡酒的功效与作用1、补肾壮阳肉苁蓉本身就是补肾壮阳的中药材，将肉苁蓉浸酒，其药效会被浸提到酒液当中，喝肉苁蓉酒可以起到补肾的功效。男性肾虚喝肉苁蓉酒可以帮助补肾，减少肾虚给身体带来的副作用和不良影响。对于男性来说，肉苁蓉泡酒的作用就是重振男性雄风。2、辅助腰酸腿疼肉苁蓉具有补肾壮阳的功效，喝肉苁蓉酒可以辅助肾虚所致的腰酸腿疼的病症，还能够提高精子的质量，对于男性不育症状有极好的改善作用。肉苁蓉泡酒还可以辅助遗精，可以帮助解决男性遗精的烦人问题。可以说，肉苁蓉是男人最好的朋友。3、安神肉苁蓉还具有安神的功效，很多现代人因为要供房供车，还要供孩子读书，还要给父母养老送终，生活压力非常大，导致神经衰弱，睡眠质量差，肉苁蓉泡酒喝可以起到安神的作用，能够促进睡眠，让我们摆脱烦人的思绪，安安稳稳地睡一个好觉。4、止血降压肉苁蓉泡酒还可以辅助降低血压，对于高血压患者来说，喝肉苁蓉酒可以辅助控制血压，对身体健康有极大的好处。肉苁蓉还可以止血，对于鼻出血、便血和尿血等出血症状有极好的辅助作用，不过，一次不要喝太多，如果没有好转，要及时就医。肉苁蓉泡酒的正确方法1.肉苁蓉酒肉苁蓉40克，浸入500克白酒内，瓶口盖紧，每日摇晃1次，浸泡7-15日后即可服用，每日饮用10-30毫升。功效：补肾阳，益精血，润肠通便。用于阳痿，肾虚，不孕，腰膝酸软，筋骨无力，肠燥便秘。2.肉苁蓉枸杞酒肉苁蓉200g、锁阳100g、天麻30g枸杞子50g，放入3千克白酒内浸泡7-15日后，每日饮用10-30毫升。3.肉苁蓉菟丝酒肉苁蓉30g、菟丝子20g，放入500克白酒内浸泡后饮用。饮用完可继续加入白酒浸泡。4.肉苁蓉首乌酒肉苁蓉50克、何首乌50克、怀牛膝50克、柏子仁50克、白酒1500克。各药切碎，用纱布袋装好，共浸泡入白酒中，隔日搅拌一次，10～20天后取澄清药酒饮用。每次25ML，一日两次。用于气血不足，肾虚精亏。这款药酒不仅有补肾益肾的作用，还能够有养发护发的功效，非常适合女性朋友们食用哦！图文来源：来自网络，版权归原作者有关于开心养生相关的问题可以在下方留言告诉我哟也欢迎大家分享你们的健康资讯让我们开心快乐健康幸福的生活每一天

一、典籍摘要《神农本草经》：“味甘，微温。主五劳七伤，补中，除茎中寒热痛，养五脏，强阴，益精气，多子，妇人癥瘕。久服轻身。”《药性论》:“益髓，悦颜色，延年，治女人血崩，壮阳……大补益，主赤白下。”《本草汇言》:“养命门，滋肾气，补精血之药也。”《日华子本草》:“治男子绝阳不兴，女子绝阴不产，润五脏，长肌肉，暖腰膝。”《本草经集注》：“味甘、酸、咸，微温，无毒。主治五劳七伤，补中，除茎中寒热痛，养五脏，强阴。益精气，多子，治妇人癥瘕，除膀胱邪气、腰痛，止痢。久服轻身。”《 雷公炮制药性解》：味甘酸咸，性微温，无毒，入命门经。兴阳道，益精髓，补劳伤，强筋骨。主男子精泄尿血，溺有遗沥，女子症痛崩带，宫寒不孕。酒浸一宿，去浮甲，擘破中心，去白膜，蒸半日，酥炙用。润而肥大者佳。苁蓉性温，为浊中之浊，故入命门而补火，惟尺脉弱者宜之。《玉楸药解》：味甘、咸，气平，入足厥阴肝、足少阴肾、手阳明大肠经。暖腰膝，健筋骨，滋肾肝精血，润肠胃结燥。凡粪粒坚小，形如羊屎，此土湿木郁，下窍闭塞之故。谷滓在胃，不得顺下，零星传送，断落不联，历阳明大肠之燥，炼成颗粒，秘涩难通。总缘风木枯槁，疏泄不行也，一服地黄、龟胶，反益土湿，中气愈败矣。肉苁蓉滋木清风，养血润燥，善滑大肠而下结粪。其性从容不迫，未至滋湿败脾，非诸润药可比。方书称其补精益髓，悦色延年，理男子绝阳不兴，女子绝阴不产，非溢美之词。《本草经解》：气微温，味甘，无毒。主五劳七伤，补中，除茎中寒热痛，养五脏，强阴，益精气，多子，妇人癥瘕。久服轻身。（洗去甲用）肉苁蓉气微温，禀天春升之木气，入足厥阴肝经；味甘无毒，得地中正之土味，入足太阴脾经；色黑而润，制过味咸，兼入足少阴肾经。气味俱浊，降多于升，阴也。填精益髓，又名黑司命。五劳者，劳伤五脏之真气也；劳者温之，苁蓉气温，所以治劳也。七伤者，食伤、忧伤、饮伤、房室伤、饥伤、劳伤、经络营卫气伤之七伤也，七者皆伤真阴；肉苁蓉甘温滑润，能滋元阴之不足，所以主之也。中者阴之守也，甘温益阴，所以补中。茎，玉茎也，寒热痛者，阴虚火动，或寒或热而结痛也；苁蓉滑润，滑以去着，所以主之。五脏藏阴者也，甘温润阴，故养五脏。阴者宗筋也，宗筋属肝，肝得血则强；苁蓉甘温益肝血，所以强阴，色黑入肾，补益精髓，精足则气充，故益精气，精气足则频御女，所以多子也。妇人癥瘕，皆由血成，苁蓉温滑而咸，咸以软坚，滑以去着，温以散结，所以主之也。久服，肝脾肾精充足，所以身轻也。二、现代研究成分：主含松果菊苷、毛蕊花糖苷、肉苁蓉苷A、B、C、H,甜菜碱等。《中国药典》规定：含果菊苷和毛蕊花糖苷的总量不得少于0.30%。作用：本品有增强记忆、强壮、抗衰老、抗疲劳、调整内分泌、促进代谢、抗应激、通便、降血压、抗动脉粥样硬化等作用。药理：动物实验证明肉苁蓉有降压作用。

