摘要：目的　测定德赢vwin登录 药渣中多糖含量及其抗氧化活性。方法　采用水提醇沉法提取德赢vwin登录 药渣中多糖成分，采用蒽酮硫酸法测定含量，利用二苯代苦味酰基（ＤＰＰＨ）、羟自由基（·ＯＨ）以及铜离子还原能力清除实验综合评价德赢vwin登录 药渣中多糖的体外抗氧化活性，通过红外光谱对多糖进行初步结构鉴定。结果　德赢vwin登录 药渣中多糖含量为０．０２５ ｍｇ／ｇ，当多糖浓度为０．０４ｍｇ／ｍＬ 时，对ＤＰＰＨ 自由基清除率为５９％，Ｖｃ的清除率为８９％，当多糖浓度为０．０３μｇ／ｍＬ时，对铜离子还原能力为６４％，Ｖｃ的还原能力为８８％，当多糖浓度为０．０１５ ｍｇ／ｍＬ时，多糖对羟自由基清除率为７０％，Ｖｃ的清除率为７０％。红外光谱分析表明德赢vwin登录 药渣中多糖提取物中含有α多糖。结论　德赢vwin登录 药渣中多糖含量较高，具有抗氧化活性。关键词：德赢vwin登录 ；多糖；红外光谱；抗氧化活性管花肉从蓉为列当科肉苁蓉属植物，主产于我国新疆，在于田、民丰县有大面积栽培，具有补肾精、益精血、润肠道的功效［１－３］。研究表明德赢vwin登录 中含有苯乙醇苷类、环烯醚萜类、木质素类、多糖类及生物碱类等多种生物活性成分［４］，具有抗氧化、增强机体免疫力、保护肝脏、改善大脑记忆力等药理作用［５－９］。本研究采用水提醇沉法提取德赢vwin登录 药渣中的多糖成分，采用蒽酮硫酸法测其多糖含量，运用红外光谱技术对多糖结构进行初步鉴定，通过３种抗氧化模型测定多糖的抗氧化活性，现报道如下。１　材料与方法１．１　仪器　ＦＡ１００４型分析天平（上海友声衡器有限公司），Ｔ６新世纪型紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司），ｔｉｇｅ２１ 型红外分光光度计（日本岛津公司）。１．２　试剂　无水葡萄糖（天津市永大化学试剂有限公司，批号：２０１３０２２５），９５％ 乙醇（天津市富宇精细化工有限公司），蒽酮（国药集团化学试剂有限公司，批号：２０１７０４２０），浓硫酸，二苯代苦味酰基（ＤＰＰＨ，上海梯希爱化成工业发展有限公司），新亚铜（上海梯希爱化成工业发展有限公司），醋酸铵（天津市盛奥化学试剂有限公司，批号：２０１３０４１２），硫酸铜（天津市盛奥化学试剂有限公司，批号：２０１４１１０３），氢氧化钠（天津永晟精细化工有限公司），过氧化氢（天津市盛奥化学试剂有限公司），试剂均为分析纯。１．３　药材　德赢vwin登录 药渣２０１８年５月购买于新疆金骏阳光生物科技有限公司。１．４　方法１．４．１　德赢vwin登录 中药渣中多糖提取方法　将德赢vwin登录 药渣粉碎，用９５％乙醇回流脱脂，在８０℃的条件下按照料液比（１∶１０）回流提取２ 次，每次２ｈ，在８０℃的条件下合并滤液浓缩，用９５％乙醇醇沉，４℃过夜。１．４．２　多糖含量测定方法　称取葡萄糖样品２０．０ｍｇ于５０ｍＬ 容量瓶中，制成０．４ ｍｇ／ｍＬ 的葡萄糖标准溶液，分别吸取３、４、５、６、７ ｍＬ 置于５０ｍＬ容量瓶，定容至刻度，分别吸取各个浓度梯度的葡萄糖溶液２．０ ｍＬ 于试管中，另取等量蒸馏水作空白对照，在各管加入０．２％硫酸蒽酮（称取０．１ｇ蒽酮加入５０ ｍＬ 浓硫酸）４．０ ｍＬ，用沸水加热１５ｍｉｎ，取出用冷水冷却至室温，在６２０ｎｍ 处测其吸光度值，以吸光度（犃）为纵坐标（犢），葡萄糖浓度（犆）为横坐标（犡），绘制标准曲线，得回归方程犢＝１６．４５犡－０．２０２４（犚２＝０．９９１１）。吸取德赢vwin登录 药渣中粗多糖溶液２．０ ｍＬ 于１０ ｍＬ 具塞试管中，按上述方法测定样品溶液中多糖含量。１．４．３　红外光谱分析　将多糖与溴化钾按１∶１００的比例均匀混合，充分研磨，取适量用压片机压片，在４０００～４００ｃｍ－１范围内进行红外光谱扫描，对多糖结构进行初步鉴定。１．４．４　德赢vwin登录 药渣中多糖的抗氧化活性研究１．４．４．１　ＤＰＰＨ 自由基清除能力测定　称取４０ ｍｇＤＰＰＨ 试剂，用无水乙醇溶解定容于２５０ ｍＬ 容量瓶内，配置成浓度为２×１０－４ ｍｏｌ／Ｌ 的溶液。取５支具塞试管依次加入不同浓度的样品溶液各２ ｍＬ及２×１０－４ ｍｏｌ／Ｌ 的ＤＰＰＨ 溶液，加入１ ｍＬ 无水乙醇使反应总体积为５ｍＬ，摇匀，避光放置３０ｍｉｎ，在５１７ｎｍ 处测定吸光度（Ａｉ），按公式ＤＰＰＨ 清除率／％＝Ａ０－（Ａｉ－Ａｊ）／Ａ０×１００％（式中：Ａ０ 为无水乙醇２ ｍＬ＋ＤＰＰＨ２ ｍＬ＋ 无水乙醇１ ｍＬ 时的吸光度值；Ａｊ 为无水乙醇２ｍＬ＋待测样品２ ｍＬ＋无水乙醇１ｍＬ 时的吸光度值；Ａｉ 为待测样品２ｍＬ＋ＤＰＰＨ２ｍＬ＋无水乙醇１ ｍＬ 时的吸光度值）计算清除率，以Ｖｃ为阳性对照，每组实验重复３ 次，求平均值。１．４．４．２　铜离子还原能力测定　取０．５ｍＬ 不同浓度的样品液，分别加入０．０１ｍｏｌ／ＬＣｕＳＯ４ 和７．５ｍｍｏｌ／Ｌ新亚铜试剂各０．１２５ｍＬ混合，再加入０．２ｍｏｌ／ＬｐＨ值为７．０的ＮＨ４Ａｃ缓冲液至总体积为１．０ ｍＬ，摇匀，静置３０ｍｉｎ，在４５０ｎｍ 波长处测定吸光度，按公式相对总还原百分率／％＝（Ａ－Ａ０）／（Ａｍａｘ－Ａ０）×１００％ （式中：Ａ０为不加样品时的吸光度值；Ａｍａｘ为在系列样品溶液中溶液浓度最高时的吸光度值；Ａ 为样品在４５０ｎｍ 处的吸光度值）计算还原百分率。以Ｖｃ为阳性对照，每组实验重复３ 次，求平均值。１．４．４．３　羟自由基清除能力测定　取５支具塞试管依次向其中加入２．０ ｍｍｏｌ／Ｌ 的ＦｅＳＯ４ 溶液２．０ｍＬ，１．０ ｍｍｏｌ／Ｌ 的Ｈ２Ｏ２２．０ ｍＬ，振荡，摇匀，再加入６．０ ｍｍｏｌ／Ｌ 水杨酸３．０ ｍＬ，摇匀，于３７℃水浴加热１５ｍｉｎ，在５１０ｎｍ 处测定吸光度（Ａ０），然后分别向５ 支试管中加入待测样品０．２、０．４、０．６、０．８、１．０ ｍＬ，再分别加入超纯水０．８、０．６、０．４、０．２、０ｍＬ，摇匀，３７℃下水浴加热１５ ｍｉｎ，在５１０ｎｍ 处测定吸光度（ＡＸ），按公式·ＯＨ 自由基清除率／％＝（Ａ０－ＡＸ）／Ａ０×１００％ 计算清除率。以Ｖｃ为阳性对照，每组实验重复３次，求其平均值。２　结果２．１　德赢vwin登录 药渣中多糖的含量　按“１．４．２”项下方法测定德赢vwin登录 药渣中多糖含量为０．０２５ｍｇ／ｇ。２．２　德赢vwin登录 药渣中多糖结构分析　在４０００～６５０ｃｍ－１有多糖类物质的特征吸收峰，在３５００～３２００ｃｍ－１处有１ 个强和宽的吸收峰，为多糖上·ＯＨ的吸收峰。在２９１０ｃｍ－１处出现的峰为ＣＨ的变角振动，和ＣＨ 伸缩振动形成的糖类特征吸收峰。在１６０４ｃｍ－１ 处出现的峰为ＣＯ 吸收峰，在８４０ｃｍ－１处出现的峰为α型糖苷键的特征吸收峰，说明提取物为α多糖。以波数为横坐标（犡），透过率为纵坐标（犢）绘制红外光谱图，见图１。２．３　德赢vwin登录 药渣中多糖体外抗氧化活性　当多糖浓度为０．０４ｍｇ／ｍＬ 时，对ＤＰＰＨ 自由基清除率为５９％，相同浓度阳性对照品Ｖｃ 的清除率为８９％；当多糖浓度为０．０３μｇ／ｍＬ 时，对铜离子总还原百分率为６４％，相同浓度阳性对照Ｖｃ的还原率为８８％；当多糖浓度为０．０１５ ｍｇ／ｍＬ，对·ＯＨ 自由基清除率为６０％，相同浓度阳性对照Ｖｃ的清除率为７０％，见图２－４。３　讨论目前对德赢vwin登录 的研究主要集中在其醇提物的化学成分及药理作用方面，如苯乙醇苷类在体外对黑色素瘤细胞抑制率达到９０％以上，对人体内黑色素瘤生长的抑制率达到５０％以上，对德赢vwin登录 水提物的研究主要在多糖成分的提取和含量测定［１０－１４］。本研究对德赢vwin登录 药渣进行二次利用，从药渣中提取多糖类成分，提高了德赢vwin登录 药材的利用率，通过３种抗氧化模型研究德赢vwin登录 药渣中多糖成分的抗氧化活性，为更好地开发利用德赢vwin登录 多糖的生物活性打下了实验基础。参考文献：［１］　王鑫彤，王未，吴慧玉，等．肉苁蓉多糖水解产物单糖组分的气相色谱法测定［Ｊ］．江苏大学学报（医学版），２０１６，２６（３）：２５４２５７．［２］　蒋媛，李玉婷，周振华，等．德赢vwin登录 中的苯乙醇苷的提取工艺的优化［Ｊ］．饮食保健，２０１７，４（１６）：４５４６．［３］　吴至久，唐学贵，何德才．补中益气汤加味治疗直肠粘膜内脱３０例临床观察［Ｊ］．川北医学院学报，２００４，１９（４）：１０２１０３．［４］　龚立冬，曹玉华，侯建霞，等．毛细管电泳电化学检测法研究肉苁蓉多糖的单糖组成［Ｊ］．中国中药杂志，２００７，（１９）：２０７３２０７５．［５］　宋志宏，屠鹏飞，赵玉英，等．德赢vwin登录 的苯乙醇苷类成分［Ｊ］．中草药，２０００，３１（１１）：８０８８１０．［６］　王虎，李文伟，蔡定芳，等．肉苁蓉提取物对帕金森病细胞损伤模型的保护作用［Ｊ］．中西医结合学报，２００７，４（４）：４０７４１１．［７］　张杰，赵天翼，李鸿钰，等．德赢vwin登录 提取物中化学成分研究［Ｊ］．海峡药学，２０１６，２８（１０）：３９４１．［８］　李媛，宋媛媛，张洪泉．肉苁蓉的化学成分及药理作用研究进展［Ｊ］．中国野生植物资源，２０１０，２８（１）：７１１．［９］　蔡鸿，鲍忠，姜勇，等．不同产地德赢vwin登录 中有效成分的定量分析［Ｊ］．中草药，２００７，３８（３）：４５２４５５．［１０］　杨太新，张喜焕，蔡景竹．德赢vwin登录 松果菊苷次生代谢部位研究［Ｊ］．中国中药杂志，２００７，５２（２４）：２５９１２５９４．［１１］　任璐，顾小红，汤坚，等．栽培德赢vwin登录 中苯乙醇苷的乙醇提取工艺［Ｊ］．食品与生物技术学报，２００６，２４（３）：３３３６．［１２］　陈敏，肖苏萍，崔光红，等．德赢vwin登录 中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量测定［Ｊ］．中国中药杂志，２００５，５０（１１）：８３９８４１．［１３］　李莉，曹进．分光光度法测定肉苁蓉多糖含量［Ｊ］．食品安全质量检测学报，２０１７，８（７）：２４１９２４２３．［１４］　刘国库，屠鹏飞，杨太新，等．德赢vwin登录 的生物学研究进展［Ｊ］．中国现代中药，２０１５，１７（４）：３９９４０５．

摘　要　简介了近年德赢vwin登录 资源分布与生物学特性、生药鉴定及药理作用等方面研究概况。关键词　肉苁蓉　德赢vwin登录 　资源分布　开发利用中药肉苁蓉为列当科肉苁蓉属植物, 干燥带鳞叶的肉质茎性甘、咸而温, 具有补肾阳、益精血、润肠通便和延缓衰老等功能。《中国药典》所收载的肉苁蓉正品植物为Cistanche deserticola Y .C .Ma ., 因其药源紧缺, 肉苁蓉属其他植物也广泛应用, 其中以德赢vwin登录 [ Cistanche tubulosa ( Schrenk) R .Wight] 资源较丰富,为目前中药肉苁蓉的主要基源植物[ 1] 。1 　德赢vwin登录 资源分布与生物学特性德赢vwin登录 又称红柳大芸、管花大芸, 主产于新疆维吾尔族自治区塔里木盆地的南缘, 被列为濒危物种[ 2], 生长于海拔高度约1200m 处水分较充足的柽柳丛中及沙丘地, 常寄生于塔克拉玛干柽柳( T .talamakanensisM.T .Liu) 、多枝柽柳( T .vamosissima Bunge ) 、多花柽柳( T .hohenackeri Bunge) 和密花柽柳( T .arceuthoides Bunge) 的根部。德赢vwin登录 为多年生寄生草本, 茎肉质, 株高0 .6 ～ 1m, 地上部高0 .30 ～0.35m, 茎不分枝, 叶乳白色, 干后变褐色, 三角形, 长2 ～ 3cm ×宽约0 .5cm, 穗状花序, 花萼筒状, 花冠筒状漏斗形, 雄蕊4 枚, 花丝着生于距筒基部0 .7 ～ 0 .8cm 处, 花药卵形, 长0 .4 ～ 0 .6cm, 密被黄白色长柔毛, 基部钝圆, 不具小尖头, 蒴果长圆形, 种子多数近圆形, 干后变黑褐色, 外面网状, 花期5 ～ 6 月, 果期7 ～ 8 月, 与本属其他种易区别。国内外对肉苁蓉植物的研究热点主要集中于肉苁蓉和盐生肉苁蓉[ C .salsa( C .A .Mey )G .Beck] 2 个种,前者为中国药典规定肉苁蓉的植物基源, 后者为日本和汉药肉苁蓉的主要基源植物, 而对德赢vwin登录 的研究相对较少。张志耘[ 3] 曾研究肉苁蓉属花粉及种皮的形态。李志军等[ 4] 对德赢vwin登录 异常结构的发育解剖学研究, 初步探讨其茎肉质膨大的原因。