摘要: 目的研究济川煎及以不同功效拆方对小鼠肠蠕动的影响。方法按济川煎组方中中药功效拆方为温肾润肠组( 肉苁蓉、牛膝、当归) 、降浊组( 泽泻、枳壳) 及升清组( 升麻) ，考察不同组方对便秘模型小鼠小肠碳末推进、排便实验、大小肠含水量的影响。结果济川煎全方及降浊组与模型组相比，能显著增加模型小鼠炭末推进率( P ＜ 0. 01) ; 济川煎全方及温肾润肠组与模型组相比，能显著增加模型小鼠小肠含水量( P＜ 0. 01) 及大肠含水量( P ＜ 0. 05) ; 济川煎全方明显增加模型小鼠4h 排便粒数及4h 排便重量，与模型组相比( P ＜ 0. 05) 。结论温肾润肠药物能显著增加肠道含水量，降浊药物能显著促进小肠的推进功能，全方能显著促进排便。关键词: 拆方配伍; 济川煎; 便秘; 小鼠; 实验研究济川煎出自明·张景岳《景岳全书》，由肉苁蓉、当归、牛膝、泽泻、枳壳、升麻6 味药组成，功效温肾益精、润肠通便，为治肾虚便秘的常用方。现代研究报道，济川煎临床常用于治疗习惯性便秘、老年便秘、产后便秘等属于肾虚精亏肠燥者〔1，2〕，其机制可能为降低肠道生长抑素水平，促进肠道胃动素、P 物质的释放有关〔3〕，且肉苁蓉〔4〕、当归〔5〕和枳壳〔6〕等药物均对胃肠道有一定的调节作用。本研究拟对济川煎进行拆方研究，考察全方及各拆方( 温肾润肠方、降浊方、升清方) 对模型小鼠肠蠕动的影响，探讨该方治疗便秘作用的主次及配伍的规律。1 实验材料1. 1 仪器电子分析天平( FA20004 N 型，上海精密科学仪器有限公司) ; 中草药粉碎机( FY135 型，天津市泰斯特仪器有限公司) ; Ｒesearch Plus 可调量程移液器( eppendorf，德国) ;旋转蒸发仪( ＲE-52 型，上海亚荣生化仪器厂) ; 超声波清洗器( KQ-500E 型，昆山市超声仪器有限公司) ; 数显水浴锅( HH-S型，上海锦屏仪表有限公司) 。1. 2 药品与试剂肉苁蓉( Cistanches Herba) 、牛膝( Achyranthisbidentatae Ｒadix) 、当归( Angelica sinensis Ｒadix) 、泽泻( Alismatis Ｒhizoma) 、枳壳( Auranth Fructus) 、升麻( CimicifugaeＲhizoma) 等药材均购于福建中医药大学国医堂，并经福建中医药大学王河山老师鉴定。药用炭末( 上海久亿化学试剂有限公司，批号: 20080820) ; 阿拉伯树胶( 天津市恒兴化学试剂制造有限公司，批号: 20080710) 。1. 3 动物KM 种健康小鼠，6～ 8 周龄，雌雄各半，体重20 ±2g，由福建医科大学实验动物中心提供，许可证号: SCXK( 闽)2013-0001。2 实验方法2. 1 药物配制2. 1. 1 济川煎剂量及拆方: ①济川煎全方剂量参考《方剂学》十二五规划教材中的剂量，即肉苁蓉9g、牛膝6g、当归15g、泽泻4. 5g、枳壳3g、升麻3g; ②济川煎可拆成温肾润肠方( 肉苁蓉9g、牛膝6g、当归15g) 、降浊方( 泽泻4. 5g、枳壳3g) 、升清方( 升麻3g) 。2. 1. 2 不同组方液的制备: 不同组方( 全方、温肾润肠方、降浊方及升清方) 按2. 1. 1 项下剂量称取适量，加6 倍量水浸泡0. 5h 后，煎煮2 次，每次0. 5h，分别过滤，合并上清液，减压浓缩至1g·mL － 1 ，即得4 个不同组方的药液，置冰箱4℃保存备用。2. 1. 3 活性炭汁的配制: 精密称取药用炭末约10. 0g，加冰水100mL，即得10%的活性炭冰水，将其置于－ 20℃ 冰箱中保存，用前摇匀。精密称取阿拉伯树胶2. 5g，先加一定量不同组方药液煮至溶液透明，再精密称取药用炭末0. 25g，加入上述溶液，并煮沸数次，冷却后加药液定容至25mL，即得含1%的活性碳粉和含10% 的阿拉伯树胶的混悬药液，将其置于－ 4℃冰箱中保存，用前摇匀。2. 2 模型复制参照文献〔7〕方法复制小鼠阳虚型便秘模型:造模期间小鼠自由饮水、进食，第一天按0. 3mL/只灌胃白醋，第二天起按0. 01mL·g － 1 灌胃白醋，连续9d; 于第七天起同时灌胃10%的0℃活性炭冰水0. 04mL·g － 1 ，灌胃时间间隔4h。2. 3 分组与给药实验设3 批，共210 只小鼠。将每批70只模型小鼠均随机分为7 组( 空白对照组、生理盐水组、阳性对照组、温肾润肠组、降浊组、升清组、济川煎全方组) ，每组10 只，禁食24h 后，各组方组均灌胃给予含10% 的阿拉伯树胶和含1% 的活性碳粉的混悬组方药液，给药体积均为0. 01mL·g － 1 体重，阳性对照组给予同体积的含10% 的阿拉伯树胶和含1%的活性碳粉的麻仁丸混悬液，生理盐水组给予同体积的含10%的阿拉伯树胶和含1%的活性碳粉的混悬液，空白对照组给予同体积的生理盐水。2. 4 检测指标2. 4. 1 一般情况观察: 造模及给药期间观察并记录小鼠的活动情况、饮食情况、毛发光泽度和精神状况等。2. 4. 2 对模型小鼠小肠碳末推进的影响: 给药40min 后颈椎脱臼处死动物，剖开腹腔，暴露肠管，分离肠系膜，剪取幽门至回盲部的肠管，轻轻将其拉成直线，从幽门至回盲部的长度即为小肠总长度( cm) ，从幽门至活性炭末前进的长度即为活性炭末在小肠中推进长度( cm) ，按下式计算小鼠小肠碳末推进率( 见表1) 。2. 4. 2 对模型小鼠排便实验的影响: 给药1h 后，将各组小鼠分别置于垫有滤纸的烧杯内，并开始计时，观察记录小鼠4h内排便的总粒数，称重( 见表2) 。2. 4. 3 对模型小鼠大小肠含水量的影响: 给药2h 后颈椎脱臼处死动物，剖开腹腔，暴露肠管，分离肠系膜，剪取幽门至回盲部的肠管，系小肠段; 剪取回盲至直肠末端，系大肠段，分别称其湿重后，置于烘箱内90℃烘2h，称其干重，按下式计算小肠、大肠的含水量( 见表3) 。2. 5 统计学分析实验数据采用SPSS 20. 0 统计分析软件，结果以均数±标准差( x ± s) 表示，组间比较采用t 检验，P ＜ 0. 05 表示有显著差异。3 实验结果3. 1 一般情况观察模型小鼠体重上升不明显，全身机能低下，活动减少，毛发发黄，无光泽且伴竖毛，大便次数变少，且粪便坚硬、粪粒细小，表明造模成功。给药组小鼠上述情况稍有好转。3. 2 不同组方对模型小鼠炭末推进率的影响不同组方对模型小鼠炭末推进率影响的实验结果( 见表1) ，由表1 可知，生理盐水组与空白对照组比较，模型小鼠炭末推进率差异显著( P ＜ 0. 05) ，证明模型复制成功; 阳性对照组与生理盐水组比较，炭末推进率显著升高( P ＜ 0. 05) ，表明阳性药可作为对照参考。济川煎全方组及降浊组与生理盐水组比较，炭末推进率极显著升高( P ＜ 0. 01) ，与空白对照组比较，炭末推进率亦显著升高( P ＜ 0. 05) ，而温肾润肠组、升清组与空白对照组比较，炭末推进率略升高，但无统计意义( P ＞ 0. 05) 。结果说明济川煎全方及降浊药物能明显促进模型小鼠的肠推进作用。3. 3 不同组方对模型小鼠排便情况的影响不同组方对模型小鼠排便情况影响的实验结果( 见表2) ，由表2 可知，济川煎全方组及阳性对照组与生理盐水组比较，4h 内排便总粒数、4h 内排便均量均显著升高( P ＜ 0. 05) ，济川煎全方组与空白对照组比较，4h 内排便总粒数、4h 内排便均量亦显著升高( P ＜ 0. 05) ，说明济川煎全方能促进模型小鼠的排便。3. 4 不同组方对模型小鼠肠道含水量的影响不同组方对模型小鼠肠道含水量影响的实验结果( 见表3) ，由表3 可知，生理盐水组与空白对照组比较，模型小鼠肠道含水量差异显著( P ＜ 0. 05) ，证明模型复制成功; 阳性对照组与生理盐水组比较，肠道含水量显著升高( P ＜ 0. 05) ，表明阳性药可作为对照参考。济川煎全方组及温肾润肠组与生理盐水组比较，小肠含水量极显著升高( P ＜ 0. 01) ，与空白对照组比较，小肠含水量亦显著升高( P ＜ 0. 05) ，而降浊组、升清组与空白对照组比较，小肠含水量略升高，但无统计意义( P ＞ 0. 05) ; 济川煎全方组与生理盐水组比较，大肠含水量显著升高( P ＜ 0. 05) ，与空白对照组比较，大肠含水量亦显著升高( P ＜ 0. 05) ，而温肾润肠组与空白对照组比较，大肠含水量略升高( P ＞ 0. 05) 。以上结果均说明济川煎全方及温肾润肠药物能明显增加模型小鼠肠道含水量。4 讨论济川煎是温肾益精、润肠通便的代表方，由肉苁蓉、当归、牛膝、泽泻、枳壳、升麻6 味药组成。方中肉苁蓉补肾阳、益精血、润肠通便，当归补血润燥、润肠通便，牛膝补肝肾、强筋骨、且性善下行，三药共奏温肾润肠之功; 枳壳下气宽中、行滞消胀以助通便，泽泻利水渗湿而泄肾浊，妙伍升麻以升清阳，清阳升、浊阴降，相反相成，以助通便之效。诸药合用，既能温肾益精治其本，又可润肠通便治其标。鉴于本方的配伍特点“补中有泻，降中有升”，本研究将该方拆分为温肾润肠药( 肉苁蓉、当归、牛膝) 、降浊药( 泽泻、枳壳) 和升清药( 升麻) ，旨在探讨全方中不同药物对模型小鼠小肠推进率、肠道含水量、排便情况的作用主次及配伍规律，为临床应用及进一步开发研究提供实验依据。本研究实验结果表明，济川煎全方组及降浊组与空白对照组比较，炭末推进率显著升高( P ＜ 0. 05) ，而温肾润肠组、升清组炭末推进率虽略升高，但无统计意义( P ＞ 0. 05) ，提示降浊药物( 泽泻、枳壳) 在方中的机制可能与促进模型小鼠的肠推进作用相关; 济川煎全方组及温肾润肠组与空白对照组比较，肠道含水量显著升高( P ＜ 0. 05) ，而降浊组、升清组肠道含水量略升高，但无统计意义( P ＞ 0. 05) ，提示温肾润肠药物( 肉苁蓉、当归、牛膝) 在方中的机制可能与增加模型小鼠肠道含水量相关。由此可见，温肾润肠药物与升清降浊药在方中的机制不尽相同，诸药合用，共奏通便之效，也正如排便情况实验结果所示，济川煎全方能显著提高模型小鼠4h 内排便总粒数及排便重量( P ＜ 0. 05) 。中医认为六腑“以通为用”、“以降为顺”，如《素问·五脏别论》曰: “六腑者，传化物而不藏，故实而不能满也。所以然者，水谷入口，则胃实而肠虚，食下，则肠实而胃虚”。若功能失调，升降失职，浊气不降，肠道失润，传导不利，则可见大便不通。本研究从某种意义上佐证了升清阳、降浊阴，以助通便之效，但其深入作用机制有待进一步研究。参考文献〔1〕周文，王冬梅，刘增光，等. 济川煎临床应用近况〔J〕. 湖南中医杂志，2013，29( 13) : 161-163.〔2〕高宏振. 济川煎加味治疗老年习惯性便秘86 例〔J〕. 中国现代药物应用，2010，4( 15) : 133-134.〔3〕车彦忠，陈洪宝，安立凤，等. 济川煎对老龄大鼠胃肠蠕动的影响及相关机制研究〔J〕. 中国实验方剂学杂志，2007，13( 11) : 44-46.〔4〕徐文豪，邱声祥，沈连忠. 肉苁蓉和盐生肉苁蓉化学成分和药理作用的比较〔J〕. 中草药，1995，26( 3) : 143-146.〔5〕程小平，吴国泰，刘峰林，等. 当归挥发油对实验性胃肠动力障碍的作用及机制研究〔J〕. 中药药理与临床，2011，27( 4) : 54-56.〔6〕滕建业. 枳壳促进胃动力化学物质组的筛选及作用机理研究〔D〕. 辽宁: 辽宁中医药大学，2011.〔7〕彭成，王岚，赵小梅. SD 大鼠阳虚便秘模型的建立及评价〔J〕. 中国药理学通报，2007，23( 3) : 407-409.