肉苁蓉，作为中药材使用已经有2000多年的历史，最早记载于春秋战国时期的《神农本草经》，以新疆和田为主产地。肉苁蓉有“沙漠人参”之称，古时多作为贡品朝贡，蒙古族还有传说，认为肉苁蓉为上天赏赐给成吉思汗的食物，才助力成吉思汗和部将打赢了战争。长期食用可增加体力、增强耐力以及抵抗疲劳，同时又可以增强人类及动物的性能力及生育力。据说当年乾隆皇帝就经常用肉苁蓉来“补肾壮阳”。中国历代皇帝的寿命相对于普通人的平均寿命要短。究其原因，可能是因为政务繁忙，操劳过度，以及放纵的性生活所致。皇帝拥有三宫六院、众多嫔妃，耗尽了体内的的“阳气”或“能量”，导致他们比普通人寿命短。但是，乾隆皇帝寿命却很长，他活了 89 岁，原因是乾隆皇帝每日都会饮用肉苁蓉酒，作为日常保健。肉苁蓉，被新疆当地人称为“沙漠里的活黄金”，有这样一句谚语“宁要苁蓉一筐，不要金玉满床”，足见肉苁蓉的珍贵。《神农本草经》：味甘，微温。治五劳七伤，补中，除茎中寒热病，养五脏，强阴，益精气，多子，妇人癥瘕，久服轻身。现代研究表明，肉苁蓉具有保肝护肾、润肠通便、延缓衰老等多方面的作用，男性服用补肾益精、保肝解酒，女性服用可补益气血、美白养颜。

科学护养肝肾 肉苁蓉当归玄参麦冬与便秘及精血不足肝肾功能减退等。精血不足肾藏精主骨生髓通脑，大主遗传生殖生长，肝藏血，精血同源。精血功能清阳浊阴气机气化主题责任，大主循环分泌排泄新陈代谢转化转移生化。气血津液核心物质基础为精血功能态，精血不足整体上为肝肾阴阳二者亏虚的症状。精血不足者，可见头晕目眩，腰膝酸软，耳鸣，齿发病变，足痿无力，性功能减退，视听功能下降，烦热盗汗，颧红口干，大便秘结，气血循环、分泌排泄、新陈代谢障碍等病变。头晕目眩，腰膝酸软，齿发病变，性功能减退，烦热盗汗，视听功能下降等无分泌排泄障碍如便秘者，治疗上一般以滋补肝肾六味地黄丸等类型处方调理保养。如果肝肾精血功能失调，且伴亏耗津少、热毒结积引起火热肺脾肠便秘者，宜在滋养肝肾基础上，配伍玄参麦冬清热凉血，解毒散结，通便助祛邪生新，促进加强大肠气机气化排泄功能、为肝肾胃肠标本二治疗法则。肉苁蓉、当归、玄参、麦冬配伍，治疗精血不足热结便秘。头晕目眩，腰膝酸软，耳鸣，齿发病变，足痿无力，性功能减退，视听功能下降，烦热盗汗，颧红口干，大便干结，状如羊屎，口干少津。肉苁蓉，温补肾精，润肠通便，配当归辛甘而温润，养血和血又能润肠，玄参养阴生津，清热润燥，麦冬益肺阴，滋液通便。

大家都知道沙漠地区，不适宜植物生长，但就是有一些生命力及其顽强的植物，生长在沙漠中，这些植物在我们平原地区很难见到。比如有“沙漠英雄花”之称的仙人掌，有“圣果”之称的沙棘，有“沙漠之王”之称的梭梭树。这些个性鲜明，生命力顽强的植物都只有在沙漠中才能见到，今天我们要介绍的主人公，也来自沙漠地区，它就是锁阳。锁阳又叫不老药，和肉苁蓉一起被称为“沙漠双雄”，是我国名贵的中草药，和肉苁蓉类似，锁阳也是治疗男性肾虚的良药。但锁阳的功效不止于此，下面给大家详细介绍一下。中医来讲，锁阳味甘、性温、无毒，主治大补阴气、益精血、利大便，润燥养筋。锁阳中含有的元素可以提高人体中酶的活性，达到抗衰老的效果；锁阳可以增强集体的免疫力，增强防御功能；锁阳中含有的糖类和苷类可以为人体改善耐缺氧能力；锁阳中含有的无机离子可以增加肠胃蠕动、润肠通便；锁阳对男性性功能下降、遗精、腰膝酸软以及女性的不孕等症状，都有着显著的疗效。那我们应该怎么食用锁阳呢？现在就教给大家两个简单的方法，在家就可以自己制作。1：锁阳:粥原料：锁阳20克、大米适量。制作方法：先把锁阳择干净，放入锅中，倒进适量的清水泡5-10分钟，水煎取汁，把大米倒进药汁中煮粥，粥熟即成。用法：每日1剂，连续服用3-5天。锁阳粥可以补肾壮阳、润肠通便。适用于肾阳不足、阳痿、遗精、不孕等症状，都有很好的治疗作用。2：锁阳酒原料：锁阳30克左右，白酒1斤。制作方法：先把锁阳切成薄片，放进白酒中泡酒，泡7天。用法：每次1小杯，每天2次。锁阳酒对于治疗肾虚阳痿、性功能减退有着很好的功效，具有补肾壮阳的效果。大图模式服用锁阳需要注意的是，在服用期间不能吃辛辣刺激的食物，尽量不要熬夜，阴虚火旺、泄泻的患者都不宜服用锁阳。在日常生活中，应该适当的锻炼身体，增强体质，学会自我调节，放松心情，不要自我承担过多压力。这两个方法都是特别简单，在家随时可以制作的，有肾虚方面困扰的朋友可以在家试一试，自己制作，肯定会得到意想不到的好处。

【摘要】　李曰庆教授认为特发性少弱精子症病机为脾肾亏虚，兼夹湿热、血瘀、痰浊等病理变化。治疗以补肾填精，益气健脾为主，配合活血化瘀，疏肝理气治法。用药以“微调阴阳”为主，药效平和，无大辛大热之品，疗效确切。文章主要介绍李教授治疗特发性少弱精子症的用药经验，常用药对有：生地黄—熟地黄—山萸肉、肉苁蓉—黄精、鹿角胶—巴戟天—仙灵脾、生黄芪—茯苓—太子参、丹参—三七—牛膝、水蛭—蜈蚣、白芍—乌药等。【关键词】　特发性少弱精子症；　药对；　李曰庆；　微调阴阳；　补肾填精；　益气健脾育龄夫妇同居１ 年以上，未采取任何避孕措施，女方受孕能力正常，因男方原因而导致女方不能受孕的疾病，称为男性不育症［１］ 。其发生可能与全身性疾病、生殖系统感染、精索静脉曲张、激素水平异常及环境因素等有关，其中无明确病因者称为特发性少弱精子症。现代医学对特发性弱精子症的发病机制研究不明确，所以其更多地倾向于经验性治疗，国内外现代医学相关治疗性研究亦集中于使用左卡尼汀、维生素、雄激素、克罗米芬等药物［２⁃３］ ，但治疗效果差强人意。本病属于中医学“无子”范畴，李曰庆教授认为本病以肾虚为本，与心肝脾密切相关，病机为脾肾亏虚，兼夹湿热、血瘀、痰浊、肝郁等病理变化。在辨证上主张宏观与微观相结合，在治疗上以补肾健脾生精为则，以微调阴阳为法，同时配合疏肝理气、清热利湿、活血化瘀等，用药平和，无燥热寒凉之弊，以微调为主，强调缓以图功，攻补兼施，调和阴阳。