2 　德赢vwin登录 生药鉴定与药理作用肉苁蓉类植物药用部分为干燥带鳞叶的肉质茎, 其性状较相似极易混淆, 因此国内许多学者通过性状鉴定和显微鉴定方法研究其药材性状。据报道[ 5], 德赢vwin登录 生品呈纺锤形或扁纺锤形, 直或稍弯曲且极少数扭曲( 也有研究认为多数扭曲[ 6]) , 质坚硬, 无韧性, 不易折断, 断面颗粒状, 灰棕色至灰褐色, 黄白色点状维管束散生于整个断面, 具明显酒糟香味, 味甘微苦。性状鉴定主要观察其形状、大小、颜色、质地、断面以及气味特征;此外采用红外光谱、紫外光谱等方法对德赢vwin登录 进行鉴定。日本学者曾对巴基斯坦产德赢vwin登录 [ C .tubulosa(Schrenk)Hook .f .] 研究分离得到苯乙醇苷[ 19] 、环烯醚萜苷、木脂素苷等成分[ 20], 但巴基斯坦产德赢vwin登录 与国产德赢vwin登录 在形态、化学成分及寄主植物方面均有较大区别, 被认为系不同种[ 21] 。我国学者堵年中药肉苁蓉为列当科肉苁蓉属植物, 干燥带鳞叶的肉质茎性甘、咸而温, 具有补肾阳、益精血、润肠通便和延缓衰老等功能。《中国药典》所收载的肉苁蓉正品植物为Cistanche deserticola Y .C .Ma ., 因其药源紧缺, 肉苁蓉属其他植物也广泛应用, 其中以德赢vwin登录 [ Cistanche tubulosa ( Schrenk) R .Wight] 资源较丰富,为目前中药肉苁蓉的主要基源植物[ 1] 。我国学者堵年生等[ 7] 从国产德赢vwin登录 提取物中分离得到D-甘露醇、β-谷甾醇、胡萝卜甙、8-表马钱子甙酸、海胆甙和肉苁蓉甙A 等成分, 薛德钧[ 8] 光谱测试鉴定出琥珀酸、D-葡萄糖和D-果糖等成分。宋志宏等[ 9] 采用各种色谱技术( 包括高效液相色谱仪) 从国产德赢vwin登录 提取物中分离得到7 个苯乙醇苷类化合物、4 个环烯醚萜苷、1个木质素苷和1 个单萜[ 10] 类物质。屠鹏飞等[ 11, 12] 采用反相高效液相色谱法对肉苁蓉生药中苯乙醇甙类成分分析研究表明, 德赢vwin登录 所含化学成分与正品肉苁蓉相似且含量明显高于后者, 补肾壮阳和润肠通便等药理作用相似, 建议中国药典收载。此外热娜等[ 13] 从德赢vwin登录 中测出11 种氨基酸。德赢vwin登录 药理作用一是具有抗衰老作用, 肉苁蓉中海胆甙和肉苁蓉甙A 具有壮阳抗衰老功能[ 14] 。德赢vwin登录 可增加正常小鼠体重, 延长耐缺O2 时间和负重游泳时间, 且显著延长“阳虚” 及自由基损伤小鼠在恶劣环境中生存能力[ 15] 。并对兔血和小鼠肝脏过氧化脂质生成有显著抑制作用, 且德赢vwin登录 抗衰老作用与肉苁蓉相似[ 16] 。二是有补肾壮阳作用, 宗桂珍等[ 17] 通过不同种肉苁蓉药理作用的比较研究发现, 德赢vwin登录 能显著增加去势大鼠精囊前列腺的重量。也有研究认为[ 11] 德赢vwin登录 水煎剂虽对体温耐寒能力和体力有一定调节能力,但对改善体重不明显。三是有调节免疫功能, 德赢vwin登录 可显著提高吞噬细胞的吞噬能力, 使抑制低下的非特异免疫功能恢复到一定水平[ 17] 。施大文等[ 16] 以不同种肉苁蓉乙酸乙酯提取物和水提取物进行免疫药理试验结果表明, 各种肉苁蓉乙酸乙酯提取部位或水提取部位在一定浓度下有激活淋巴细胞杀伤K562 细胞的作用, 其中德赢vwin登录 水提取部位和乙酸乙酯部位作用最强, 即增强免疫功能最明显。四是有润肠通便作用, 其水煎剂有明显促进肠蠕动、抑制大肠水分吸收和缩短排便时间的作用, 且作用强度与肉苁蓉相似[ 11, 12] 。张勇等[ 18] 通过肉苁蓉类药材及其炮制品通便作用比较研究认为, 德赢vwin登录 能显著缩短小鼠通便时间, 酒制后通便作用相应减弱, 但对小鼠通便时间无影响。肉苁蓉为珍贵的补益中药, 近年来由于不合理地大量采挖其资源遭受严重破坏, 正品肉苁蓉药源十分紧缺。德赢vwin登录 种植对生态环境、湿度、水质和土壤要求不高, 易于引种且产量高, 有很大开发前景, 且德赢vwin登录 活性成分及药理作用均与肉苁蓉相似。故德赢vwin登录 可代替正品肉苁蓉入药, 但其野生种与栽培种化学成分、药理作用等方面究竟有何差异尚待进一步研究。并应将解决肉苁蓉药源紧缺问题与保护野生资源相结合, 加强引种栽培研究, 以寻求肉苁蓉人工栽培稳产、高产的有效途径, 合理开发利用肉苁蓉资源。参　考　文　献1 　屠鹏飞, 何燕萍等.肉苁蓉类药源调查与资源保护.中草药, 1994, 25( 4) :205 ～ 2082 　傅立国主编.中国植物红皮书———稀有濒危植物( 第一册) .北京:科学出版社, 1991 .5023 　张志耘.国产肉苁蓉属( 列当科) 花粉及种皮的形态研究.植物分类学报, 1990, 28( 4) :294 ～ 2984 　李志军, 吕春霞等.德赢vwin登录 异常结构的发育解剖学研究.西北植物学报, 1997, 17( 5) :118 ～ 1225 　何燕萍, 尹哲洙等.肉苁蓉生药鉴定与商品调查.中药材, 1997, 20( 1) :117 ～ 1226 　张浩杰, 丁秀芳.肉苁蓉及混淆品的鉴别.时珍国医国药, 2002, 13( 3) :1837 　堵年生, 周丕文等.德赢vwin登录 化学成分的研究.中国药科大学学报, 1993, 24( 1) :46 ～ 488 　薛德钧.德赢vwin登录 化学成分研究.中国中药杂志, 1997, 22(3) :170 ～ 1719 　宋志宏, 屠鹏飞等.德赢vwin登录 的苯乙醇苷类成分.中草药, 2000, 31( 11) :808 ～ 81010 宋志宏, 莫少红等.德赢vwin登录 化学成分的研究.中国中药杂志, 2000, 25( 12) :728 ～ 73011 屠鹏飞, 楼之岑等.三种肉苁蓉补肾壮阳药效比较.中药材, 1996, 19( 8) :420 ～ 42112 屠鹏飞, 李顺成等.肉苁蓉类润肠通便药效比较.天然产物研究与开发, 1997, 11( 1) :48 ～ 5113 热　娜, 堵年生等.新疆四种肉苁蓉中氨基酸成分分析.新疆医学院学报, 1991, 14( 2) :124 ～ 12514 佐藤倜.肉苁蓉的药理学研究( 第一版) .国外医学·中医中药分册, 1987, 9( 6) :3315 孟广森, 陈晓莉等.肉苁蓉延缓衰老研究的进展.中医杂志, 1996, 37( 8) :501 ～ 50216 施大文, 何松春等.中药肉苁蓉及其同属生药对免疫功能及酯质过氧化的作用.上海医科大学学报, 1995, 22( 4) :306 ～ 30817 宗桂珍, 何　伟等.不同品种肉苁蓉药材一些药理作用的比较.中国中药杂志, 1996, 21( 7) :436 ～ 43718 张　勇, 吴　焕等.肉苁蓉类药材及其炮制品通便作用的比较研究.中成药, 1993, 15( 5) :20 ～ 2119 Kobayashi H ., Oguchi H ., Takizawa N ., et al .New phenylethanoid glycosides f rom cistanche tubulosa( Schrenk )Hook .f .Ⅰ.Chem PharmBull, 1987, 35( 8) :330920 Yoshizaw a F ., Deyama T ., Takizawa N ., et a l .The const ituents of cistanche tubulosa( Schrenk) Hook .f .Ⅱ.Isolat ion and st ructu res of anew phenylethanoid glycoside and a new neolignan glycoside .Chem .Pharm Bull, 1990, 38( 7) :192721 Moriya A ., Tu P .F., Karasaw a D., et al .Pharmacognostical studies of ci stanchi s herba( Ⅱ) .Comparisi on of the components of cist ancheplant s .Nat .Med ., 1995, 49( 4) :394

我国有５种肉苁蓉，分别为沙苁蓉（Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓＢａｃｋ　ｖｏｎ　Ｍａｎｎａｇ）、肉苁蓉（又称荒漠肉苁蓉）（Ｃ．ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａ．Ｍａ）、兰州肉苁蓉（Ｃ．ｌａｎｚｈｏｕｅｎｓｉｓ　Ｚ．Ｙ．Ｚｈａｎｇ）、盐生肉苁蓉［（Ｃ．ｓａｌｓａ（（Ｃ．Ａ．Ｍｅｙ．）Ｇ．Ｂｅｃｋ．）］和德赢vwin登录 （Ｃ．ｔｕｂｕｌｏｓａ）［１－２］。荒漠肉苁蓉是历代本草记载的品种，也是《中国药典》最早收载的品种，其在新疆、内蒙、宁夏、甘肃广为分布，寄生于梭梭。盐生肉苁蓉在上述４个省区亦有分布，寄主有琵琶柴、盐爪爪、白刺囊果碱蓬等。德赢vwin登录 在我国主产于新疆和田、喀什、阿克苏等地区［３］，其中以和田地区民丰、于田、皮山、墨玉县产量最大，生于水分较充足的柽柳丛中及沙漠地带，常寄生于柽柳属（ＴａｍａｒｉｘＬ．）植物根上，在非洲北部、阿拉伯半岛、巴基斯坦、印度及中亚地区的哈萨克斯坦也广泛分布。自２００５年德赢vwin登录 被《中国药典》收载以来，对其的需求量逐年增加，对其的研究也日益深入。本文对德赢vwin登录 的药理作用、资源、应用状况及相关产业发展状况综述如下。１　德赢vwin登录 化学成分及药理作用德赢vwin登录 含苯乙醇苷类、环烯醚萜苷类、木脂素苷类、寡糖酯类、多元醇、多糖类等成分。多位学者从德赢vwin登录 中分离出了５８种化合物，包括２０种苯乙醇苷类、２０种单萜类、３种寡糖类、３种木脂素类、３种甾类、９种吡咯酮类、烷基苷类［４－１０］。现代药理学研究表明，德赢vwin登录 具有抗衰老、提高免疫力、补肾壮阳、润肠通便［１１］、降压［１２］等多种药理活性。其总提取物能够延长实验动物寿命、增强机体免疫功能、降低体内褐脂质堆积［１３］，并能显著抑制兔血和小鼠肝脏中过氧化脂质的生成，抗衰老作用与肉苁蓉相似［１４］。张洪泉等［１５］研究表明其有效成分麦角甾苷能拮抗自由基损伤，增强衰老小鼠心、脑组织端粒酶活性和机体免疫功能。德赢vwin登录 可显著增加去势大鼠精囊前列腺的重量［１６］；有关研究认为德赢vwin登录 可增加正常小鼠体质量，延长耐缺氧时间和负重游泳时间，且显著延长“阳虚”及自由基损伤小鼠在恶劣环境中的生存能力［１７］；另外，还能显著提高吞噬细胞的吞噬能力，使抑制低下的非特异免疫功能恢复到一定水平［１６］。施大文等［１４］进行的不同种肉苁蓉乙酸乙酯提取物和水提取物的免疫药理试验表明，各种肉苁蓉乙酸乙酯提取部位、水提取部位在一定浓度下均有激活淋巴细胞杀伤Ｋ细胞的作用，其中以德赢vwin登录 水提取部位和乙酸乙酯部位作用最强，增强免疫功能最明显。２　德赢vwin登录 资源与人工种植肉苁蓉是国家二类保护植物，１９８７年国务院颁布的《野生药材保护条例》将其列为三级保护野生中药材品种，《卫生部关于限制以甘草、麻黄草、苁蓉和雪莲及其产品为原料生产保健食品的通知》中禁止采挖野生肉苁蓉。随着肉苁蓉市场的走俏，原料的短缺及需求便形成了巨大的市场。德赢vwin登录 的寄主为柽柳，种植德赢vwin登录 必先种植柽柳，柽柳是防风固沙的先锋植物，对土地的沙化有很强的保护作用［１８－２０］，并且德赢vwin登录 本身又具有经济价值，该产业是一项兼顾生态与经济效益的产业。多项有关德赢vwin登录 产地适宜性分析表明，新疆环塔里木盆地沙漠边缘２７个县市总面积达４．６９×１０６　ｈｍ２，其中最适宜德赢vwin登录 种植区面积达０．３×１０６　ｈｍ２ 的县有于田、皮山、墨玉、洛浦、策勒，面积达０．０８×１０６～０．２６×１０６　ｈｍ２ 的县有民丰、和田、阿图什、柯枰、麦盖提、英吉沙、莎车、叶城、若羌等，新疆具有发展德赢vwin登录 人工种植得天独厚的条件［２１－２２］。目前，和田地委和行署已将德赢vwin登录 产业作为地区的主导产业之一，鼓励德赢vwin登录 种植业的发展，制定了打造德赢vwin登录 生态经济产业的发展目标。新疆和田地区是德赢vwin登录 的主产地，从２０世纪９０年代以来，就承担了国家对德赢vwin登录 药材需求量的７０％左右。近几年来，和田正以年平均０．