[ 摘要] 　目的:综述中药代用品的研究进展。方法:通过查阅国内外相关文献资料, 对中药代用品的研究进行一综述。结果:由于中药自然资源的萎缩, 中药代用品的研究取得了一定的成果。结论:虽然在中药代用品的研究方面取得了一定的进展,但目前研究清楚的代用品尚占中药品种的较小比例。[ 关键词] 　中药;代用品;麝香　近年来, 人们对植物药的需求量剧增, 10 年间翻3 倍, 使大量的药用资源快速萎缩。甘草、羌活、单叶蔓荆、黄皮树、银柴胡、肉苁蓉、三叶半夏、新疆阿魏、紫草等100 多种药材的资源量普遍下降, 影响60 多个药材品种的医疗用药。长叶榧、八角莲、厚朴、杜仲、野山参、黑节草30 多种药材因野生资源稀少, 无法提供商品或只能提供少量商品, 处于濒临灭绝的边缘。基于此, 不少科研工作者进行了大量的中药代用品研究, 本资料将近年来几种中药代用品的研究工作进行综述。1　羚羊角羚羊角( Co rnu Saig ae Tataricae) , 别名高鼻羚羊, 为洞角科动物赛加羚羊等的角, 属国家稀有保护动物, 可用藏羚羊角、羊蹄角、水牛及牦牛角等代用。藏羚羊角为牛科动物西藏羚羊的角。对藏羚羊角与羚羊角石油醚、氯仿、水提取物的化学成分及氨基酸、金属元素进行分析比较, 实验结果表明, 两者所含成分基本相同[ 1] 。陈长勋等对藏羚羊角和羚羊角的药理作用进行了研究, 发现藏羚羊角提取液具有一定中枢抑制作用和抗惊厥作用, 能明显抑制小鼠自发活动;扭体法及热板法实验表明羚羊角有一定镇痛作用;此外, 还有退热及降压作用。但藏羚羊也属国家稀有保护动物, 故只有紧急情况下才用来代用[ 2] 。羊蹄角系牛科动物山羊或绵羊蹄的角质部分。羊蹄角与羚羊角同属皮层的衍生组织, 均由角质细胞组成, 结构和成分相似, 常用来代替羚羊角。羊蹄角除总含氮量较羚羊角少外, 胆固醇含量、炽灼残渣及水溶性氨基酸含量均比羚羊角高, 其中水溶性游离氨基酸17 种, 总量为12 .5 mg·kg -1 ,较羚羊角高之许多[ 3] 。采用小鼠醋酸扭体法、热板法比较两者的镇痛作用, 虽然羚羊角组的痛域高于羊蹄角组, 但差异无显著性。他们还发现羊蹄角对大鼠琼脂、白陶土混合致炎剂和组织胺、蛋清、甲醛所致足跖炎性肿胀有抑制作用, 并能减少大白鼠纸片法肉芽组织增生[4] 。也有学者提出牦牛角也可代替犀牛角使用的, 王斐等系统分析了犀角、羚羊角、藏羚羊角、水牛角、黑牦牛角、花牦牛角、白牦牛角这8 种动物( 类型) 角中的元素与氨基酸, 获得了35 种元素及18 种氨基酸的含量信息, 通过聚类分析发现, 牦牛角与犀牛角的成分相似, 可代替犀牛角[ 5] 。2　熊胆熊胆为熊科动物黑熊或棕熊的干燥胆囊, 为我国稀有中药材之一, 主要有效成分为胆汁酸, 如UDCA( 熊去氧胆酸)与CDCA( 鹅去氧胆酸) 等, 含量分别为42% ～ 51 %和7%～13% 。引流熊胆系对熊科动物施行活体胆汁引流术而得的胆汁干燥品, 又称熊胆粉, 临床作为熊胆药物使用, 属国家一类新药。经化学分析, 其主要成分与天然熊胆颇为相似, 对引流时间长达半年至两年的多批引流熊胆样品进行薄层层析,发现引流时间长短不影响UDCA 的斑点大小、颜色强弱。红外光谱分析结果表明, 引流熊胆与天然熊胆红外图谱一致, 在2 931, 1 849, 1 213, 1 049 cm -1 等处都有较强的吸收峰, 说明引流熊胆与天然熊胆主要化学成分基本一致[ 6] 。比较天然熊胆与引流熊胆微量元素含量, 两者Cu 、Zn、Fe 、Mn 、Ca 等微量元素含量比较接近, 尤其是决定其寒凉性药性的Fe 含量都较高[ 7] 。中国生物制品检定所分别以薄层层析法与高效液相色谱法测定了引流熊胆与UDCA、CDCA 、胆酸的含量, 发现引流熊胆中UDCA 和CDCA 含量之和与天然熊胆基本一致, 但引流熊胆UDCA 的含量比正品低, 而CDCA高于正品。作者认为, UDCA 是次生胆汁酸, CDCA 在肠道菌簇作用下转变成UDCA 后被重吸收进入肝脏的。由于对胆汁的引流, UDCA 的产生和再吸收减少, 因此, UDCA 含量下降[ 8-9] 。天然熊胆与引流熊胆的药理作用也非常相近, 引流熊胆与天然熊胆均能明显地延长硝酸士的宁致惊厥小鼠的潜伏期, 亦能显著地抑制二甲苯引起的小鼠耳部肿胀, 呈现抗炎及解痉作用, 其作用强度也比较接近。而且, 两种熊胆均能显著地增加大白鼠胆汁流出量, 呈现利胆作用[ 10-11] 。但引流熊胆对动物有一定的损伤, 往往会被指不人道, 故除了引流熊胆外, 根据熊胆的化学成分, 已合成了人工熊胆粉。人工熊胆粉与天然熊胆粉一样具有镇静利胆的药理作用[ 12] 。除了熊胆外, 学者们还发现其他动物的胆囊也有类似的药理作用, 猪胆也有与天然熊胆相似的抗炎、抗惊厥、镇痛作用, 还能延长小鼠在缺氧条件下的存活时间。3　麝香麝香( mo schus) 是成熟♂体鹿科动物林麝或马麝脐下香囊分泌物之干燥品, 它不仅是名贵中药, 而且是香料工业中的主要定香剂。60 年代初据估计全国有麝约250 万只, 但现仅存约60 万只。尽管早已有人工饲养活体取香, 但年产量只有500 kg , 远不能满足需求。因此, 很多学者开始了麝香代用品的研究。由中国医学科学院药物研究所依据“ 化学成分和药理活性最大限度的保持与天然品的一致性” 及“ 化学成分类同性、生物活性一致性、理化性质近似性” 的设计配制原则, 研制了人工麝香。其化学成分、药理作用及临床疗效均相似, 1993年底被卫生部批准为中药一类新药。香港大学以高效液相色谱与气-质联用研究了人工麝香代替天然麝香的片仔黄化学成分组成, 结果两者有较好的一致性, 且均对四氯化碳及半乳糖诱发的肝损伤有保护作用, 能降低转氨酶, 减轻细胞坏死, 气球样变, 淋巴浸润, 脂肪样变等病理变化[13] 。另一麝香的代用品为麝鼠香, 其为啮齿目田鼠科动物公麝鼠在发情期香腺囊分泌的乳白色分泌物, 具有相似麝香的香气。通过质谱分析分离、鉴定其主要化学成分, 证实在麝鼠香囊中含有麝香酮、十七环烷酮、多种大环酮类、有机酸酯类等成分, 与麝香类似[ 14] 。利用扭体法, 对比观察麝鼠香与麝香的镇痛作用, 发现麝鼠香与麝香均能明显减少冰醋酸所致的小鼠扭体次数, 麝香300 mg·kg -1 与麝鼠香1 200 mg·kg -1 剂量组镇痛作用比较接近;应用二甲苯致炎模型及醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增加模型对比观察麝鼠香与麝香的抗炎作用, 结果发现, 麝鼠香与麝香均能显著抑制二甲苯引起的小鼠耳肿胀, 同剂量给药, 麝香组的作用明显强于麝鼠香组;麝鼠香与麝香能抑制醋酸所致的小鼠腹腔毛细血管通透性增加性的炎症反应, 相同剂量给药, 二者的作用差异无显著性[ 15-16] 。也有学者提出, 灵猫香含有高含量的大环酮类物质, 可用灵猫香代替麝香应用于临床, 但目前仍有争论[ 17] 。4　紫菀紫菀( Radi x Asteris) 为菊科紫菀属, 生长于山坡或河边草地, 常用山紫菀( Li gularia f ischeri Tucy ) 代用。山紫菀为菊科橐吾属植物, 生长于山坡、灌木丛间、林下草地, 山沟旁。以原子吸收法测定紫菀与山紫菀中微量元素的含量, 发现两者中铜、锌、铁、镁、钙、钼、锰、硒等种类相同, 含量较接近[ 18] 。中国药科大学报道, 紫菀与山紫菀均能增加小鼠酚红排泌量, 延长咳嗽潜伏期, 减少咳嗽次数, 镇咳袪痰作用明显, 两者的药理作用差异无显著性[ 19] 。5　僵蚕僵蚕( Bomby x Batry ticatus) 又名天虫、僵虫。为蚕蛾科昆虫家蚕蛾的幼虫感染白僵菌而致死的干燥全虫, 主要成分草酸铵。来源紧缺, 常以僵蛹( Pupa Bomby cis Batryticat us)代替。僵蛹是以蚕蛾科动物家蚕的蛹为底物, 接种白僵菌,在一定条件下发酵后, 再灭菌、烘干而成。接种死蛹生成的僵蛹草酸铵含量最低;而经皮接种活蛹生成的僵蛹与经皮接种幼虫生成的僵蚕草酸铵含量与僵蚕相似;穿刺活蛹生成的僵蛹草酸铵含量最高[ 20] 。其药理作用和僵蚕类似, 能抗惊厥、祛痰、降胆固醇、抗癌、抗凝。临床用僵蛹配伍全蝎、蜈蚣、天麻等治疗乙型脑炎有高热抽搐患者的疗效与僵蚕基本相同[ 21] 。6　石斛石斛( Herba Dendrobii ) 为兰科石斛属多种植物的茎, 具有滋阴清热, 生津益胃, 润肺止咳之功效。但是石斛资源紧缺, 因此不少研究者对其代用品云南石仙桃( Pholidota y unnanensisRol f e ) 进行了研究[ 22] 。李满飞等与日本名屋大学合作, 以比色法测定了25 种石斛36 个样品多糖的含量, 发现云南石仙桃中的多糖含量达19 %, 与部分石斛相似甚至更高[ 23] ;云南石仙桃中的总生物碱含量也与石斛相似, 且均具有益胃, 止咳, 抑制NA-K-ATP 酶的药理作用[ 24] 。7　肉苁蓉肉苁蓉( Herba Cistanche) 为国家二级保护植物, 是常用的补肾壮阳中药。由于药源紧缺, 本属其他品种如德赢vwin登录 主产于我国新疆, 资源比较丰富, 为目前中药肉苁蓉的主要代用品。肉苁蓉和德赢vwin登录 中均含有苯丙苷类、木脂素苷类、甜菜碱及多糖类等化合物。其中甜菜碱及多糖类等成分已被证明为肉苁蓉壮阳的活性成分。吴波等报道, 肉苁蓉与德赢vwin登录 的水提取物均能润燥通便, 随着剂量的增加对排便时间有一定的影响;有一定温补肾阳的作用, 二者水煎液都可明显增加“ 肾阳虚” 模型小鼠的体质量, 也能明显延长小鼠的耐寒时间;两者的醇溶物能增加阉割小鼠前列腺, 精囊腺的重量, 增加腹腔巨噬细胞的呑噬功能[ 25-26] 。采用液相色谱/ 电喷雾-串联质谱联用方法对肉苁蓉及其代用品德赢vwin登录 中的苯乙醇苷类化合物进行定性分析及相对含量测定, 发现肉苁蓉含有海胆苷、麦角甾苷、2′, 2-乙酰麦角甾苷、肉苁蓉苷A 、顺式麦角甾苷、异麦角甾苷和o sma nthuside B 7种苯乙醇苷类化合物;德赢vwin登录 中则不含肉苁蓉苷A 和osmanthuside B, 德赢vwin登录 中海胆苷、顺式麦角甾苷含量较高, 而异麦角甾苷及2′, 2-乙酰麦角甾苷含量较低。正品肉苁蓉中异麦角甾苷及乙酰麦角甾苷含量较高, 而海胆苷含量较低[ 27] 。参考文献:[ 1] 　徐莲英.藏羚羊角化学成分比较[ J] .中成药, 1988, 12 :32-33 .[ 2] 　陈长勋.藏羚羊角的部分药理作用研究[ J] .中成药, 1990, 11( 9) :27-28 .[ 3] 　徐必达, 张华林, 苏燕娴.羚羊角及其代用品的研究[ J] .中华现代临床医学杂志, 2003, 1( 12) :1091-1093 .[ 4] 　李治淮, 杜冠华, 张连, 等.羊蹄角镇痛抗炎作用研究[ J] .山东中医学院学报, 2006, 4 :65-68 .[ 5] 　王斐, 段金廒, 钱大玮, 等.犀角及羚羊角替代资源的寻找与评价研究( I) [ J] .南京中医药大学学, 2005, 21( 3) :163-165 .[ 6] 　徐延洋, 高东藩, 周晓英.引流熊胆的质量研究-定性分析[ J] .中国中药杂志, 1989, 14( 10) :34-35 .[ 7] 　李峰, 张振秋, 康廷国.等.熊胆与其它动物胆汁的无机元素的比较[ J] .微量元素与健康研究, 1998, 15( 4) :77-79 .[ 8] 　张启明, 蒋及年, 严克东, 等.薄层扫描法测定引流熊胆中熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量[ J] .药物分析杂志, 1990, 10( 2) :102-105 .[ 9] 　王方生, 徐礼燊, 赵英举, 等.薄层扫描法测定熊胆引流物中胆汁酸的含量[ J] .药学学报, 1989 ;24( 5) :397-400 .[ 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摘要目的探究中医药治疗勃起功能障碍方剂的用药规律，分析其治疗过程的分子作用机制和药效物质基础。方法应用中医药整合药理学研究平台v2.0，挖掘《中药成方制剂》中治疗男科勃起功能障碍疾病的方剂，获取疾病治疗的核心药物，分析其化学成方、靶标，进行Gene ontology（GO）富集分析和生物通路分析。结果中药治疗勃起功能障碍方剂中核心药物有13 种；药物靶标分子作用主要有氧化还原酶的激活、药物绑定、催化活性等；中药- 疾病核心蛋白相互作用网络在体内主要参与复合生物合成、PKA 激活、腺苷酸环化酶激活途径等生物过程。结论揭示了中药方剂治疗勃起功能障碍核心药物的活性成分、靶点及网络，阐明了中药药物在治疗勃起功能障碍疾病的分子作用机制。关键词勃起功能障碍； 中药方剂学； 药理学； 药理作用分子作用机制勃起功能障碍（erectile dysfunction，ED），中医称之为阳痿，是临床男科常见的性功能障碍疾病之一[1]。中医学认为阴茎不能勃起,或勃而不坚，或坚而不久,皆属于该病的临床表现[2]。中医药对其防治具有悠久的历史，有着较为完整的理论架构和特有的治疗手段[3]。《中华人民共和国卫生部药品标准———中药成方制剂》(简称《中药成方制剂》)[4]中收录不少于百种的中药方剂，但目前的科学研究中， 对于中药治疗勃起功能障碍的组方用药规律，组方核心药物的挖掘，药物的成分、靶标，分子内在的作用机制等相关研究较少， 未能较好的在微观层面阐明中医药治疗疾病的机理机制。整合药理学是中药现代研究新模式,药理学研究的新领域。由中国中医科学院中药研究所开发的“中医药整合药理学研究平台v2.0（Integrative Pharmacology-based Research Platform of Traditional ChineseMedicine v2.0,TCMIP V2.0）”，包含了中药材、中药方剂、中药成分、中药靶标、疾病相关分子等五大数据库资源[5]，可用于揭示中医药理论的科学内涵、挖掘组方用药经验、阐释中药作用原理、分析中药药理效应等研究，为中医药的现代化研究提供强有力的数据支撑和分析平台。本研究基于TCMIPv2.0 平台，分析中医药治疗勃起功能障碍方剂的核心用药，阐释药物的药效物质基础（主要成分、靶点）及作用机制，为临床及科研的深入开展提供一定的理论依据。