摘要德赢vwin登录 和淫羊藿是我国几千年来一直用于强身健体的两种中药。牛磺酸和锌是现代医学中人体的重要组成部分。根据中药配伍的原理，由德赢vwin登录 、淫羊藿、牛磺酸和葡萄糖酸锌组成了复方德赢vwin登录 片。本研究旨在评价新型保健品复方德赢vwin登录 片对小鼠的抗疲劳作用，并探索其抗疲劳作用的机制。选用雄性小鼠，设低、中、高剂量和阴性对照组，分别给予复方德赢vwin登录 片产品和等量纯水，连续灌胃30 天后，测定各组小鼠负重游泳时间、血清尿素氮含量、肝糖原含量和血乳酸水平。与阴性对照组比较，复方德赢vwin登录 片能显著增加小鼠负重游泳时间，加速血乳酸清除，提高肝糖原水平。这些结果表明，复方德赢vwin登录 片能延缓疲劳的产生，这可能与复方德赢vwin登录 片的抗氧化应激效应有关。关键词复方德赢vwin登录 片抗疲劳雄性小鼠抗氧化应激疲劳是体力劳动或脑力劳动后的一个生理过程， 涉及工作能力和活力的显著下降［1］。这可能是由于能量资源消耗、身体内部环境紊乱等原因造成的［2］。当今社会的快速发展，给人们的生活和工作带来了巨大的压力，疲劳已成为一种严重的现象［3］。因此，有必要找到有效的缓解疲劳的方法。肉苁蓉作为补肾、补阳、补血的滋补药，在我国已有2000 多年的历史［4］。药理研究表明，它们具有抗氧化、清除一氧化氮自由基［5］、增强机体免疫力、抗衰老［6］、改善性功能、抗炎、神经保护等多种生物学活性［7-10］。此外，先前的一项研究发现，肉苁蓉的甲醇提取物可提高心肌ATP 生成能力［11］。淫羊藿是“补肾”、“补骨”的著名中药［12］。现代医学研究表明，淫羊藿提取物的主要活性成分是多糖、黄酮苷类、木脂素、萜类和厚朴生物碱［13］，可用于治疗骨质疏松症、心血管疾病、类风湿性关节炎［14］、性功能障碍和炎症等［15， 16］。此外，淫羊藿经常与肉苁蓉一起使用，以提高其疗效［17］。牛磺酸是人体内最丰富的游离氨基酸之一。它可以在几乎所有的组织中发现，特别是心脏、大脑、视网膜、骨骼肌和血小板等［18］。牛磺酸的生理功能有结合胆汁酸、抗氧化、解毒、渗透调节、膜稳定、神经调节等［19， 20］。锌是人体不可缺少的微量元素之一，几乎存在于人体所有的活性酶中［21］。它可以通过维持金属硫蛋白［22］来保护生物结构免受自由基诱导的损伤。在免疫反应调节、伤口愈合等方面也发挥着重要作用［23］。葡萄糖酸锌具有生物利用度高、易于吸收等优点，被广泛应用。根据中药配伍的原则，我们研究的复方德赢vwin登录 片是肉苁蓉、淫羊藿、牛磺酸和葡萄糖酸锌的全新组合，它综合这四种组成成分的功效，能增强抗疲劳效果。本试验通过强迫游泳试验，为复方德赢vwin登录 片的抗疲劳性能评价提供依据。1 材料和方法1． 1 材料复方德赢vwin登录 片由德赢vwin登录 提取物( 折合生药材4． 0 g /d) 、淫羊藿提取物( 折合生药材4． 0 g /d) 、牛磺酸( 0． 4 g /d) 、葡萄糖酸锌( 折合锌10 mg /d) 组成。片剂折合剂量为0． 066 g /kg． Bw。1． 2 主要仪器和试剂BS － 420 全自动生化分析仪( 深圳迈瑞) 、UV 紫外可见分光光度计、JD500 － 2 电子天平。试剂盒( 南京建成赛浩科技有限公司) 、生化分析试剂( 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司) 等。1． 3 试验动物分组及剂量确定SPF 级雄性昆明种小鼠，体重18 ～ 22 g［东南大学医学院实验动物中心生产许可证号: SCXK( 陕)2012 － 003，SCXK( 京) 2012 － 0001］。选取预游泳姿势正确的小鼠160 只，随机分为4 个试验组，每组40只。各试验组均设三个剂量组和阴性对照组，每剂量组小鼠各10 只。试验一组负重游泳试验，试验二组血清尿素氮试验，试验三组肝糖原试验，试验四组血乳酸试验。因人体每日推荐量为4． 0 g /60 kg． Bw ( 0． 066g /kg． Bw) ，故称取1． 98 g、1． 32 g、0． 66 g 样品，分别加蒸馏水至20 mL，混合均匀，定为高、中、低剂量组，另设阴性( 蒸馏水) 对照组。试验组经口给予相应剂量药品( 1 次/天) ，灌胃体积为20 mL /kg． Bw。阴性对照组给予等体积蒸馏水，连续灌胃30 天。然后，分别进行各项指标的测定。1． 4 方法1． 4． 1 小鼠负重游泳试验末次给药30 min 后，在小鼠尾根部负荷5%体重的铅皮，置于游泳箱中游泳( 水深35 cm，水温25℃) 。记录各组小鼠自游泳开始至死亡的时间( 沉至游泳箱底并停止张口呼吸) ，以及小鼠试验前后体重变化。1． 4． 2 小鼠血清尿素氮测定末次给药30 min 后，不负重的情况下置于游泳箱中游泳90 min( 水温30℃) ，休息60 min 后眼球采血0． 5 mL，离心15 min，血清用全自动生化分析仪进行血清尿素氮测定。1． 4． 3 小鼠肝糖原测定末次给药30 min 后处死，解剖取出肝脏，用生理盐水清洗干净，滤纸吸干后按试剂盒要求进行肝糖原测定。1． 4． 4 小鼠血乳酸测定末次给药30 min 后，不负重的情况下置于游泳箱中游泳10 min( 水温30℃) ，于游泳前、游泳后及休息20min 后，各采血三次( 内眦采血， 20μL) ，测定血乳酸含量。血乳酸曲线下的面积( AUC) ［24］根据以下公式计算:Cs =1/2 !( C0 + C1) !10 +1/2 !( C1 + C2) !20Cs 是血乳酸曲线下的面积。C0、C1 和C2 分别是游泳前、游泳后和休息20 min 后小鼠的血乳酸浓度。1． 4． 5 数据统计处理所有统计数据均采用SPSS 17． 0 版Windows 软件进行。通过单因素方差分析估计各组间的差异。数据表示为平均值± 标准差( X ± S) 。概率值( P) 小于0． 05 被认为具有统计学意义。2 结果2． 1 对体重的作用试验过程中及时记录小鼠体重，如表1。与对照组相比，各剂量组体重变化无显著性差异( P ＞0． 05) 。2． 2 对小鼠耐力的作用由图1 可见，饲喂复方德赢vwin登录 片高、中、低剂量组的小鼠游泳力竭时间均得到不同程度的延长，其中高剂量组小鼠游泳力竭时间与阴性对照组相比，呈极显著差异( P ＜ 0． 01) ，说明高剂量组可以显著提高游泳力竭时间，小鼠的运动耐力显著增强。2． 3 对小鼠血清尿素氮的作用由图2 可见，相较于阴性对照组，饲喂复方德赢vwin登录 片低剂量组小鼠的血清尿素氮有所下降，但下降无显著性差异( P ＞ 0． 05) 。而高、中剂量组比阴性对照组的血清尿素氮稍有升高，仍无显著性差异。这说明复方德赢vwin登录 片对运动小鼠的血清尿素氮含量的影响不显著。2． 4 对小鼠肝糖原水平的作用由图3 可见，饲喂复方德赢vwin登录 片的高、中、低剂量组小鼠的肝糖原含量比阴性对照组均有不同程度的增加。其中高剂量组肝糖原含量的增加相较于对照组有显著性差异( P ＜ 0． 05) 。2． 5 对小鼠血乳酸含量的作用由表2 可见，饲喂复方德赢vwin登录 片的高、中、低剂量组小鼠的三个时间点血乳酸曲线下面积均小于阴性对照组，且高剂量组与阴性对照组相比有显著性差异( P ＜ 0． 05) 。3 讨论疲劳是运动后机体产生的一种复杂的应激性反应。运动耐力宏观反应了机体抗疲劳的能力，而负重游泳时间的长短直接体现了运动耐力的情况，对评价抗疲劳和运动耐力有重要意义［25］。试验结果显示，复方德赢vwin登录 片高、中、低剂量组都不同程度地增长了力竭时间，特别是高剂量组更是显著性的延长了小鼠的力竭时间，提示复方德赢vwin登录 片可以显著提高机体的运动耐力，延缓疲劳的产生。为了进一步研究复方德赢vwin登录 片的抗疲劳性能，测定了几种与疲劳相关的生化指标—肝糖原、血乳酸和血清尿素氮。文献报道［26］，运动衰竭是伴随糖原的耗竭产生的。当剧烈运动时，血糖和肌糖原的消耗急剧上升，这时肝糖原就会转化为血糖以维持机体的血糖平衡，因此，肝糖原的含量是反映机体疲劳程度的敏感指标之一。试验中，饲喂复方德赢vwin登录 片的各剂量组肝糖原的含量明显比对照组高，特别是高剂量组相较于阴性对照组有显著性差异，提示复方德赢vwin登录 片可以维持运动后肝糖原的含量，使机体有较好的能量储备，减缓疲劳的产生。