３０×１０４　ｈｍ２ 的速度推广人工种植柽柳。截至２０１０年１２月，全地区７个县１个市，人工种植柽柳面积已达１．６×１０４　ｈｍ２，德赢vwin登录 接种面积累计达０．６７×１０４　ｈｍ２［２３］。“十二五”期间，在新疆维吾尔自治区重大科技专项“新疆维药与特色天然药物创制及产业化示范项目”支持下，德赢vwin登录 规范化基地有望进行良好农业规范（ＧＡＰ）认证。３　德赢vwin登录 应用状况由于德赢vwin登录 具有显著的药理活性，很受人们推崇。近年来，国内外市场对肉苁蓉的需求呈上升趋势，价格也不断攀升，干品收购价由２０世纪８０年代的８～１０元／ｋｇ上升到目前的８０～１００元／ｋｇ。受汉方医学的影响，肉苁蓉在日本很受关注，研究工作者对其活性成分的结构、药理作用等都进行了深入系统的研究［７－８］。２００５年德赢vwin登录 被日本厚生省批准为食品使用。日本不仅进口大量肉苁蓉药材，也进口肉苁蓉提取物，直接用于精细产品的生产，复配后做成片剂、胶囊剂、清凉饮料、口服含片、糖果、口服液等３０余类精深加工产品，其中以日本养命酒制造株式会社生产的养命酒最为著名；美国也利用肉苁蓉提取物研制了保健食品；韩国、俄罗斯、东南亚也都从我国进口干品肉苁蓉。强大的市场需求也为德赢vwin登录 产业的发展提供了良好的契机。生产企业在开发产品时多直接使用活性成分已得到富集的提取物，以节省生产周期、成本，增强产品效果，德赢vwin登录 提取物也具有很大的市场，目前出口日本的德赢vwin登录 提取物售价为１５万～２０万美元／吨。《中国药典》［２４］将松果菊苷（海胆苷，ｅｃｈｉｎａｃｏｓｉｄｅ，Ｃ３５Ｈ４６Ｏ２０）和毛蕊花糖苷（麦角甾苷、类叶升麻苷，ａｃｔｅｏｓｉｄｅ，Ｃ２９Ｈ３６Ｏ１５）作为德赢vwin登录 的含量检测指标，并且现代药理学研究也证明它们是德赢vwin登录 的主要活性成分，因此大部分德赢vwin登录 提取物都是以这２个成分作为活性成分指标，但也有以多糖、环烯醚萜类等为活性成分指标的。４　德赢vwin登录 相关产品开发德赢vwin登录 在药品、保健食品等领域都可使用。肉苁蓉主要活性成分苯乙醇总苷，是用于开发抗疲劳、抗氧化［２５］、抗辐射、增强记忆力、调节免疫等保健食品的良好原料；多糖类成分，可用于开发增强免疫力的保健食品；松果菊苷具有保肝作用，可用于开发药品和保健食品；肉苁蓉总苷有促进记忆、改善化学药物所造成的记忆损害作用，可用于开发治疗老年痴呆症、阿尔茨海默病等药品或增强记忆力的保健食品；肉苁蓉提取物具有美白功能，还可用于化妆品的生产。在国内外肉苁蓉市场形势大好的背景下，很多企业参与到肉苁蓉市场。新疆各地州、中国台湾及日本各企业，都围绕肉苁蓉进行了产品深加工。win德赢官方 和新疆中药民族药研究所合作以德赢vwin登录 为主要原料研发了具有抗疲劳功能的保健食品“帝辰牌康卡片”［２６］，该产品已报送国家食品药品监督管理局保健食品申报中心进行第３次审评；该所研发的“三参片”预计２０１２年年底可以取得保健食品批准文号；北京博远新绿生物科技有限公司以德赢vwin登录 为原料开发了“疆芸牌苁蓉劲片”；新疆和田天力沙生药物开发有限责任公司为杏辉天力（杭州）药业有限公司在新疆成立的一个主要从事德赢vwin登录 种植及粗加工子公司，杏辉天力（杭州）药业有限公司以德赢vwin登录 为主要原料研发出治疗老年痴呆症的苁蓉总苷胶囊，２００５年４月取得新药证书并上市销售。近年来，在政府政策支持下德赢vwin登录 种植、深加工业有了较快发展，但同时也暴露出一些问题：种植技术推广缺乏统一规划；种植模式不规范，接种技术掌握不足；种植规模、产量有限，不能满足市场需求；ＧＡＰ基地有待认证；产业化深加工链条短，深加工明显不足；缺乏品牌、国际竞争力。而且目前对德赢vwin登录 的研究更多的是基础研究，在新药、保健品、食品等领域上的开发、应用上仍然比较欠缺。因而，保护肉苁蓉野生资源，加强规范化、规模化人工种植研究和技术推广，并在药用研究基础上，进行更广泛和更深层的研究，开发更多的产品特别是食品及保健品，扩大其在相关等领域的应用，仍然是发展德赢vwin登录 产业的重要任务。参考文献：［１］　中国科学院中国植物志编委会．中国植物志［Ｍ］．北京：科学出版社，１９９０：６９，７１，８４－８７．［２］　新疆植物志编委会．新疆植物志［Ｍ］．乌鲁木齐：新疆科学技术出版社，２００４：４，４２６－４２８．［３］　中国药材公司．中国中药资源丛书：中国常用中药材［Ｍ］．北京：科学出版社，１９９５：８４４－８５０．［４］　堵年生，周丕文，王健，等．德赢vwin登录 化学成分的研究［Ｊ］．中国药科大学学报，１９９３，２４（１）：４６－４８．［５］　宋志宏，屠鹏飞．德赢vwin登录 的苯乙醇苷类成分［Ｊ］．中草药，２０００，３１（１１）：８０８－８１０．［６］　宋志宏，莫少红，陈燕，等．德赢vwin登录 化学成分的研究［Ｊ］．中国中药杂志，２０００，２５（１２）：７２８－７３０．［７］　Ｙｏｓｈｉｋａｗａ　Ｍ，Ｍａｔｓｕｄａ　Ｈ，Ｍｏｒｉｋａｗａ　Ｔ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｈｅｎｙｌｅｔｈａｎｏｉｄｏｌｉｇｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ　ａｎｄ　ａｃｙｌａｔｅｄ　ｏｌｉｇｏｓｕｇａｒｓ　ｗｉｔｈ　ｖａｓｏｒｅｌａｘａｎｔ　ａｃｉｖｉｔｙｆｒｏｍ　Ｃｉｓｔａｎｃｈｅ　ｔｕｂｕｌｏｓａ［Ｊ］．Ｂｉｏｏｒｇ　Ｍｅｄ　Ｃｈｅｍ，２００６，１４：７４６８－７４７５．［８］　Ｘｉｅ　Ｈ　Ｈ，Ｍｏｒｉｋａｗａ　Ｔ，Ｍａｔｓｕｄａ　Ｈ，ｅｔ　ａｌ．Ｍｏｎｏｔｅｒｐｅｎｅ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｆｒｏｍ　Ｃｉｓｔａｎｃｈｅ　ｔｕｂｕｌｏｓａ：ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ　ｏｆ　ｋａｎｋａｎｏｓｉｄｅｓＡ－Ｅ　ａｎｄ　ｋａｎｋａｎｏｌ［Ｊ］．Ｃｈｅｍ　Ｐｈａｒｍ　Ｂｕｌｌ，２００６，５４（５）：６６９－６７５．［９］　贾晓光，谢海辉，李勇，等．德赢vwin登录 化学成分研究［Ｊ］．新疆大学学报，２００７，２４（７）：２１４－２１６．［１０］　薛德钧．德赢vwin登录 化学成分研究［Ｊ］．中国中药杂志，１９９７，２２（３）：１７０－１７１．［１１］　吴波，顾少菊，傅玉梅，等．肉苁蓉和德赢vwin登录 通便与补肾壮阳药理作用的研究［Ｊ］．中医药学刊，２００３，２１（４）：５３９－５４０．［１２］　李勇，熊元君，贾晓光，等．德赢vwin登录 提取物对高盐饲养大鼠血压、红细胞膜流动性及全血黏度的影响［Ｊ］．天然产物研究与开发，２００９，２１（０５）：２２０－２２２．［１３］　Ｌｉｕ　Ｊ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｃｉｓｔａｎｃｈｅ　ｏｎ　ａｎｔｉ－ａｇｉｎｇ［Ｊ］．Ｉｎｆ　Ｔｒａｄｉｔ　Ｃｈｉｎ　Ｍｅｄ，２００５，２２（２）：２０－２１．［１４］　施大文，何松春，蒋莹，等．中药肉苁蓉及其同属生药对免疫功能及酯质过氧化的作用［Ｊ］．上海医科大学学报，１９９５，２２（４）：３０６－３０８．［１５］　张洪泉，翁晓静，陈莉莉，等．德赢vwin登录 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［摘要］ 目的: 建立德赢vwin登录 提取物正丁醇残留量的检测方法，优选残留正丁醇的最佳去除工艺。方法: 以正丁醇残留量为考察指标，运用气相色谱法测定正丁醇残留量，采用正交试验方法，优选最佳的残留正丁醇去除工艺。结果: 正丁醇残留量检测方法平均回收率为100. 5%，ＲSD 值为1. 83%。德赢vwin登录 提取物残留正丁醇最佳去除工艺为每次加水0. 8 倍，80 ℃旋转蒸发3 次，测得正丁醇残留量符合《中华人民共和国药典》规定限量标准。结论: 本正交设计试验所得的正丁醇残留量检测方法准确可靠，优选的正丁醇去除工艺简便、可行，为后续研究提供参考。［关键词］ 德赢vwin登录 提取物; 正丁醇; 残留量; 气相色谱法德赢vwin登录 Cistanche tubulosa( Schenk) Ｒ. Wight为列当科植物，具有壮阳补肾、益精血、润肠通便等功效［1］。主要分布于新疆南疆的塔克拉玛干沙漠及其周围地区，是新疆特色植物资源，主产于塔里木盆地，资源较丰富，栽培技术成熟［2］。目前已收载于《中华人民共和国药典》。目前从德赢vwin登录 中分离得到的化合物主要有苯乙醇苷类、木脂素类、环烯醚萜苷类化合物等。现代药理研究表明，德赢vwin登录 中苯乙醇苷类化合物具有补益［3］、抗氧化、保肝和神经保护作用［4-5］。朱乃亮等［6］研究表明，德赢vwin登录 中苯乙醇苷类成分含量明显高于其他肉苁蓉，且苯乙醇苷类成分含量明显高于环烯醚萜苷类成分。王毓杰［7］采用大孔树脂从德赢vwin登录 中制备出苯乙醇苷化合物，筛选出稳定可行的纯化工艺。李承花等［8］采用反相高效液相色谱法( ＲP-HPLC) 同时测定了德赢vwin登录 中4 种苯乙醇苷的含量。近年来研究发现，德赢vwin登录 中苯乙醇苷类成分在神经保护和抗神经退行性疾病方面，尤其是在抗老年痴呆方面具有良好的应用前景，已成为人们研究的热点。课题组前期通过体内外药效筛选表明，德赢vwin登录 中的苯乙醇苷类化合物毛蕊花糖苷对冈田酸诱导的Alzheimer 病细胞模型具有保护作用、对东莨菪碱诱导的小鼠记忆功能障碍模型具有拮抗作用、对D-半乳糖制备衰老模型具有拮抗作用，并从整体动物、细胞以及分子生物学水平开展了毛蕊花糖苷抗AD 作用机制的研究。目前已对其制备工艺进行系统研究，其中正丁醇萃取德赢vwin登录 ，从而获得纯度较高的中间品是关键的环节，正丁醇萃取后，减压浓缩得到含量较高的含毛蕊花糖苷萃取物。然而， 《中华人民共和国药典》中将正丁醇列为第三类溶剂，虽然毒性低，但是正丁醇大量残留会对皮肤和呼吸系统造成刺激，还会引起全身不适。因此，为控制最终产品的质量，保障药物的用药安全，完善德赢vwin登录 有效成分毛蕊花糖苷的富集工艺，使其萃取物中正丁醇的残留量不超过《中华人民共和国药典》规定的限度。1 材料1. 1 仪器GC-2010 高效气相色谱仪( 日本岛津公司) ;BS224S 电子天平( 赛多利斯科学仪器北京有限公司) ; S2840HP 超声波清洗器( 上海亚荣科导超声仪器有限公司) ; DHG-9123A 电热恒温鼓风干燥箱( 上海精密试验设备有限公司) ; N-1200B 旋转蒸发仪( 上海爱朗仪器有限公司) ; SHZ-24 水浴恒温振荡器( 上海梅香仪器有限公司) 。1. 2 试药德赢vwin登录 购自新疆麦迪森维药有限公司( 批号: 20161211) ; 德赢vwin登录 提取物由新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所药剂研究室制备( 德赢vwin登录 经65%乙醇提取后，提取液减压浓缩、干燥制备得到干浸膏，批号: 20170603，干浸膏水溶解混悬后，正丁醇萃取，收集正丁醇层，浓缩干燥即得) ; 正丁醇、甲醇( 天津市富宇精细化工有限公司，色谱纯) ; 其他试剂为分析纯; 去离子水。2 方法与结果2. 1 正丁醇去除工艺本工艺采用共沸法对德赢vwin登录 提取物中残留的正丁醇进行去除，即在德赢vwin登录 提取物中加入水为夹带剂，与正丁醇形成水-正丁醇共沸物，降低沸点，从而使德赢vwin登录 提取物中残留正丁醇能够被带出［9］，使药液中正丁醇尽量去除。2. 2 因素与水平选取旋蒸温度( A) 、加水量( B) ( 以德赢vwin登录 提取物的体积倍数计) 及加水次数( C) 作为本试验考察因素，以去除后的残留正丁醇残的量为考察指标，采取正交试验设计，优选得到最佳的去除残留正丁醇的工艺。2. 3 正交试验方法根据正交设计试验中因素及水平，将100 mL 德赢vwin登录 提取物减压蒸出正丁醇-水混合液，观察少有或没有溶剂蒸出时，视为正丁醇去除效果能够满足要求，用甲醇将所得的浓缩物溶解至100 mL 容量瓶中并定容，测定其中正丁醇的含量。2. 4 正丁醇残留量测定2. 4. 1 色谱条件Agilent DB-WAX 色谱柱( 30 m ×0. 32 mm，0. 