资料与方法一、方剂收集录入中医药整合药理学研究平台（http：//www.tcmip.cn/）中药方剂数据库中收录了《中药成方制剂》记载的方剂数据，包括方剂名称、药物组成、功效疾病、主治证候等信息。利用该平台，按指定疾病“阳痿”提取数据库中的方剂信息。二、核心药物数据挖掘中药治疗勃起功能障碍的核心药物由“高频次单味药材（药物在所有方剂中出现次数大于20%）”与“高频次药组（药组在所有方剂中出现次数大于20%）”的交集组成。通过中医药整合药理学研究平台“组方用药规律分析”模块，对获取到的方剂进行数据分析，包括处方中所含药物频次统计、组方规律。高频次单味药材的获取，应用“组方中药的频次统计”选项，可一键化获得各味中药的用药频次，选取用药次数大于总方剂数×20%的药物；高频次药组的获取，应用“组方中药的关联性分析”选项，该功能基于关联规则算法，分别设置“2味、3 味、4 味”药组，计算相应药组频次，选择频率大于20%的药组作为数据结果。三、中药化学成分来源在中医药整合药理学研究平台- 中药材数据库，对核心药组药物进行检索，收集所有化学成分，建立中药治疗“勃起功能障碍”核心药组化学成分数据库。四、中药靶标预测及GO 富集分析利用中医药整合药理学研究平台中的“中药（含方剂）靶标预测及功能分析”模块，依次输入核心药组药物名称， 即可对核心药组的药物进行靶标预测及GO富集分析。该模块针对中药化学成分和FDA 上市药物进行相似性打分，获取高可信度（Similar Score>0.8）的中药候选靶标谱，可进一步阐释中药作用机理。五、疾病相关基因集获取TCMIP V2.0 平台整合了疾病“基因相关性数据库” （DisGeNET）、“ 人类表型本体数据库” （HPO）、“Drugbank 数据库”、“治疗靶标数据库”（TTD）等资源，构建起疾病和常见临床表型相关基因数据库。在TCMIP V2.0 平台疾病相关分子集及其功能挖掘模块，以“erectile dysfunction”作为关键词，通过检索可获取勃起功能障碍疾病的相关基因。六、中药- 疾病核心靶标蛋白质相互作用网络及生物通路分析通过整合药理学平台的“中医药关联网络挖掘”模块， 该模块镶嵌了HAPPI、Reactome、OPHID、InAct、HPRD、MINT、DIP、PDZBase 等包含蛋白质- 蛋白质相互作用数据的数据库， 可构建中药与勃起功能障碍核心靶标的蛋白互作网络(protein protein interaction network,PPI network)。应用Cytoscape 3.4 软件绘制网络图。同时， 该模块整合了Reactome （https://reactome.org/）[6]生物通路数据库，可对获得网络中包含的所有基因参与的生物通路进行分析。结果一、中药治疗勃起功能障碍核心药物结果应用平台中的中药方剂数据库，共计获得治疗勃起功能障碍方剂127 首，包含280 味中药材。对各味中药在方剂中出现的频率进行统计，提取频率大于20%的药材从高到低进行列出。分别为枸杞子（72 首，57.6%）、菟丝子（62 首，49.6%）、熟地黄（61 首，48.8%）、淫羊藿（60首，48%）、肉苁蓉（47 首，37.6%）、当归（43 首，34.4%）、人参（42 首，33.6%）、山药（38 首，30.4%）、补骨脂（37首，29.6%）、茯苓（36 首，28.8%）、五味子（36 首，28.8%）、杜仲（35 首，28%）、巴戟天（34 首，27.2%）、黄芪（28 首，22.4%）、牛膝（26 首，20.8%）。药物组合频率大于20%的药组，分析结果如表1 所示。综合高频次单味药与高频次药组结果，确定中药治疗勃起功能障碍的核心药物为枸杞子、熟地黄、肉苁蓉、菟丝子、山药、淫羊藿、杜仲、茯苓、当归、巴戟天、人参、补骨脂、五味子。二、核心药物化学成分基于TCMIP V2.0中的中药材数据库， 依次分析核心药物的化学成分。枸杞子收集到化学成分57 个，主要为多糖、氨基酸、生物碱、挥发油等；熟地黄收集到化学成分12 个、主要为糖类、谷甾醇、核苷等；肉苁蓉收集到50 个化合成分，主要为肉苁蓉苷、生物碱、氨基酸等；菟丝子收集到化学成分8 个，主要为糖苷、胡萝卜素、山奈酚等；山药收集到45 个化合成分，主要为甘露糖、多巴胺、氨基酸等；淫羊藿收集到化学成分27 个，主要为黄酮类化合物、淫羊藿苷、棕榈酸等；杜仲收集到化学成分52 个，主要为黄酮类、环烯醚萜、甾体和萜类等；茯苓收集到33 个化学成分，主要为多糖、脂肪酸、甾醇类等；当归收集到65 个化学成分，主要为挥发油、酚酸类、黄酮类等；巴戟天收集到19 个化学成分，主要为糖类、谷甾醇、胡萝卜苷等；人参收集到158 个化学成分，主要为皂苷类、多糖类、有机酸等；补骨脂收集到32 个化学成分，主要为香豆素类、黄酮类、单萜酚类等；五味子收集到99 个化学成分，主要为木脂素类、有机酸、挥发性油等。三、中药靶标预测及GO 富集分析结果中药化学成分复杂，且已知作用靶点有限，通过获得更多且可靠性高的靶标是研究中药作用原理的关键问题[7]。基于Tcmip V2.0 中的中药（含方剂）靶标预测及功能分析模块可以获得每味核心药物的靶标， 并且对预测出的靶标进行GO 功能富集分析。枸杞子获得靶标基因235 个、熟地黄获得靶标基因656 个、肉苁蓉获得靶标基因326 个、菟丝子获得靶标基因101 个、山药获得靶标基因898 个、淫羊藿获得靶标基因200 个、杜仲获得靶标基因338 个、茯苓获得靶标基因232 个、当归获得靶标基因334 个、巴戟天获得靶标基因235 个、人参获得靶标基因1283 个、补骨脂获得靶标基因255个、五味子获得靶标基因94 个。对各个药物的靶标基因取交集，13 位中药共同作用的靶标基因为AR （雄激素受体） 基因。对核心药物靶点基因进行GO 富集分析，结果如表2 所示。四、疾病相关基因集获取结果基于TCMIP V2.0平台疾病相关分子集及其功能挖掘模块，输入疾病关键词后，共获得勃起功能障碍疾病基因17 个，见表3。五、中药- 疾病蛋白质相互作用网络及生物通路分析结果应用TCMIP V2.0平台中的中医药关联网络挖掘模块，可构建中药靶标与疾病靶标蛋白质互作网络，并可对网络中的基因进行深入的生物通路分析。基于平台中的蛋白数据库， 核心药物与勃起功能障碍疾病构建的核心靶标网络中包含108 个基因， 其中中药基因101 个，疾病基因10 个，共同基因3 个。蛋白互作网络如图1 所示。对核心靶标蛋白互作网络进行生物通路分析，显著富集的前20 条通路结果如图2 所示。讨论由于中医药治疗勃起功能障碍的方剂较多， 配伍较为灵活，靶点众多，对其治疗疾病的作用机制一直是科学研究的重、难点[8]。本研究采用挖掘组方规律与整合药理学的方法，对《中药成方制剂》中治疗男科勃起功能障碍疾病的方剂进行收集， 挖掘方剂核心药物的作用机制和药效物质基础， 并进行了深入的药理学分析， 为中药方剂治疗疾病的机理机制研究提供了新思路。通过对《中药成方制剂》中勃起功能障碍方剂的组方规律分析， 从127 味中药中挖掘出13 味核心药物。其中居于前三位的单味药为枸杞子、菟丝子、熟地黄；前三位药对为枸杞子—菟丝子、枸杞子—熟地黄、熟地黄—菟丝子，与方剂“右归丸”中部分药物相吻合。“右归丸”是治疗阳痿遗精、肾阳不足的经典名方[9]。结合该三味药物的特性可知， 中医对于勃起功能障碍的治疗首选温补肾阳、益气养血之品[10]。对13 味药物进行四气五味归经分析，发现四气中温性药占主体，有9 味药属温性（肉苁蓉、淫羊藿、杜仲、当归、巴戟天、熟地黄、人参、补骨脂、五味子），其余4 味皆属平性（枸杞子、菟丝子、山药、茯苓）；五味中甘味占多数，只有淫羊藿属苦味、补骨脂属辛味，其余药材或属纯甘味，或属甘、苦，甘、咸，甘、辛味。归经分析发现，除当归属心经、肝经、脾经，其余12 味药物皆含肾经，并与肝经、脾经、肺经、心经、大肠经密切相关， 说明药物的作用以肾经为根本，协同体内其他脏器共同作用，产生滋肾壮阳、补血养阴、精气充髓、活血通络等功效，针对勃起功能障碍疾病表现出的肾虚肝郁、气滞血瘀、湿热下注、阴虚火旺等证，发挥特定的治疗作用。对于核心药物化学成分的分析， 再次证明了中药具有多成分，且不同中药具有相同成分的特性[11]。在用药过程中，药物的作用是复杂的多对多关系。以淫羊藿为例，该药物以黄酮类化合物为主要成分，能够影响下丘脑—垂体—性腺轴、肾上腺皮质轴等内分泌系统，其提取液能已被证明能够通过血睾屏障,在生殖系统中发挥作用[12]。在当归、补骨脂、杜仲等中药中也具有黄酮类成分。从而可知，核心药物中所含的某些化学成分与勃起功能障碍疾病密切相关， 为中医临床药物的选择提供了科学依据。进一步对药物化学成分的作用靶标进行分析，发现每位中药的靶标数各不相同，但由于不同中药之间具有相同的化学成分， 以致不同药物具有部分相同的靶标，说明在基因作用层面，药物仍存在协同作用的关系[13]，药物的协同作用有效增强了药效，对于疾病的治疗起着积极促进的作用。13 味核心药物唯一共同作用的靶标为AR（androgen receptor，雄激素受体）基因，该基因与体内雄激素的形成密切相关，是雄激素作用的中介物质，能够使细胞的功能发生改变，具有促进细胞分化和组织器官的发育等功能[14]。以此可推断，13 味核心药物对于勃起功能障碍疾病的治疗， 可能与调控体内某些关键基因（如AR 基因）密切相关。通过对核心药物全部靶点基因的GO 富集分析， 发现药物主要参与氧化还原过程、药物反应脂质代谢过程、类固醇代谢过程、类固醇激素介导的信号通路等一系列生物过程，在线粒体、神经元、髓鞘、突触后膜等细胞位置，起到氧化还原酶的激活、药物绑定、催化活性、核苷酸绑定、核受体的活动等分子作用。通过对中药与疾病核心靶点蛋白相互作网络的构建， 可清晰的看出药物作用靶标与疾病作用靶点之间的复杂网络关系。在已知的药物基因与勃起功能障碍基因之间，存在多对多的作用，既有共同相互作用的基因， 也有独立调控的基因。通过进一步的网络功能分析， 发现蛋白作用网络主要通过复合生物合成、proteinkinase A（PKA）激活、腺苷酸环化酶激活途径、TumorProtein p53 （TP53) 调节代谢、胰高血糖素信号转导中PKA 的激活、胰高血糖素信号在代谢调节中的作用、Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2（VEGFR2）介导的血管通透等生物过程， 在体内产生治疗勃起功能障碍疾病的作用。药物与疾病的作用在微观层面是复杂的，涉及多过程、多成分、多反应，对于药物治疗勃起功能障碍的核心作用过程， 仍需开展深入的实验验证。综上， 本研究利用整合药理学方法从药材—成分—靶标—通路—疾病等不同层面， 深入开展了中药方剂治疗勃起功能障碍方剂核心药物的作用机制研究， 较为清晰的阐明了中药药物在治疗勃起功能障碍疾病过程中发挥的中药作用。同时，本研究也为中药方剂治疗男科疾病的作用机制研究提供新思路与方法，进而推进中医药治疗男科疾病的现代化。参考文献1 徐福松, 章茂森, 赵伟. 中医药防治勃起功能障碍研究进展述评. 江苏中医药2019; 51(5): 1-52 孙自学, 李鹏超. 勃起功能障碍的中医诊疗思路探析. 辽宁中医杂志2019; 46(5): 970-9723 赵文, 王祖龙, 张琦, 等. 阳痿中医辨治溯源. 中医药临床杂志2018; 30(5): 875-8774 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摘要: 以“补肾助阳”中药功效术语为例，探索基于药性理论的中药功效术语个性化翻译。通过查阅词典、古代文献和相关教材，对“补肾助阳”相关功效术语的中文内涵进行挖掘，分析具有类似功效药物的药性特点。从国内外较为认可的英译标准、辞典辞书和中药学英文教材中遴选能够表达中药药性特点的英文翻译，以期在中英翻译转换中介入最具核心的药性特点，使之能够更加正确地指导临床用药。关键词: 补肾助阳; 功效术语; 药性理论; 英译高晓山《中药药性论》中指出: “药性理论是中药理论的核心。［1］”顾名思义，中药的药性理论很大程度上决定了药物的临床功效，所以在翻译过程中，如果丢掉了药性理论就丢掉了中药功效的核心，不能有效地指导临床用药。因此，中药功效术语翻译的准确与否，直接影响到受众在中药方面的正确使用。目前对于中药功效术语的翻译一直存在一词多译和多词一译的情况，不论哪种情况均存在简单依据词典进行表观翻译之嫌。英文翻译虽大同小异，但同没有依据、异没有凭证，更没有药性特点的表达，致使千药一面，很难在英文表述中看到不同药物的功效差异。如淫羊藿和巴戟天均有补肾阳之功效，但是很多英文书籍只是简单翻译成“tonifyingthe kidney yang”，这显然不能够充分解释其中文功效“补肾壮阳”或“补肾助阳”的内涵，引起英文阅读者的疑惑和误解。本文以“补肾助阳”功效术语为例，结合相关药物药性特点进行术语内涵的挖掘，再根据其内涵给出相应的具有药性特点的个性化翻译，探索基于药性理论的中药功效术语英文翻译。1 基于药性理论的“补肾助阳”中文内涵挖掘在中药学教材中，很多药物具有“补肾助阳”或“补火助阳”等类似作用，但它们各自药性不同，作用特点不同，因此临床主治病证亦不同。如何在英语翻译中将药性特点融合其中进行表达，是摆在我们面前的一个挑战。《中药学》七版教材中，涉及“补肾助阳”功效术语的药物共4 味，分别为巴戟天、肉苁蓉、锁阳和桑螵蛸，故首先进行“补肾助阳”相关中文内涵的挖掘。1. 1 “补肾助阳”概念阐释补肾为中医术语，在《中医大辞典》［2］中解释为:“补法之一，分补肾阴，补肾阳。”助阳为中医术语，在《中医大辞典》解释为: “助阳”即“补阳”，为补法之一，是治疗阳虚证的方法。肾为阳气之本，故补阳多指补肾阳。结合上述释义，补肾助阳可以按照互文结构将其转换为“补助肾阳”去理解。1. 2 基于药性的“补肾助阳”内涵挖掘1. 2. 1 巴戟天辛、甘、微温，归肾、肝经，功效补肾助阳、祛风除湿。本品补肾助阳、甘润不燥，主治肾阳不足、阳痿遗精、宫冷不孕、月经不调、少腹冷痛、风湿痹痛、筋骨萎软等［3］。《本草经解》云: “巴戟天气微温，味辛甘无毒。气味俱升，阳也。［4］”《本草新编》云:“巴戟天，味甘温，无毒……壮阳道。