李老临床选方多以“六五四二”为原则加减用药［４］ ：“六”指六味地黄丸；“五”指五子衍宗丸；“四”指四物汤、四君子汤、四妙丸；“二” 指二至丸、二仙汤。临床根据此原则随症加减，疗效颇佳。笔者有幸跟随李老长期门诊学习，受益颇多，现将李老治疗少弱精子症的临床常用药对做一浅析，以供同道参考。１　补肾填精为核心临床上很大一部分特发性少弱精子症患者多无明显症状，中医属于“无证可辨”，但李老认为，这种情况也是有肾虚的存在，主张“从肾论治”。《素问·上古天真论篇》曰“丈夫八岁肾气实，发长齿更。二八肾气盛，天癸至，精气溢泻，阴阳和，故能有子”，也指出肾气充足是男性具有生育能力的前提。所以肾虚是特发性少弱精子症的核心病机，李老在补肾时注重阴阳并调，根据肾阴或肾阳的偏重随症加减。例如，李老基本方中包含的五子衍宗丸由枸杞子、菟丝子、覆盆子、车前子、五味子组成，药性平和，无大辛大热之品，全方补中寓泻，补而不腻，阴阳并调，共奏补肾填精之效。１． １　滋补肾阴药对１．１． １　生地黄—熟地黄—山萸肉　李老在滋补肾阴时多喜欢生地黄与熟地黄并用，另外配合六味地黄丸中的另外两种滋补肾阴的药物：酒萸肉、山药（若患者兼有肺脾两脏的不足，常配合山药，因山药具有健脾、补肺、固肾、益精的功效，可肺脾肾三补，且药食同源，可久服之）。生地黄味甘苦而性寒，功能凉血清热、滋阴补肾、生津止渴，熟地黄味甘性微温，长于滋阴补血，益髓填精，两者均可滋阴补肾，但是功效侧重不同，正如《本草纲目》云“地黄生则大寒，而凉血，血热者需用之，熟则微温，而补肾，血衰者需用之”，指出了两者的不同，但是李老将两者合用，既可补肾填精，又可滋阴补血，且寒温并用，药性温和，这也是李老用药的特点之一，平调阴阳，寒温并用，临床常用剂量为１０ ～１５ ｇ。山萸肉味酸、涩，微温，具有补益肝肾、收涩固脱之功，经酒制后，补益肝肾作用增强［５］ 。现代药理研究发现，山萸肉有延缓衰老、抗炎、调节免疫、抗疲劳、保肝等作用［６］ 。《汤液本草》曰：“滑则气脱，涩剂所以收之，山茱萸止小便利，秘精气取其味酸涩以收滑也。”《药性论》言：“止月水不定，补肾气，兴阳道，添精髓，疗耳鸣。” 所以，山萸肉既能益精，又可助阳，长于固涩下焦，为肝肾亏虚、下元不固之要药。与生熟地并用，则肝肾同补、精血互生，且山萸肉微温而不热，是一味平补阴阳的药品，不论阴虚或阳虚，都可配用，李老临床常用到１２ ～ １５ ｇ。临床对于特发性少弱精子症患者阴虚症状明显者，三者合用多用至１５ ｇ，而无症状的患者但是精子密度偏低者，李老常常三者合用并重用，并配合鳖甲、龟板等滋补肾阴的血肉有情之品。１．１． ２　肉苁蓉—黄精　肉苁蓉味甘、咸，性微温，归肾、大肠经，可益精血、润肠道，为滋补精血的要药。《本草汇言》曰：“肉苁蓉……此乃平补之剂，温而不热，补而不峻，暖而不燥，滑而不泄，故有从容之名。”《神农本草经》言：“主五劳七伤，补中，除茎中寒热痛，养五脏。” 黄精甘、平无毒，归肺、脾、肾经，功能补气养阴，健脾，润肺，益肾。本品为平补要药，可补肺脾肾三脏，善补中气、除风湿、安五脏，药性平和，尤适用于特发性少弱精子症而无症状者。李老临床常将二药合用（肉苁蓉１２ ｇ、黄精１５ ｇ），两药均可补五脏（《神农本草经》言肉苁蓉可养五脏，黄精可安五脏），且药性平和，且肉苁蓉厚重下降，直入肾家，温而能润，无燥烈之害，能温养精血而通阳气，两药合用，可温补下焦，滋阴养血且无阳之弊，为李老滋补肾精的常用药对。若患者阴虚症状明显，李老常配合二至丸加味（女贞子１０ ｇ、墨旱莲１０ ｇ）。１． ２　温补肾阳药对１． ２． １　鹿角胶—巴戟天—仙灵脾　鹿角胶味甘、咸、性温，归肝、肾经，可温补肝肾、益精血、止血。《本草纲目》云：“熟用则益肾补虚、强精活血，练霜为膏，则专于滋补矣。”张锡纯则认为鹿角善化瘀生新，熬之成胶其性仍在，故鹿角胶还可补精血而化瘀血。巴戟天味辛、甘，性微温，归肾、肝经。能够补肾助阳、祛风除湿，常用于治疗阳痿不举、小便频数、宫冷不孕、风湿腰膝疼痛、肾虚腰膝酸软等症。《本草汇》言：“巴戟天，为肾经血分药，盖补助元阳则胃气滋长，诸虚自退，其功可居萆薢、石斛之上。”仙灵脾性辛、甘、温，归肝、肾经。具有补肾阳、强筋骨、祛风湿功效。对于具有肾阳虚损，畏寒怕冷的少弱精子症患者，李老常选用此药对配伍（鹿角胶１０ ｇ、巴戟天１５ ｇ、仙灵脾１０ ｇ）。李老临床观察，由于生活方式的改变，目前患者多久坐、贪凉，加之空调等外部寒气的侵袭，气血瘀滞，肾阳虚损的患者逐渐增多，而鹿角胶与巴戟天皆为肾经血分药，且鹿角胶具有活血之性，三者合用，即可温补肾阳，又可活血化瘀，有补而不滞的特点。三者性味多温，李老常选黄柏（１０ ～１２ ｇ）同用，既制其温热，又能补阴。若患者瘀血重者，多配伍三七粉、丹参之品，增强其活血化瘀之效；阳虚明显者，李老常联用仙茅、炒杜仲等增强温补肾阳之力。２　益气健脾药对：生黄芪—茯苓—太子参随着人们工作压力增大，饮食不节，嗜食肥甘厚味，思虑劳倦过度等成了现代病的主要因素，思虑过度、饮食不节，则劳伤心脾，而脾虚气弱也成为特发性少弱精子症的常见病因，患者多出现疲劳、大便不成型、舌质胖大有齿痕等症状，根据脾肾先后天相互滋养的理论，脾虚则生化乏源，五脏之精失水谷精微濡养，肾失封藏，生殖之精则无以化生，而出现精子密度低、活力低等表现，若健脾运胃，则脾气散精，精气藏于肾，先后天相互资生，精血充足，则精子可保持正常的活力密度，而能有子。生黄芪味甘气微温，气薄而味浓，功效补气升阳，利水消肿，为益气健脾之良药。