剧烈运动时，机体代谢加快，产生的代谢产物乳酸进入血液使肌肉酸痛，因此血乳酸水平可以直接反应机体的疲劳程度。试验结果显示饲喂复方德赢vwin登录 片的剂量组运动后血乳酸水平比阴性对照组低，且高剂量组相较于对照组有显著性差异，提示复方德赢vwin登录 片可以显著降低机体运动后血乳酸水平，从而延缓疲劳的产生。蛋白质和氨基酸代谢分解为尿素，来不及排泄时，堆积在体内，影响机体内环境的相对稳定，从而使机体感到疲劳［27］。因此血清尿素氮含量的高低也是评价机体疲劳的重要指标［28］。但是，一般程度的运动蛋白质参与很少，只有当糖和脂肪代谢不足以为机体提供足够的能量时，蛋白质与氨基酸的分解代谢才会加强，以补充机体对能量的需求。试验结果显示，相较于阴性对照组，饲喂复方德赢vwin登录 片的各剂量组的血清尿素氮含量没有显著性差异。可能复方德赢vwin登录 片对机体运动后血清尿素氮的清除没有太大影响或者是因为肝糖原储备量的增加导致参与代谢的蛋白质和氨基酸变化不大，这需要更多的试验来验证。过度运动会破坏氧化和抗氧化系统之间的平衡［29］。氧化应激已被证明与疲劳有关。药理研究表明，复方德赢vwin登录 片的组分具有不同程度的抗氧化和自由基清除作用，因此，能有效缓解氧化应激，使其具有抗疲劳作用。参考文献［1 ］Xi，X． ; Guo，S． ; Guo，H． et al． Anti － exercise － fatigueand promotion of sexual interest activity of total flavonoidsfrom wasps drone － pupae in male mice ［J］． Biomed．Pharmacother． 2018，107: 254 -261．［2 ］Li，Z． ; Wu，F． ; Shao，H． et al． Does the Fragrance ofEssential Oils Alleviate the Fatigue Induced by Exercise? 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摘要通过大鼠急性经口毒性试验、三项遗传毒性试验( Ames 试验、鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验) 及30 天喂养试验对复方德赢vwin登录 片安全性进行评价。以26． 40 g /kg·bw 剂量给予大鼠灌胃后，无中毒现象，观察2周动物无死亡，试验结束后大体观察解剖动物未见明显异常。遗传毒性实验结果均为阴性。30 天喂养试验中各剂量组大鼠的体重、摄食量、血液学及生化指标等较对照组差异无显著性( P ＞ 0． 05) ; 组织病理学检查未见因样品产生的异常改变，在试验剂量范围内未见毒性副作用。因此，在本实验条件下复方德赢vwin登录 片具有较好安全性。关键词：复方德赢vwin登录 片急性毒性试验遗传毒性试验30 天喂养试验复方德赢vwin登录 片由德赢vwin登录 、淫羊藿配伍牛磺酸、葡萄糖酸锌组成。德赢vwin登录 为新疆特色药材，具有提高肾功能、抗疲劳等多种药理作用［1］。淫羊藿具有补肾益骨、祛除风湿的作用［2］。牛磺酸属典型非蛋白质氨基酸，能够对胞内外渗透压进行平衡、减少氧自由基、达到抗过氧化损伤之目的，同时也能够平衡细胞钙、促进膜稳定［3］。葡萄糖酸锌为有机锌补剂，可抗疲劳，对治疗缺锌引起的生长发育迟缓、免疫力下降等有确切功效［4］。淫羊藿、德赢vwin登录 均为常用助阳药，常配合使用［5，6］。牛磺酸和锌为营养素补充剂，中药配伍营养素补充剂，可以加强疗效［7，8］，通过前期研究发现复方德赢vwin登录 片在延长小鼠负重游泳时间，加速小鼠血清尿素清除，促进肝糖原储备量，减少运动后血乳酸增加方面作用显著，优于单一提取物组。虽然已有大量研究证实淫羊藿、德赢vwin登录 单独使用的安全性［9 －12］，但复方德赢vwin登录 片四药合用的安全性尚无文献报道，本文对复方德赢vwin登录 片进行全面的毒理学安全性试验研究，为其在保健食品和医药领域的应用提供科学依据。1 实验部分1． 1 试剂及仪器自制受试复方片组成为德赢vwin登录 提取物( 原材料来自新疆和田地区，折合生药材4． 0 g /d) ( g /d为日用量克/天) 、淫羊藿提取物( 折合生药材4． 0 g /d) 、牛磺酸( 0． 4 g /d) 、葡萄糖酸锌( 折合锌10 mg /d) 。片剂折合剂量为0． 066 g /kg·bw( g /kg·bw 为每千克体重用药量g) 。BS － 420 全自动生化分析仪( 深圳迈瑞生物医疗电子有限公司) ，BC － 2800vet 血细胞分析仪( 深圳迈瑞生物医疗电子有限公司) ，LW200LT 型显微镜( 上海聚亮光学仪器有限公司)1． 2 试验动物SPF 级昆明种小鼠［许可证号: SCXK( 苏) 2012 －0004，质量合格证号: 6100170000222、61001700002275］、SPF 级SD 大鼠［许可证号: SCXK( 苏) 2012 － 0004，质量合格证号为61001700002195、61001700002244］，于东南大学实验动物中心饲养，试验动物房屏障系统: 温湿度分别为20 ～25℃、45% ～65%。1． 3 实验方法1． 3． 1 大鼠急性毒性试验SD 大鼠( 180 － 220 g) ，分雌雄两组各10 只。按最大耐受剂量法( MTD) 设26． 40 g /kg·bw 为灌胃剂量( 人体推荐量的400 倍) 。配制浓度66%的样品蒸馏水溶液，每次20 mL /kg·bw 经口灌胃，二次间隔6小时。动物在给药前16 小时禁食，饮水不受限，2周内，查看动物情况，具体方法按文献［13］。1． 3． 2 鼠伤寒沙门氏菌试验( Ames 试验)采用组氨酸缺乏型鼠伤寒沙门氏菌TA 97、TA98、TA 100、TA102，均符合生物学标准，检测间接诱变后大鼠肝微粒体酶S － 9 的活性。设5 000、1 000、200、40、8 g /皿( “皿”表示菌株培养平皿) 五个剂量组，另设三组对照，即溶剂( 蒸馏水) 、0． 1 mL 阳性对照物( 加入致突变物) 、自发回变组。每组三个平行皿，重复试验。1． 3． 3 小鼠骨髓细胞微核试验按文献方法［13］，剂量分别为10． 0 g /kg·bw、5． 0g /kg·bw、2． 5 g /kg·bw，并设溶剂对照组( 蒸馏水) 、阳性对照组( 环磷酰胺， 40 mg /kg·bw) ，每隔24小时处死动物，计算微核千分率，嗜多染红细胞与成熟红细胞比值( PCE /NCE) 。1． 3． 4 小鼠精子畸形试验雄性昆明种小鼠( 25 ～35 g) 数量50 只，分成5 个小组，剂量分组同试验1． 3． 3。服用20 mL/kg·bw，1 次/日，连续5 日，自初始给药，第35 天后杀死所有动物。采用GB 15193． 7 －2003 标准，观察并记录精子畸形率。1． 3． 5 30 天喂养试验80 只SD 大鼠( 62 ～ 88 g) ，按体重随机进行分组，雌雄各半，单笼饲养，期间饮水进食自由。设6. 60、3． 30、1． 65 g /kg·bw 这3 个不同的剂量组( 人体推荐用量的100、50 和25 倍) 。连续灌胃30 天，灌胃量为10 mL /kg·bw，每日1 次，观察动物平时活动、有无中毒或是死亡，并做好统计。试验结束禁食16 h 后称大鼠空腹体重，取动物血检测出血液学以及生化指标。对动物的肝脏、肾脾脏及睾丸( 卵巢)等组织解剖，完成病理学检查，计算脏器与体重比值。1． 4 试验数据统计实验数据用x－ ± s 表示( x－ 均数，s 标准差) ，根据SPSS17． 0 软件进行统计，卡方检验进行处理小鼠骨髓细胞微核试验结果，对小鼠精子畸形试验用秩和检验， 30 天喂养数据采用方差分析。2 实验结果与分析2． 1 大鼠急性毒性试验大鼠灌胃给予26． 40 g /kg·bw 的复方德赢vwin登录 片后，生长正常、无中毒现象，2 周内无一例死亡，试验结束，大体观察解剖动物未见明显异常。根据急性毒性标准［13］，该样品属于无毒级。2． 2 Ames 试验表1 可见样品诱变试验结果为阴性。