用附子，肉桂，以温命门，未免过于太热，何如用巴戟天之甘温，补其火，而又不烁其水而为妙也。［5］”现代研究证明，巴戟天低聚糖具有明显的补肾壮阳［6］和促肾上腺皮质激素样作用［7］。综上所述，巴戟天的补肾助阳之功效、药性特点为甘温为主，气味俱升，阳也。但其质地甘润补其火，而又不烁其水，表明巴戟天可直接补益肾阳，壮阳程度较强，但因质地甘润，其壮阳之功不燥烈。1. 2. 2 肉苁蓉甘、咸、温，归肾、大肠经，功效补肾助阳、益精血、润肠通便，主治肾阳不足、精血亏虚、阳痿不孕、腰膝酸软、筋骨无力、肠燥便秘等［3］。《本草乘雅半偈》云: “柔红美满，膏释脂凝，肉之体也……用强体阴之精，以益阳生之。［8］”《本草经解》云:“肉苁蓉气温，味甘无毒，色黑而润。气味俱浊，降多于升，阴也。填精益髓，又名黑司令。［4］”《神农本草经百种录》云: “此以形质为治也，苁蓉像人之阴，而滋润黏腻，故能治前阴诸疾，而补精气。如地黄色质像血，则补血也。［9］”现代研究表明，雄性小鼠服用肉苁蓉水煎液2 ～ 3 周后，小鼠精子数量、活动率明显增多，精子运行速度增快［10］，还可提高实验组大鼠性腺质量和性行为频率。日本对肉苁蓉中含有苯丙基糖苷类化合物进行研究，认为其粗提物有雄性激素样作用［11］。综上所述，肉苁蓉补肾阳之功，药性特点为味甘温，气味俱浊，降多于升，阴也。其质地肥美濡润，能填精益髓、主治精血亏虚，其补肾助阳之功是通过补益精血、精髓而实现的。1. 2. 3 锁阳甘、温，归肝、肾、大肠经，功效补肾助阳、润肠通便，主治肾阳不足、精血亏虚、腰膝萎软、阳痿滑精、肠燥便秘等［3］。《本草求真》云: “本与苁蓉，同为一类。则知其性虽温，知其体仍润……益知其性属阴类，即有云可补阳，亦不过云其阴补而阳自兴之意。［12］”《本草新编》云: “盖锁阳非苁蓉可比，苁蓉，乃马精所化，故功效能神; 锁阳，非马精所化之物，虽能补阴兴阳，而功效甚薄，故神农薄而不取。［5］”锁阳有促进动物性成熟的作用，可显著增加幼年雄性大鼠的血浆睾酮含量［11］。综上所述，锁阳药性、功效、主治病证基本与肉苁蓉相同，但其益精髓、补肾助阳之功稍逊一筹。1. 2. 4 桑螵蛸甘、咸、平，归肝、肾经，功效补肾助阳、固精缩尿，主治遗精滑精、遗尿尿频、小便白浊、肾虚阳痿等［3］。本品甘能补益，咸以入肾，性收敛。《神农本草经疏》云: “桑螵蛸，桑树上螳螂子也。禀秋金之阴气，兼得桑木之津液。气厚，味薄，阴也。［13］”《神农本草经读》云: “又具水性，能使肾子作强得其用。［14］”综上所述，桑螵蛸有补肾阳之功，药性特点为味甘平，其气厚，壮阳之性强，味薄，其燥性较烈，阳动之性较强，故桑螵蛸补肾壮阳之功强但较燥烈。2 常见“补肾助阳”英译本文选用目前国际上常用且相对权威的中医药术语标准，业内较为认可且有影响力的中医英文辞典及辞书，以及4 本中药学英文教材作为英译语料来源及研究对象，进行“补肾助阳”英文翻译的分析研究，相关翻译列表如下。表1 显示，对于“补肾助阳”这一功效术语的翻译，肾阳翻译为the kidney yang 并无争议，重点是“补助”这一动词的翻译存在不同版本。综上所述，目前常见的对于“补肾助阳”这一功效术语中，表达动词“补助”的英文动词可归纳整合为: assist /strengthen /invigorate /reinforce /tonify /replenish /nourish。3 “补助”相关英译分析《牛津高阶英汉双解词典( 第8 版) 》［24］，分别释义如下。3. 1 Ｒeinforceto make a feeling，an idea，etc． stronger; tomake a structure or material stronger，especially byadding another material to it; to send more people orequipment in order to make an army，etc． stronger，加强，充实，使更强烈; 加固，使更结实; 给……加强力量( 或装备) ，使更强大。其名词形式reinforcement有援军、增援警力( extra soldiers or police officers whoare sent to a place because more are needed) 的意思。通过其表达可以发现，reinforce 的“补助”意思是基于“不足”这一意义上的补充和加固。3. 2 Ｒeplenish( formal ) to make something full again byreplacing what has been used，补充，重新装满。例句为Allow me to replenish your glass，让我再给您斟满。其补充的内涵是“本身不足，补充使其重新装满”。且其宾语多为具体名词如food，water 等具体名词，用语场合比较正式。3. 3 Strengthento become stronger， to make somebody orsomething stronger，加强，增强，巩固。例句为Herposition in the party has been strengthened，他在党内地位提高了。The new evidence will strengthen theircase，新的证据将使他们的论据更为充分。明显，strengthen 在这里是加强的意思，在强的基础上使其更强。3. 4 Assistto help somebody to do something; to helpsomething happen more easily，帮助，促进。表达“帮助”之义时，宾语多为人，译为帮助某人，如We willdo all we can to assist you，我会尽量帮助你。表达“促进”之义时，宾语多为物，译为促进某事。如activities that will assist the decision-making process。3. 5 Invigorateto make somebody feel healthy and full of energy;to make a situation，an organization，etc． efficient andsuccessful，使生气勃勃，使精神焕发; 使蒸蒸日上，使兴旺发达。例句: They felt refreshed andinvigorated after the walk，散步之后他们感到精神焕发。所以invigorate 的补助之义多指精神状态及能能量的补充。3. 6 Tonifyto make a part of the body firmer，smoother，andstronger，by exercise or applying special creams，etc．( 通过锻炼和涂特殊的护肤霜等) 改善( 身体部位)状况。其名词形式tonics 译为补药、滋补品，如herbal tonics 滋补草药。所以tonify 所表达补的含义是通过其他物质的补充改善身体情况，是一种比较泛泛的和概括的“补”的翻译。3. 7 Nourishto keep a person，an animal or a plant alive andhealthy with food，etc，抚养、滋养、养育，其名词形式为nutrition，译为营养，滋养。形容词形式为nutritious，译为有营养的、营养丰富的。英译释义为:containing many of the substances which help the bodyto grow，故可进一步理解为nourish 的“补”包含了提供很多营养物质去滋养身体，从而实现补益的作用。4 相关药物“补肾助阳”功效术语的翻译建议结合英文补助英译核心词汇的释义以及这4 味中药的药性、功效和主治病证，笔者对于这4 味药相应的翻译建议如下。4. 1 巴戟天基于巴戟天的药性分析，其壮阳程度强，但因质地甘润，其壮阳之功不燥烈。在英文词汇中，reinforce 是指基于不足的增强。建议将巴戟天的“补肾助阳”功效翻译成“reinforce the kidney yang”，以突出其壮阳质润之性。4. 2 肉苁蓉、锁阳基于肉苁蓉、锁阳的药性分析，其补肾壮阳是通过补益精髓、精血实现的。在英文词汇中，nourish包含了滋养、滋补这一含义。建议将肉苁蓉、锁阳的“补肾助阳”功效翻译成“nourish the kidney yang”，以突出其填精益髓之功效。4. 3 桑螵蛸基于桑螵蛸的药性分析，其补肾壮阳较强，但因其“气薄”，药性较为燥烈。在英文词汇中，invigorate有精神焕发、增强活力的意思。建议将桑螵蛸的“补肾助阳”功效翻译成“invigorate the kidneyyang”，以突出其阳动燥烈之性。5 讨论随着中医药翻译的发展，在对中药功效术语翻译的过程中，越来越多的人注意到其英译的规范化与准确性问题。本文认为，规范性一定要建立在准确性的基础上，否则就存在舍本逐末之弊。中药之所以与西药、化学药、植物药不同，其核心主要在于中药是在系统的药性理论指导下的采收、炮制和临床应用，如果没有药性理论的指导，中药就没有了灵魂，就会变成植物药或合成药。因此，在对外传播的过程中，在中外两种语言的转换过程中，要尽量保持中医药最核心和最关键的问题。中药功效术语中一词多意和多词一意的现象，误导翻译者走表观翻译之路，干扰了英文翻译的正确表达。如何在做到基本信、达、雅的基础上，又能有药性特点的彰显，本文体会如下首先在中药功效术语中文内涵的挖掘过程中，我们不能仅仅依靠教材中功效术语的字面意思去完成翻译，还需要查阅相关古籍和现代研究，综合药物的气、味、形、色、质、植物形态等与功效有关联的药性描述，有时还需要结合主治病证、临床配伍等综合分析其功效术语的隐含之义，然后作出较为恰当的药性特点判断，为英文翻译的正确选词奠定基础。其次，我们还要对英文译文，特别是英文功效术语中动词的把握要准确。有时不能够从释义或例句中区别，还要考虑其词根词源进行挖掘，吃透其真实含义。基于药性理论的中药功效术语个性化翻译是个任重而道远的过程，本文仅以“补肾助阳”功效术语为例做了大胆的尝试，以期抛砖引玉，共同推动中医药英译的发展与进步!参考文献:［1］ 高晓山． 中药药性论［M］． 北京: 人民卫生出版社，1992: 6-8．［2］ 李经纬，等． 中医大辞典［M］． 北京: 人民卫生出版社，1995:744．［3］ 高学敏． 中药学［M］． 北京: 中国中医药出版社，2007: 443．［4］ 叶桂． 本草经解［M］． 上海: 上海卫生出版社，1958: 10．［5］ 陈士铎． 本草新编［M］． 北京: 中国医药科技出版社，2011:72．［6］ 肖凤霞，等． 巴戟天补肾壮阳作用的初步研究［J］． 食品与药品，2006，8( 5) : 46．［7］ 沈道修． 中药巴戟天的研究［J］． 上海中医药杂志，1985，11:46．［8］ 卢之颐． 本草乘雅半偈［M］． 北京: 中国中医药出版社，2016:61．［9 ］ 徐大椿． 神农本草经百种录［M］． 北京: 人民卫生出版社，1956: 40．［10］ 王德俊，盛树青，梁虹． 肉苁蓉对小鼠睾丸和附睾形态学及组织化学的影响［J］． 解剖学研究，2000，22( 2) : 101-103．［11］ 梅全喜． 现代中药药理与临床应用手册［M］． 北京: 中国中医药出版社，2016: 781-783．［12］ 黄宫绣． 本草求真［M］． 北京: 中国中医药出版社，1997: 64．［13］ 缪希雍． 神农本草经疏［M］． 北京: 中医古籍出版社，2002:619．［14］ 陈修园． 神农本草经读［M］． 福州: 福建科学技术出版社，2007: 62．［15］ WHO． WHO 西太平洋地区传统医学名词术语国际标准［M］．北京: 北京大学医学出版社，2008: 217．［16］ 李振吉． 中医基本名词术语中英对照国际标准［M］． 北京: 人民卫生出版社，2008: 204．［17］ 李照国． 简明汉英中医词典［M］． 上海: 上海科学技术出版社，2002: 17．［18］ 谢竹藩． 中医药常用名词术语英译［M］． 北京: 中国中医药出版社，2004: 179．［19］ 方廷钰，嵇波，吴青． 新汉英中医学词典［M］． 北京: 中国医药科技出版社，2013: 396．［20］ DAN BENSKY． Chinese herbal Medicine Materia Medica［M］．3rd Edition［J］． by Eastland Press，Inc，2004: 775．［21］ 滕佳林． 中药学［M］． 北京: 人民卫生出版社，2007: 542．［22］ 常章富，贾德贤． Chinese materia medica［M］． 北京: 人民卫生出版社，2014: 571-573．［23］ 唐德才． 中药学［M］． 上海: 上海中医药大学出版社，2003:308．［24］ 霍恩比． 牛津高阶英汉双解词典［M］． 8 版． 北京: 商务印书馆，2014: 105．