茯苓味甘、淡，性平，擅利水渗湿，健脾，宁心。《本草衍义》言其：“行水之功多，益心脾不可阙也。”太子参味甘微苦，性质平和，归脾肺之经，可益气健脾，生津润肺，本品药性平和偏凉，补中兼清，可防脾虚痰湿瘀热互结。《本草再新》云其：“治气虚肺燥，补脾土，消水肿，化痰止渴。”李老临床常将三药合用（生黄芪２０ ～３０ ｇ、茯苓１５ ｇ、太子参１５ ｇ），共寓益气健脾之功，且太子参药性平和偏凉，黄芪性温，茯苓甘平，一方面太子参可佐制生黄芪之温；另一方面参芪相须为用，健脾益气功效更强，配合茯苓可增强健脾利水之功。另外，中医认为弱精症与气虚推动无力相关，大剂量的生黄芪补气升提的作用可明显提高精子活力，现代研究也发现黄芪的有效成分可增强弱精子症患者精子线粒体的活性［７⁃８］ ，从药理学的角度证实了黄芪对精子活力的提高作用。若患者气虚者，李老常与炙黄芪同用，同时配合石斛、红景天、绞股蓝等提高补气养阴的力度；脾虚痰浊明显者，常配合浙贝母、姜半夏、海藻、昆布等化痰散结之品助之。３　活血化瘀药对特发性少弱精子症患者多病程较长，久病成瘀，加之现代生活方式的改变以及工作压力的增大，气滞血瘀、湿热血瘀的患者随之增多［９］ ，尤其是伴有精索静脉曲张、睾丸微石症、勃起功能障碍的患者，更是考虑有血瘀的存在［１０⁃１２］ ，故而在临床上李老面对久治无明显效果的患者常将“活血化瘀”之法贯穿始中，对本病的远期疗效比较明显。由于活血化瘀药多有耗气伤阴之弊，故李老选用活血化瘀药多具养血之效，或配伍红景天、石斛、太子参等益气养阴之品，以起到活血而不伤正的目的。３． １　丹参—三七—牛膝丹参味苦，微寒，归心、肝经，功效活血祛瘀，通经止痛，清心除烦。“一味丹参，功同四物”，说明丹参不仅有活血之效，兼可补血养血，久服可利人血脉而不伤气血。三七性温，味甘、微苦，归肝、胃经。可散瘀止血，消肿定痛。《本草纲目拾遗》中言“人参补气第一，三七补血第一，味同而功亦等，故称人参三七，为中药之最珍贵者”，指出三七不仅有活血化瘀之功，且兼具补血之效，尤适于血瘀兼有气血虚损者。牛膝味苦酸、性平，具有补益肝肾，强腰膝以及活血、引血下行的作用。李老临床常将三者合用（丹参１５ ｇ、三七３ ～ ６ ｇ、牛膝１０ ～１５ ｇ），若患者无明显瘀血症状，则选用丹参与牛膝配合。丹参与三七都具有补血活血之效，二者合用可化瘀通滞而不伤气血，与牛膝同用，则引药下行，直达病所，使精室血行通畅，败精瘀血得除，精子得新血滋养而活力、密度均可提高。临证时，多与黄芪，党参配伍，在增强活血化瘀力度的同时，顾护正气，使得气血双补，阴阳调和。另外不仅在治疗少弱精子症方面，李老在治疗有关精室之类的疾病时，都常配伍牛膝，以起到引经药的作用，使药效直达下焦精室。３． ２　水蛭—蜈蚣对于血瘀较重，普通活血化瘀药效果一般时，李老常将两药配伍使用（水蛭３ ～ ４ ｇ、蜈蚣４ ｇ）。叶天士在《临证医案指南》中提出“久病入络”学说，强调“初为气结在经，久则血伤入络”。络脉瘀阻，则常规的活血化瘀药难以奏效，无破血之品则不可攻坚。张锡纯云：“水蛭善破瘀血而不伤新血， 凡破血之药多伤气分，惟水蛭味咸专入血分，于气分丝毫无损，且其性迟缓善入，迟缓则生血不伤，善入则坚积易破。”蜈蚣性咸、辛，温，归肝、脾、肺经，可息风镇痉，攻毒散结，通络止痛，李老认为根据其习性判断，其尤善于化瘀通络，故李老常将两药配伍使用，且破瘀通络而不伤正，临床佐以路路通， 威灵仙等品效果更佳。４　疏肝理气药对：白芍—乌药近现代医家在治疗少弱精子症时多从肾论治，而忽略其他脏腑的影响。而李老认为随着时代变迁，生活节奏的加快和压力的增大，肝郁气滞的患者也逐渐增多，长期保持此状态，则易肝郁气滞，肝木乘脾，脾虚不能运化，使肾精不能充养，或肝郁化火，肝胆火盛，肾水亏耗，肾精不足而出现少弱精子症。故李老在辨证时若患者出现以上症状，常配伍一两味滋阴柔肝疏肝的药物，并配合培土生津益肾之品，使肝木柔润，气机调畅。白芍味酸苦，性微寒凉，归肝、脾经，可戢肝火泻胆热、滋阴液利小便、抑浮火制药性，擅养血调经，敛阴止汗，柔肝止痛。张锡纯认为本品味酸，故能入肝以生肝血，味苦，故能入胆而溢胆汁，味酸而兼苦，且又性凉，故善泻肝胆之热。乌药性温，擅行气止痛、温肾散寒［１３］ 。《本草求真》言其：“凡一切病之属于气逆，而见胸腹不快者，皆宜用此。”李老临床常联合用此二药（白芍１５ ｇ、乌药１５ ｇ）滋阴柔肝，理气散结。白芍与乌药配伍，一凉一温，一方面在药性方面可以相互佐制，另一方面两药相伍既可提高白芍滋阴柔肝清火之力，又可增强乌药疏肝行气止痛之功，相辅相成，使气机调畅，肝血足，肾水旺，肾精充，则精液活力密度自然提高。５　验案举隅患者，男，３２ 岁，２０１８ 年８ 月１２ 日初诊。主诉：婚后２年未避孕未育。平素夫妻性生活规律，每周２ ～３ 次，爱人相关检查一般状况好。患者半年前于当地孕前检查被诊断为少弱精子症，其他检查包括男性激素、阴囊超声、染色体等均未见异常，今为进一步治疗求诊。刻下：平素易疲劳，乏力，腰酸，纳可，眠佳，稍怕冷，无口干，稍口苦，阴囊无潮湿，性欲正常，大便不成型，小便正常。平时压力稍大。舌质淡边有齿痕苔薄白，脉细无力。复查精液：４ ｍＬ，完全液化，前向运动精子１８ ％，密度：１３×１０６ ／ ｍＬ。诊断：男性不育症（少弱弱精子症）。辨证：脾肾阳虚，肝郁气滞。治法：健脾补肾，疏肝理气。