5 μm) ，FID 检测器; 进样口温度:220 ℃; 检测口温度: 240 ℃; 恒温程序: 温度35 ℃，保持15 min，进样量1 μL，进样方式为不分流进样。2. 4. 2 对照品溶液的制备取50 mg 正丁醇溶液，精密称定，置于100 mL 量瓶中，用色谱甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。2. 4. 3 供试品溶液的制备取所制溶液约1. 0 g，精密称定，置于10 mL 容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。2. 4. 4 线性关系考察精密量取2. 4. 2 项下配置的正丁醇对照品溶液适量，分置于10 mL 量瓶中，配制成质量浓度分别为0. 05、0. 5、5、50、100、150 μg·mL －1的待测样，甲醇定容，摇匀，依次精密吸取1 μL，注入气相色谱仪，以峰面积为纵坐标，以对照品质量浓度为横坐标，进行线性回归，得线性方程Y =13 609X + 13 095 ( r = 0. 999 5 ) ，表明正丁醇在0. 05 ～ 150 μg·mL － 1线性关系良好。2. 4. 5 精密度试验精密吸取同一对照品溶液按照2. 4. 1 项下色谱条件进行分析，连续进样6 次，得正丁醇峰面积的ＲSD 为1. 74%，表明仪器精密度良好。2. 4. 6 稳定性试验取正交试验1 号样品母液，依据2. 4. 1 项下色谱条件，分别在0、2、4、6、8、10 h进样检测，计算ＲSD 为1. 48%，表明其在10 h 内稳定性良好。2. 4. 7 重复性试验精密称取正交试验1 号样品母液6 份各1. 0 g，依据2. 4. 1 项下色谱条件进样，计算ＲSD 为1. 51%，表明方法重复性良好。2. 4. 8 加样回收率试验精密吸取9 份正交试验1 号样品母液约0. 5 g，精密称定，精密加入100 μg·mL － 1的对照品溶液2. 25 mL，置10 mL 量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，按照2. 4. 1 项下色谱方法进样测定，得平均回收率为100. 5%，ＲSD 为1. 83%，表明方法准确、可靠。2. 4. 9 最低检出限及定量限采用逐步稀释法进行测定，以信噪比约为3∶1 时计算最低检出限，以信噪比约为10∶1 时计算定量限，结果正丁醇的最低检出限为25 ng·mL － 1，定量限为40 ng·mL － 1。2. 4. 10 正交试验样品测定依次在2. 4. 1 色谱条件下重复2 次测定正交试验制备得到的样品，以峰面积和2. 4. 4 中的线性方程计算出供试品浓度，由公式( 1) 可计算出正交试验样品中的正丁醇含量，并得到最佳的德赢vwin登录 提取物残留正丁醇去除工艺。正丁醇含量( %) =( 浓度× 体积)干浸膏质量× 100 ( 1)由方差分析结果可知，旋蒸温度、加水量和旋蒸次数均显著影响德赢vwin登录 提取物中残留正丁醇的去除。直观分析结果表明，各因素对德赢vwin登录 提取物中正丁醇残留量影响顺序为C ＞ A ＞ B。因此，确定去除德赢vwin登录 提取物中残留正丁醇的最佳工艺为A2B3C3，即80 ℃减压浓缩3 次，每次加水量为0. 8 倍，见表1 ～ 2。2. 4. 11 最佳工艺验证实验取德赢vwin登录 提取物3 份，按最佳工艺操作，正丁醇质量分数分别为0. 000 5%、0. 000 5%、0. 000 9%，平均值约0. 000 6%。3 讨论3. 1 正丁醇去除方法的选择目前药物制剂中残留有机溶剂的去除工艺常用的有生物膜萃取法、共沸法以及超临界二氧化碳萃取法等［10-12］。其中共沸法是通过加入蒸馏水，在加热的条件下，蒸馏水与提取物中残留的正丁醇形成水-正丁醇共沸物，新形成的共沸物的挥发性明显比水和正丁醇的挥发性好，因新的共沸物与原来的溶液中的各组分完全不同，它的挥发不影响原溶液的质量; 同时共沸法对设备要求不高，简单的蒸馏装置即可完成，操作简便、效率高，对共沸试剂的质量要求也不高，可同时分离多组分化合物，达到去除有机试剂的目的，尤其是对难分离、沸点相近的物质，也能够实现很好的分离，可操作性强［13］。共沸法作为有效的分离手段主要应用在醇类脱水、稀酸回收、酯类生产等实际生产过程中。目前已有研究报道采用共沸法去除天舒滴丸、六味生物制剂制备过程中残留的正丁醇溶剂［14-15］。德赢vwin登录 有效成分的提取过程中用到了大量的水饱和正丁醇，因此，本研究采用共沸法去除德赢vwin登录 提取物中残留正丁醇并进行工艺优化，以最大限度的去除残留正丁醇，达到《中华人民共和国药典》要求标准。3. 2 色谱条件的选择本研究对气相色谱条件进行了考察，在选择气相色谱柱时，首要考虑的是固定相在待分析供试品和固定相功能团之间有不同的相互作用关系，因此应该尽量多了解色谱柱和待分析的供试品的特点。色谱柱的选择应按照“相似相溶”的基本原理，如被分离的供试品中既有极性物质，又有非极性物质，则沸点相近的极性物质先被分离出来; 被分离的供试品如水、醇等，能够形成氢键，供试品中各组分与色谱柱之间主要是氢键作用力，各组分则按照与色谱柱形成的氢键能力的大小而被先后分离出来，这种供试品则可以选择氢键型色谱柱。如被分离的供试品是极性物质，一般选择极性色谱柱，极性小的先被分离。正丁醇为极性大的有机溶剂，因此本研究中选用极性色谱柱。另外，柱温对分离效能和分析速度影响也很大，是气相色谱法检测中很关键的参数。提高色谱柱的柱温可缩短分析时间，保留时间提前; 降低色谱柱的柱温，则色谱柱对分离的化合物柱选择性更大，有利于提高供试品中各组分的分离度，检测结果的稳定性也得到了提高，延长色谱柱的使用寿命。一般采用色谱柱的柱温考虑等于或高于待测物的平均沸点10 ℃左右。本研究中通过改变柱温，以调节正丁醇色谱峰的保留时间、峰形和分离度，最终采用恒温程序35 ℃。进样方式选择上，一般分流进样适合于可挥发性的供试品，不分流进样的灵敏度明显高于分流进样，但由于气相色谱进样口的温度、色谱柱的初始温度等参数都与溶剂的沸点有直接的关系，不分流进样对供试品溶剂要求较为严格，一般溶剂色谱峰的峰较大，易覆盖供试品色谱峰，只有溶剂的极性与供试品的极性相匹配，才能保证溶剂在被测供试品出峰之前就出峰，而选择高沸点溶剂比低沸点溶剂更有利于分析供试品，本研究中的测定对象，正丁醇的沸点是117. 7 ℃，沸点较高，采用不分流进样方式，适当改变初始温度，实现固定相聚焦，有利于获得可靠、可信的分析结果，还能够缩短分析时间，因此本研究中选择不分流进样方式。4 结论与展望实验结果表明，各因素对德赢vwin登录 提取物中正丁醇残留量影响顺序为C ＞ A ＞ B，提取物经优选的最佳去除工艺为A2B3C3，即80 ℃减压浓缩3次，每次加水量为0. 8 倍，经处理后，验证实验结果测得残留正丁醇平均质量分数为0. 006 6‰，远低于《中华人民共和国药典》规定的限度。因此，本研究所优选的德赢vwin登录 提取物中萃取后残留有机溶剂去除工艺及正丁醇残留量检测方法可应用于生产的内控质量标准，具有成本较低，操作简便，安全等特点，实际应用价值较大。中药所含成分复杂，在满足其中的有效成分能都够提取的同时保证有机试剂的残留量低于《中华人民共和国药典》限度，从而保证药物使用的安全性。目前有机溶剂萃取法被越来越多地应用于中药中化合物提取与分离，而残留溶剂的去除与残留量检测是当前新药研发及其质量控制中必须要解决的问题，也是提高中药有效成分提取物质量标准的关键。本实验优选的去除德赢vwin登录 有效部位提取物中正丁醇的方法，也为其他同类工艺研究提供参考。参考文献［1］ 国家药典委员会． 中华人民共和国药典: 一部［M］．北京: 中国医药科技出版社，2015: 135．［2］ 巴哈尔古丽·阿尤甫，徐业勇，郭泉水，等． 德赢vwin登录 资源、贸易与人工培植的调查与分析［J］． 中国野生植物资源，2013，32( 2) : 47-50．［3］ 杨建华，胡君萍，热娜卡·斯木，等． 肉苁蓉苯乙醇总苷对酪氨酸酶活性的抑制作用［J］． 华西药学杂志，2010，25( 5) : 533-535．［4］ 宋光西，马玲云，魏峰，等． 苯乙醇苷的分布及药理活性研究进展［J］． 亚太传统医药，2011，7( 4) : 169-171．［5］ ZHAO Q，GAO J P，LI W W，et al． Neurotrophic and neurorescueeffects of echinacoside in the subacute MPTP mousemodel of Parkinson’s disease［J］． Brain Ｒes，2010，1346:224-236．［6］ 朱乃亮，徐荣，吴海峰，等． 荒漠肉苁蓉和德赢vwin登录 指纹图谱比较研究［J］． 中国药学杂志，2016，51( 13) : 1116-1119．［7］ 王毓杰． 德赢vwin登录 中苯乙醇苷的提取和大孔吸附树脂纯化工艺研究［J］． 中草药，2014，45( 16) : 2344-2347．［8］ 李承花，刘婧慧，徐珍霞． ＲP-HPLC 同时测定德赢vwin登录 中4 种苯乙醇苷的含量［J］． 药物分析杂志，2010，30( 6) : 1003-1006．［9］ ZHU H J，ＲEN X Y，WANG J X，et al． Integrated OMICSguided engineering of bio-fuel butanol-tolerance in photosyntheticSynechocystissp． PCC 6803［J］． Biotechnol biofuels，2013，6( 106) : 14．［10］ 李小兵，钟运斌，龚红梅，等． 粗粒盐酸土霉素生产中正丁醇的回收利用［J］． 江西中医学院学报，2005，17( 4) : 59．［11］ 曹永民，陈玉奎． 一种去除原料中有机溶剂残留的方法:CN201510749659． 1［P］． 2016-02-24．［12］ 胡忠． 利用膜分离技术回收正丁醇/水混合液的工艺研究［J］． 广西化工，1998，27( 3) : 12-15．［13］ 李志卓，姜占坤，张善鹤． 共沸精馏技术研究及应用进展［J］． 山东化工，2015，44( 3) : 33-39．［14］ 王锦玉，张旭，仝燕，等． 天舒滴丸正丁醇去除工艺优选及正丁醇残留量检测［J］． 中国实验方剂学杂志，2011，17( 10) : 15-17．［15］ 杨霞，郭丽冰，翁志平，等． 六味生物制剂有效部位残留正丁醇去除工艺优选及正丁醇残留量检测［J］． 中药新药与临床药理，2014，25( 1) : 82-85．