摘要：目的基于网络药理学探讨肉苁蓉治疗血管性痴呆（v a s c u l a r d e m e n t i a , V D )的作用机制。方法采用T C M S P 分析平台检索中药活性成分和中药靶点，利用G e n e C a r d s 数据库和0 M I M 数据库筛选肉苁蓉治疗V D 的作用靶点，构建蛋白互作网络（P P I ),进行G O 功能富集分析及K E G G 通路富集分析，构建可视化的中药-疾病靶点相关的信号通路。结果从肉苁蓉中筛选出4 个有效成分，作用于6 0 个血管性痴呆靶点，肉苁蓉治疗V D 的核心基因主要有11^、¥£0卩八、£0-F R 、C A S P 3 、M Y C 、C C N D l 、F O S 、P P A R G 、A R 、R E L A 、N O S 3 、I C A M I 等。中药-疾病靶点涉及的 G O 功能主要包括 D N A 结合转录激活活性、核受体活性、转录因子活性，直接配体调节的序列特异性D N A 、乙酰胆碱受体活性、泛素蛋白连接酶结合、R N A 聚合酶I I 转录因子结合等。中药-疾病靶标涉及的K E G G 通路主要包括流体剪切应力与动脉粥样硬化信号通路、前列腺癌信号通路、糖尿病并发症中A G E - R A G E 信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、癌症中的蛋白多糖信号通路、P I 3 K - A 1U 信号通路、肝细胞癌信号通路、细胞凋亡信号通路、丙肝信号通路等。结论基于网络药理学探讨了肉苁蓉治疗血管性痴呆的分子机制，为中药现代化研究提供了理论基础。关键词：肉苁蓉；血管性痴呆；网络药理学；作用机制；蛋白互作网络血管性痴呆（v a s c u l a r d e m e n t i a ，V D )是一种由脑缺血、缺氧或者出血所引起的行为、记忆等严重认知功能障碍综合征[1_2]。其典型临床表现为具有脑卒中病史，在脑卒中后3 个月内出现明显的认知记忆功能障碍31。V D 发病率随着全球人口老龄化加剧而逐渐增加，成为继阿尔茨海默病（A l z h e i me r ’s d i s e a s e , A D ) 后的第二大痴呆类型 ，给家庭和社会带来沉重的经济负担。到目前为止尚未有被美国食品药品管理局（T h e U S F o o d a n d D r u g A d m i n i s t r a t i o n，F D A ) 批准用于 V D的临床治疗药物，目前主要以改善脑循环、抗血小板聚集、调脂稳斑等治疗原发性血管性疾病，多用多奈哌齐、吡拉西坦等胆碱酯酶抑制剂改善记忆减退情况:5_6]。由于V D 是目前唯一可以预防的痴呆类型[7]，在无西药专药治疗该病的现实下，从中医药中寻找有效防治V D 药物是目前医学研究的重点。近年来,很多研究表明中药能够改善V D 症状。李强等8运用“中医传承辅助系统”对V D 方药组成进行数据挖掘分析，发现肉苁蓉出现频次较多。肉苁蓉，学名M a , 别名寸芸，列当科植物肉灰蓉Cistonc/ies //er6 a Y . C. M a或德赢vwin登录 Cirf f m c /jefufcH/osa ( S c h r e n k ) W i g h t 干燥带鳞叶的肉质茎，素有“沙漠人参”之美誉，其性温，味甘，咸；归肾、大肠经，具有补肾阳、益精血、润肠通便的功效。有研究报道，肉苁蓉富含留醇、木脂素类、苯乙醇苷类、环烯醚萜类等有效成分，可有效改善老年痴呆患者的认知功能9 ，但对改善V D 患者认知功能的机制仍未完全明确。研究肉苁蓉中有效成分治疗V D 的作用机制具有重要意义。中药复方具有令人信服的疗效，但其多靶点、多成分、多途径的共同作用特点，使得我们很难明确何种成分在治疗疾病中起到主要作用〜。网络药理学是一门基于生物信息学、分子生物学及各大数据库信息系统的学科，综合分析中药成分作用于疾病的共同粑标，深人分析靶标涉及的基因、蛋白、信号通路，与中药多成分- 多靶点的特点是相统一的本研究基于网络药理学探讨肉苁蓉治疗V D 的作用机制。1 资料本研究使用相关分析平台和数据库见表1。2 方法2 . 1 筛选肉苁蓉中有效成分和靶点本研究通过中药系统药理学数据库与分析平台（T C M S P ，Traditional C h i n e s e M e d i c i n eS y s t e m s P h a r m a c o l o g y D a t a b a s e a n d A n a l y s i s P l a t f o r m ) ，以肉灰蓉为关键词搜索其全部活性成分。然后以为口服生物利用度(oral bioavailability，0 B ) > 3 0 % ，药物类药性（d r u g l i k e n e s s ,D L ) >0. 1 8 为筛选条件[13],见表2。采用P e r l 软件对相关有效成分作用靶点进行预测。2. 2 注释肉龙蓉f t 点基因（g e n e s y m b o l ) 通过U n i P r o t 知识库和P e r l 软件对筛选出的靶点基因进行注释。2 . 3 获取V D 疾病相关基因以“V a s c u l a r d e m e n t i a”作为关键词，检索G e n e C a r d s 数据库、0 M 1M 数据库的疾病靶点，从而得到V D 疾病相关基因。2 . 4 找出肉苁蓉靶点和V D 疾病靶点交集K 语言软件将V D 疾病相关靶点和肉苁蓉靶点取交集，得到肉苁蓉和V D 疾病共同靶点的韦恩图，见图1，得到肉苁蓉- V D 耙点。2 . 5 构建中药- 有效成分- 疾病- 靶点调控网络将2 . 2 获得的肉苁蓉靶点和2 . 4 获得的肉苁蓉- V D 靶点利用P e r l 软件进行一一映射，然后运用C y t o s c a p e 软件对该网络进行拓扑计算，得到中药-成分-疾病-靶点调控网络。见插页X I 图2 。其中节点的类型有中药、有效成分、疾病和中药一疾病靶点。2 . 6 构建中药-疾病靶点蛋白相互作用网络与筛选核心基因利用S T R I N G 在线软件将中药一疾病靶点输人软件，筛选条件为种属选择丨w n w s a p i e n s，保存结果文件见插页X M 图3 .将所得文件输人K 语言计算.得到蛋白互作网络核心靶点的条图。见图42.7 G O 功能富集分析和K E G G 通路富集分析将中药- 疾病靶点利用K 语言软件计算，得到G O 功能富集分析(插页X I 图5 、插页X X I 图6 ) 和K E G G 通路富集分析（插页X X I I图7 〜图8 )。3 结果3 . 1 肉苁蓉中有效成分的筛选和靶点预测结果通过对T C -M S P 数据库中肉苁蓉所有有效成分及其相关靶点筛选，共搜索到有效成分7 5 个，相关靶点6 5 8 个。根据0 B 和D L 标准对肉苁蓉的有效成分进行筛选，共获得有效成分6 个，有效成分对应的粑点2 2 4 个33 . 2 中药- 疾病靶点构建的结果利用K 语言软件将V D疾病相关靶点与肉苁蓉靶点取交集，得到中药-疾病共同耙点的韦恩图（图1 )，从中得到中药-疾病靶点6 0 个。其中V D疾病相关靶点3 0 4 7个，肉苁蓉靶点8 5 个：3 . 3 构建中药- 有效成分- 疾病- 靶点调控网络的结果插页X I 图2 中红色代表血管性痴呆（V D ),绿色代表中药肉苁蓉，紫色代表肉苁蓉的有效成分，蓝色代表肉苁蓉- V D 疾病共同靶点。中药肉苁蓉主要通过4 种有效成分作用于6 0 个靶点，这6 0 个靶点可能影响V D 的发生3 . 4 构建中药-疾病靶点蛋白相互作用网络与筛选核心基因的结果据图4 可知，中药- 疾病核心基因按邻接节点数目由多到少依次为：I L 6 、V E G F A 、E G F R 、C A S P 3 、M Y C 、C C N D 1 、F 0 S 、P P A R G ' A R 、R E L A 、N O S 3 、I C A M 1 、H I F A 、A H R 、C A V 1 、P G R 、C A S P 8 、N F K B 1A 、C A S P 9 、V C A M 1、N F E 2 L 2 、K I 51、H S P B I 、I G F 2 、P A R P 1 、C R P 、C Y P 3A 4 、I G F B P 3 、N Q 0 1 、P L A U D 邻接节点数目越多，成为核心基因的概率越大。左列为基因名，如丨L -6( interleukin - 6 , 白介素- 6 ) ，数字为相应基因邻接节点数目，如L - 6 邻接节点数目为40。3.5 G O 功能富集分析肉苁蓉治疗V D 的核心耙点的G O功能富集分析结果见插页X I 图5 ~ 插页X M 图6 。肉苁蓉治疗V D 的核心基因的G O 功能主要涉及D N A 结合转录激活活性、激活转录因子结合、核受体活性、转录因子活性，直接配体调节的序列特异性D N A 、乙酰胆碱受体活性、泛素蛋白连接酶结合、泛素样蛋白连接酶结合、R N A 聚合酶I I 转录因子结合、半胱氨酸型内肽酶活性与细胞凋亡的关系、类固醇激素受体、G 蛋白偶联胺受体活性、激酶调节活性、整合素结合、抑制转录因子结合等。柱状图:插页X I 图5 左侧字母为G O 名称，下面数字为富集在G O 上的基因数目，柱状图形表示富集在G O 上的基因，P代表富集的显著性，颜色越红，富集的程度越高，相应的P 值越小.，气泡图:插页X X I 图6 左侧字母为G O 名称，下面数字为基因的比例，大小表示富集的基因的数目，颜色代表P 值，颜色越红，富集的程度越高，相应的Z5 值越小。3.6 K E G G 通路富集分析肉苁蓉治疗V D 的核心靶标的K E G G 通路富集分析结果见插页X H 图7 ~ 图8 ,肉苁蓉治疗V D 的核心基因的K E G G 通路主要涉及:流体剪切应力与动脉粥样硬化信号通路、卡波西肉瘤相关疱疹病毒感染信号通路、前列腺癌信号通路、糖尿病并发症中的年龄-年龄信号通路、人巨细胞病毒感染信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、肺小细胞癌信号通路、癌症中的蛋白多糖信号通路、P I 3 K - A k t 信号通路、肝细胞癌信号通路、细胞凋亡信号通路、丙肝信号通路等。柱状图:插页X M 图7 左侧字母为K E G G 名称，下面数字为富集在K K G G 上的基因数目，柱状图形表示富集在K E G G上的基因,P 代表富集的显著性，颜色越红，富集的程度越高，相应的P 值小。气泡图:插页X M 图8 左侧字母为K E G G 名称，下面数字为基因的比例，圆圈大小表示富集的基因的数目，颜色代表P值，颜色越红，富集的程度越高，相应的P 值越小。4 讨论现代研究显示，肉苁蓉具有神经免疫调节、抗疲劳、抗炎、抗氧化、抗病毒、抗肿瘤等多种药理活性M 本研究利用网络药理学对肉苁蓉治疗血管性痴呆的作用机制进行探讨。网络药理学是一种包括网络分析、系统生物学和多效性的药物设计方法15。结合中医药“整体观念”的理论，全面分析中药成分作用于疾病的靶点,对于研究中药治疗疾病的作用机制具有深远意义。本研究表明，肉苁蓉的主要有效成分可通过多靶标、多通路影响V D 的发生。肉苁蓉治疗V D 的核心基因主要有I L 6 、V E G F A 、E G F R 、C A S P 3 、M Y C 、C C N D 1、F O S 、P P A R G 、A R 、R E L A 、N O S 3 J C A M 1 等，这些基因可通过影响D N A 结合转录激活活性、激活转录因子结合、核受体活性、转录因子活性，直接配体调节的序列特异性D N A 、乙酰胆碱受体活性、泛素蛋白连接酶结合、K N A 聚合酶I I转录因子结合、半胱氨酸型内肽酶活性与细胞凋亡的关系、类固醇激素受体、G 蛋白偶联胺受体活性、激酶调节活性、整合素结合、抑制转录因子结合等来调控V D 的发生，即主要从炎症因子、细胞因子等分子水平来治疗V D ，炎症因子可损伤脑白质细胞（星形胶质细胞、小胶质细胞、少突胶质细胞和周细胞），细胞间黏附分子_ 1 ( intercellular cell a d he s i o n m o l e c u l e - 1 , I C A M - 1 ) 能加快斑块脱落， 导致脑血管堵塞，增加二次脑卒中风险，进而使患V D 概率增加16;。研究发现，I L - 6 ( interleukin6 ,白细胞介素- 6 ) 是一种多功能的细胞因子[17]，U .- 6 升高与认知功能下降、脑血管疾病关联性很大,它参与V D 发病的病理过程Ns_191。V E G F 在缺血性脑血管病的微循环重建中发挥关键的作用，是目前最强的促血管生长因子，能促进新生毛细血管的形成，提高机体输氧能力和氧交换面积，减轻缺氧对人体的伤害％ i。肉苁蓉治疗V D 的核心基因的K E G G 通路很多，这些通路主要包括流体剪切应力与动脉粥样硬化信号通路、卡波西肉瘤相关疱疹病毒感染信号通路、前列腺癌信号通路、糖尿病并发症中A G E - R A G E 信号通路、人巨细胞病毒感染信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、肺小细胞癌信号通路、癌症中的蛋白多糖信号通路、P 13K - A k t 信号通路、肝细胞癌信号通路、细胞凋亡信号通路、丙肝信号通路等。前列腺癌信号通路的下游通路包括凋亡信号通路。解恒革2 1对睾丸切除术患者（包括认知功能正常者、M C I 、A D 、V a D )进行研究，结果发现痴呆患者出现血清睾酮和E Z 的下降，与痴呆严重程度密切相关。T 和E Z 对认知功能的影响依认知功能是否受损而不同。动脉粥样硬化信号通路的下游通路包括N F k B 信号通路、M A P K 信号通路、凋亡信号通路等。张海燕1221研究发现五脏温阳化瘀汤能改善动脉粥样硬化V D 大鼠学习记忆能力，其作用机制可能与抑制动脉粥样硬化V D 大鼠的氧化应激反应。王晋平等通过动物实验发现益肺宣肺降浊方能提高c A M P 含量，促进P K A 表达（P <0. 05 ) ，改善V D 大鼠学习记忆功能和空间探索能力，减少神经细胞凋亡。综上所述，肉苁蓉多种有效成分通过调控V D 相关的基因起到治疗V D 的作用。网络药理学为发现新信号通路，调控富集程度高的基因和信号通路来治疗疾病以及全面认识中药和疾病的关系拓宽了渠道。本研究可为肉苁蓉治疗V D 提供…定的依据，也可为临床治疗V D 及新型药物的开发提供思路参考文献[ 1 ] 胡久略，商健,侯紫君，等.温肾醒脑方对血管性痴呆大鼠认知功能的影响及机制研究[■!].中华中医药学刊，2 0 1 9 , 3 7 ( 1 0 ) :2 4 5 0 - 2 4 5 5 , 2 5 7 5 .[ 2 ] W U Y T , A L I G C , G U E R C H E T M , et al. 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摘要 目的： 通过网络药理学及分子对接技术， 探讨肉苁蓉苯乙醇总苷(Phenylethanoid Glycosides from Cistanche, CPhGs)治疗肝细胞癌(HepatocellularCarcinoma, HCC)的潜在分子机制。方法：应用TCMSP等数据库及献收集肉苁蓉苯乙醇总苷的活性成分及潜在作用靶点。