可见在本实验条件下，复方德赢vwin登录 片不会诱发突变。2． 3 小鼠骨髓细胞微核试相较于溶剂对照组，表2 各剂量组的骨髓细胞微核率未见统计学差异( P ＞ 0． 05) ，而阳性对照中雌雄两组均超过20‰。各小组PCE /NCE 值均符合正常值，且无显著性差异。上述结果显示: 样品对小鼠的骨髓细胞微核率的增加无影响。2． 4 小鼠精子畸形试验阳性对照组( 环磷酰胺， 40 mg /kg·bw) 的精子畸形率上升至6． 59% ± 0． 34%，低、中、高剂量组的畸形率远低于阳性对照组，分别为1． 82% ± 0． 17%，1． 83%±0． 21%，1． 81% ± 0． 33%，溶剂( 蒸馏水) 对照组为1. 81% ±0． 26%，试验组与之较为接近( P ＞ 0． 05) ，提示复方德赢vwin登录 片并不会诱导小鼠精子发生畸变。2． 5 大鼠30 天喂养试验2． 5． 1 动物一般情况试验过程中，动物体重保持增长，各组中的大鼠均无中毒或死亡现象。由表3 可见，相较于溶剂对照组，各剂量组中的大鼠在初始、每周末以及空腹体重上，均无显著性差异( P ＞ 0． 05) 。同时，包括每周进食量、食物利用率、肝/体比值、肾/体比值等各项指标上，均无显著性差异( P ＞ 0． 05) ，提示复方德赢vwin登录 片不会对大鼠生长产生不利影响。2． 5． 2 血液学及血液生化学结果相较于溶剂对照组，各剂量组在检测出来的血液学指标上( 表4) ，无显著性差异( P ＞ 0． 05) ; 各组剂量组肌酐、血清尿素氮未见明显升高( 表5) ，提示在试验剂量内，样品未对肝肾功能产生不良影响。2． 5． 3 组织病理学检查结果溶剂对照组观察到轻度肝小叶空泡变雌雄各2例，样品高剂量组该病变为雌性2 例、雄性1 例，其余组织均未见异常。上述轻度肝小叶空泡变属动物自发轻度病变，无高剂量样品引起的动物中毒性损伤改变。3 讨论德赢vwin登录 的活性成分及作用均与肉苁蓉相似［14］，2005 年被中国药典收载可代替肉苁蓉入药，能有效缓解肉苁蓉药源的紧缺问题［1］，极具开发价值。复方德赢vwin登录 片中德赢vwin登录 含有苯乙醇苷类、苯丙素苷类和环烯醚萜苷类等主要成分［15］; 淫羊藿不仅含有主要活性成份淫羊藿苷，同时包含多糖、木脂素、生物碱、挥发油等多种物质［8］，两者再配伍牛磺酸、锌，多种活性组分混合提高疗效的同时，化学成分也并非简单加合，需考虑复配使用是否具有潜在的毒性作用以及靶器官损害。尽管单味药材提取物安全性已获证实，但复方德赢vwin登录 中多味中药与营养补充剂复配使用的毒理安全性目前鲜有研究。在本实验中，受试样品无急性毒性; 通过体外Ames 试验系统，证明了样品对基因突变无诱发作用。同时，采用小鼠骨髓细胞微核试验、精子畸形试验，分别在体内造血细胞、生殖细胞水平上，更进一步证明样品无遗传毒性。在30 天喂养试验中，各项观察指标均未因样品发生异常改变，可见在受试剂量范围内，样品对试验动物的生长发育、造血功能、肝肾功能均无损害作用。因此，德赢vwin登录 、淫羊藿提取液配伍牛磺酸和锌服用具有良好的安全性，该研究为德赢vwin登录 保健品及制剂的开发提供了理论依据，对促进我国新疆德赢vwin登录 这一独特中药资源的利用及推广具有重要意义。参考文献［1 ］倪慧，张娟，卿德刚，等． 复方德赢vwin登录 片抗疲劳作用研究［J］． 新疆医科大学学报， 2012，35( 7) : 867 -869．［2 ］国家药典委员会． 中华人民共和国药典: 一部． ［M］． 北京: 中国医药科技出版社， 2010: 306 -308．［3 ］于俊海． 牛磺酸的生物学效应与运动能力的研究进展［J］． 氨基酸和生物资源，2014，36( 3) : 25 -28［4 ］刘薇芝，胡汉昆，刘萍，等． 葡萄糖酸锌药理作用与临床应用［J］． 医药导报，2009，28( 8) : 1060 -1061．［5 ］臧洁． 淫羊藿苷的抗疲劳作用研究［D］． 陕西师范大学，2013．［6 ］吴丽霞，吴铁松，何文平，等． 肉苁蓉与淫羊藿提取物对小鼠抗疲劳作用研究［J］． 国际医药卫生导报，2012，18( 18) : 2665 -2667．［7 ］吴亚运，侯少贞，黄晓其，等． 葛根素与牛磺酸配伍对红细胞稳定性的影响［J］． 中药新药与临床药理，2014，25( 5) : 532 -535．［8 ］查圣华，姜水红，赵庆生，等． 玛咖淫羊藿配伍毒理安全性实验研究［J］． 山东化工， 2015， 44( 8) : 28 -34．［9 ］张娟，卿德刚，贾晓光，等． 德赢vwin登录 提取物安全性评价研究［J］． 新疆医科大学学报， 2012， 35( 7) : 870 -873［10］李敏杰，田峰，杜军，等． 德赢vwin登录 提取物急性毒性、遗传毒性及亚慢性毒性试验研究［J］． 毒理学杂志，2013，27( 5) : 400 -403．［11］王琴，张盼阳，袁晓美，等． 淫羊藿不同提取物的小鼠长期毒性研究［J］． 中国药物警戒， 2018， 15( 2) : 65 -69．［12］张华峰，杨晓华． 淫羊藿在食品工业中的应用现状与展望［J］． 食品工业科技，2010， 31( 5) : 390 -393．［13］中华人民共和国国家卫生和计划委员会，中国国家标准化委员会． GB15 193 － 2014 食品安全性毒理学评价程序和方法［S］． 北京: 中国标准出版社，2015．［14］张瑞霞． 浅谈德赢vwin登录 的研究与应用［J］． 世界最新医学信息文摘，2017， 12( 69) : 132 -133．［15］张杰，赵天翼，李鸿钰，等． 德赢vwin登录 提取物中化学成分研究［J］． 海峡药学，2016，28( 10) : 39 -41．

摘要：［目的】探讨肉苁蓉口服液对运动员抗疲劳效果。【方法】随机选取我校在校运动员60名为研究对象，随机分为三组，I组饮用5%葡萄糖口服液75ml/人，II组饮用矿泉水75ml/人，三组服用肉苁蓉口服液75ml/人，通过比较三组运动员跑完5000m所用时间和心率，以及跑完5000m后5min和15min三组运动员血乳酸的值，分析肉苁蓉口服液的抗疲劳效果。【结果】服用肉苁蓉口服液III组与服用葡萄糖的I组运动员的运动时间明显短于II组饮用矿泉水的运动员组，p<0. 05； III组运动员的心率与其他两组的相比有明显差异，p< 0.05； 5000m距离速度测试后5min三组运动员体内乳酸堆积量差异不明显，15min后HI组全血乳酸下降的较其他两组的要快。【结论】肉双蓉口服液可明显降低人体的乳酸量，抗疲劳效果明显，有良好应用前景。关键词：肉苁蓉口服液；抗疲劳；运动员肉苁蓉（Cistanchedeserticola）,主要生长在我国西部等地荒漠中，是一种多年寄生的草本植物"J中国古籍中，例如《本草纲目》、《图经本草》等著名医术均对其进行了记载。肉苁蓉，别名为金笋、苁蓉，具有温和的药性，味微甘、微咸，在药物治疗中有很高的价值，可补肾阳，润肠通便，被誉为"沙漠人参”。古人在很早之前就对肉苁蓉有了相关的记载“补阳多燥，补阴多腻，此药不燥不腻，药性缓，故得此名“苁蓉”，意为从容”。肉苁蓉在我国药用己有1800年的历史，相传古人在增强体力的相关治疗中，运用药物首选为肉苁蓉,有良好的效果，其在美容抗衰老的药物排行中，仅次于人参，排名第二巴将其列为上品，名副其实。经过多年的临床实践与研究，《中国药典》终将其列为正品药材131,目前己广泛应用到临床治疗中。自20世纪80年代以来，对于肉苁蓉的研究就没有停止过，国内外学者对其化学成分的研究，肉苁蓉的成分提取和质量控制，及其药理作用和毒理作用等都是目前学者的研究范围"J从肉苁蓉研究中，已经知晓其在壮阳润肠通便、抗疲劳、抗衰老、增强记忆力等方面具有很高的药用价值旳。肉苁蓉药理研究表明，分离肉苁蓉提取出来的苯乙醇昔类生物活性物质，有抗氧化、抗人体衰老、以及增强记忆力等多种生物功能，提取出来的还有环烯瞇牯及其昔类、木脂素类及其昔类，以及含有可以提供人体7种的氨基酸类和提供人体能量的糖类等。关于肉灰蓉抗疲劳的研究，目前大多集中在以小鼠为研究模型，进行其抗疲劳的作用效果。肉苁蓉的相关药理实验表明肉从蓉无毒，可以运用到人体研究中，但是小鼠为研究对象的抗疲劳性实验研究与人体在服用肉苁蓉口服液的需求有着很大的差别，因此需要以人为研究对象进行明确的药理作用研究。