摘要：目的：制备德赢vwin登录 提取物，分析主要成分，研究其通便作用。方法：测定德赢vwin登录 提取物中水分、灰分、总蛋白、多糖、总黄酮及总苷的含量；采用斑马鱼肠道染色荧光模型，观察德赢vwin登录 对斑马鱼肠蠕动的促进作用。结果：德赢vwin登录 提取物中的多糖是主要成分，含量为40．27％，总苷和总黄酮总含量近25％，另外合有少量的蛋白成分(7．6l％)，水分和灰分总含量不高于8％；德赢vwin登录 提取物在浓度为2001xg／mL、667tLg／mL和2000p。g／mL时对斑马鱼肠蠕动均有促进作用，呈现浓度依赖性，最高促进率可达23．26％，且在所有浓度下没有对斑马鱼造成死亡。结论：此提取物安全无毒，并且保证药效，可开发成预防或治疗便秘的保健食品或者药品。关键词：德赢vwin登录 主要成分润肠通便斑马鱼尼罗红随着饮食结构的改变及精神心理和社会因素的影响，便秘发病率有增加趋势，困扰越来越多的人II．21。据统计，便秘在人群中的患病率高达27％，且有增加趋势13I。便秘患者除会感到身体不适外，还有可能伴有失眠、焦虑、抑郁等心理障碍，严重者会出现腹痛、贫血和消瘦等症状[41。便秘是临床上常见的慢性消化道疾病，通常以排便间隔延长、大便干结、艰涩不畅为主要症状，严重者可导致电解质和酸碱平衡紊乱，引起痔疮、下肢静脉曲张等疾病151。长期便秘则可导致肠道细菌发酵产生致癌物质，刺激肠黏膜上皮细胞，产生异形增生，易诱发癌变16l。因便秘发病率高、病因复杂，患者常有许多苦恼，便秘严重时会影响生活质量同。因此，预防和治疗便秘是保证人类健康并提高生活质量的一个重要方面。德赢vwin登录 为列当科植物德赢vwin登录 Cistanche tubulosa(Sehrenk)R．Wight的干燥带鳞叶的肉质茎，俗称红柳大芸，寄生于怪柳属植物红柳的根上，主要分布于我国新疆北部的和田、奇台、吉木萨尔县以及新疆南部的塔克拉玛干沙漠周围地区，以和田地区的民丰县和于田县产量最大18·91。德赢vwin登录 具有益精血、补肾助阳、延缓衰老等功能，是我国稀有的名贵中药材，在《神农本草经》中被列为上品，为中医常用的补肾壮阳药物，被人们誉为“沙漠人参”flol。其主要活性成分为苯乙醇总苷类物质，代表成分为松果菊苷和毛蕊花糖苷，《中国药典}(2005年版)正式收录⋯1。近年来，国内外学者对于德赢vwin登录 的研究非常活跃，主要集中于德赢vwin登录 的免疫调节、神经保护、抗衰老、清除自由基、保肝等功效方面112】。目前，对于德赢vwin登录 润肠通便药效的研究也有报道，但研究较少。屠鹏飞等对市场上常见的三种肉苁蓉类生药进行了润肠通便的药效比较，结果表明德赢vwin登录 药材的水煎剂可以促进肠蠕动、抑制大肠水分吸收和缩短排便时间1131。张勇等通过肉苁蓉类药材及其炮制品通便作用比较研究认为，德赢vwin登录 药材的酒制品能增加小鼠小肠的推进度，缩短通便时间f141。可见，目前对于德赢vwin登录 润肠通便的研究主要停留在对其原药材的方面，而对于德赢vwin登录 提取物用于预防和治疗便秘等疾病的研究尚未见报道。本文将德赢vwin登录 药材煎煮浓缩后，再经醇沉、干燥等工序制备提取物，并经斑马鱼体内实验验证其润肠通便生物活性，为德赢vwin登录 药材开发利用提供理论基础。l仪器与材料1．1仪器与试剂：R一210型旋转蒸发仪和V一700型真空隔膜泵(美国步琪公司)，Milli—Q Reference纯水机(美国Millipore公司)，XS一205型1／10万电子分析天平(瑞士梅特勒一托利多公司)，FreeZone型冷冻干燥机(美国Labconco公司)，SMZ645型解剖显微镜(13本Nikon公司)，AZl00型电动聚焦连续变倍荧光显微镜(日本Nikon公司)。乙醇为食品级，水为超纯水，其余试剂为分析纯。1．2药材：德赢vwin登录 药材购自新疆和田天力沙生药物开发有限责任公司，经台湾“国防”医学院林汉钦教授鉴定为列当科肉苁蓉属植物德赢vwin登录 Cistanche tubulosa(Sehrenk)R．Wight干燥的肉质茎，符合2015版《中国药典》一部下规定，样品编号为20151 106，储存于杏辉天力(杭州)药业有限公司研究所。1．3实验动物：斑马鱼胚胎的繁殖以自然成对交配的方式进行，每次交配准备4～5对成年斑马鱼。在受精6h和24h后对胚胎进行清理(移除已死亡胚胎)，并根据胚胎的发育阶段挑选合适的胚胎。在温度为28℃条件下，用养鱼用水孵育胚胎(养鱼用水水质：每1L反渗透水中加入200mg速溶海盐，电导率为480～5101．LS／cm；pH值为6．9—7．2；硬度为53．7～71．6mg／L CaC03)。因为胚胎可以从卵黄囊中获取营养物质，所以在受精后9d内不需要喂食。实验完成后，用三卡因甲磺酸对各个发育阶段的斑马鱼进行过度暴露处理，从而将斑马鱼麻醉处死。麻醉处死的操作步骤符合美国兽医协会(AVMA)对动物麻醉处死的规范要求。2实验方法2．1德赢vwin登录 提取物的制备：称取100kg德赢vwin登录 药材，经清洗、浸润60min后，切片(厚度5～8mm)，再加入1000mL纯化水回流提取3h，提取3次，合并以上提取液，离心、过滤。滤液用旋转蒸发仪浓缩至密度为1．109／mL时停止浓缩，冷却至温度40qC，边搅拌边加人体积浓度为95％的乙醇，以调至醇的体积浓度约为65％。静置过夜，离心、去除上清液，沉淀物经真空干燥得到1 1．2kg德赢vwin登录 提取物。2．2德赢vwin登录 提取物成分测定方法：水分含量测定按照GB／T5009．3—20161151；灰分测定按照GB／T 5009．4—20161161；蛋白含量测定按照GB 5009．5—2016中的凯氏定氮法1171；多糖含量测定采用苯酚一硫酸法[181；总黄酮含量测定采用硝酸铝比色法【19l；总苷含量测定采用苯乙苷类测定法㈣。23最大非致死浓度(MNLc)的确定：将德赢vwin登录 提取物用养鱼水配制5个浓度，分别为100p．g／mL、21lI上g／mL、447p,g／mL、9461止g／mL和20001_Lg／mL，同时设空白对照组。每个浓度均处理30尾斑马鱼，处理期间，记录并统计每组斑马鱼死亡数量并及时移除。处理6h后，统计各实验组斑马鱼死亡数量，绘制最佳的浓度效应曲线，并使用Origin统计学软件计算MNLC值。2．4对斑马鱼肠蠕动影响的评价：根据“2．3”项下确定的MNLC值，以浓度为MNLC／IO、MNLC／3和MNLC的3种浓度的德赢vwin登录 提取物处理经尼罗红喂养的斑马鱼，并设模型组和阳性对照组(多潘立酮)，每组浓度(包括模型组和阳性对照组)均处理30尾斑马鱼。处理6h后，在荧光显微镜下拍照，每组随机拍摄数量为15尾，利用NIS—Elements D 3．10高级图像处理软件分析斑马鱼肠道总荧光信号(S，Total fluorescent signal)，肠蠕动促进率=(1一S药物，s模型)x100％。统计学分析采用方差分析和Dunnett s t一检验，P<0．05表示差异显著。3结果与分析3．1德赢vwin登录 提取物的化学成分分析：德赢vwin登录 提取物的化学成分见表1。由表l可知，多糖是德赢vwin登录 提取物的主要成分，含量为40．27％，总苷和总黄酮总含量近25％，另外含有少量的蛋白成分。3．2通便实验：斑马鱼是源自印度、巴基斯坦淡水河的一种小型热带淡水鱼，属于鲤科，与人类基因同源性高达85％，其信号传导通路与人类基本近似，生物结构和生理功能与哺乳动物高度相似，现已被美国国立卫生研究院列为继人和小鼠之后的第三大模式生物，近年来广泛被用于疾病模型建立和药物开发1211。斑马鱼的个体小、易于饲养、胚胎透明易于观察和操作、样品用量少、试验周期短和可实现高通量筛选等优点，且肠道组成与人类非常相似，均由内皮细胞、结缔组织、环状肌和外纵肌组成，可用斑马鱼研究胃肠道生理功能吲。尼罗红(9一二乙基氨基一5H一苯并【d】吩恶嗪一5一酮)是一种荧光染料，可以标记活体细胞培养中的巨噬细胞、平滑肌细胞中的脂滴，因其无毒性，尼罗红染料在脂肪代谢疾病模型中广泛应用于活体染料冽。当斑马鱼卵暴露于尼罗红溶液中，富含脂肪的组织卵黄囊能被结合，在荧光显微镜下清晰显示。当斑马鱼5。6d时，大部分卵黄囊被吸收，斑马鱼开始自发肠蠕动摄食，可以观察到肠道中尼罗红的充盈情况，而不被其他组织吸收㈣。当斑马鱼摄入有助于促进肠蠕动的药物或者食物时，肠道荧光强度会减弱，可根据斑马鱼肠道蠕动情况来评价促进肠动力药物的药效。3．2．1斑马鱼肠蠕动实验测定浓度的确定：德赢vwin登录 提取物用养鱼水配制的1001LLg／mL、21 ltxg／mL、447斗g／mL、9461xg／mL和20001LLg／mL这五个浓度，处理斑马鱼6 h后，统计斑马鱼死亡数量，如表2所示。从表2的实验数据可以看出，斑马鱼在德赢vwin登录 提取物五个浓度下，均没有诱发斑马鱼死亡，可见德赢vwin登录 安全无毒，MNLC浓度即为2000txg／mL。基于此实验结果，确定斑马鱼肠蠕动实验的三个测定浓度，分别为200斗g／mL、667I山g／mL和20001出g／mL。3．2．2斑马鱼肠蠕动实验结果的分析：将发育至第5天的斑马鱼幼鱼置于浓度为200pg／mL、667¨．g／mL和2000p,g／mL的德赢vwin登录 提取物溶液中，并设置模型组和阳性对照组(多潘立酮：2000“g／mL)。处理6 h后，观察并在荧光显微镜下拍照，实验结果如图l所示。从图1可以看出，未经任何药物处理的模型组中的斑马鱼肠道呈现强度较高的荧光，说明肠道染色成功。而经浓度为20001xg／mL多潘立酮处理后的斑马鱼肠道呈现很弱的荧光强度，初步证实造模成功。再经浓度为2001^g／mL、6671xg／mL和20001山g／mL的德赢vwin登录 提取物作用后的斑马鱼肠道的荧光强度信号值也呈现一定的变化，肠道荧光强度信号值如图2A所示。由图2A可知，经多潘立酮作用后，荧光强度信号值较低，也验证了阳性对照多潘立酮具有促进肠道蠕动作用。经三种浓度的德赢vwin登录 提取物作用后，荧光强度信号值随着浓度的提高而降低。根据荧光强度信号值，计算德赢vwin登录 提取物对斑马鱼肠道蠕动的促进作用，结果如图2B所示。从图2B可以看出，德赢vwin登录 提取物对斑马鱼肠道蠕动具有明显的促进作用，随着浓度的提高，促进作用明显增强，呈现浓度依赖性，在浓度为2000lxg／mL时，促进作用达到了23．26％。由此可见，德赢vwin登录 提取物可以通过促进肠道蠕动，达到润肠通便的目的，也恰好印证了民间对于德赢vwin登录 的功效评价。综上所述，德赢vwin登录 提取物具有较好的润肠通便作用，可以作为较好的润肠通便保健食品或者药品进行开发。对于促进肠道蠕动的机制尚不清楚，因此对其作用机制有待实验研究。此外，人类每天有不同程度的体力和脑力消耗且需要应对各种压力，这种情况下德赢vwin登录 提取物能否表现出润肠通便效果还需探讨。4结论本文对德赢vwin登录 提取物进行了化学成分分析，结果表明多糖类化合物是德赢vwin登录 提取物的主要成分，含量在40％左右，总黄酮和总苷总含量近25％，还有少量蛋白类成分(7．61％)。斑马鱼体内实验结果显示德赢vwin登录 提取物在浓度为200～20001乩g／mL时均没有诱发斑马鱼死亡，说明德赢vwin登录 安全无毒。此外，斑马鱼肠蠕动实验表明德赢vwin登录 提取物可明显促进肠蠕动，并呈现浓度依赖性，在浓度为2000lxg／mL时，促进率可达23．26％。由此可以证实德赢vwin登录 提取物具有增强肠蠕动和促进排便的作用，但对于德赢vwin登录 提取物的作用机制尚不清楚，有待实验研究。德赢vwin登录 与荒漠肉苁蓉虽是不同种植物，但这两种植物均为列当科肉苁蓉属植物，同科同属植物具有类似的药理活性。据文献报道，荒漠肉苁蓉多糖具有清除自由基、免疫调节、抗衰老、改善脾虚、抗病毒、抗肿瘤、促进造血等多方面的药理活性，也有报道指出荒漠肉苁蓉的胶质多糖可以显著提高小肠推进度，缩短通便时间，有效地对抗阿托品的抑制排便作用，抑制大肠中水分的吸收125-261。而多糖也是德赢vwin登录 提取物的主要成分，可以推测多糖是德赢vwin登录 提取物的主要活性成分。对于德赢vwin登录 多糖进一步的成分研究和药理活性探讨正在进行。

［摘要］ 目的: 研究德赢vwin登录 提取物的干燥工艺。方法: 以德赢vwin登录 提取物干燥粉末的松果菊苷含量、压缩度、休止角为考察指标，比较板式干燥、带式干燥、喷雾干燥、微波干燥4 种干燥方法，优选较为合适的干燥方法，并应用正交试验法，对其工艺参数进行优化，确定最佳工艺参数。结果: 干燥方法选择喷雾干燥法，干燥条件为浸膏相对密度为1. 15( 50 ℃) ，进风温度190 ℃，进料速度9600 mL·h － 1 ，喷头转速为180 Hz。结论: 优选确定的喷雾干燥条件，适应产业化生产，且能够达到苁蓉总苷胶囊的装填要求。［关键词］ 德赢vwin登录 ; 提取物; 干燥方法; 喷雾干燥; 正交试验肉苁蓉药材为列当科植物肉苁蓉或德赢vwin登录 的干燥带鳞叶的肉质茎，具有补肾阳，益精血，润肠通便的功效［1］，素有“沙漠人参”的美誉［2］。苁蓉总苷胶囊由德赢vwin登录 药材经提取、精制得到的提取物直接充填胶囊而成，具有补肾益髓、健脑益智之功效，临床用于髓海不足证的轻中度血管性痴呆［3］。但在提取物充填胶囊的过程中，存在因提取物流动性较差导致胶囊装量不合格的问题，影响苁蓉总苷胶囊的制剂成型。为解决以上问题，本实验选取不同的干燥方法对提取物进行干燥，以提取物的松果菊苷含量、水分、干燥时间、压缩度和休止角为考察指标［4-6］，优选出可行的干燥方法，并应用正交试验法进行工艺优化，选取出最优干燥参数，为苁蓉总苷胶囊的工艺提升提供参考。1 仪器与材料真空板式干燥箱( 杭州三特医药化工设备有限公司) ; MTVBD-01 真空带式干燥机( 上海朗逸节能有限公司) ; G-10 型喷雾干燥机( 无锡市昌盛干燥机厂) ; HWZ-10B 型微波板式干燥设备( 甘肃天水华圆制药设备科技有限责任公司) ; BT-100SD 数显定时恒流泵( 上海青浦沪西仪器厂) ; EH620A 型变频器( 深圳市西林电气技术有限公司) ; NJP-200 型胶囊充填机( 瑞安市天宏制药机械公司) ; 高效液相色谱仪( Agilent 1260) ; JZ-1 型粉体振实密度测试仪( 昆山市顺诺仪器有限公司) ; Winner2308 智能型全量程干湿一体激光粒度仪( 济南微纳颗粒仪器股份有限公司) 。