通过TTD，GeneCards等数据库获得与HCC相关的疾病基因，得到药物靶点与疾病靶点的交集为肉苁蓉苯乙醇总苷治疗HCC的潜在作用靶点，将交集靶点导入PPI网络，筛选关键靶点。将关键靶点导入DAVID数据库，进行GO功能、KEGG通路富集分析。最终，利用Autodock vina软件对筛选出的蛋白与肉苁蓉苯乙醇总苷活性成分进行分子对接。结果：肉苁蓉苯乙醇总苷中有29种活性成分及410个靶基因，涉及PI3K-Akt信号通路、癌症信号通路、癌症蛋白聚糖通路、VEGF信号通路等以发挥治疗HCC的作用。分子对接结果显示，筛选的靶点受体蛋白与活性成分具有较好的结合活性。结论：肉苁蓉苯乙醇总苷可能通过多组分、多靶点和多途径的方式调节癌细胞、血管生成等相关靶标和途径，从而对HCC产生治疗作用。关键词 肉苁蓉苯乙醇总苷；肝细胞癌；网络药理学；分子对接原发性肝癌是全球高发病率和致死率的恶性肿瘤之一，五年内的存活率仅为7%[1]。肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma，HCC）是其中最主要的病理类型，约占85%~90%以上[2]。最新数据表明，我国HCC的病死率和发病率分别排在所有恶性肿瘤的第3位和第4位，具有发展较快、易复发的特点[3-4]。肝癌的病因和发病机制尚不清楚，其发生可能与宿主基因多态性、环境因素(包括代谢综合征和黄曲霉毒素B1)、饮酒和病毒因素(包括乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒感染)的相互作用有关[5]。中药可用于晚期HCC患者，具有抗肿瘤、减少放疗化疗的不良反应、提高肿瘤患者免疫力、改善生活质量等作用[6]。肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉Cistanche deserticola Y.C.Ma或德赢vwin登录 Cistanche tubulosa（Schenk）Wight的干燥带鳞叶的肉质茎[7]，具有补肾、益精、润燥、通便的功效，是我国西北干旱地区特有的名贵补益类药材，应用历史悠久。肉苁蓉始载于东汉《神农本草经》：“味甘、微温。主五劳七伤，补中，除茎中寒热痛，养五脏，强阴，益精气，多子，妇人症瘕，久服轻身”，被列为上品[8]。肉苁蓉苯乙醇总苷(PhenylethanoidGlycosides from Cistanche, CPhGs)作为肉苁蓉中的主要有效成分，包括毛蕊花糖苷、松果菊苷、红景天苷、2’-乙酰基毛蕊花糖苷、管花苷B等[9]，具有肝脏保护、抗痴呆、抗疲劳、缺血保护、抗骨质疏松、润肠通便、免疫调节、抗衰老及改善生殖等作用[10]。已有研究证明，CPhGs具有良好的防治肝癌作用。Yuan等人[11]的研究表明CPhGs通过外源性和内源性凋亡途径抑制H22细胞的生长。胡琼等人[12]发现CPhGs能够抑制肝癌细胞的生长，这可能与CPhGs降低荷瘤小鼠血清中AFP的含量，提高荷瘤小鼠的免疫能力有关。目前，尚未发现针对CPhGs防治HCC作用及其分子作用机制的深入研究，其活性成分、作用靶点及分子机制尚未完全阐明。网络药理学将现有的“一靶一药”方式更新为“网络靶点-多成分”的研究方式，即在此基础上对中药的疗效进行综合分析，从系统视角和分子水平探索中医药，构建中医药网络药理学新思路[13-14]。本研究通过网络药理学策略，基于中医药整体观，对CPhGs防治HCC的作用机制进行系统探讨，结合“中药-活性成分-靶点-信号通路”的多层次网络模式，预测CPhGs防治HCC作用的关键靶点及作用机制，并利用分子对接技术进行验证，阐述CPhGs多成分、多靶点、多通路的协同作用机制，为显著提升CPhGs的药用资源开发领域，为后续研究提供参考。1 资料与方法1.1 CPhGs 类成分的收集通过检索中药系统药理学数据库(TCMSP)、中医药百科全书数据库(ETCM）、中医药研究综合数据库(TCMID)等数据库并结合CNKI 数据库、PubMed 数据库中的相关文献，收集CPhGs 类的化学成分及靶点信息。1.2 药物潜在治疗靶点的预测及“中药-活性成分-靶标”网络图的构建将检索得到成分的SDF 格式文件导入PharmMapper 数据库，进行潜在靶点的预测分析，并采用UniProt KB 搜索功能对靶点名称进行校正。运用Cytoscape3.8.0 软件构建“中药-活性成分-靶点”网络图。1.3 HCC 相关基因的筛选将“Hepatocellular Carcinoma” “HCC”作为关键词在以下4 个数据库中进行检索，获得HCC 靶点的信息：(1)OMIM 数据库；(2)DrugBank 数据库；(3)GeneCards数据库；(4)TTD 数据库。筛选后将靶点信息进行汇总整理。1.4 CPhGs 治疗HCC 的靶点映射通过在线绘图软件制作韦恩图，将CPhGs 类成分作用靶点与HCC 靶标进行映射，交集靶点即为CPhGs 类成分治疗HCC 潜在作用靶点，通过韦恩图确定CPhGs 类成分与HCC 的药物-疾病交集靶点。1.5 PPI 网络的构建利用STRING数据库（https://string-db.org/）进行共有靶点的蛋白质间相互作用关系分析，设置Combined Score > 0.4，并将结果利用Cytoscape 3.8.0进行拓扑分析，以度值大于中位数的2倍筛选出关键共有靶点。1.6 GO 富集分析和KEGG 通路富集分析利用DAVID 数据库对CPhGs 和HCC 共同作用靶点蛋白进行GO 分析和KEGG 通路富集分析，设定阈值P ≤ 0.05，筛选出具有显著性差异的生物过程和通路，并通过Cytoscape 3.8.0 软件构建“中药-活性成分-靶点-通路”网络。1.7 核心靶点的分子对接验证选择关键靶点蛋白用于分子对接，从RCSBPDB 数据库获取这些靶点蛋白的晶体结构文件，从PubChem 数据库获取这些靶点的活性成分的结构文件，利用Autodock_vina 软件计算靶点蛋白与活性成分间的最低结合能并将分子对接模拟验证结果进行可视化。2 结果2.1 肉苁蓉苯乙醇总苷的活性成分及其预测靶点通过在TCMSP、ETCM、TCMID数据库及文献[15-16]内检索，最终确定29个化合物作为候选化合物。包括Echinacoside 、Acteoside 、Isoacteoside 、2’-Acetylacteoside、Tubuloside A等，基本信息，见表1。通过数据库及PharmMapper预测出成分的靶标并去重后，获得410个可能的靶标。2.2 “中药-活性成分-靶标”网络构建与分析将“2.1”项下的29 个CPhGs 类成分和410 个潜在靶标的相关信息导入Cytoscape 3.8.0 软件中，结果见图1。“中药-活性成分-靶标”网络图涉及439 个节点，7515 条边。图中白色节点为中药；图中黄色节点中的缩写为成分名称，如PhGs9 为Acteoside，其余略；图中蓝色节点为靶标名称，如CASP3 为Caspase-3蛋白。2.3 HCC 疾病靶点的获取及CPhGs 类成分靶点映射以 “Hepatocellular Carcinoma”“HCC”为关键词检索OMIM、DrugBank、GeneCards、TTD 数据库，通过标准化去重及筛选后共获得HCC 相关靶点1944个。通过韦恩图将CPhGs 成分预测的靶点与HCC 的靶点进行映射，发现共有173 个交集靶点，即CPhGs 治疗HCC 的作用靶点，见图2。2.4 PPI 网络构建及分析CPhGs 治疗HCC 的靶点蛋白PPI 网络，见图3A，该网络涉及173 个节点，2202 条边。度值中位数为20，根据度值大于中位数2 倍筛选出核心网络蛋白29个，见图3B，包括ALB、AKT1、EGFR、MAPK1、IGF1、SRC、CASP3、MMP9、HRAS、HSP90AA1、MAPK8、ESR1、MMP2、RHOA、MAPK14、ANXA5、CAT、MDM2、KDR、PIK3R1、CDC42、MAP2K1、STAT1、GRB2、AR、IL2、NOS3、IGF1R、JAK2。以上靶点在PPI 网络中的位置，表明其在CPhGs 治疗HCC 中可能发挥重要作用。2.5 GO 分类富集分析和KEGG 通路富集分析将筛选出的 29 个关键靶点进行GO 和KEGG 富集分析，得到生物过程（Biological Process, BP）65 条，主要包括蛋白质磷酸化，细胞增殖、迁移、凋亡，肾上腺素信号通路等；细胞组成（Cellular Components, CC）18 条，主要与细胞质，细胞间连接，细胞内外基质等有关；分子功能（Molecular Function, MF）23 条，主要与蛋白激酶活性、蛋白质结合、酶结合等有关，见图4，以上数据P值均小于0.05。通过 KEGG 富集得到92 条信号通路（P < 0.05），主要涵盖癌症信号通路（hsa05200: Pathways in cancer）、癌症蛋白聚糖通路（hsa05205: Proteoglycans incancer）、PI3K-Akt 信号通路（hsa04151: PI3K-Akt signaling pathway）、RAS 信号通路(hsa04014: Ras signaling pathway)、FoxO 信号通路（hsa04068: FoxO signalingpathway）、血管内皮生长因子信号通路（hsa04370: VEGF signaling pathway）等，排名前20 的通路，见图5。2.6 “中药－活性成分－靶点－信号通路”网络构建通过Cytoscape 3.8.0软件构建CPhGs治疗HCC的“中药-活性成分-靶点-通路”网络，见图6，共有79个节点和901条边，涉及29种活性成分、29个关键靶点、20条KEGG通路，体现了CPhGs可能通过多成分、多靶点、多途径发挥多效应的特点。2.7 分子对接验证根据“中药-活性成分--靶点”网络中靶点的度值选择CPhGs活性成分5个（毛蕊花糖苷、松果菊苷、2-乙酰毛蕊花糖苷、肉苁蓉苷A、管花苷A）与PPI分析中度值排名前10的靶点蛋白（ALB、AKT1、EGFR、MAPK1、IGF1、SRC、CASP3、MMP9、HRAS、HSP90AA1）进行分子对接，筛选对接结果中结合能低的分子构象即为最优对接结果，其中活性成分与蛋白间的结合能等信息，见表2，具体对接过程，见图7。结果显示，50个对接结果均有较优的（Total score ≤ -5.0）对接活性，其中，43个对接结果有强烈的匹配活性（Total score ≤ -7.0）。以上对接结果充分表明，CPhGs活性组分与HCC关键核心靶基因的结合作用良好。3 讨论HCC 是严重威胁人类健康的十大恶性肿瘤之一，具有发病隐匿，进展迅速，治疗困难、转移概率高的特点[17]。HCC 是各种信号通路及细胞因子共同参与的病理生理过程，因此单靶点、单通路治疗很难起效。中药具有多成分、多作用靶点和作用途径复杂等特点，并以“人”为核心，将整体与局部相关联，通过中药有效成分在体内的代谢过程，进而从系统上实现药物对机体的调控。通过“中药-活性成分-靶点”的网络结果显示，CPhGs类成分毛蕊花糖苷、松果菊苷、红景天等均具有较高的防治肝癌活性，在治疗过程中可能发挥重要作用。毛蕊花糖苷对环境、饮食及二乙基亚硝胺（DEN）诱导的大鼠肝癌具有预防作用，其发挥作用可能是由STAT-3依赖性的氧化应激和凋亡调控介导的[18]。另外，毛蕊花糖苷可通过干扰JNK信号通路的激活和调控自噬蛋白的表达来抑制肝癌细胞的增殖[19]。研究表明，松果菊苷（ECH）能抑制二乙基亚硝胺（DEN）诱导的小鼠肝癌，并对HepG2肝癌细胞株具有抗增殖和促凋亡作用，其作用机制可能是通过降低TREM2的表达和PI3K/AKT信号通路发挥其抗肿瘤活性[20]。红景天苷联合奥沙利铂给药可以提高HCC患者的化疗疗效，通过抑制HIF-1α信号通路，显著提高HCC患者对铂类药物的敏感性，抑制缺氧诱导的EMT[21]。综上所述，目前针对CPhGs类成分防治HCC的作用机制研究较少，尚未见有关CPhGs防治HCC作用机制的报道。基于此，本课题应用网络药理学及分子对接技术对CPhGs防治HCC的作用机制进行系统研究，丰富和完善中药、天然药物治疗HCC的研究资料，拓展新疆地产药材肉苁蓉的开发应用价值。本研究的PPI网络拓扑学分析显示，CPhGs治疗HCC的核心靶点有29个，其中包括AKT1，PIK3R1，STAT1，SRC，MAPK1，CASP3，MAPK8，MAPK14，IGF1R等，均涉及细胞凋亡和细胞增殖过程。采用DAVID数据库对上述29个关键靶点进行GO功能和KEGG富集分析。GO功能富集分析结果显示CPhGs可以对细胞信号转导、细胞迁移、细胞增殖、细胞免疫等生物过程起调控作用，涉及细胞膜、核、质、细胞器膜及细胞空间等细胞组成过程，并通过与蛋白、酶各类受体结合等分子功能产生活性。KEGG功能富集分析结果显示，CPhGs防治HCC可能是通过调控癌症信号通路、癌症蛋白聚糖通路、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K-Akt）信号通路、GnRH信号通路等多条信号转导通路，其中均涉及PI3K/Akt信号通路，其作用尤为关键。PI3K/Akt信号通路在肝癌的起始过程中起着至关重要的作用，涉及多种生物学过程，如增殖、转移、耐药、放射抗性、能量代谢和自噬等[22-23]。PI3K是由调节亚单位p85和催化亚单位p110组成的异源性二聚体。根据底物和序列同源性，将PI3K分为3个亚型，都能磷酸化磷脂酰肌醇第3位羟基，从而产生特定的磷酸肌醇形式而发挥作用[24]。蛋白激酶B是位于PI3K下游的靶蛋白，是细胞增殖和存活的重要调节因子。目前，已经鉴定出3种Akt基因，分别称为Akt1、Akt2和Akt3。抑制Akt活性可诱导一系列哺乳动物的细胞凋亡，因此，将Akt抑制剂与抗癌药物联合治疗具有突变的肿瘤有一定的疗效[25]。本研究将“中药-活性成分--靶点”网络中排名前5的核心活性化合物与PPI分析中度值排名前10的蛋白靶点进行分子对接，进一步明确其发挥效用的治疗机制。采用Autodock vina进行对接，选取亲和力最佳的构象，其中最低结合能 ≤ -5.0kcal/mol即表明药效分子与蛋白对接效果良好,结合能越低，表明分子与蛋白结合能力越佳。本研究结果提示肉苁蓉中的苯乙醇苷类活性化合物与AKT1、HSP90AA1等靶标结合后最低结合能均 ≤ -5.0 kcal/mol，表明其具有较强的结合能力，充分验证了网络药理学的预测结果。蛋白激酶B（AKT）是一种人类丝氨酸-苏氨酸激酶，是AGC蛋白激酶家族的成员[26]。AKT蛋白在大多数癌症类型中都高度表达，包括HCC、肺癌、乳腺癌和以及结肠癌，其中AKT1是治疗癌症的主要药物靶点，在细胞增殖和抗凋亡的过程中发挥作用。有研究表明沉默AKT1能够抑制肿瘤生长和诱导细胞凋亡，并可有效上调肿瘤抑制基因PTEN的表达、减少Notch1的表达，靶向AKT1可以抑制HCC的发展[27]。热休克蛋白90α(Heatshock protein 90α，Hsp90α)由HSP90AA1基因编码，是分子伴侣Hsp90的诱导亚型，是真核生物中高度保守且必不可少的伴侣蛋白[28]。HSP90已成为治疗癌症中的关键目标，Hsp90与多种促进肿瘤发生的蛋白相互作用，因此，Hsp90是一个重要的致癌因子。研究表明，HCC患者血清HSP90AA1水平明显高于健康对照组[29]，分泌型HSP90AA1可能是HCC良好的生物标志物，被批准用于中国HCC的临床诊断[30]。综上所述，本文以CPhGs主要活性成分为研究对象，通过网络药理学技术分析其潜在的防治HCC靶点及信号通路，并结合分子对接方法初步验证了CPhGs主要活性成分能与HCC靶点发生相互作用，为进一步深入探讨其作用机制奠定了基础。