运动性疲劳是一种严重降低机体运动能力的重要原因。当前，人体疲劳的原因，一般认为是由于体内无氧呼吸产生乳酸，堆积在体内，导致肌体产生酸痛、乏力。相关小鼠研究表明巴肉苁蓉可以增强小鼠抗疲劳的能力，延长其在常压状态下的耐缺氧时间。运动耐力和耐缺氧的能力均能够体现人体抗疲劳的程度。本研究通过对比60名运动员的运动耐力和耐缺氧能力，探讨肉苁蓉口服液对运动员抗疲劳的效果，具体内容报告如下：1材料与方法1. 1研究对象本次研究随机选取我校在校运动员60名为研究对象，其中男生46名，女生14名。经过随机数字表法，随机分为3组，每组20人。第I组有男生16人，女生4人，年龄在18-23岁之间，平均年龄为（19.2±1.4）岁；第II组有男生15人，女生5人，平均年龄为（19.4±1.3）岁；第III组有男生15人，女生5人，平均年龄为（20. 1 ±1. 1）岁。此次研究期间，所有参加试验研究的对象均未饮用其他与试验研究有所冲突的饮用品或者药物。统计分析研究对象的身高、体重、心率差异不明显，具有可比性，研究对象的一般资料差异不具有统计学意义。1. 2材料1.2. 1肉苁蓉口服液的制备叫釆用由内蒙釆购的原产地野生肉苁蓉，经中药医师确认为列当科，肉苁蓉的干燥茎；药材研磨打碎后，过15目，并运用十倍量70%的乙醇进行高温加热，利用回流提取肉苁蓉中的有效成分，1小时2次，共高温回流提取两次，最后，将两次冋流的液体过滤，合并；将回收的液体经过减压，回收液体中残留的乙醇；然后继续减压，将液体压缩成膏状，加冷干燥24小时，用适量的蒸馆水将膏溶解，因肉苁蓉的最大配药浓度约为lg/ml,本次药液浓度调为0. 5g/ml,每杯含量为100ml,备用。肉苁蓉口服液，棕褐色，味微甜，微苦，具有补肾阳、益精血的功效。1.2.2其他：秒表（体育器材中心），精确度为0.01秒；5%口服葡萄糖（市售）：矿泉水（市售）。1. 3实验方法1. 3. 1给药方法三组研究对象分别饮用不同的饮料。每组受试对象每天可自由饮水，III组运动员每天饮用100ml的肉双蓉口服液，持续30天。30天后参与试验的研究对象在进行5000m测试前30分钟，I组饮用5%葡萄糖口服液75ml/人，II组饮用矿泉水75ml/人，三组服用肉双蓉口服液75ml/人。1. 3. 2耐力检测方法开始试验前先监测每位运动员跑完5000m所用的时间和心率。待III组运动员持续饮用肉苁蓉口服液30天后，开始再次检测每位运动员跑完5000m所用时间和心率。三组运动员在开始第二次检测30min前，服用该组规定的饮品。乳酸作为检测抗疲劳效果的重要指标，本研究分别对运动员服用饮料前后釆取100W的全血，按照全血乳酸测定试剂盒规定的程序，对三组运动员的5000m运动后的5min和15min后全血的乳酸进行测定。1. 4统计处理将所得数据进行统计学处理，运用SPSS1 & 0统计软件处理数据，先将三组数据检验三组的方差齐性，若方差齐则进行单因素方差分析，然后釆用Dunnett法进行各组间两两均数之间的比较，P<0. 05表示数据比较具有统计学意。若方差不齐，则将原始数据进行变量转换，达到方差齐性后，再次进行数据处理。2结果2. 1三组运动员最终跑5000m所用时间的比较结果比较三组运动员在服用饮料后每组运动员跑5000m所用时间的均数，结果如下，见表1。如表1所示在服用饮料前，3组运动员跑5000m的时间没有明显差异，服用饮料30min后，再次测试运动员5000m的跑步时间，根据统计数据处理结果，得知服用肉苁蓉口服液III组与服用葡萄糖的I组运动员的运动时间明显短于1【组饮用矿泉水的运动员组，P<0. 05,说明肉欢蓉口服液与葡萄糖有着相同的抗疲劳作用。2.2服用饮料后三组运动员跑完5000m的心率比较三组运动员在服用饮料前后跑完5000m即刻测的心率比较结果，见表2。如表2所示，三组运动员在服用饮料前跑完5000m即刻测得的心率之间没有差异，I组II组运动员服用饮料前后的差异不明显，而III组运动员的心率与其他两组的相比有着明显的差异，p<0. 05,说明肉苁蓉口服液可明显提高运动员的运动耐力。2. 3三组运动员服用饮料后血乳酸的比较三组运动员全部饮用饮料后30min,跑完5000m后5 min和15 min采集全血测得的乳酸比较结果，见表3。如表所示，5000m距离速度测试后5 min三组运动员体内乳酸堆积量差异不明显，15min后III组全血乳酸下降的较其他两组的要快，表明肉苁蓉口服液在降低体内乳酸的含量方面有一定的效果，说明肉苁蓉口服液有一定的降疲劳作用。3讨论3.1肉苁蓉口服液的作用研究中药作为我国的传统药材，现代药理研究中成为越来越重要的角色。将肉苁蓉干燥茎提取出的成分制成浓度为0. 5g/ml 口服液，经过试验对比性研究，服用肉苁蓉口服液的运动员的运动时间和口服葡萄糖的运动员运动时间差异不明显，但与饮用矿泉水的II组运动员有着明显的差异，表明肉苁蓉口服液与葡萄糖在机体供能、补充机体的损失等方面有着相同的作用。服用肉庆蓉口服液的运动员在运动完5000m的距离后，心率较其他两组的心率慢，表明肉苁蓉口服液可以提高运动员的运动耐力；通过对比三组运动员的全血乳酸，口服肉从蓉的运动员在完成5000m距离15min后的乳酸降低程度明显比其他两组的较大，充分说明肉苁蓉口服液可以充分起到抗疲劳的作用。3. 2乳酸堆积产生疲劳乳酸是人体无氧酵解的代谢产物，也是检测机体疲劳程度的重要指标。人们在适量活动的情况下，机体的主要供能为有氧呼吸，少部分是靠无氧酵解，这一途径会产生少许的乳酸，机体内的乳酸维持在一定的水平，不会对人体产生不良反应。但是短时间的剧烈运动时，有氧酵解途径氧气不足，无氧酵解分解葡萄糖增多，产生乳酸，人体肌肉内pH值降低，H+是产生疲劳的主要原因[81. Thompson等他研究表明，肌力与人体内乳酸的堆积程度明显的程负相关，pH值和人体的疲劳恢复时间有联系。肌肉内pH值一旦降低，H+浓度升高，影响肌细胞细胞浆内的Ca+的释放，从而影响肌钙蛋白与其之间的偶联调节，导致肌动-肌球蛋白的连接收缩过程降低，肌力减小。肉苁蓉口服液与其他两组的饮料相比，有着明显的抗疲劳效果。庄伟诃釆用5000%的肉苁蓉乙醇提取物研究药物对小鼠运动抗疲劳的效果，是以小鼠血液中的血乳酸作为其中之一的检测指标，服用肉从蓉的小鼠血乳酸均较对照组有着明显的降低。3. 3其他检测指标关于肉苁蓉的多项研究表明肉苁蓉有着良好的抗疲劳效果。肉苁蓉抗疲劳的相关研究大多以小鼠为研究对象。韩春丽,侯金凤3以小鼠为研究对象，通过测定小鼠游泳时间和负荷运动后小鼠血清肌酸激酶，并观察小鼠骨骼肌超微结构，通过以上指标研究肉苁蓉15%水煎液的抗疲劳效果。高占友，周海涛等皿同样釆用小鼠为研究对象，以小鼠游泳力竭时间为指标，研究肉双蓉抗疲劳效果。4结语肉苁蓉中有多种成分，能够为机体提供能量，起到抗疲劳的效果。目前大多相关研究都是以小鼠为研究对象，很多项研究指标都是在致死小鼠的前提下才可以得到想要的结果。而目前以人为研究对象的相关文献还很少，在保证人体健康的前提下釆用哪项检测项目作为评价肉苁蓉抗疲劳效果的指标，值得研究学者们进行深思。肉苁蓉抗疲劳的效果研究最终是服务于人类，因此需要广大研究学者们在这方面有更深更广的研究。随着肉苁蓉的深入研究，肉苁蓉有望成为一种功能性抗疲劳饮用品。参考文献[1] 程齐来，陈君.肉次蓉属植物研究概况[J].中药材,2004,27 (10)： 789.[2] 高占友，周海涛,林强.肉双蓉对大鼠抗运动性疲劳能力及脑自由基的影响[J].安徽农业科学,2011(16): 9592-9593.[3] 中国药典[S], 2010:126.[4] 陈飞，陈卓，邢雪飞，等.肉苁蓉的研究进展[J].药物评价研究,2013(6) :469-475.[5] 丁燕，张开梅,苍小鑫，等.肉苁蓉属化学成分及生物活性研究进展[J].大连工业大学学报,2016(6) :395-402.[6] 彭亮,覃辉艳，赵鹏，等.肉苁蓉茶对小鼠抗疲劳和耐缺氧能力的影响[J].现代预防医学,2011(12): 2362-2364.[7] 王金芳，孙虹，刘同宁，等.人工种植肉灰蓉缓解运动疲劳作用及急性毒性实验研究[J].中华中医药学刊,2014(7):1730-1732.[8] 李永超.肉双蓉有效部位抗疲劳作用机制研究[D].中国协和医科大学,2007.