松果菊苷对照品( 中国食品药品检定研究院，批号: 111670-200503 ) ; 甲醇( 色谱纯) ， 水( 超纯水) ，其余试剂均为分析纯。2 干燥方法的确定2. 1 提取物的制备取德赢vwin登录 药材，经提取浓缩、精制、干燥等工艺步骤，制备成不同相对密度的浸膏，供干燥实验使用。2. 2 松果菊苷的测定方法采用苁蓉总苷胶囊成品中松果菊苷含量测定方法对肉苁蓉提取物中间体制备过程中松果菊苷的含量进行测定。2. 2. 1 色谱条件与系统实用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂: 甲醇-15% 醋酸溶液( 30 ∶70)为流动相; 流速为1 mL·min － 1 ; 检测波长: 333 nm;进样量: 5 μL。理论塔板数按松果菊苷计算，应不低于3000。2. 2. 2 对照品溶液制备取松果菊苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇溶解，制成每1 mL 含松果菊苷0. 1 mg 的溶液，即得。2. 2. 3 供试品溶液制备取本品约100 mg，精密称定，置100 mL 量瓶中，加50%甲醇适量，超声处理2 分钟使溶解，加50% 甲醇至刻度，摇匀，精密量取5 mL，置25 mL 量瓶中，加50%甲醇至刻度，用0. 45 μL 滤膜滤过，即得。2. 2. 4 含量测定法分别精密吸取上述溶液5 μL，按2. 2. 1 项下所示色谱条件测定，并计算结果。2. 3 水分测定法按《中华人民共和国药典》2010 版附录ⅨH 水分测定法项下第1 法测定。2. 4 压缩度测定法将欲测定物料精密称定，轻轻加入粉体振实密度仪的量筒中，计算并记录最松密度ρ0; 于粉体振实密度仪中进行多次振动，直至体积不变为止，测量体积，计算并记录最紧密度ρ1。按公式C =［( ρ1-ρ0) /ρ1］ × 100%计算。2. 5 休止角测定法将物料轻轻地、均匀地落入圆盘的中心部，使粉体形成圆锥体，当物料从粉体斜边沿圆盘边缘中自由落下时停止加料，用量角器测定休止角。反复做5 次，计算平均值。2. 6 干燥方法考察对比采用中药生产中常见的干燥条件［7-10］，板式干燥( 温度: 80 ℃，真空度: － 0. 09 MPa) 、带式干燥( 90 ℃，3000 mL·h － 1 ) 、喷雾干燥( 进风温度:180 ℃，进料速度: 5000 mL·h － 1 ) 、微波干燥( 功率: 800 W) ，各提取物干燥条件均一致。板式干燥、带式干燥、微波干燥所得干膏粉碎后过60 目药典筛，结果见表1。2. 7 结果分析自由流动的药物粉末，因颗粒间相互作用较弱，松体积和压实体积数值上接近，压缩度值较小，流动性较差的药物粉体，有较强的粒子间的相互作用，则松体积与压实体积差距较大，压缩度值较大。一般认为，压缩度≤10%，休止角≤30°，流动性好;压缩度≤25%，休止角≤40°，流动性较好，可以满足制剂成型工艺［5］。而当压缩度≥30%，休止角≥40°时，粉体具有强团聚性，在制剂成型过程中，无法保证粉体剂量的准确。从表1 数据可以看出，四种干燥方式对松果菊苷含量和水分无显著影响。但板式干燥、带式干燥及微波干燥所得提取物的压缩度及休止角明显无法满足提取物直接充填胶囊的要求。而喷雾干燥所得的提取物粉末，压缩度与休止角较为接近胶囊充填所需要求，因此，选择喷雾干燥为最终干燥方式。3 喷雾干燥工艺优化3. 1 正交试验的方法与结果为提升喷干粉的流动性，进行中试放大研究，应用正交试验法，选定可能影响喷干粉流动性的浸膏相对密度( A) 、进料速度( B) 、喷头转速( C) 为考察的3 个因素，每个因素分设3 个水平，结果见表2。以喷干粉的压缩度、休止角和含量为考察指标，采用正交表L9( 34 ) 进行试验，试验结果见表3，方差分析见表4、表5、表6。由表3 直观分析可知，各因素对含量几乎无影响，对压缩度的影响次序为A ＞ B ＞ C，对休止角的影响次序为A ＞ B ＞ C。以压缩度为指标来看，各因素最佳水平为A3B3C3; 以休止角为指标来看，各因素最佳水平为A3B3C3，两者的最佳工艺组合都是A3B3C3。表5 及表6 方差分析结果表明，浸膏的相对密度A 和进料速度B 对压缩度的影响显著，喷头转速C 的影响不显著; 浸膏的相对密度A 对休止角的影响显著，进料速度B 和喷头转速C 的影响不显著。由于喷头转速水平间的差异不显著，可以认为喷头转速在选定的水平内对休止角无影响，因此选定喷头转速为180 Hz。根据上述实验结果，确定其最佳工艺条件为A3B3C3，即浸膏相对密度为1. 15 ℃，进料速度为9600 mL·h － 1，喷头转速为180 Hz。4 喷雾干燥最佳条件验证按初步确定的最佳工艺，即浸膏相对密度为1. 15( 50 ℃) ，进料速度为9600 mL·h － 1，喷头转速为180 Hz 验证三批，以喷干粉的松果菊苷含量( 见图1) 、压缩度、休止角、性状、水分、粒度( 见图2) 为考察指标，并进行胶囊充填实验，考察装量是否符合要求，结果见表7。4. 1 胶囊充填实验将三批喷干粉使用胶囊充填机充填1 号胶囊，所得胶囊随机选取20 粒，称定重量，每粒重量应在0. 276 ～ 0. 324 g，记录，计算平均值与ＲSD 值，结果见表7。4. 2 结果分析3 批验证结果发现，此工艺参数所制备的提取物，80% 以上的粒径在30 ～ 130 μm，平均粒径( Xav) 在60 ～ 70 μm，松果菊苷含量、水分、性状均合格，且具有较好的流动性，符合胶囊的充填要求。5 讨论通过预实验发现，喷雾干燥过程中，浸膏相对密度超过1. 15( 50 ℃) 会堵塞喷干设备的雾化喷头，此外，喷头转速在180 Hz 以下，由于药液旋转不充分，雾化不完全，会导致较严重的粘壁现象，无法持续生产。在干燥过程中，一般以含量及水分作为喷干粉的监控标准，很少检测喷干粉的流动性。但苁蓉总苷胶囊的制备工艺为喷干粉直接充填胶囊，而喷干粉的流动性直接影响到其充填胶囊的质量。所以，喷干粉的流动性也可作为中间体内控标准进行监控。由于传统的流动性检测方法在测定过程中存在一定的误差，而粒径检测精密度高，可重复性好，因此，喷干粉粒径可以作为反应其流动性的重要指标。参考文献［1］ 国家药典委员会． 中华人民共和国药典: 一部［S］． 北京:中国医药科技出版社，2010: 126．［2］ 郝媛媛，岳利君，康建军，等．“沙漠人参”肉苁蓉和锁阳研究进展［J］． 草业学报，2012，21( 2) : 286-293．［3］ 张彦红，朱磊，梁伟雄． 苁蓉总苷胶囊治疗髓海不足型轻中度血管性痴呆40 例［J］． 中医研究，2012，25 ( 6 ) :41-44．［4］ Podczeck F，Newtonewton JM． Powder filling into hardgelatine capsules on a tam Pfilling machine［J］． Int JPharm，1999，185( 2) : 237-245．

［摘要］ 目的观察德赢vwin登录 提取物较长期喂养SD 大鼠后的亚慢性毒性反应。方法试验设2 500 mg /kg． BW、5 000 mg /kg． BW、7 500 mg /kg． BW 3 个剂量组( 分别相当于人体推荐摄入量的100、200、300 倍) ，另设基础饲料对照组，每组雌雄各10只动物。采用拌饲法连续90 d 喂养大鼠后，观察对动物血液学指标、血生化指标、脏体比、进食量及食物利用率和组织病理学指标等的影响。结果雌鼠低剂量组试验中期的血红蛋白( 157. 40 ±8. 77 g /L) 和试验中、末期的红细胞计数( 9. 25 ±0. 65 ×1012 /L、10. 35±1. 27×1012 /L) 均高于对照组( 145. 10±8. 54 g /L、8. 45±0. 51×1012 /L、8. 77±0. 86×1012 /L) ，差异有统计学意义( F= 10. 539，P＜0. 05; F= 6. 881，P＜0. 01; F = 2. 551，P＜0. 05) ; 雄鼠低剂量组甘油三酯( 1. 16±0. 25 mmol /L) 高于对照组( 0. 91±0. 20 mmol /L) ，差异有统计学意义( F = 2. 946，P＜0. 05) ，雄鼠中剂量组血糖( 6. 04 ±0. 45 mmol /L) 低于对照组( 6. 54 ±0. 26mmol /L) ，差异有统计学意义( F= 3. 178，P＜0. 05) ; 其余指标未见异常。结论在本试验条件下，未观察到德赢vwin登录 提取物有明显的毒性反应。［关键词］ 德赢vwin登录 ; 90 天喂养; 血液学; 血生化; 脏体比近年来的食品安全问题日益引起人们更加关注食品质量和食品安全。德赢vwin登录 是列当科肉苁蓉属多年生寄生草本植物，在我国主要分布新疆等地区的沙漠和荒漠等干燥地带。它作为药食两用植物，其治疗保健作用和食用安全性备受人们普遍关注。目前有关它的治疗保健和短期毒性等方面的研究已有报道［1－3］，但较长期接触德赢vwin登录 的亚慢性毒性研究资料尚未见报道。为此，于2010 年对德赢vwin登录 提取物采用拌饲法进行了大鼠90 d 喂养试验，并检测相关指标，为其安全性评价提供依据。1 材料与方法1. 1 材料北京博远欣绿科技有限公司提供的德赢vwin登录 提取物，样品为黄棕色粉末，人体每日推荐量为1500mg /60kg． BW。SD 大鼠由四川省医学科学院实验动物研究所提供，动物生产许可证号为SCXK( 川) 2008 － 19． SPF 级，动物房使用许可证号为SCXK( 川) 2011 －043． 屏障系统，温度20℃ ～ 25℃，相对湿度40% ～ 70%。CX4 型全自动生化分析仪、SysmexXt－2000i 型全自动血细胞分析仪、全自动脱水机及组织包埋机。1. 2 方法［4］ 采用拌饲法给予受试物，设2 500mg /( kg． BW) 、5 000 mg /( kg． BW) 、7 500 mg /( kg．BW) 3 个剂量组( 分别相当于人体推荐摄入量的100、200、300 倍) ，另设基础饲料对照组。将80 只体重60 ～ 86 g 的断乳SD 大鼠随机分为4 组，每组20 只，雌雄各半。以大鼠体重的8% 折算为进食量计，即分别称取1. 5 kg、3. 0 kg、4. 5 kg 受试物，各加基础饲料配制成48kg 含受试物的饲料，充分搅拌混匀后加工成型，钴60 照射后备用。每天用所配饲料喂养动物，连续喂养90 d。每只大鼠单笼喂养，让其自由进食饮水。每天观察动物的行为表现、中毒症状及死亡情况。每周根据进食量和体重计算食物利用率。试验中期取尾血测定血液学指标。试验结束时采血测定血液学指标和血生化指标，解剖动物观察内脏改变，计算肝、肾、脾、睾丸的脏体比，取肝、肾、脾、胃肠、睾丸( 卵巢) 作组织病理学检查。试验数据采用SPSS 11. 0 for Windows 软件进行统计处理。2 结果2. 1 试验期间一般情况观察每天动物的一般行为表现及生长发育正常，未出现中毒症状和死亡。雌雄大鼠的结束体重和增重、进食量及食物利用率与对照组比较，均无差异( 表1) 。2. 2 德赢vwin登录 提取物对试验中期和末期血液学指标的影响雌雄大鼠试验中期及末期血液学指标检测结果与对照组相比较，经统计学处理，除雌鼠低剂量组试验中期的血红蛋白和试验中末期的红细胞计数升高，差异均有统计学意义( F = 10. 539，P ＜0. 05; F = 6. 881，P＜0. 01; F = 2. 551，P＜0. 05) ，其余各项指标，差异均无统计学意义( 表2，表3) 。2. 3 德赢vwin登录 提取物对末期血生化指标的影响雌雄大鼠血生化指标检测结果与对照组相比，除雄鼠低剂量组甘油三酯升高和中剂量组血糖降低，差异有统计学意义( F = 2. 946，P＜0. 05; F = 3. 178，P＜0. 05) ，其余各项生化检测项目均无显著性差异( 表4，表5) 。2. 4 德赢vwin登录 提取物对大鼠脏体比的影响3个剂量组雌雄大鼠的肝体比、脾体比、肾体比以及雄鼠的睾丸体比值与对照组相比较，均无差异( 表6) 。2. 5 组织病理学检查试验结束后处死动物，进行大体解剖，肉眼未见异常改变。