处方：生地黄１５ ｇ、熟地黄１５ ｇ、山萸肉１２ ｇ、肉苁蓉１２ ｇ、菟丝子１５ ｇ、枸杞子１５ ｇ、五味子１０ ｇ、车前子１０ ｇ、覆盆子１５ ｇ、生黄芪３０ ｇ、丹参１５ ｇ、盐黄柏１２ ｇ、仙灵脾１５ ｇ、鹿角胶１０ ｇ、怀牛膝１０ ｇ、茯苓１５ ｇ、制巴戟天１２ ｇ，３０剂，免煎，温水冲服，早晚各一袋。嘱其忌辛辣油腻，适当运动。２０１８ 年９ 月１０ 日二诊：患者诉疲劳感减轻，现无怕冷症状，口干，平时久坐，运动较少，大便偶尔成型。舌质淡边有齿痕苔薄白脉细。复查精液常规：３ ｍＬ，液化，前向运动精子３２ ％，密度１８×１０６ ／ ｍＬ。前方减鹿角胶，加山药１５ ｇ、太子参１５ ｇ、麦冬１５ ｇ，继服３０ 剂，服法和调护同前。２０１８ 年１０ 月１３ 日三诊：患者诉疲劳感大大减轻，身体无特殊不适，无口干口苦，大便偶不成型，小便正常，舌质淡边有齿痕脉滑。处方：前方加炒白术１２ ｇ、黄精１５ ｇ，继服３０剂，巩固疗效，用法和调护同前。半年后来门诊报喜其妻已自然受孕４ 月余。６　讨论特发性少弱精子症无明确病因，现代医学方法治疗效果一般。中医中药优势明显，李老临证４０ 余年，对本病的辨证和治疗有独特的看法［１４］ ：在辨证方面，强调中西医结合并举，宏观与微观结合辨证，即从宏观方面运用中医四诊合参整体全面把握患者的症状、体征，配合现代医学从微观角度借助仪器在深层组织研究结构变化，而且将现代医学细微阳性体征纳入中医辨证体系，这实际上也是中医四诊合参的延伸。例如针对无症状的少弱精子症患者，属于中医“无症可辨”的范畴，但李老将西医的微观检查如精液常规纳入中医辨证体系，形成特殊的“中医辨证”，根据中医理论“阳化气、阴成形”，精液属水为阴，与精液量和精子密度相关；精气属火为阳，起推动作用，与精子活力有关，故临床精液量和精子密度偏低的患者李老认为是肾阴虚偏重，滋补肾阴药对量则偏重，甚者则添加鳖甲、龟板等滋补肾阴的血肉有情之品；精子活力偏低者，则重用补肾助阳药对，但是慎用附子、桂枝等大辛大热之品，多选用性平或微温之品，如鹿角胶、仙灵脾、巴戟天等。在治疗用药方面，李老坚持以调和阴阳为主，不用大寒大热之品，因过用寒凉之品，则会导致精液活力下降；过用温热之品，虽精子活力一时提高，但长久来看，会导致肾阴亏耗，精子黏稠度大，精液量下降，精液不液化等。故李老常常补肾阴与肾阳之品同用，根据症状两者比例灵活调配，且多用性平之品，正所谓“善补阳者，必阴中求阳，则阳得阴助，而生化无穷；善补阴者，必阳中求阴，则阴得阳升，而泉源不竭”。李老临床以“补肾健脾”为核心，随症兼以活血化瘀、疏肝解郁清热等，以“六五四二”为基本方，随症加减，不拘泥于单纯的补肾填精，前期治疗多以汤药为主，力达药转，直达病所，后期多以丸药缓以图功，攻补兼施，调和阴阳，使阴阳调合则故能有子，并善于使用精简而效专的药对组合，以增强药力，直达病所，临床值得进一步推广。参考文献［１］　李宏军． 特发性男性不育药物治疗的相关问题［Ｊ］． 中国计划生育学杂志，２０１３，２１（４）：２８６⁃２８８．［２］　张华，孙自学，李鹏超，等． 生精通络赞育方治疗特发性弱精子症肾虚瘀阻证５７ 例疗效观察［Ｊ］． 中医杂志，２０１８，５９（６）：４９０⁃４９３．［３］　赵玉，欧阳斌，耿强，等． 补肾健脾法治疗少弱精子症临床有效性的Ｍｅｔａ 分析［Ｊ］． 生殖与避孕，２０１７，３７（１）：５５⁃６０．［４］　宣志华，杨振，轩立华，等． 李曰庆教授“六五四二”方治疗男性少弱精子症的临床经验［Ｊ］． 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内蒙古鄂尔多斯市中医院副院长李寿庆主任医师，祖上五世业医，其临床推崇张仲景、叶天士、龚延贤、张锡纯等中医大家，熟读中医经典医籍，临床严谨求实，注重实效，擅长治疗脾胃病以及疑难杂症，现举临床治疗老年性顽固性便秘一案，供同道交流借鉴。王某，男，81 岁，2013 年3 月3 日初诊。患者主诉习惯性便秘60 年，伴乏力、心悸、干咳、易感。患者诉年轻时起，大便常干结、身热、口臭、排便困难，常6～7 天排便一次，每次大便干硬而结。多年来依靠导泄药、麻仁丸、芦荟胶囊、开塞露，维持了大半辈子。近半年，大便干结，虽有便意而临厕努挣乏力，难于排出，挣则汗出气短、便后疲乏，伴眩晕、心悸、易感，寻他医救治，仍用枳实导滞丸、麻仁丸、芦荟胶囊、增液承气汤，治疗无效。自觉体疲乏力，身虚倦怠，口干、心悸、干咳加重，邀李寿庆诊治。患者现大便困难，便意频频，临厕努挣，难于排出，挣则出汗、气喘吁吁，肢倦懒言，心悸怔忡，舌淡嫩，少苔，脉细微。辨证为“肺脾肾三脏气阴两虚”型“便秘”。治以益气养阴，健脾养血，补肾润肠。方用：生脉散合玉屏风散加味。处方：西洋参（冲服）10 克，麦冬30 克，五味子10 克，黄芪30 克，生白术30 克，紫菀30 克，莱菔子30 克，柴胡6 克，肉苁蓉30 克，生首乌10 克，苏子10 克，当归15 克，石斛15克，炙甘草5 克。6 剂后，大便已顺通，所解的大便并无干硬结，每天2～3 次排便，患者兴奋不已，要求再服中药调理。再诊时，患者唯觉喜卧懒言，踡卧无神，语声低弱，不耐劳烦，动则汗出，面白、舌淡，脉微细，守上方去石斛、柴胡，佐制附子10 克，先煎。再服6 剂。药后排便自如，每日1 次，排便顺畅至今。分析：便秘是老年人的常见病，且随着年龄的增长而症状加重，老年虚性便秘辨证分型尚无统一标准，大多遵循1994 年国家中医药管理局颁布的《中医病证诊断疗效标准》辨证分型及论治。