关　键　词：囊性乳腺增生；乳癖；调摄冲任法；治疗乳腺增生属中医“乳癖”范畴‚本病可分为三型：肝郁气滞型、痰凝血瘀型和冲任失调型‚且以冲任失调为发病之本易致病情反复‚冥顽不愈‚且有岩变的危险故对后者的防治在乳腺增生的治疗上具有重要意义。1 临床资料一般资料53例患者均来自本院门诊。全部为女性‚其中‚年龄最小的25岁最大的58岁平均34岁。发病高峰位于35～47岁。病程最短的半年‚最长的30年平均为5年。左侧发病12例‚右侧发病7例‚双侧同时发病为34例。纳入标准全部53例患者均符合“中华全国中医学会外科分会乳腺病专题组经验交流会”制定的诊断标准。年龄分布：25～35岁5例；35～45岁‚35例；45～55岁11例；55岁以上‚2例。2 治疗方法应用中药汤剂二仙汤治疗：药用鹿角霜、仙茅、淫羊霍、巴戟、知母、黄柏。若里虚寒盛经络不畅者加肉桂、菟丝子；阴虚火旺者加女贞子、生地；精血亏少者加熟地、首乌；便秘者加肉苁蓉、锁阳；气虚者加党参、黄芪；肿块较大质硬者加炙甲片、昆布经前可酌加疏肝、活血、散结之品。20～24天为1疗程（据月经周期调整）经期停服服用3个疗程后观察疗效。3　疗效观察疗效评定标准依据“中华全国中医学会外科分会乳腺病专题组经验交流会”制定的诊断标准。结果显效28例占52．8％；有效11例占20．8％；好转7例占13．2％；无效7例占13．2％。总有效率为86．8％。4　讨论乳房属于冲任二脉然冲任无本脏不能独行经。冲任隶属于肝肾肾气化生天癸天癸激发冲任通盛具有经前充盈经后疏泄的特点。乳房亦随冲任盛衰而变化经前阴血充足乳腺小叶增生经后经血已外泄冲任处于静止状态乳房亦由增生转为复旧。由于经、孕、产、乳屡伤精血或因后天失养房事不节或忧思恼怒乙癸同源日久伤肾冲任失调气机郁结痰浊阻滞瘀血内停循经上逆克于乳房‚发为乳癖。如宋代《圣济总录》中云：“又冲脉者起于气街‚并阳明经夹脐上行至胸中而散。妇人以冲任为本若失于将理冲任不和阳明经热或为风邪所克则气壅不散结聚乳间‚或硬或肿疼痛有核。”结合现代医学理论乳腺增生症与周期性激素分泌失调或乳腺组织对激素的敏感性有关。只有纠正这种内分泌紊乱才能从根本上防止并扭转本病的发生和发展。而采取温补肾阳、调摄冲任之法治疗可调整不平衡之激素促进黄体功能的正常发挥是治病求本之法。尤其在卵泡期冲任应当充盈之时应用温肾阳药物可以促进卵泡成熟进而保证排卵后黄体功能健全实乃本中之本即取“冲任之本在肾”之意。故选用仙灵脾、肉苁蓉、鹿角霜、巴戟天、锁阳等性温不热、质润不燥的温肾之品。其中肉苁蓉、锁阳兼有润畅通便之效可改善便秘妇女粪便中分解出的ＳＰ－Ｇ3作用于下丘脑而引起的内分泌失调；仙灵脾、巴戟天兼有祛风除湿之效可通经活络并可酌情选用仙茅以温肾祛寒同时伍用理气、祛瘀化痰之柴胡、香附、莪术、王不留行、昆布、浙贝母等达到标本兼顾既调节内分泌失衡以绝发病之源又可止痛消块改善症状。温肾的同时应兼顾滋阴、养血、健脾以达到阴阳双补、气血共生的目的如《景岳全书》中云：“善补阳者必于阴中求阳则阳得阴助而生化无穷…… ”。可酌选女贞子、首乌、党参等。参考文献［1］顾伯华．实用中医外科学［Ｍ ］．上海：上海科学技术出版社1985［2］林毅‚唐汉钧．现代中医乳房病学［Ｍ］．北京：人民卫生出版社2003［3］顾乃强．乳癖灵治疗乳腺增生213例临床观察［Ｊ］．上海中医药杂志1991（5）：16．［4］陆德铭．实用中医乳房病学［Ｊ］．上海：上海中医学院出版社1993：417126．［5］陈贵廷‚薛赛琴．最新国内疾病诊断标准．［Ｓ］．北京：学苑出版社1991．807

【摘要】　该文总结中药特色技术传承项目轮转游学培训中的道地药材产区变化。举例说明了由于道地药材野生资源匮乏、大量栽培及新栽培技术的应用和栽培区域地理气候的优势等原因，道地药材的产区在发生着变化，指出道地药材产区变化是随着时代的发展产生适应性变化，有助于解决优质中药供应问题。提出应当充分了解道地药材的生长习性和质量评判标准，在栽培上选择合适区域进行指导性栽培，不能盲目栽培，才能保持中药质量的优质性、稳定性及可控性，同时提出生态种植是未来道地中药材栽培种植的方向。【关键词】　道地药材；产区；栽培；肉花蓉；黄芪；红花国家中医药管理局自２０１３年启动中药特色技术传承培训项目，笔者是２０１８级第３批全国中药传承学员，从２０１８年下半年开始参加全国各地的基地轮转游学培训，在中药资源方面收获颇多。以往笔者一直认为道地药材质量好，采购中药饮片一定要选择传统道地产区的药材，而在实际工作中有时采购不到传统道地产区的中药。通过游学基地的老师授课和实地了解发现，中药饮片道地产区发生了变化，如红花，原来河南属于道地产区，但目前产量减少，市场货源很少，很难采购，目前市场主流的红花产区是新疆，质量优良。由此表明道地药材的产区在发生着变化，有的已经和本草书上的记载不同。黑龙江中医药大学王振月教授认为，道地药材不是一成不变，只要是好的遗传基因加上产地因素和人文因素，符合高质高产高效，就可以称为道地药材。如黑龙江的西洋参，虽然道地药材是加拿大，但黑龙江最早引种，产量大，质量优，口碑好，已成为国内认可的道地药材。王振月教授关于道地药材的上述看法，笔者认为很有道理。本文探讨分析道地药材产区变化的主要原因。１　道地药材产区变化的主要原因　１．１　大量人工栽培　由于中药野生资源的匮乏及急剧减少，中药人工栽培量越来越大，且中药的栽培已经突破传统道地产区，进而使道地药材的产区发生了变化。如防风，原来的道地产区是东北地区，俗称关防风。但中国中医药报报道显示，目前东北地区的野生资源濒临枯竭，可供货源不多。市场主要以家种防风为主，其主产地是河北、内蒙古，这两处产的防风含量达标，质量最好［１］。用途上，河北省以防风饮片供应为主，主产于石家庄行唐、保定安国。内蒙古产地家种防风为籽播１年生品种，单产量相对较低，但其更受药厂采购方的青睐，价格也高于秧播的河北防风。诸如此类的还有很多，如天麻、茯苓、猪苓等野生资源大幅度减少，人工栽种大幅增加，使原有道地产区的产量发生明显变化，在市场供应中的份额也有明显改变。１．２　新栽培技术应用　新栽培技术的产生，改变了道地药材各产区的产量。如肉苁蓉，《中华人民共和国药典》（以下简称“药典”）收载的是荒漠肉苁蓉，主产于内蒙古，新疆产量少。由于新疆野生资源急剧减少，寄主梭梭被大量砍伐、挖掘，固沙植被破坏，土地荒漠化加重。但其有着适合梭梭和柽柳生长的广大沙漠区域，广泛种植梭梭和柽柳有助于固沙防沙。新疆基地李永和老师称，随着肉苁蓉在梭梭上接种、德赢vwin登录 在柽柳上接种研究的成功，在改善植被的情况下大面积接种肉苁蓉和德赢vwin登录 ，极大地提高了肉苁蓉和德赢vwin登录 的产量。德赢vwin登录 被列入２０１５年版药典，并开发出多种产品。新疆基地贾晓光老师称，全国肉苁蓉产量中，新疆的德赢vwin登录 占１００％；新疆荒漠肉苁蓉占６０％，有力保障了全国肉苁蓉的市场需求。１．３　地理环境及气候条件　地理环境及气候条件的优势，改变了道地药材各产区的产量。如红花，是活血化瘀的常用药，原产于欧洲及中亚地区，先引种到河南、山东、四川和云南等地区，河南种植的红花称“怀红花”，为道地药材。但由于时代变迁、土地紧张等因素，除云南外，其他产区逐渐减少。最早新疆也有分布，产量不大，但新疆具有地理气候的优势，地广人稀，土地资源丰富，机械化操作方便，同时日照时间充足，气温温差大，降雨量少，极适合红花等喜光耐旱中药种植。近年来，新疆红花种植面积逐步扩大，２０１０年最高峰时种植面积可达７０万亩以上，年产红花高达７　０００～８　０００吨，占全国产量的８０％，后经调减，到２０１６年时产能占比仍达到７５％以上，产量在４　５００吨以上，成为名副其实的红花主产区，且质量也优，形成了红花新的道地产区［２］。２　分析　道地药材的产区变化是随着时代前进的适应性变化，有助于解决优质中药供应问题。但也应当看到，在经济利益驱动下，也存在着中药引种的随意性、不科学性，南药北种、北药南栽的现象，导致中药质量下降。笔者认为应当充分了解道地药材的生长习性和质量评定标准，在栽培上选择合适区域进行指导性栽培，不能盲目栽培，保持中药质量的优质性和稳定性、可控性。