取肝、肾、脾、胃、空肠、睾丸( 卵巢) 作组织病理学检查，检查结果显示:对照组有1 例雌性动物肾组织间质局灶性轻度炎细胞浸润; 受试物高剂量组有1 例雄性动物肾组织间质局灶性轻度炎细胞浸润，其余受检组织形态结构正常。以上所发现均为动物自发病变，未见受试物高剂量组引起动物中毒性损伤改变。3 讨论德赢vwin登录 作为传统药食两用品在新疆已有悠久历史，我国已于2005 年将其收入国家药典［5］，肯定了其药用价值，近年来把它作为功能性食品开发其保健作用，德赢vwin登录 提取物具有通便润肠、补肾壮阳、抗衰老、抗氧化和抗辐射等保健作用［6－7］。倪慧等［8－9］的研究表明德赢vwin登录 对小鼠主要脏器未显示明显影响，属无毒级，未见致突变性。研究所用德赢vwin登录 提取物经粗碎过20 目筛后，用75%乙醇回流提取2 次，合并提取液后低温减压浓缩，然后喷雾干燥浓缩液得喷干粉，过80 目筛得细粉即为德赢vwin登录 提取物。德赢vwin登录 提取物连续90 d 采用拌饲法喂养动物后，可见动物生长发育正常，试验期间未见动物出现中毒症状及死亡。各项观察指标的检测结果表明，德赢vwin登录 提取物剂量达到人体推荐量的300 倍时，也未观察到对雌雄大鼠有明显的毒性反应，病理组织学检查也未发现对主要脏器有明明显影响。德赢vwin登录 的短期毒性和亚慢性毒性研究结果表明其对啮齿类动物无明显的毒副作用，不过要进行综合性评价还需流行病学资料的支持。4 参考文献［1］谢静霞，潘伯荣． 德赢vwin登录 研究现状［J］． 中国生态农业学报，2004， 12( 3) : 196-197．［2］侯志华，常国文． 肉苁蓉的药理学研究进展［J］． 中国民族医药杂志， 2003，10( 4) : 50-51．［3］ 胡余明，胡怡秀，刘秀英，等． 苁蓉总苷急性、亚急性及遗传毒性实验研究［J］． 实用预防医学，2006， 13( 5) : 1176-1180．［4］中华人民共和国卫生部． 食品安全性毒理学评价程序和方法［S］． 2003: 85-88．［5］中华人民共和国药典［S］． 2005: 90．［6］吴波，顾少菊，傅玉梅，等． 肉苁蓉和德赢vwin登录 通便与补肾壮阳药理作用的研究［J］． 中医药学刊，2003，21( 4) : 539．［7］赵新杰，夏华玲，王苏静． 肉苁蓉的药理作用研究进展［J］． 综述报告，2009，18( 17) : 77-79．［8］ 倪慧，贾小光． 德赢vwin登录 软胶囊的研制［J］． 中国民族医药杂志， 2007，12( 12) : 59-60．［9］ 汤小蕾，孙平飞． 德赢vwin登录 的研究进展［J］． 中医药导报，2009，15( 5) : 101-104．

摘要：目的　评价德赢vwin登录 提取物的安全性。方法　清洁级ＳＤ大鼠、昆明种小鼠，分别进行急性经口毒性试验、Ａｍｅｓ试验、小鼠骨髓嗜多染细胞微核试验、小鼠精子畸形试验及致畸试验，观察德赢vwin登录 提取物毒性、致突变及致畸作用。结果　德赢vwin登录 提取物急性经口毒性试验最大耐受剂量（ＭＴＤ）均＞１０ｇ／ｋｇ·ｂｗ，属实际无毒物；骨髓微核试验、精子畸形试验、Ａｍｅｓ试验表明该样品无致突变作用；致畸试验结果为阴性，无致畸作用。结论　德赢vwin登录 提取物有较好的安全性，可以用于保健食品的开发。关键词：德赢vwin登录 提取物；安全性；评价　德赢vwin登录 为列当科植物德赢vwin登录 Ｃｉｓｔａｎｃｈｅｔｕｂｕｌｏｓａ （Ｓｃｈｒｅｎｋ．）Ｒ．Ｗｉｇｈｔ的干燥带鳞叶的肉质茎，多年寄生草本植物［１］。其具有补肾阳、益精血、润肠通便之功效［２］，有“沙漠人参”之美誉。现代药理学研究也表明，其具有提高肾功能、抗疲劳、降血压、抗衰老、调节免疫功能等多方面的药理作用［３－４］。德赢vwin登录 因其显著的药理活性在新疆民间有着悠久的应用历史。２００５年日本厚生省批准其为食品应用。开发其相关保健食品有较高的应用价值。但目前德赢vwin登录 还不是国家公布的可以用于保健食品的原料，其安全性及食用剂量是保健产品开发中的难点。本研究通过急性经口毒性试验、Ａｍｅｓ试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、致畸试验对德赢vwin登录 提取物的安全性进行评价，为其开发应用提供更充分的科学依据。１　材料与方法１．１　主要仪器、器材与试剂　ＭＤ２００－３上皿式电子天平，电子称，ＣＸＡ奥林巴斯双瞳显微镜，ＸＴＬ－Ｉ型连续变倍体视显微镜，５００石蜡旋转式切片机，ＴＳ－１２Ｈ生物组织自动脱水机，ＢＭ－ＶＩ生物组织冷冻包埋机，ＬＥＩＴ２２０显微镜，迈瑞ＢＣ－３０００血细胞分析仪，迈瑞ＢＣ－２８００Ｖｅｔ血细胞分析仪，罗氏－４００全自动生化仪。１．２　方法１．２．１　急性经口毒性试验　清洁级昆明种小白鼠２０只，体质量１８～２２ｇ，雌雄各半。称取德赢vwin登录 提取物２５ｇ，加灭菌蒸馏水定容至１００ｍＬ，按２０ｍＬ／ｋｇ·ｂｗ，间隔３ｈ，分２次给予，灌胃后连续观察１４ｄ，记录中毒表现及死亡情况。１．２．２　小鼠骨髓嗜多染红细胞（ＰＣＥ）微核试验　清洁级昆明种小白鼠５０只，体质量２５～３０ｇ，随机分５组，雌雄各半。采用间隔２４ｈ２次经口灌胃法，设德赢vwin登录 提取物低、中、高剂量（１．５、３．０、６．０ｇ／ｋｇ·ｂｗ）组、阴性对照（灭菌蒸馏水）组、阳性对照（４０ｍＬ／ｋｇ·ｂｗ环磷酰胺，１０ｍＬ／ｋｇ·ｂｗ腹腔注射）组。末次给受试物后６ｈ颈椎脱臼处死动物，常规取材、制片、镜检，每只鼠计数１　０００个骨髓嗜多染红细胞，观察含有微核的嗜多染红细胞数，并计数２００个嗜多染红细胞，观察其与成熟红细胞的比值（ＰＣＥ／ＲＢＣ），计算微核率（‰）。微核率（‰）＝（含微核的嗜多染红细胞数／嗜多染红细胞总数）×１００％。１．２．３　小鼠精子畸形试验　雄性清洁级昆明种小鼠２５只，体质量２６～３３ｇ，随机分５组。受试剂量、溶液配制及灌胃量均同微核试验，阳性对照（４５ｍＬ／ｋｇ·ｂｗ环磷酰胺）按１１．２５ｍＬ／ｋｇ·ｂｗ腹腔注射，每日１次，连续５ｄ。末次给受试物后３０ｄ处死动物，取副睾滤液涂片，伊红染色，每只动物计数５　０００个结构完整的精子，计算畸变精子发生率（％）。畸变精子发生率（％）＝（畸变精子数／精子总数）×１００％。１．２．４　Ａｍｅｓ试验　用经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型ＴＡ９７、ＴＡ９８、ＴＡ１００、ＴＡ１０２菌株和多氯联苯（ＰＣＢ）诱导的大鼠肝微粒体酶（Ｓ９）进行试验。设５个试验剂量组（０．００８、０．０４０、０．２００、１．０００、５．０００ｍｇ／皿）及自发回变组、溶剂对照（蒸馏水）组和阳性对照（突变剂）组。阳性剂：－Ｓ９：ＴＡ９７、ＴＡ９８ 为２，４，７－三硝基芴酮（０．２μｇ／皿），ＴＡ１００为叠氮钠（１．５μｇ／皿），ＴＡ１０２为丝裂霉素Ｃ（４μｇ／皿）。＋Ｓ９：ＴＡ９７、ＴＡ９８、ＴＡ１００为２－氨基芴（１０μｇ／皿），ＴＡ１０２为１，８－二羟基蒽醌（５０μｇ／皿）。观察各组回变菌落数变化。１．２．５　致畸试验　清洁级ＳＤ雌性大鼠１００只，体质量２０８～３８０ｇ，雄性大鼠６０只，体质量３０２～４５０ｇ，雌雄大鼠以２∶１进行交配。每组孕鼠不少于１２只，于受孕的第７～１６ｄ，各组动物分别按德赢vwin登录 提取物０．２５、０．５０、１．００ｇ／ｋｇ·ｂｗ的剂量给予，各组均按１０ｍＬ／ｋｇ·ｂｗ灌胃，溶剂对照为蒸馏水。妊娠第２０ｄ剖腹取出子宫称重，记录并检查死胎数、活胎数，记录胎鼠体质量、体长，检查胎鼠外观有无异常。５０％胎鼠进行骨骼检查，另５０％的胎鼠进行内脏检查。１．３　统计学处理　数据采用ＰＥＭＳ３．１Ｆｏｒ　Ｗｉｎｄｏｗｓ进行转化和统计分析。先对数据进行方差齐性检验，若方差齐，采用单因素方差分析进行总体比较，发现差异再用Ｄｕｎｎｅｔｔ检验比较各剂量组与对照组。若方差不齐，改用非参数（秩和检验）进行统计。计数数据采用卡方检验。小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸形试验按Ｐｏｉｓｓｏｎ分布统计处理，检验水准α＝０．０５。２　结果２．１　急性经口毒性试验　以１０ｇ／ｋｇ·ｂｗ的剂量灌胃后，未出现任何不良体征，观察１４ｄ，未见明显中毒症状，无死亡。解剖检查主要脏器未见明显异常变化。雌雄小鼠急性经口毒性试验最大耐受剂量（ＭＴＤ）均＞１０ｇ／ｋｇ·ｂｗ。德赢vwin登录 提取物属实际无毒级。２．２　小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验　经灌胃，雌雄各剂量组小鼠骨髓微核率未发生明显改变（受检ＰＣＥ数为５　０００个），各剂量组小鼠嗜多染红细胞微核率与阴性对照组比较差异无统计学意义（Ｐ ＞０．０５），阳性对照组微核率高于阴性对照组，差异有统计学意义（Ｐ ＜０．０１），即德赢vwin登录 提取物微核试验结果为阴性，见表１。２．３　小鼠精子畸形试验　各剂量组对雄性小鼠精子畸变率未产生明显改变，各组与阴性对照组比较，差异无统计学意义（Ｐ ＞０．０５），阳性对照组小鼠精子畸变率高于阴性对照组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。表明德赢vwin登录 提取物对小鼠精子未产生畸变作用，见表２。２．４　Ａｍｅｓ试验　各剂量组回变菌落数均未超过自发回变菌落数的２倍，亦无剂量－反映关系，而阳性对照组明显大于自发回变菌落数，故对鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型ＴＡ９７、ＴＡ９８、ＴＡ１００、ＴＡ１０２　４株菌株，在加与不加Ｓ９时，均未见有致突变作用，见表３。２．５　致畸试验　各剂量组孕鼠及胎鼠的各项指标及死胎率与对照组相比较，差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）；各组胎鼠内脏检查均未发现有畸形，但各剂量组和对照组动物骨骼检查均发现个别胎鼠胸骨骨化不全。根据ＧＢ１５１９３－２００３中的致畸试验评价标准判定，各剂量组未发现有致畸作用。３　结论为了给德赢vwin登录 相关产品开发提供更充分的依据，本研究对德赢vwin登录 提取物的安全性进行了评价，急性经口毒性试验表明德赢vwin登录 提取物最大耐受剂量（ＭＴＤ）＞１０ｇ／ｋｇ·ｂｗ，属实际无毒物；３项遗传毒性试验（骨髓微核试验、精子畸形试验、Ａｍｅｓ试验）结果均为阴性，表明该样品无致突变作用；致畸试验结果为阴性，表明无致畸作用。德赢vwin登录 提取物有较好的安全性，可以用于保健食品的开发。参考文献：［１］　国家药典委员会．中华人民共和国药典：一部［Ｓ］．２０１０年版．北京：化学工业出版社，２０１０：１２６．［２］　侯志华，常国文．肉苁蓉的药理学研究进展［Ｊ］．中国民族医药杂志，２００３，９（４）：３－４．［３］　金秀莲，张庆荣．肉苁蓉化学成分研究进展［Ｊ］．中国中药杂志，１９９４，１９（１１）：６９５－６９７．［４］　李勇，熊元君，贾晓光，等．德赢vwin登录 提取物对高盐饲养大鼠血压、红细胞膜流动性及全血黏度的影响［Ｊ］．天然产物研究与开发，２００９，２１（５）：２２０－２２２．