通常分为气虚型、血虚型、阴虚型、阳虚型。气虚型见大便不干硬，排出困难，虚坐努挣，汗出气短，便后乏力，面白神疲，舌苔白，脉弱。血虚型见便干，头晕目眩，面色无华，心悸气短，唇甲色淡，苔白、脉细。阴虚型见便如羊屎，形体消疲，头晕耳鸣，心烦少寐，潮热盗汗，腰膝酸软，舌红、脉细数。阳虚型见大便排出困难，小便清长，面色淡白，四肢不温，腹中冷痛，舌淡、苔白，脉沉细。李寿庆认为，治疗老年性便秘应遵循实则泻之、虚则补之、六腑以通为用的治疗原则，注重调理肺脾肾三脏，以复大肠传导之职。本例顽固性便秘，久用导泄药，气阴津血兼伤，加之年长之人阴气渐衰，阴虚之渐，精血日耗，而津液更亏，急需复正气，生阴血，通腑气。《素问·灵兰秘典论》云：“大肠者，传导之官，变化出焉”，人年过四十阴气自半，阴虚之渐，越老越衰，精之日耗，而津血更亏，进而生气不足，成燥结内生，进而出现老年气血津液均亏。气虚不能运血、生血，则肠道失润，推动无力，传送乏力。血虚则生气不足，更致气虚，血虚津枯而失濡养之功，精血同源，血亏日久致精亏，真阴亏损，使肠道更失濡养；精亏者阳气生成不足，阳不化阴，阴寒内生，凝滞肠道，使气血津液无一流通，日久成秘。李寿庆认为，便秘宜通便，但通便之法不能都用硝黄之类攻下，应针对不同证型选用不同的治法。《证治汇补·秘结》云：如少阴不得大便，以辛润之；太阴不得大便，以苦泄之；阳结者清之，阴结者温之，气滞者疏导之，津少者滋润之，大抵以养血清热为先，急攻通下为次。临床所见老年性便秘，多由真阴亏损，温煦无权，阴邪凝结，或阴亏血燥，大肠液枯，无力行舟导致，多属虚证，但临床亦有虚实多见，寒热错杂，不可妄补妄伐，变生他证。本案用生脉散配石斛，复正气，养胃阴，生阴血，滋阴润腑；黄芪、生白术、柴胡、肉苁蓉益气健脾，润肠通便，使胃肠推动有力，气血生化有源；当归、麦冬、首乌、肉苁蓉与黄芪相配，针对脾肾亏虚，因虚致滞，气虚血亏，益气养血，健脾养肾，扶正通运，以补为通之义；气虚便秘，首责肺气虚，肺气虚则大肠传导无力，方中黄芪、生白术、紫菀、苏子、莱菔子，补肺启秘，宣肺降气，气通肠道，大肠传导有职，莱菔子民间常用其下气定喘，化痰消食，除胀，利大小便之功。对老年性便秘有满意疗效。二诊时，虑及久病阴虚及阳，少佐附子，取其少火生气之义，也含阴中求阳之义，复其大肠传导，推动之力，而附子与黄芪、肉苁蓉、当归相配，温肾润肠，且与白术相伍，温补脾肾，通阳顺气，以司运二便。总之，李寿庆常说：辨证、立法，遣方用药，皆以方证对应为本，虽为老调，确有必要重弹。

摘要:目的　研究类叶升麻苷抗鱼藤酮致多巴胺能神经元SH-SY5Y细胞损伤, 对帕金森病相关蛋白Parkin、α-突触核蛋白(α-Synuclein, α-Syn)表达的影响, 探讨类叶升麻苷抗细胞损伤的分子机制。方法　化学比色法测定细胞培养液乳酸脱氢酶( lactate dehydrogena se, LDH)活性, 蛋白质印迹法(W este rn b lo t)检测Park in、α-Syn的表达, 免疫荧光法检测SH-SY5Y细胞α-Syn分布。结果　①类叶升麻苷(10, 20 或40 mg L- 1)可明显降低鱼藤酮诱导的SH-SY5Y 细胞乳酸脱氢酶(LDH)的释放;② 0.5 μmo l L- 1的鱼藤酮处理SHSY5Y细胞48 h能引起Pa rkin蛋白的明显降解及α-Syn蛋白二聚体增加;③预先用类叶升麻苷(10, 20或40 mg L- 1)处理细胞, 能够有效减少鱼藤酮诱导的Park in蛋白的降解, 呈浓度依赖性;并能够抑制鱼藤酮诱导的α-Syn蛋白二聚体增加及α-Syn阳性细胞数增加。结论　类叶升麻苷对鱼藤酮致SH-SY5Y细胞损伤具有神经保护作用, 其作用机制可能与减少Park in蛋白的降解和抑制α-Syn蛋白的二聚体形成有关。关键词:类叶升麻苷;鱼藤酮;SH-SY5Y 细胞;乳酸脱氢酶;Park in;α-突触核蛋白　帕金森病(Parkinson disease, PD)是一种以黑质纹状体通路的退变为主要特征的神经系统变性疾病。PD的基本病理特征是黑质致密区多巴胺神经元变性伴胞质内嗜酸性包涵体即路易(Lew y)小体形成, 导致黑质纹状体通路破坏及尾状核、壳核中神经递质多巴胺含量减少[ 1] 。PD 的发病机制尚未明确, 与遗传、环境因素、氧化应激、过多的自由基形成及神经生长因子缺乏等有关[ 2] 。目前关于PD 的发病机制研究越来越集中在与PD相关的基因及蛋白的分子机制研究, 已发现有数种基因及其蛋白和PD相关[ 3] , 如Parkin蛋白和α-突触核蛋白(α-Synuc lein,α-Syn)。Park in 蛋白是一种E3 泛素蛋白连接酶, Park in蛋白在PD发病机制中具有保护多巴胺神经元的功能, 如Park in蛋白可减少红藻岩酸诱导的细胞凋亡[ 4] 。利用免疫组化法发现PD 患者脑中特征的路易小体及路易神经轴束(Lewy neurite)中存在大量的α-Syn蛋白, 尽管这些患者并不存在该基因的突变。同时, Feany 等[ 5] 在将人野生型和突变型α-Syn基因转入果蝇后, 发现这些果蝇不但出现运动行为障碍, 而且有多巴胺能神经元选择性变性和死亡, 同时部分神经元中出现类似于路易小体的包涵体。这些结果证实α-Syn蛋白在神经变性死亡中起关键作用。有关类叶升麻苷(acteoside)对鱼藤酮致SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用已有报道[ 6] , 但其对该细胞模型保护作用的分子机制研究尚未见国内外报道。