内蒙古基地的张春红老师授课时讲到，其团队利用ＡｒｃＧＩＳ技术和最大信息熵Ｍａｘｅｎｔ模型进行内蒙古地区肉苁蓉、蒙古黄芪、赤芍等的适宜性区划研究，找出影响内蒙古黄芪等药材适宜性分布的主要生态因子，总结出其适宜性区划分布区域生态特征，指出在内蒙古自治区的适宜性分布区域，为今后内蒙古黄芪等药材的适宜性区域种植及道地性研究提供基础和借鉴。笔者认为这种研究及模式完全可以推广到全国范围及所有道地药材，用于道地药材栽培种植的指导和规范，这样栽培的道地药材才能在保障中药产量和满足使用的基础上保持高品质。同时内蒙古有着生态种植中药材的经验，与经济作物的套种，十分成功。如内蒙古黄芪和马铃薯的套种及结合牧业，形成良好的生态种植养殖业，既提高了产量，又提高了品质。因为大部分中药材种植不能连续耕作，笔者认为生态种植是未来道地中药材种植的方向，值得在全国推广借鉴。３　小结　笔者认为中药材既要讲究传统道地，又要与时代同行，适应道地药材的产区变化。同时在中药材栽培种植上要科学规划，提倡生态种植，确保道地，保证质量，保障应用。参考文献［１］中药材天地网．防风成交量大，市场平稳［Ｎ］．中国中医药报，２０１９－１－１８（６）．［２］中药材天地网．红花产量大减，市场紧俏［Ｎ］．中国中医药报，２０１７－８－１０（６）

　笔者在临床用当归、黄芪加肉苁蓉治疗劳损内伤, 或体弱血虚, 产后失血过多而致大便秘结, 屡建奇功。兹举例如下。例1:患者, 女, 32 岁, 于1974 年11 月6 日足月顺产一女婴, 为初产妇, 其产程长, 出血多, 产后3 天无大便, 第四天有便意, 但因秘结而难以排出, 经用蜜煎导法后排出颗粒状粪便, 量多质坚硬。以后每有便意, 急用导法通之, 1 周后要求中医治疗。患者眼睑、牙龈、颜面色白, 唇舌干燥, 苔薄白,且有裂纹, 口渴欲饮, 脉洪大而虚, 诊为气血虚损所致。治当补气益血, 润肠通便。方用当归6g, 黄芪30g , 肉苁蓉10g , 水煎2 次, 对匀分2 次服, 2 剂痊愈。按:本例患者为大龄初产妇, 因产程长而损其气, 失血多而致血虚。大肠为排出糟粕之通道, 今因血虚, 津液不能润其大肠, 肠管枯涩而排出不利, 糟粕滞留, 逐渐产热, 终致粪便干燥而秘结, 方用当归益血和营, 黄芪补脾肺之气, 肉苁蓉升阳通便, 令气旺血生, 肠管得润, 故随手奏效。例2:患者:女, 43 岁, 因发热腹痛, 不规则阴道大量出血, 在家中服药治疗一两个月无效, 后经查为阑尾炎、子宫肌瘤, 同时做阑尾, 子宫切除术。术后一直大便秘结, 数日排便1 次, 且大便时间延长, 便时腰骶部重坠, 眼前出现黑花, 痛苦异常, 便后需家人托扶方能起身, 起则目眩, 1 年来家中常备果导、大黄, 便前服用, 方能排便。近1 个月来二药不起作用, 要求中医治疗。患者面色白光白, 口唇干燥, 裂纹中有血迹。眼睑牙龈色白, 舌干, 苔薄白, 形神疲乏, 语言低微, 平时口渴喜饮, 诊为气血虚损所致, 法当补益气血, 生津润肠通结, 方用当归补血汤加肉苁蓉, 方中重用黄芪, 大补脾肺之气, 配当归以益气生血, 肉苁蓉补肾生精。前后共进6 剂, 大便通畅, 诸症悉减。按:患者有不规则阴道大量出血史, 且同时做阑尾、子宫肌瘤切除手术, 致气血更加亏损, 术后失于调养, 机体气血未能完全恢复, 令脾气虚而不能输送水谷津液于肠管, 肺气虚而肃降功能失司, 加之久病血枯, 大肠失于濡养, 长期服用泻药更致津液耗损,肠管愈加枯涩, 滞留于大肠之粪便不能按时排出。三药同用, 补气升阳, 益血和营。气血两旺, 津液四布, 肠润便通之功效。例3:患者:女, 20 岁, 学生, 大便秘结半年, 采取限食减便措施, 使其由原来3 天大便1 次而为1 周1次;形成数天无便意, 每次便程更为延长, 粪便干燥而结成颗粒, 继而造成肛裂, 便后出血量多, 于1988年2 月求治于中医。患者平时汗多, 动则汗出乏力, 唇干舌燥, 苔薄白, 口渴欲饮, 颜面苍白, 表情惊恐不安, 语言低微,脉洪大中虚, 诊为气血不足所致, 当养气和营, 补气生血, 润肠通便。方用当归补血汤加肉苁蓉, 连服3剂而愈。按:患者性情内向, 常坐室中而少活动, 日久致局部气血流通不畅, 语言低微乃肺气不足之故, 肺与大肠相表里, 肺之肃降功能减弱, 而致大肠糟粕难于通畅, 又因限食忍便, 久积成热, 直至秘结。用补气生血之法, 使气行血旺, 津液四布, 肠润便自通。体会当归补血汤加味治疗大便秘结, 必须以久病体弱, 气血亏损, 或失血而致者为适应症, 临床时当审病求因。若为急性病, 实证, 或有表症者, 则非本方主治之所宜。

老年习惯性便秘是临床常见疾病之一。老年人肠蠕动功能减弱‚肠液不足‚患习惯性便秘者甚多。不少老年人常年依靠泻药来通便‚十分痛苦。笔者近年用单味中药治疗老年习惯性便秘获良好效果‚介绍如下。本文所涉及的仅为功能性便秘。功能性便秘的病因1∙肠蠕动缓慢：老年人活动量减少‚胃肠功能减弱‚因而肠蠕动频率降低‚肠道中的水分减少‚粪便干燥‚导致大便秘结。2∙精神欠佳：精神紧张、心情抑郁的老年人多数有便秘症状‚这是因为神经调节功能紊乱的缘故。3∙药物因素：许多老年人患心脑血管疾病‚需要长期服药治疗。而一些抗高血压药、麻醉药、神经节阻滞药‚或温补中药等都可引起便秘。4∙体内缺水：老年人本身就存在生理性的细胞内缺水‚加上口渴感觉功能下降‚在体内缺水时也不感到口渴‚这使得老年人肠道中的水分减少‚导致大便干燥。5∙饮食因素：饮食中缺少纤维素含量高的食物‚尤其是缺少粗粮和水果‚导致大肠内水分减少和菌群失调‚引起便秘。针对病因采取的措施1∙老年人应适当增加锻炼‚如散步、打太极拳‚使全身肌肉放松‚增加胃肠道蠕动。2∙保持良好的心态‚心情舒畅‚精神放松‚保持神经调节功能正常。3∙有心脑血管疾患的老年人‚注意药物对排便的影响‚必要时更换其他药物。4∙每天至少应喝4～6次水‚喝水时间宜在早上起床后‚上午九、十点‚下午三、四点和睡前（少量）。每天饮水量不少于1500ml‚鼓励多饮绿茶。5∙做到生活规律‚不要在饭前吃水果‚少食多餐‚多吃纤维素含量高的蔬菜‚适量吃些粗粮和海产品‚少吃过于精细的食品‚少吃辛辣油炸等火热之物。治疗便秘单味中药验方1∙肉苁蓉治疗便秘：肉苁蓉10～20g‚开水冲泡代茶饮‚长期饮用可补肾阳‚益精血‚润肠通便。2∙黑芝麻治疗便秘：黑芝麻炒熟‚打碎‚装瓶‚用时取2匙‚开水冲开‚加适量蜂蜜‚调匀后服‚每日1次‚长期饮用‚可润肠通便。3．车前子治疗便秘：每日取车前子30g‚加水煎煮成150ml‚每日3次‚饭前服‚1周为1个疗程。一般治疗1～4个疗程即可痊愈。服药期间停服其他药物。4．胖大海治疗便秘：取胖大海5枚‚放在茶杯或碗里‚用沸水150ml 冲泡15min‚待其胀大后少量分次频频饮服‚并且将胀大的胖大海（核仁勿吃）也慢慢吃下‚一般饮服1天大便即可通畅。5．蒲公英治疗便秘：取蒲公英干品或鲜品60～90g ‚加水煎至100～200ml‚鲜品煮20min‚干品煮30min‚每日1剂‚饮服‚可加适量的白糖或蜂蜜以调味。6．杏仁治疗便秘：杏仁打碎入煎或生食‚每日不超过7g。杏仁含有丰富的纤维素‚可以润肺清火‚通便排毒。7．桑椹子治疗便秘：取桑椹子50g‚加水500ml‚煎煮成250ml‚加适量冰糖‚每日1次‚5天为1个疗程。8．决明子治疗便秘：取决明子20g‚以开水冲浸20min 后‚水渐成淡黄色‚即可饮用。喝完后‚再加开水泡饮1次。