摘要: 目的建立HPLC 法同时测定肉苁蓉属药材中松果菊苷、金石蚕苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、2' － 乙酰金石蚕苷和2' － 乙酰毛蕊花糖苷含量的方法。方法采用岛津Inertsil C18色谱柱( 4． 6 mm × 250 mm，5． 0 μm) ，以乙腈( A ) －0． 1%磷酸水溶液( B ) 为流动相，梯度洗脱。流速为1． 0 mL·min － 1 ，柱温20℃，检测波长为330 nm。结果松果菊苷、金石蚕苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、2' － 乙酰金石蚕苷和2' － 乙酰毛蕊花糖苷6 个成分的进样量分别在0． 240 ～ 2． 400μg ( r = 0． 9993) ，0． 300 ～ 3． 000 μg ( r = 0． 9998) ，0． 072 ～ 0． 720 μg ( r = 0． 9994) ，0． 006 ～ 0． 060 μg( r = 0． 9991) ，0． 150 ～1． 500 μg ( r = 0． 9999) ，0． 030 ～ 0． 300 μg ( r = 0． 9993) 线性关系良好; 平均回收率( n = 3) 在98． 81% ～ 101． 52% 之间，ＲSD 的范围为0． 3% ～ 2． 8%。含量测定结果表明，肉苁蓉和德赢vwin登录 中含量最高的成分依次为松果菊苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷; 肉苁蓉中均含有量较大的2' － 乙酰毛蕊花糖苷; 而德赢vwin登录 中检测不到; 二者均不含金石蚕苷和2'－ 乙酰金石蚕苷。盐生肉苁蓉主要的成分为松果菊苷、毛蕊花糖苷、2' － 乙酰毛蕊花糖苷，还有一定量的金石蚕苷。沙苁蓉的特征性成分为金石蚕苷和2' － 乙酰金石蚕苷，毛蕊花糖苷和2' － 乙酰毛蕊花糖苷含量极低，松果菊苷检测不到。结论建立的HPLC 方法可把肉苁蓉属4 种药材明确区分开来，方法简便、准确且重复性好，可望为肉苁蓉药材和饮片的质量评价和有效控制提供科学依据。关键词: 肉苁蓉; 德赢vwin登录 ; 盐生肉苁蓉; 沙苁蓉; 苯乙醇苷; 松果菊苷; 含量测定肉苁蓉属( Cistanche) 药用植物，我国主要分布有5 种，肉苁蓉C． deserticola、德赢vwin登录 C． tubulosa、沙苁蓉C． sinensis 和盐生肉苁蓉C． salsa 最为常见［1］。肉苁蓉C． deserticola 和德赢vwin登录 C． tubulosa 作为肉苁蓉( Cistanches Herba) 的正品基原植物被我国药典所收载［2］; 而盐生肉苁蓉C． salsa 以及沙苁蓉C． sinensis 在民间也有一定的药用历史，但是多数情况认为盐生肉苁蓉是民间习用品，而沙苁蓉是伪品。文献报道这四种植物的特征性成分均为苯乙醇苷类成分［3 ～ 6］，并且药理研究表明该类化合物是肉苁蓉发挥药理活性的重要物质基础，具有改善学习记忆、抗衰老、抗疲劳、增强机体免疫力等活性［7 ～ 9］。课题组通过市场走访调查发现，以上四种药材在市场均有销售，药材和饮片名肉苁蓉或盐生肉苁蓉; 以沙苁蓉冒充盐生肉苁蓉或肉苁蓉情况时有发生; 也有正品伪品掺杂在一起的情况。本研究收集了肉苁蓉属15 批药材或饮片( 市售12 批，采集3 批) ，在预实验基础上，建立了高效液相色谱法同时测定肉苁蓉属药材和饮片中6 种主要成分: 松果菊苷( echinacoside，1) 、金石蚕苷( poliumoside，2) 、毛蕊花糖苷( acteoside，3) 、异毛蕊花糖苷( isoacteoside，4) 、2' － 乙酰金石蚕苷( 2＇ － acetyl poliumoside，5) 和2' －乙酰毛蕊花糖苷( 2＇－ acetyl acteoside，6) 含量的方法，并对这些药材和饮片进行含量测定，为区分市售肉苁蓉药材的质量，鉴定药材真伪提供科学依据。1 仪器与试药UltiMate 3000 型高效液相色谱仪( Thermo Fisher， chameleon色谱工作站) ，AB － 135S 分析天平、AL240 分析天平( 十万分之一，万分之一，瑞士梅特勒－ 托利多) ，KQ － 500DE 超声仪( 昆山市超声仪器厂) 。对照品松果菊苷和2' － 乙酰毛蕊花糖苷购于上海源叶生物试剂公司，纯度≥98%，供含量测定用; 金石蚕苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷和2' － 乙酰金石蚕苷均为实验室自制，经MS，1H －13C NMＲ 和13C － NMＲ 确定结构，HPLC 峰面积归一化法测得纯度均≥98%( 对照品结构见图1) 。乙腈为色谱纯，水为纯净水，其余试剂均为分析纯。15 批肉苁蓉属药材或饮片为采集或购自药材公司( 见表1) 。2 方法与结果2． 1 溶液的制备2． 1． 1 对照品溶液精密称取对照品松果菊苷、金石蚕苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、2' － 乙酰金石蚕苷和2' － 乙酰毛蕊花糖苷适量，甲醇定容，分别配制成质量浓度为1． 0，2． 5，0． 6，0． 3，5． 0，0． 3mg· mL － 1的单一对照品储备液，并置于4℃的冰箱中保存，备用。2． 1． 2 供试品溶液取药材粉末( 过四号筛) 约0． 1g，精密称定，精密加入70%甲醇溶液25mL，静置30min，称重，超声( 功率500W，频率40 kHz) 提取40min，待冷却至室温后称重，用70% 甲醇溶液补足减失的质量，摇匀，过滤，取续滤液并用0． 45μm 微孔滤膜过滤，即得。2． 2 色谱条件采用岛津Inertsil C18色谱柱( 250 mm × 4． 6mm，5 μm) ，以乙腈( A ) － 0． 1%磷酸水溶液( B ) 为流动相，梯度洗脱( 0 ～ 8 min， 89% B→85% B; 8 ～ 13 min， 85% B→83% B; 13～ 20 min，83% B→78% B; 20 ～ 36 min，78% B→74% B; 36 ～ 48min， 74%B ) ，流速为1． 0 mL·min － 1 ，柱温20℃，检测波长为330nm，进样量10μL。在该色谱条件下，各组分的分离度均大于1． 5，理论塔板数均大于10000，色谱图见图2。2． 3 方法学考察2． 3． 1 线性关系考察精密吸取“2． 1． 1”项下的单一对照品储备液各1． 20，0． 60，0． 60，0． 10，0． 15，0． 50 mL 置于5 mL 量瓶中，甲醇定容，摇匀，即得混合对照品溶液。分别精密吸取上述混合对照品溶液1，2，4，6，8， 10 μL 注入液相色谱仪，按“2． 2”项下色谱条件进行测定，以进样量X ( μg ) 为横坐标，峰面积Y 为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程，线性方程、r 和线性范围见表2。2． 3． 2 精密度试验取药材粉末( S15) ，按“2． 1． 2”项下的方法制备供试品溶液，连续进样6 次，记录峰面积，得出松果菊苷、金石蚕苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、2' － 乙酰金石蚕苷和2' － 乙酰毛蕊花糖苷峰面积的ＲSD 分别为1． 3%，1． 9 %，2． 6 %，3． 0 %，1． 8 %，1 ． 3 % ，表明仪器精密度良好。2． 3． 3 稳定性试验取药材粉末( S15) ，按“2． 1． 2”项下的方法制备供试品溶液，分别于制备溶液后的0，2，4，6，8， 12h 内进样测定，得出松果菊苷、金石蚕苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、2' － 乙酰金石蚕苷和2' － 乙酰毛蕊花糖苷含量的ＲSD 分别为1． 3 %，1． 8 %，2． 4 %，2． 3 %，1． 7 %，1． 7 %，含量表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。2． 3． 4 重复性试验取药材粉末( S15) ，按“2． 1． 2”项下的方法制备供试品溶液，平行制备6 份，进样测定，测得松果菊苷、金石蚕苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、2' － 乙酰金石蚕苷和2' － 乙酰毛蕊花糖苷的平均含量分别为6． 37，9． 89，3． 08，0． 15，2． 08 和2． 97mg·g － 1 ，ＲSD 分别为1． 8 %，2 ． 3 %，3． 0 %，2． 5 %，2 ． 4 %和2． 3 %，表明该方法的重复性良好。2． 3． 5 加样回收率试验取已知含量的药材粉末( S15 ) 约0． 05 g，精密称定，平行称定9 份，分别精密加入相当于药材中6个待测成分含量的80%， 100%， 120% 倍量的对照品溶液，平行测定3 份，按“2． 1． 2”方法制备供试品溶液，进样测定，计算各成分的加样回收率及ＲSD，结果见表3，表明该方法准确度良好。2． 4 样品含量测定分别称取不同批次的药材干燥粉末约0． 1g，精密称定，按“2． 1． 2”项下的方法制备供试品溶液，按“2． 2”项下的色谱条件进行测定，记录峰面积，按回归方程计算6 个化学成分的含量，结果见表4。3 结论与讨论3． 1 提取条件的优选本实验对不同提取方法( 加热回流提取和超声提取) ，提取溶剂( 水、30 % 甲醇、50 % 甲醇、70 % 甲醇、甲醇、30 % 乙醇、50 % 乙醇、70 % 乙醇、乙醇) ，浸泡时间( 0，0． 5，1 h) ，提取时间( 20，30，40，50，60，90 min) ，取样量( 0． 05，0． 10，0． 15，0． 20，0． 25 g) 进行单因素考察，最终确定，称取药材约0． 1g，加70% 甲醇25 ml，浸泡0． 5 h，超声40 min 为最佳提取条件。3． 2 色谱条件的优化通过二极管阵列检测器进行全波长扫描( 210 ～ 400 nm) ，表明在330 nm 处6 个化学成分均有较大吸收，且杂质成分干扰较少，故选择330 nm 为检测波长。在流动相筛选时分别考察了乙腈－ 0． 10% 磷酸水，乙腈－ 0． 15% 磷酸水，乙腈－ 0． 20% 磷酸水流动相系统，样品中各成分色谱峰在乙腈－ 0． 10% 磷酸水流动相系统中分离程度最好，故最终确定此流动相。3． 3 结论本研究在实地收集样品的基础上，结合药材及饮片的性状特征，并通过HPLC 预实验，可基本判断市售肉苁蓉属药材主要有如下几个来源: 两种药典正品肉苁蓉C． deserticola、德赢vwin登录 C． tubulosa; 民间习用品盐生肉苁蓉C． salsa; 非正品沙苁蓉C． sinensis( 民间疗效类似于正品) ; 还有的是正品和非正品掺杂。5 种来源样品在同一色谱条件下的代表性的图谱见图2B ～ 2F。由图2B、2C 和表4 可知，肉苁蓉和德赢vwin登录 中特征性成分以及含量最高的成分是我国药典检测的指标性成分松果菊苷( 1) 和毛蕊花糖苷( 3) ，其次为异毛蕊花糖苷( 4) ，肉苁蓉药材中均含有一定量的2' － 乙酰毛蕊花糖苷( 6) ; 而德赢vwin登录 中检测不到2'－ 乙酰毛蕊花糖苷( 6) ［10， 11］; 二者均不含金石蚕苷和2' － 乙酰金石蚕苷。由图2D 和表4 可知，盐生肉苁蓉含量极高的成分为松果菊苷( 1) 、毛蕊花糖苷( 3) 、2' － 乙酰毛蕊花糖苷( 6) ，还含有一定量的金石蚕苷( 2) 。由图2E 和表4 可知，沙苁蓉的特征性成分为金石蚕苷( 2) 和2' － 乙酰金石蚕苷( 5) ，毛蕊花糖苷( 3) 和2'－ 乙酰毛蕊花糖苷( 6) 含量极低，松果菊苷( 1) 检测不到。市售两批正伪掺杂样品( 图2F，表4) ，6个成分均可检测到。实验结果也表明正品肉苁蓉药材中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量差异也很大，这可能和产地、炮制加工等因素都有关。本实验建立的HPLC 方法可把肉苁蓉属4 种药材明确区分开来，方法简便、准确且重复性好，可望为肉苁蓉药材和饮片的质量评价和有效控制提供科学依据。参考文献:［1］ 国家中医药管理局《中华本草》编委会． 中华本草． 二十卷［M］．