因此本文用鱼藤酮诱导建立SH-SY5Y细胞损伤模型, 首次就类叶升麻苷的神经保护作用同Park in及α-Syn蛋白表达水平之间的关系进行了探讨。1　材料与方法1. 1　材料1. 1. 1　试剂　鱼藤酮(ro tenone)、胰蛋白酶(trypsin)为S igma 公司产品;1640 培养基、胎牛血清为G ibco公司产品;乙二胺二乙酸二钠盐(EDTA-Na2 )为Am re sco公司产品;小鼠神经生长因子(mNGF)、蛋白提取试剂盒为Promega公司产品;蛋白定量试剂盒为Pierce公司产品;兔抗人Park in多克隆抗体、兔抗人α-Syn 多克隆抗体为Ce ll signaling 公司产品;二抗和ECL试剂盒均为Santa cruz公司产品。鱼藤酮溶解于二甲基亚砜(DMSO, S igma)中, 配成1mmo l L- 1储存液于常温避光备用。类叶升麻苷相对分子量为624, 经HPLC 检测纯度>98%, 由北京大学药学院天然药物学系屠鹏飞教授提供。人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)购自中国医学科学院细胞库。1. 1. 2　主要仪器　CO2 孵箱:SANYO 公司;倒置相差显微镜:德国LE ICA公司;倒置荧光显微镜:日本OLMPUS公司;Im age Master VDS 凝胶成像分析系统:B io Rad公司;全自动生化分析仪:AMS公司。1. 2　方法1. 2. 1　SH-SY5Y细胞培养　1640培养基加体积分数为0.1的胎牛血清、青霉素1 ×105 U L-1 、庆大霉素8 ×104 U L-1 , 5% CO2 , 37℃培养细胞。待细胞增长至70%融合时, 用含0.1 g L-1 EDTA-N a2的0.5 g L-1胰蛋白酶消化传代, 1 ∶3分瓶传代,每4天传代1次。当细胞用药物(类叶升麻苷、鱼藤酮或NGF)处理时, 换用含体积分数为0.01的胎牛血清的培养基进行培养, 细胞每隔2天换液1次。1. 2. 2　实验分组和药物处理　SH-SY5Y 细胞分为以下各组:①正常对照组:除了含体积分数为5 ×10- 3 DMSO 外, 不加其他任何药物;②类叶升麻苷单独处理组:除了含类叶升麻苷(20 mg L- 1 )外, 不加其他任何药物;③细胞损伤组:培养液中加入0.5μmo l L-1鱼藤酮;④类叶升麻苷组:用不同终浓度(10、20、40 mg L- 1 )类叶升麻苷预处理6 h +0.5μmo l L-1鱼藤酮;⑤阳性对照组:小鼠神经生长因子(NGF, 200 μg L-1 )预处理6 h + 0.5 μmo lL-1鱼藤酮, 7组细胞培养所需时间后, 进行指标测定。1. 2. 3　细胞培养上清液乳酸脱氢酶(LDH )水平的测定　用1 ×108 L-1的细胞悬液接种24孔板, 每孔400 μl。培养方法同前。收集各孔培养上清液,用全自动生化分析仪测定LDH活性。1. 2. 4　W este rn-blo t检测Parkin、α-Syn的表达　低温提取细胞蛋白, BCA 法测定蛋白浓度。每孔的上样量为50 μg, 质量体积分数为0.125的SDS-PAGE分离样品。转膜, 封闭, 将膜与溶于封闭液中的一抗(兔抗人Parkin多克隆抗体1 ∶1 000, 兔抗人α-Syn多克隆抗体1 ∶1 000)4℃孵育过夜, 漂洗, 将膜浸入以1 ∶5 000体积比稀释(用封闭液)的二抗稀释液, 室温孵育2 h, 加入ECL试剂, 曝光, 显影, 定影,对X 光底片拍照, 并用VDS凝胶成像系统分析软件进行光密度积分值分析。1. 2. 5　间接免疫荧光法检测SH-SY5Y 细胞α-Syn的分布　将盖玻片(8 mm ×8 mm )置于6 孔板中,以1 ×105 个/孔 将SH-SY5Y 细胞悬液接种于6 孔培养板的盖玻片上, 37℃, 5% CO2 , 孵育一定时间,待细胞基本贴壁后, 分为3组, 分别为正常对照组、细胞损伤组和类叶升麻苷组(20 mg L- 1 )。其余处理步骤同前, 造模24 h后用PBS 漂洗3次, 4℃4%甲醛固定15 m in, PBS 漂洗3次, 37℃ 5%胎牛血清封闭30m in, PBS漂洗3次, 滴加一抗(小鼠α-Syn单抗1 ∶50), 将6孔板制成湿盒, 37℃孵育2 h,PBS漂洗3次, 滴加荧光素标记二抗(1 ∶50), 37℃孵育1 h, PBS漂洗3次, 荧光显微镜下观察并拍照。2　结果2. 1　类叶升麻苷对LDH 活性的影响　鱼藤酮(0.5 μmol L- 1 )诱导SH-SY5Y 细胞损伤24 h后,细胞损伤组LDH值较正常对照组明显升高;类叶升麻苷组(10、20、40mg L-1 )抑制LDH 活性呈浓度依赖性, 结果表明类叶升麻苷浓度越高, 对SHSY5Y细胞保护作用越强。鱼藤酮诱导48 h, 各组的LDH 变化同24 h时间点类似, 具有浓度依赖关系, 但细胞损伤组LDH 值较正常对照组升高更加明显, 并观察到更加明显的类叶升麻苷神经保护作用(Tab 1)。2. 2　类叶升麻苷对鱼藤酮致Parkin蛋白降解的影响2. 2. 