摘要:目的: 研究肉苁蓉配伍维生素C 对大鼠运动性肾缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法: 将6 周龄雄性Wistar 大鼠96 只为对象随机分为6 组: 对照组( C 组，12 只) 、一般训练组( M 组，12 只) 、过度训练组( OM 组，24 只) 、肉苁蓉+ 过度训练组( COM 组，16 只) 、维生素C+过度训练组( VCOM 组，16 只) 、肉苁蓉+ 维生素C + 过度训练组( CVCOM 组，16 只) ，进行56 d 的力竭游泳训练。COM 组、CVCOM 组采用专业灌胃器灌胃( ig) ，每天一次，剂量为6. 01g·kg － 1，ig 体积为5 mL·kg － 1 ; VCOM 组、CVCOM 组采用腹腔注射( ip) ，剂量为100 mg·kg － 1，每天一次，注射体积为0. 5 mL，其他各组ig 等量生理盐水。末次训练后24 h，进行血清尿素氮、血清肌酐等生化指标检测。结果: 1) 8 周的过度训练导致大鼠运动性肾缺血“再灌注”，肾组织超微结构被严重破坏、组织病理学发生明显改变，肾功能受到严重损坏。2) 血尿素氮和血清肌酐上升。OM 组( P ＜ 0. 01) 、COM 组( P ＜ 0. 01) 、VCOM 组( P ＜ 0. 01) 、CVCOM组( P ＜ 0. 05) 高于C 组; COM 组( P ＜ 0. 05) 、VCOM 组( P ＜ 0. 05) 、CVCOM 组( P ＜ 0. 01) 低于OM 组; COM 组( P ＜ 0. 05) ，CVCOM 组( P ＜ 0. 01) 低于VCOM 组。3、SOD 活性降低。OM 组( P ＜ 0. 01) 、COM 组( P ＜ 0. 01) 、VCOM 组( P ＜ 0. 01) 、CVCOM 组( P ＜ 0. 05) 低于C 组; COM组( P ＜ 0. 05) 、VCOM 组( P ＜ 0. 05) 、CVCOM 组( P ＜ 0. 01) 高于OM 组; COM 组( P ＜ 0. 05) ，CVCOM 组( P ＜ 0. 01) 高于VCOM 组。4、MDA 含量升高。OM 组( P ＜ 0. 01) 、COM 组( P ＜0. 01) 、VCOM 组( P ＜ 0. 01) 、CVCOM 组( P ＜ 0. 05) 高于C 组，COM 组( P ＜ 0. 05) 、VCOM 组( P＜ 0. 05) 、CVCOM 组( P ＜ 0. 01) 低于OM 组; COM 组( P ＜ 0. 05) ，CVCOM 组( P ＜ 0. 01) 低于VCOM 组。结论: 1) 过度训练造成了大鼠肾脏缺血再灌注损伤。2) 肉苁蓉和维生素C 均可以增强SOD 活性，清除氧自由基，减轻脂质过氧化作用，对运动性缺血再灌注肾脏具有保护作用。3. 肉苁蓉作用优于维生素C，二者配伍使用效果更好。关键词:肉苁蓉; 维生素C; 运动性缺血再灌注随着现代中医药理论的发展、现代药理学理论及现代生物技术的更新，更多的单剂或配伍组方应用于体育实践。中药以其多靶点、多途径作用且几乎不含违禁成分的特点日益显示出其独特的优势，在提高运动员身体机能及缓解疲劳方面取得了一定的成就。机体在稳定状态下，肾血流量可以通过自身调节机制来维持相对恒定。在剧烈运动时，肾血流在神经和体液因素的影响下发生改变。由于各器官血流量重新分配，使活动器官特别是肌肉的血流量增多，肾血流量急剧下降，并伴随运动过程的持续和强度递增表现的更加明显［1］。肾脏的这种不完全缺血状态形成了“运动性肾缺血”。运动停止后，肾血供应恢复形成运动性肾缺血后的“再灌注”［2］。缺血再灌注损伤过程中，自由基的产生异常增多起着重要作用。研究表明，肉苁蓉具有提高过氧化物岐化酶活性、降低脂质过氧化物的药理作用，可以清除体内过量生成的自由基对机体细胞的损伤［3］; 维生素C 作为体内重要的抗氧化剂，也可以有效地清除自由基［4］。本文研究肉苁蓉配伍维生素C 对大鼠缺血再灌注肾脏的影响，并探讨二者在缺血再灌注损伤中的作用及其机制，旨在为其临床应用提供理论依据。1 材料1. 1 动物清洁级雄性Wistar 大鼠100 只，42 d 龄，平均体重( 201. 8 ± 14. 1) g，北京大学医学部实验动物科学部提供，许可证号SCXK( 京) 2006 － 0008。在整个试验过程中，实验室内温度保持在( 22 ± 2) ℃，相对湿度55%～ 75%，光照时间随自然变化。所有试验大鼠均以基础饲料( 北京大学医学部实验动物科学部提供) 和蒸馏水常规饲养，自由饮食。实验时间为63 d，正式训练时间为56 d。1. 2 实验用药肉苁蓉( Cistanche deserticolaY. C. Ma) ，产自内蒙，北京同仁堂药店购得，批号:120224536 并经天津中瑞药业有限公司高占友高级工程师鉴定。将干燥带鳞叶的肉苁蓉粉碎成粗粉，用10，6，6 倍量60%乙醇水浴提取3 次，每次2 h，合并提取液冷藏24 h，过滤，滤液减压回收乙醇，浓缩成浸膏( 相当于2. 0g 生药/g 浸膏) ，备用［3］。维生素C 注射液( 批号20120406) ，北京双鹤药业提供。1. 3 试剂血清肌酐( serum creatinine，Scr) 采用Jaffe 苦味酸法测定，血尿素氮( blood urea nitrogen，BUN) 采用二乙酰－ 肟法测定，丙二醛( malondialdehyde，MDA) 采用比色法测定; 超氧化物歧化酶( superoxidedismutase，SOD) ，采用黄嘌呤氧化酶法测定，均采用南京建成生物工程研究所提供试剂盒，试剂盒编号20120511，并严格按照使用说明操作。1. 4 仪器BS224S 型电子分析天平( 德国赛多利斯) 、光学显微镜( 日本OLYMPUS 公司) 、ALCYON300全自动生化分析仪( 美国雅培) 、756MC 型紫外－ 可见分光光度计( 上海精密仪器厂) 及GL － 20G 高速冷冻离心机( 上海安亭) 。2 方法2. 1 动物分组实验大鼠适应性饲养4 d 后，以20 min /d 的运动量对其进行为期3 d 的筛选，淘汰个别不适应游泳训练者，将剩余大鼠以数字随机分组法分6 组: 对照组( C 组) 12 只，一般训练组( M 组) 12 只，过度训练组( OM 组) 24 只，肉苁蓉+ 过度训练组( COM 组) 16 只，维生素C + 过度训练组( VCOM 组) 16 只，肉苁蓉+ 维生素C + 过度训练组( CVCOM 组) 16 只进行56 d 的游泳训练。训练期间，COM 组、CVCOM 组采用专业灌胃器灌胃( ig) ，每天一次，剂量为6. 01 g /kg， ig 体积为5mL /kg; VCOM 组、CVCOM 组采用腹腔注射( ip) ，剂量为100 mg /kg ，每天一次，注射体积为0. 5 mL( 通过预实验获得最佳剂量) ，其他各组ig 等量生理盐水。2. 2 实验方法2. 2. 1 训练及测试方案C 组常规饲养，不加任何干预，平时不运动。M 组进行中等强度游泳训练，正式游泳训练8 周。每周训练6 d，每天训练1 次，第一次下水游20 min，此后逐渐增加，至第1 周末时每天游60 min，第2 周末时加至每天游90 min，第3 周末时加至每天游120 min，此后5周均保持此运动量。其他各组前3 周训练安排同M组，第4 周起开始安排高强度训练。大鼠进行负重游泳，每次训练至力竭。力竭标准以大鼠下沉后10 s 不露出水面为度。第1 ～ 3 周负0. 5% 体重，第4 周负1%体重，第5 周负2%体重，每天训练1 次。第6 周每天上、下午各训练1 次，第7 ～ 8 周，每天上、下午、夜间各训练1 次，均负5% 体重。至第8 周末，C、M 组大鼠，均正常生长，无意外死亡发生。其他各组大鼠因尾部负重，疲劳衰竭不能恢复及训练意外死亡等原因，死亡率较高。OM 组、COM 组、VCOM 组、CVCOM 组分别剩余14、13、11、13 只。各组分别取10 只用于实验取材，其他随机剔除。2. 2. 2 指标测定各组大鼠于末次游泳训练24 h 后，乙醚适度麻醉，从颈总动脉处取血加入柠檬酸钠溶液抗凝，37℃水浴中30 min 后，4℃ 3 000 rpm 离心10 min，分离制备血清，置－ 20℃冰箱中保存待查。迅速取双肾，剔除筋膜，置于预冷的生理盐水中洗净血污，肉眼观察肾脏大小、色泽、质地。分离左肾，取肾上极组织0. 5 g，用1. 5 mL 生理盐水在1℃ 下以12 000 rpm 研磨制成10%肾组织匀浆; 10% 甲醛固定肾组织标本，石蜡包埋，制成4 um 厚切片，HE 染色，观察组织病理学变化。2. 2. 3 肾脏病理变化评价参照Pallers 标准［5］，在400 倍光镜下随机选5 个视野，每个视野选10 个肾小管评分。