上海: 上海科学技术出版社，1999．［2］ 国家药典委员会． 中国药典，一部［S］． 北京: 中国医药科技出版社，2015: 135．［3］ Jiang Y，Li S P，Wang Y T，et al． Differentiation of Herba Cistanchesby fingerprint with high － performance liquid chromatography － diodearray detection － mass spectrometry［J］． J Chromatogr A，2009，1216( 11) : 2156．［4］ Lei L，Jiang Y，Liu X，et al． New Glycosides from Cistanche salsa［J］． Helv Chim Acta，2010，90( 1) : 79．［5］ Liu X M，Li J，Jiang Y，et al． Chemical constituents from Cistanchesinensis ( Orobanchaceae) ［J］． Biochem Syst Ecol，2013，47( 8) : 21．［6］ Tu P F，Shi H M，Song Z H，et al． Chemical constituents of Cistanchesinensis［J］． J Asian Nat Prod Ｒes，2007，9( 1) : 79．［7］ 王晓琴，黄慧，李彩峰，等． 列当属、肉苁蓉属与草苁蓉属药用植物亲缘学初探［J］． 中国中药杂志， 2018，43( 23) : 4608．［8］ Zhu M，Lu C，Li W． Transient exposure to echinacoside is sufficient toactivate Trk signalingand protect neuronal cells from rotenone［J］． JNeurochem，2013，124( 4) : 571．［9］ Li F，Yang X，Yang Y，et al． Antiosteoporotic activity of echinacosidein ovariectomized rats［J］． Phytomedicine，2013，20( 6) : 549．［10］ Morikawa T，Pan Y，Ninomiya K，et al． Acylated phenylethanoid oligoglycosideswith hepatoprotective activity from the desert plantCistanche tubulosa［J］． Bioorgan Med Chem，2010，18( 5) : 1882．［11］ Pan Y N，Morikawa T，Ninomiya K，et al． Bioactive constituents fromchinese natural medicines． XXXVI． Four new acylated phenylethanoidoligoglycosides，kankanosides J1，J2，K1，and K2，from stems ofCistanche tubulosa［J］． Chem Pharm Bull，2010，58( 4) : 575．

摘　要： 用先灰化、硝酸－高氯酸（４

摘要: 目的: 观察黄芪汤加减治疗老年性便秘的临床疗效。方法: 选择符合老年性便秘患者56 例，随机分成治疗组( 黄芪汤加减) 和对照组( 西沙比利) ，治疗4 周，观察疗效和进行半年随访。结果: 治疗组治愈率和有效率高于对照组，复发率明显低于对照组。结论: 用黄芪汤加减治疗老年性便秘优于西沙比利。关键词: 老年性便秘; 黄芪汤; 莱菔子; 肉苁蓉; 西沙比利老年性便秘是老年人的常见病，且随着年龄的增长而增多，可诱发或加重其他疾病，是老年人心脑血管疾病发生意外的隐患之一。我们经过反复临床实践，总结出用黄芪汤加减治疗老年性便秘的治疗方案，临床疗效分析结果表明，明显优于临床常规剂量的西药西沙比利，现报道如下。1 临床资料1. 1 一般资料收治符合罗马Ⅲ的老年性便秘患者共56 例，随机分为治疗组和对照组。治疗组28 例，男11 例，女17 例; 年龄61 ～ 82 岁，平均73. 3 岁; 病程6个月～ 12 年。对照组28 例，男13 例，女15 例; 年龄61 ～ 85 岁，平均年龄73. 5; 病程6 个月～ 15 年。1. 2 老年性便秘的诊断标准根据2005 年制定的罗马Ⅲ标准: 病人在求治前症状至少出现6 个月，近3 个月症状符合以下标准。①必须包括下列2 项或多项:排便期间，排便费力至少占25%; 粪便中团块或硬粪至少25%; 排便不尽感至少25%; 肛门直肠的梗阻至少25%; 手工操作助排便至少25%; 每周排便少于3次。②不用缓泻药，很少出现松软大便。③IBS( 肠易激综合征) 诊断依据不足。④排除器质性便秘。1. 3 给药方法对照组: 黑龙江省地纳制药有限公司生产的西沙比利，10 ～ 15mg·次－ 1，每日2 次，口服。治疗组: 黄芪30g，陈皮10g，火麻仁12g，白蜜10g，莱菔子10g，肉苁蓉15g，每天1 剂，水煎服，早晚2 次温服。两组必要时加用其它缓泻剂或通便灌肠，疗程均为4 周。对照组出现腹泻时停药，腹泻停止后减量给药，并在住院过程中观察西沙比利的心脏毒性以防意外。用药过程中及停药后均嘱患者生活起居规律，定时排便，多吃富含纤维素多的食物。2 治疗结果2. 1 疗效判定标准参照《中医病症诊断疗效标准》: ①治愈: 2 天内排便1 次，便质正常，排便通畅，1个月内无复发; ②显效: 3 天内排便1 次，便质趋于正常，排便通畅，1 个月内无复发; ③有效: 3 天内排便1次，便质转润，排便欠畅; ④无效: 临床症状无明显改善。由于疗效判定标准中显效和有效在临床上较难区别，因此我们在疗效观察上把显效和有效均按有效处理。治愈和好转者半年以内复发为复发。2. 2 临床疗效比较治疗组和对照组患者治疗效果如表1 所示，治疗组的治疗效果明显优于对照组，统计学( 非正态分布阶段数据秩和法) 处理表明，两组间存在显著性差异( U = 4. 52，P < 0. 01) 。2. 3 随访半年后随访，治疗组25 例有效者中有6例复发，复发率24%; 对照组24 例有效者中在随访前1 例死于脑出血，其余23 例中有17 例复发，复发率74%，明显高于治疗组，用卡方检验法进行统计学处理，表明两组复发率间存在显著性差异( χ2 = 11. 96，P< 0. 001) 。3 讨论黄芪汤又称为黄汤，出于宋代《太平惠民和剂局方》，由黄芪、陈皮、火麻仁、白蜜组成，＇治老人大便秘涩，“…秘甚者不过两服愈，常服即无秘涩之患…其效如神”。后清代《金匮翼》一书也有记载，亦称之为黄汤，为治疗虚闭( 体虚便秘) 的良方。在本研究中，笔者以该方加莱菔子和肉苁蓉治疗老年性便秘，疗效良好。由表中可见，治愈率和有效率治疗组均高于对照组，半年内复发率对照组明显高于治疗组。中医学认为，老年性便秘多起因于气阴两虚，大肠传导不畅。黄芪汤方中主药黄芪补脾肺之气，因而可通利大便，火麻仁、白蜜润肠通便，陈皮理气，加莱菔子行气，肉苁蓉补肾润肠，全方补气健脾温肾，行气润肠便，标本兼治，因此临床收到满意疗效。实验表明，火麻仁所含脂肪油内服后在肠道内分解产生脂肪酸，促进分泌，加快蠕动，减少大肠水分吸收; 莱菔子水煎液离心后上清液对结肠纵肌具有显著促动力作用，促进肠蠕动，可用于各种老年性便秘; 肉苁蓉的水溶液能使小鼠排便时间明显缩短，离体试验表明，肉苁蓉能引起大鼠胃底和豚鼠回肠平滑肌条收缩，显示其有胃肠道平滑肌的收缩作用和通便作用。因此，黄芪汤加减可明显调节和加强胃肠道蠕动，促进胃肠道分泌。但其对老年性便秘远期效果的具体机制尚不明确，可能是通过其对消化道乃至机体整体功能的调整而起作用，尚需进一步研究。综上所述，本研究系统地观察了黄芪汤加莱菔子和肉苁蓉治疗老年性便秘的临床效果，结果表明，该方治愈率高，复发率低，为治疗老年性便秘的良好方剂。

肉苁蓉Cistanche deserticola Y. C. Ma 又名荒漠肉苁蓉,为列当科肉苁蓉属植物,其带鳞叶的干燥肉质茎作为中药肉苁蓉使用,是《中华人民共和国药典》收载的正品。肉苁蓉味甘、性温,具有“补肾阴益精血,润肠通便”之功效,可用于治疗男子阳痿、女子不孕、腰膝冷痛、血枯便秘等[1 ]。近年来中药肉苁蓉因具有显著的改善记忆、抗衰老、抗疲劳、增强机体免疫等功能而备受人们关注,其化学成分及药理作用报道较多[2, 3 ]。而文献检索表明,新鲜荒漠肉苁蓉的相关研究则较少,仅屠鹏飞等人研究过其鲜花序的正丁醇萃取物的化学成分[4 ]。笔者在对新鲜肉苁蓉化学成分的系统研究中,发现其石油醚提取物和醋酸乙酯提取物均具有一定的抗肿瘤活性。本实验用GC-M S对石油醚提取物的化学成分进行分析鉴定,同时用流式细胞术检测其对小鼠乳腺癌ts FT210细胞的周期抑制活性。1　实验部分1. 1　仪器、试剂及样品: GC-MS联用仪英国V G公司, Fi so ns MD800GC /MS型。采用小鼠乳腺癌t s-FT210细胞。流式细胞术采用美国BD公司Va ntage型流式细胞仪,细胞在细胞周期各时相中的分布利用Mod Fit LT软件分析计算。胎牛血清( FBS)和RPMI-1640 细胞培养基分别为Hyclo ne 公司( Cat. No. STF721)和Gibcobrl公司产品,碘化丙啶( PI)和Tri ton X- 100均为Sigma公司产品。新鲜肉苁蓉药材采于内蒙古阿拉善盟,经中国海洋大学海洋药物与食品研究所刘红兵老师鉴定为肉苁蓉C. desert icola Y. C. Ma 带鳞叶的肉质茎。1. 2　样品的提取: 新鲜荒漠肉苁蓉药材450 g 切碎后,用沸程30～ 60℃的石油醚2 000 mL渗滤,低温减压回收溶剂,再经无水硫酸钠干燥,得黄色透明液体,密封保存于- 10℃冰箱中备用。收率为0. 93%。1. 3　石油醚提取物的GC-M S分析: 气相色谱条件: 色谱柱为30QC2 /AC5石英毛细管柱( 30 m×0. 32 mm) ; 柱温80～ 280℃ ,程序升温3℃ /min; 分流比30∶ 1; 气化室温度240 ℃ ; 柱前压82. 8 kPa;载气为高纯N2。质谱条件: EI-MS, 电子能量70 eV; 离子源温度200℃ ; 灯丝电流4. 1 A;质量范围35～ 450m /z;扫描周期1 s; 数据处理用LAB-BASE系统,使用美国国家标准局NBS库检索,并参考文献加以确认。1. 4　抗肿瘤活性测试: 参照文献方法[5 ] , 利用流式细胞术检测荒漠肉苁蓉石油醚提取物对t sFT210细胞的周期抑制活性。2　结果2. 1　石油醚提取物化学成分鉴定: 经GC-MS联用仪分析鉴定,荒漠肉苁蓉的石油醚提取物共检出46个峰,用美国国家标准局NBS库检索,并参考文献加以确认, 共鉴定出25 个化合物, 占峰面积的75. 03% ,结果见表1。结果显示,酯类和烷烃类化合物为肉苁蓉石油醚提取物的主要成分。其中质量分数最高的是14-甲基-十五烷酸甲酯( 13. 61% ) ,其次为十六烷酸乙酯( 12. 39% )和2, 5, 6-三甲基-辛烷( 7. 60% )。2. 2　抗肿瘤活性: 流式细胞术检测结果表明,荒漠肉苁蓉石油醚提取物在10μg /mL时对tsFT210细胞有明显的G0 /G1 期抑制活性(图1)。3　讨论目前,肉苁蓉的生物活性研究主要集中在改善记忆、抗衰老、增强机体免疫功能等方面,在抗肿瘤方面尚无报道。本实验首次利用流式细胞术初步评价了新鲜荒漠肉苁蓉石油醚提取物对小鼠乳腺癌t sFT210细胞周期抑制活性,并利用GC-MS 对其化学成分进行分析。在荒漠肉苁蓉石油醚提取物中,主要为烷烃类和烷酸酯类及少量的酚类和环己酮类化合物,关于这些化合物的抗肿瘤活性尚未见报道。因此,关于荒漠肉苁蓉石油醚提取物中的抗肿瘤活性成分,还有待进一步研究才能确定。致谢: GC-MS由昆明植物所丁靖垲教授测定。Ref erences:[1 ]　Jiangsu New Medi cal Coll ege. Dict ionar y of Chinese Ma teriaMed ica (中药大辞典) [M ]. Sh anghai: Sh angh ai Peopl e′sPublishing House, 1997.[2 ]　Song Z H, Lei L, Tu P F. Advances in res earch of ph armacological activit y in plan ts of Cistanche Hof fing. et Link [ J].Ch in Tra dit Herb Dru gs (中草药) , 2003, 34( 9): 16-17.[3 ]　Zhang L H, Du N S. Advances in res earch of ch emical constituents in plant s of Herba Cistanche [ J ]. Ch in Trad it PatMed (中成药) , 2003, 25( 4): 323-327.[4 ]　Tu P F, He Y P, Lou Z C. Studi es on the ch emical constituent s of th e f resh inf lo rescences of d esert living ci st anche(Cistanche d esert icola ) [ J] . Ch in Trad it Herb Drugs (中草药) , 1994, 25( 9): 451-452.[5 ]　Liu H B, Cui C B, Cai B, et al . Is olation , identi fication andanti tumor activi t y of t rit erp enes f rom Pterocar ya tonkinesis( French. ) Dode [ J] . Ch in J Med Chem (中国药物化学杂志) , 2004, 14( 3): 168-170.