1　W estern blot量效实验　细胞损伤组的Parkin蛋白的38 ku 降解条带较正常对照组和类叶升麻苷单独处理组条带较粗, 灰度值较高, 而类叶升麻苷组(10、20、40mg L-1 )及阳性对照组(NGF, 200μg L- 1 )与细胞损伤组比较, 38 ku降解条带较细,灰度值较低, 其中类叶升麻苷组(40 mg L-1 )的38ku降解条带最细, 灰度值最低。该结果表明类叶升麻苷可能通过抑制Park in 蛋白的降解而发挥其对损伤神经细胞的保护作用, 其中类叶升麻苷组(40mg L-1 )抑制Parkin 蛋白降解作用最明显(F ig1)。2. 2. 2　W estern blo t时效实验　细胞损伤组(鱼藤酮作用48 h)的Parkin蛋白的38 ku 降解条带较正常对照组条带较粗, 灰度值较高, 而类叶升麻苷组(鱼藤酮作用24、48、72 h)与细胞损伤组比较, 38 ku降解条带变细, 灰度值降低。且在鱼藤酮诱导48 h时, 降解条带最细, 灰度值降低最明显。该结果表明类叶升麻苷抑制Pa rkin蛋白的降解作用同鱼藤酮作用时间相关(Fig 2)。2. 3　类叶升麻苷对鱼藤酮致α-Syn蛋白表达的影响2. 3. 1　W este rn b lo t实验　细胞损伤组的α-Syn蛋白的36 ku二聚体较正常对照组和类叶升麻苷组单独处理组条带较粗, 灰度值高, 而类叶升麻苷组(10、20、40 mg L-1 )及阳性对照组(NGF, 200 μgL- 1 )与细胞损伤组比较, 36 ku二聚体条带较细,灰度值降低, 但浓度关系不明显。该结果表明类叶升麻苷可能通过影响α-Syn蛋白的聚集发挥其对损伤神经细胞的保护作用(Fig 3)。2. 3. 2　免疫荧光实验　采用α-Syn抗体进行间接免疫荧光检测, 观察到细胞损伤组较正常对照组荧光强度增强, 而类叶升麻苷组(20 mg L- 1 )与细胞损伤组比较, 荧光强度减弱, 类叶升麻苷(20 mgL-1 )能够抑制鱼藤酮引起的α-Syn 阳性细胞数增多。该结果表明类叶升麻苷(20 mg L- 1 )的神经保护作用与抑制α-Syn蛋白表达相关(F ig 4)。3　讨论盐生肉苁蓉[ 6] 为列当科肉苁蓉属多年生寄生草本植物, 分布于我国西北各省区。类叶升麻苷属于苯乙醇苷类[ 7] , 是盐生肉苁蓉的有效成分之一。Sheng等[ 8]研究发现类叶升麻苷具有抑制1-甲基-4-苯基吡啶离子( 1-me thy l-4-pheny lpyri-dinium,MPP+ )致大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株PC12细胞凋亡、线粒体损伤和氧化应激的作用。杨芳艳等[ 6]发现类叶升麻苷对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有明显的保护作用, 并可明显抑制鱼藤酮所诱导的自由基生成。而关于类叶升麻苷抗神经细胞损伤机制与Parkin及α-Syn蛋白表达的关系尚未见报道。LDH水平的升高是细胞受损的一个敏感指标,细胞释放LDH增加, 通常反映细胞损伤、细胞膜通透性增加。本研究发现, 鱼藤酮(0.5 μmo l L-1 )诱导细胞损伤24 h和48 h后, SH-SY5Y 细胞培养液中LDH活性较正常对照组明显升高, 类叶升麻苷低、中、高浓度组均可抑制鱼藤酮所致SH-SY5Y细胞LDH 的释放, 提示类叶升麻苷对鱼藤酮致SHSY5Y细胞损伤具有神经保护作用, 且随浓度增加保护作用增强。鱼藤酮诱导细胞损伤48 h后, 可观察到类叶升麻苷的神经保护作用更加明显。Parkin是隐性遗传性少年型帕金森病的致病基因[ 9] , Parkin是Park in致病基因表达的蛋白, Park in蛋白分子量为52 ku。Parkin的功能发挥有赖于结构的完整, 结构完整的Parkin蛋白能有效清除具有细胞毒性的底物, 从而保护细胞, 避免损伤的发生和发展, Park in 蛋白可抑制未折叠蛋白(如:αSp22、Pael-R)应激引起的细胞死亡[ 10] , Parkin的表达可以抵制蛋白酶抑制剂引起的损伤[ 11] 。本研究首次探讨了类叶升麻苷的作用同Park in 蛋白表达变化的关系, 研究发现类叶升麻苷可通过有效减少Park in蛋白的降解, 对神经细胞呈现保护作用。α-Syn是隐性遗传性帕金森病的致病基因, α-Syn是该基因表达的蛋白, 分子量为18 ku, 大多分布在神经元突触前膜和核膜上。PD 发病中, α-Syn异常积聚可破坏多巴胺存储与释放, 直接抑制线粒体功能, 增加氧化应激水平, 并可参与路易体的形成过程, 因此认为它在散发性帕金森病的致病过程中也可能起重要作用。本研究首次探讨了类叶升麻苷的作用同α-Syn蛋白表达变化的关系, 研究发现类叶升麻苷可通过抑制鱼藤酮引起的α-Syn蛋白的聚集和抑制α-Syn阳性细胞数增加而发挥其神经保护作用。α-Syn与Parkin介导泛素-蛋白酶体的降解通路[ 12, 13] , 类叶升麻苷对神经细胞的保护作用可能同该通路相关。本研究采用Park in 及α-Syn 蛋白作为研究靶点, 从分子水平对类叶升麻苷抗PD 作用进行了研究, 从而为进一步研究抗PD 药物提供了研究思路,有利于阐明抗PD药物的作用机制。参考文献:[ 1] 　B urch D, Sheerin F. 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