摘要目的: 研究德赢vwin登录 水提物的安全性。方法: SPF 级昆明种小鼠、清洁级SD 大鼠，分别进行急性经口毒性试验、Ames 试验、小鼠骨髓嗜多染细胞微核试验、小鼠精子畸形试验及90 天喂养试验，观察德赢vwin登录 提取物毒性、致突变作用。结果: 德赢vwin登录 提取物急性经口毒性试验MTD ＞ 20g /kg，属无毒级; 骨髓微核实验、精子畸形实验、Ames 实验表明该样品无致突变作用; 90 天喂养试验对大鼠未见明显毒副作用。结论: 德赢vwin登录 提取物有较好的安全性。关键词德赢vwin登录 提取物安全性评价德赢vwin登录 Cistanche tubulosa( Schrenk) Wight 为肉苁蓉药用品种之一［1］，具有补肾阳、益精血、润肠通便之功效，现代药理学研究表明其具有壮阳、抗衰老、增强记忆力、降血脂、调节免疫、抗疲劳等多种药理作用［2 － 6］。德赢vwin登录 主产于新疆南疆地区，当地少数民族常将其作为炖汤、煮肉、泡茶、泡酒、下面之品食用，具有较好的药食两用价值。但由于德赢vwin登录 只是在局部地区有食用习俗，研究者更多的是关注其药理活性，对于德赢vwin登录 的食用安全性文献研究较少。本实验对德赢vwin登录 水提物进行安全性研究，为其开发利用提供更充分的科学依据。1 材料1. 1 样品的制备将德赢vwin登录 水煮、浓缩、干燥制得，1g提取物中相当于6g 药材。1. 2 主要仪器MD200 － 3 上皿式电子天平; CXA 奥林巴斯双瞳显微镜; XTL － I 型连续变倍体视显微镜; 500 石蜡旋转式切片机; TS － 12H 生物组织自动脱水机; BM － VI 生物组织冷冻包埋机; LEIT220 显微镜; 雅培CD3700 全自动血球计数仪; OLYMPUS AU400 全自动生化分析仪。1. 3 动物SPF 级昆明种小鼠，SD 大鼠，由长沙市天勤生物技术有限公司提供，许可证号SCXK( 湘) 2009 － 0012.2 实验方法2. 1 急性经口毒性实验清洁级昆明种小鼠20 只，体质量18 ～ 22g，雌雄各半。采用最大耐受剂量法，剂量为20g /kg，称取德赢vwin登录 提取物50g，加灭菌蒸馏水定容至100 mL，按0. 2mL/10g，间隔4 小时，分2 次给予，灌胃后连续观察14 天，记录中毒表现及死亡情况。2. 2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验清洁级昆明种小鼠50 只，体质量25 ～ 30g，随机分5 组，雌雄各半。采用间隔24小时两次经口灌胃法，设低、中、高剂量组( 2. 5、5. 0、10. 0g /kg 肉苡蓉提取物) 、阴性对照组( 灭菌蒸馏水) 、阳性对照组( 0. 04g /kg 环磷酰胺) 。末次给药后6 小时颈椎脱臼处死动物，常规取材、制片、镜检，每只鼠计数1 000 个骨髓嗜多染红细胞，观察含有微核的嗜多染红细胞数，并计数200 个嗜多染红细胞，观察与成熟红细胞的比值( PCE/ＲBC) ，计算微核率( ‰) 。2. 3 小鼠精子畸形实验雄性清洁级昆明种小鼠25 只，体质量25 ～ 35g，随机分5 组。受试剂量、溶液配制及灌胃量均同2. 2 微核试验，阳性对照组( 0. 04g /kg 环磷酰胺) 腹腔注射。每日1 次，连续5 天，末次给受试物后30 天处死动物，取副睾滤液涂片，伊红染色，每只动物计数1 000 个结构完整的精子，计算畸变精子发生率( %) 。2. 4 Ames 实验用经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102 菌株和多氯联苯( PCB) 诱导的大鼠肝微粒体酶( S － 9) 进行试验。设5 个实验剂量组( 0. 008、0. 040、0. 200、1. 000、5. 000mg /皿) 及自发回变组、溶剂对照组( 蒸馏水) 和阳性对照组( 突变剂) 。阳性剂: － S9: TA97、TA98 为9 － 芴酮( 0. 2μg /皿) ，TA100 为NaN3 ( 1. 5μg /皿) ，TA102 为MMC ( 0. 5μg /皿) 。+ S9:TA97、TA98、TA100 为2 － AF( 100. 0μg /皿) ，TA102 为1. 8 －二羟基蒽醌( 50. 0 μg /皿) ，观察各组回变菌落数变化。2. 5 90 天喂养实验清洁级SD 大鼠80 只，雌雄各半，随机分4 组。低、中、高剂量组分别为1. 33、2. 67、4. 00 g /kg，各组均按1. 0mL/100g 灌胃，溶剂对照为蒸馏水，每日1 次，连续90 天。每天记录给食量和剩食量，每周称1 次体重，计算食物利用率。实验中期，禁食16 小时，采血至抗凝管和非抗凝管，抗凝管全血用雅培CD3700 全自动血球计数仪测定血红蛋白、红细胞压积，进行红细胞、白细胞、血小板计数及白细胞分类; 非抗凝管血分离血清后用OLYMPUSAU400 全自动生化分析仪测定总蛋白、白蛋白、肌酐、尿素氮、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、胆固醇、甘油三酯和血糖。实验末期同上禁食，摘眼球采血测定血常规及血生化指标，禁食前和禁食后称重动物体重，采血后颈椎脱臼处死动物作大体解剖，取肝、肾、脾、胃、肠、睾丸( 卵巢) 做病理切片检查。2. 6 统计学处理采用SPSS11. 0 统计软件，先对数据进行方差齐性检验，若方差齐，采用单因素方差分析进行总体比较，发现差异再用Dunnett 法进行检验。若方差不齐，则对原始数据进行适当的变量转换，满足方差齐性检验后，用转换后的数据进行统计; 若变量转换后仍方差不齐，改用秩和检验进行统计，发现总体比较有差异，采用不要求方差齐性的Tamhane’sT2检验进行两两比较。检验水准α = 0. 05。3 结果3. 1 急性经口毒性实验以20g /kg 剂量灌胃后，未出现任何不良体征，观察14 天，未见明显中毒症状，无死亡。解剖检查主要脏器未见明显异常变化。雌雄小鼠急性经口毒性实验最大耐受剂量( MTD) 均＞ 20g /kg。德赢vwin登录 提取物属无毒级。3. 2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验经灌胃，雌雄小鼠各剂量组骨髓微核发生率未发生明显改变( 受检PCE 数为5000) ，各剂量组小鼠嗜多染红细胞微核率与阴性对照组比较差异无统计学意义( P ＞ 0. 05) ，阳性组与阴性组比较差异有统计学意义( P ＜ 0. 01) ，即德赢vwin登录 提取物微核实验结果为阴性，见表1。3. 4 Ames 试验对鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102 4 株菌株，加与不加S － 9 时，各剂量组回变菌落数均未超过自发回变菌落数的2 倍，亦无剂量－ 反映关系，未见有致突变作用，而阳性对照组明显大于自发回变菌落数，见表3。3. 5 90 天喂养试验90 天喂养试验期间，各剂量组动物生长发育、活动正常，无异常行为和中毒症状，无死亡。喂养期间，各剂量组雌、雄大鼠体重增长、进食量、食物利用率、血常规指标、血生化指标、脏器重量、脏器/体重比值与对照组比较无显著性差异( P ＞ 0. 05) ，各剂量组大鼠的肝、脾、肾、胃、肠、睾丸( 卵巢) 均未见与实验因素有关的组织病理学变化。4 讨论4. 1 本实验根据《保健食品检验与评价技术规范》［7］，急性经口毒性试验表明德赢vwin登录 水提物MTD ＞ 20g /kg，属无毒物; 3 项遗传毒性实验结果均为阴性，德赢vwin登录 水提物无致突变作用; 90 天喂养试验未见样品对大鼠有明显毒副作用; 德赢vwin登录 水提物有较好的安全性。4. 2 德赢vwin登录 产业是生态经济型产业，种植肉苁蓉必先种植红柳，红柳为防风固沙的先锋植物，对生态环境有良好的保护作用。新疆和田地区人工种植德赢vwin登录 已达30 万亩以上，伴随着德赢vwin登录 种植规模与产量的逐渐扩大，仅在药品上的使用规模是无法促进该产业的良好发展。本实验依据民间食用德赢vwin登录 的方法，对德赢vwin登录 的水提物进行了安全性评价研究，为其在食品等领域的使用提供了一定的科学参考依据。参考文献［1］ 中华人民共和国药典委员会. 中华人民共和国药典. 北京:化学工业出版社， 2010: 126．［2］ 侯志华，常国文. 肉苁蓉的药理学研究进展. 中国民族医药杂志，2003，9( 4) : 3．［3］ 李勇，熊元君，贾晓光，等. 德赢vwin登录 提取物对高盐饲养大鼠血压、红细胞膜流动性及全血黏度的影响. 天然产物研究与开发， 2009，21( 2) : 220．［4］ 吴波，顾少菊，傅玉梅，等. 肉苁蓉和德赢vwin登录 通便与补肾壮阳药理作用的研究. 中医药学刊， 2003， 21( 4) : 539．［5］ 张洪泉，翁晓静，陈莉莉，等. 德赢vwin登录 麦角甾苷对衰老小鼠端粒酶活性和免疫功能的影响. 中国药理学与毒理学杂志，2008， 22( 4) : 270．［6］ 卿德刚，张娟，倪慧，等. 德赢vwin登录 复方制剂缓解体力疲劳功能研究. 新疆中医药，2011，29( 2) : 37．［7］ 中华人民共和国卫生部. 保健食品检验与评价技术规范．2003: 167．

当肉苁蓉的寄主梭梭和柽柳遍布沙漠其间，美丽的肉苁蓉破沙盛开时，这个已越千年的中药，与现代医学的相遇，让它插上隐形的翅膀，延续着一个又一个传奇。“沙漠人参”肉苁蓉肉苁蓉为著名的补益中药，在唐代开元年间(713—741年)的《道藏》中被列入“中华九大仙草”。虽是一味补药，但却“补而不峻”，因此有“从容”之号。《本草汇言》曰“此乃平补之剂，温而不热，补而不峻，暖而不燥，滑而不泄”。肉苁蓉为根寄生植物，其寄主为沙漠先锋植物梭梭、柽柳属植物等。寄主为强旱生植物，肉苁蓉多寄生在其30-100厘米深的支根上。适宜生长在内蒙古、甘肃和新疆西北沙漠地区，素有“沙漠人参”之美誉，具有极高的药用价值。从野生到人工由于肉苁蓉的寄生特性，所以自然繁殖能力很弱，作为中药，肉苁蓉一般在未出土或刚出土时即被采挖。20世纪90年代以前，由于长期乱采滥挖，肉苁蓉野生资源濒临枯竭，荒漠肉苁蓉被列入《野生动植物种国际贸易公约》(CITES)附录Ⅱ，受到保护。1985年，开始有人尝试在梭梭的根部接种荒漠肉苁蓉，开启了肉苁蓉人工种植的历史。但由于对肉苁蓉属植物的寄生机制不了解，早年肉苁蓉的接种率很低，不能实现大面积推广。1990年，北京大学药学院屠鹏飞教授研究发现，肉苁蓉的种子能够诱导寄主根向其方向生长，寄主根部的信号物质诱导肉苁蓉种子萌发，在此基础上建立了肉苁蓉种子撒播模式。屠教授邀请中国农业大学郭玉海教授、阿拉善盟林业治沙研究所原所长田永祯高级工程师、上海交通大学李晓波教授等团队，组成肉苁蓉研究协作组(以下简称“协作组”)，对荒漠肉苁蓉、德赢vwin登录 及其寄主梭梭和柽柳属植物的生物学基础、栽培技术、采收加工等进行了系统研究。通过几十年的努力，一系列关键技术获得突破，不仅实现了肉苁蓉人工种植推广的目标，还不断挖掘出其多个临床价值。到目前为止，新疆、内蒙古、甘肃、青海等省区沙漠中已推广种植梭梭和柽柳600多万亩，接种肉苁蓉230多万亩，年产药材7500余吨，彻底解决了肉苁蓉药用资源短缺问题。同时还治理了大片沙漠，为肉苁蓉主产区和华北地区构筑了一道牢固的生态屏障，为国家节约治沙资金120多亿元，创造了中国特色可持续治理沙漠新方法；带动沙区20余万人致富。荒漠肉苁蓉和德赢vwin登录 肉苁蓉的传统功效为补肾阳、滋肾阴、益精血、润肠通便。科学家们对其化学成分研究后发现，肉苁蓉属植物主要含有苯乙醇苷类、环烯醚萜及其苷类、木脂素苷类、寡糖和寡糖酯类、多糖类、甘露醇和甜菜碱等成分。肉苁蓉按照其来源分为荒漠肉苁蓉和德赢vwin登录 两种。传统认为，德赢vwin登录 不如荒漠肉苁蓉，但实际并不尽然，二者在疗效和用药上各有特色。屠鹏飞团队通过对两种肉苁蓉进行全成分分析和药效比较发现，荒漠肉苁蓉苯乙醇苷类成分含量较低，寡糖类、甘露醇和甜菜碱含量较高，在润肠通便方面作用较强；德赢vwin登录 苯乙醇苷类成分含量较高，寡糖类成分含量相对较低，且不含甜菜碱，在补肾、益精、抗衰老、抗阿尔茨海默病和帕金森病、保肝等方面效果更好。因此临床用药，如果用于通便，应选择荒漠肉苁蓉；如果用于补肾和抗衰老等，应选择德赢vwin登录 。根据其所含成分的药效作用，屠鹏飞团队将德赢vwin登录 的苯乙醇总苷研制成为治疗血管性痴呆的二类新药，将荒漠肉苁蓉通便的有效部位“肉苁蓉总糖醇”研制成为治疗便秘的新药。如何挑选肉苁蓉？荒漠肉苁蓉的原药材呈扁圆柱形，稍弯曲，长3～15cm，直径2～8cm。表面棕褐色或灰棕色，密被覆瓦状排列的肉质鳞叶。体重，质硬，微有柔性，不易折断，断面呈棕褐色，有淡棕色点状维管束，排列成波状环纹。一般消费者购买荒漠肉苁蓉，需认准三点：其一，呈扁圆柱形，表面密被鳞叶；其二，断面维管束排列成深波状环纹；其三，质地较重。荒漠肉苁蓉药材德赢vwin登录 的原药材呈类纺锤形、扁纺锤形或扁柱形，稍弯曲，长5～25cm，直径2.5～9cm。表面棕褐色至黑褐色。断面颗粒状，灰棕色至灰褐色，散生点状维管束。一般消费者购买德赢vwin登录 ，需认准三点：其一，呈类纺锤形或扁纺锤形，表面有鳞叶脱落的痕迹；其二，断面维管束呈点状散生；其三，质地较重，表面有光泽。德赢vwin登录 药材市场上还有一种沙苁蓉，形状细长，呈扁柱形，表面发亮，非常轻，有效成分与药用肉苁蓉不同，而且含量很低，没有肉苁蓉的疗效，属于假药。有些不良商家将其加工后作为野生肉苁蓉销售，提高价格卖给消费者。肉苁蓉伪品——沙苁蓉要避免买到的肉苁蓉是假冒伪劣产品，最有效的办法是到正规药店购买，品质有保障。