1) 肾小管明显扩张，细胞扁平为1 分; 2) 刷状缘损伤为1 分，脱落为2 分; 3) 细胞膜大泡1 分，细胞浆空泡1 分; 4) 间质水肿1 分; 5) 肾小管腔内有脱落的坏死细胞未形成管型或碎片为1 分，形成管型或碎片为2 分。肾小管评分由两名技术员双盲计算，取其平均值。2. 3 数据统计所有数据均用SPSS 12. 0 统计软件包进行处理，数据以平均数± 标准差( 珋x ± s) 表示，资料进行正态性检验; 多组计量资料采用one － way ANOVA，方差齐时采用LSD 法，方差不齐时采用Dunnett＇s T3 法。P ＜0. 05 有统计学意义。3 结果3. 1 运动及肉苁蓉、维生素C 对大鼠肾组织的病理改变Scr 和BUN 测定后取各组肾组织制作石蜡切片，进行HE 染色，光镜下观察组织形态学变化。光镜下静止对照组、一般训练组大鼠肾组织结构正常，无淤血、变性和水肿，肾小管管腔内无管型。过度训练组大鼠肾小球有淤血现象，小管上皮细胞水肿、空泡变性、管腔扩张，管腔中有少量的脱落绒毛和上皮细胞，以及各种管型。其他各组组织病理学改变较过度训练组轻，有轻微的小管上皮细胞水肿、空泡变性、管腔扩张现象，无蛋白管型和细胞管型。各组大鼠肾小管Paller ［5］评分，静止对照组、一般训练组组间无显著差异( P ＞ 0. 05 ) ，静止对照组明显低于其他组( P ＜0. 01) ，治疗组显著低于过度训练组大鼠( P ＜ 0. 05) ，且均未见肾小球明显病理改变。3. 2 运动及肉苁蓉、维生素C 对大鼠血清BUN 和Scr的影响由表2 可知，血尿素氮和血清肌酐各组较对照组明显上升，与OM 组相比COM 组、VCOM 组、CVCOM组明显下降( 分别为P ＜ 0. 05、P ＜ 0. 05、P ＜ 0. 01) ; 与VCOM 组相比，COM 组、CVCOM 组明显下降( 分别为P ＜ 0. 05，P ＜ 0. 01) 。3. 3 运动及肉苁蓉、维生素C 对大鼠肾组织匀浆中SOD 活性和MDA 含量的影响由表3 可知，SOD 活性各组较对照组明显降低，与OM 组相比COM 组、VCOM 组、CVCOM 组明显上升( 分别为P ＜ 0. 05、P ＜ 0. 05、P ＜ 0. 01) ; 与VCOM 组相比，COM 组、CVCOM 组明显上升( 分别为P ＜ 0. 05，P＜ 0. 01) 。MDA 含量各组较对照组明显升高，与OM组相比COM 组、VCOM 组、CVCOM 组明显下降，( 分别为P ＜ 0. 05、P ＜ 0. 05、P ＜ 0. 01) ; 与VCOM 组相比，COM 组、CVCOM 组明显降低( 分别为P ＜ 0. 05、P ＜0. 01) 。4 讨论肾缺血再灌注( Ischemic reperfusion，I /Ｒ) 损伤是一个复杂的病理生理变化过程，其具体机制尚未完全阐明。但氧自由基( Oxygen free radicals，OFＲ) 在I /Ｒ发生、发展过程中起着至关重要的作用［6］。正常情况下，体内可产生少量自由基，但由于体内具有灭活自由基酶系统，自由基被迅速清除，不产生损伤作用。运动时由于I /Ｒ 使自由基产生增加，可引发膜脂质过氧化反应，导致膜的液态性、流动性及通透性改变，进而造成膜功能障碍，尤其是线粒体膜的破坏将影响细胞的代谢和机能，并干扰整个器官的生理功能。机体内存在清除自由基、减轻其危害的主要物质是抗氧化酶。SOD 是需氧生物体内数千种酶中以氧自由基为底物的唯一酶。其通过催化超氧阴离子形成过氧化氢而清除超氧阴离子，保护机体免受损伤，同时在一定范围内，自由基代谢增强时，SOD 会代偿性增加。因此SOD 活性的高低是机体抗氧化能力强弱的标志。MDA 是细胞脂质过氧化的一种主产物。组织线粒体MDA 含量是目前公认的衡量机体自由基代谢的敏感指标［7］。肌酐和尿素氮分别是肌肉和蛋白质的分解代谢产物，主要经血循环从肾脏排除体外，其血中的浓度取决于肾小球滤过能力，当肾脏实质受到损伤，肾小球滤过率降到临界点后，二者的浓度就会明显上升［8］。实验结果显示，8 周的过度训练导致大鼠肾组织组织病理学发生明显改变; 血尿素氮、血清肌酐增高( 过度训练组( P ＜ 0. 01) 、肉苁蓉+ 过度训练组( P ＜0. 01) 、维生素C + 过度训练组( P ＜ 0. 01) 、肉苁蓉+维生素C + 过度训练组( P ＜ 0. 05) 高于静止对照组) ;SOD 活性降低( 过度训练组( P ＜ 0. 01) 、肉苁蓉+ 过度训练组( P ＜ 0. 01 ) 、维生素C + 过度训练组( P ＜0. 01) 、肉苁蓉+ 维生素C + 过度训练组( P ＜ 0. 05) 低于静止对照组) ; MDA 含量升高( 一般训练组( P ＜0. 05) 、过度训练组( P ＜ 0. 01) 、肉苁蓉+ 过度训练组( P ＜ 0. 01) 、维生素C + 过度训练组( P ＜ 0. 01) 、肉苁蓉+ 维生素C + 过度训练组( P ＜ 0. 05) 高于静止对照组) 。这说明过度训练已造成大鼠肾脏运动性缺血“再灌注”损伤，肾功能受到严重损坏。但肾组织组织病理学改变肉苁蓉+ 过度训练组、维生素C + 过度训练组、肉苁蓉+ 维生素C + 过度训练组( P ＜ 0. 05) 较过度训练组明显减轻。血尿素氮和血清肌酐含量肉苁蓉+ 过度训练组( P ＜ 0. 05) 、维生素C + 过度训练组( P ＜ 0. 05) 、肉苁蓉+ 维生素C + 过度训练组( P ＜0. 01) 低于过度训练组; SOD 活性，肉苁蓉+ 过度训练组( P ＜ 0. 05) 、维生素C + 过度训练组( P ＜ 0. 05) 、肉苁蓉+ 维生素C + 过度训练组( P ＜ 0. 01) 高于过度训练组; MDA 含量，肉苁蓉+ 过度训练组( P ＜ 0. 05) 、维生素C + 过度训练组( P ＜ 0. 05) 、肉苁蓉+ 维生素C +过度训练组( P ＜ 0. 01) 低于过度训练组。表明，肉苁蓉及维生素C 可以有效清除自由基，减轻肾脏的缺血缺氧，抑制脂质过氧化作用，提高SOD 活性。有效减轻肾脏缺血再灌注损伤，起到保护作用。其机制可能为: 1) 肉苁蓉可以提高抗氧化酶活性，加快自由基的消除，同时所含的多种多酚类、苷类、黄酮类物质，对清除机体自由基、减轻自由基对线粒体膜和肌浆网膜造成损伤，以及减轻对酶蛋白的氧化损伤起到积极作用［3］。2) 维生素C 是重要的抗氧化维生素，作为强抗氧化剂可有效清除氧自由基、抑制凋亡级联的启动而减轻细胞、器官的缺血再灌注损伤［9］。此外，3个治疗组间比较，血尿素氮、血清肌酐、MDA 含量，肉苁蓉+过度训练组( P ＜ 0. 05) ，肉苁蓉+ 维生素C + 过度训练组( P ＜ 0. 01) 低于维生素C + 过度训练组; SOD 活性，肉苁蓉+ 过度训练组( P ＜ 0. 05) ，肉苁蓉+ 维生素C + 过度训练组( P ＜ 0. 01) 高于维生素C + 过度训练组。提示肉苁蓉对运动性肾脏缺血再灌注损伤的疗效可能优于维生素C; 而二者配伍使用可能更有利于缺血再灌注损伤肾脏的保护。综上所述，大负荷游泳训练造成了大鼠肾脏缺血再灌注的损伤，肉苁蓉和维生素C 均对肾脏缺血再灌注损伤具有明显保护作用，可能是通过增强超氧化物歧化酶活性，清除自由基，减轻脂质过氧化作用，进而改善肾脏功能。就疗效而言，二者配伍使用优于二者单独应用，而肉苁蓉又优于维生素C，但也可能和二者在应用中的剂量大小有关，其剂量和疗效之间的关系，还有待进一步研究。参考文献:［1］Barclar WF. 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摘要：目的 筛选富集肉苁蓉中苯乙醇苷的最佳树脂和工艺条件，使分离纯化工艺达到最优化。方法 选择7 种大孔吸附树脂(AB-8、DM301、DM130、D1400、DA-201、HPD-100、D-101-I)，通过树脂对苯乙醇苷的静态吸附和解析能力，筛选出最佳树脂，再通过树脂的静态特性和动态特性的筛选优化工艺。结果 DA-201 的吸附解析最佳条件为：上样流速为1.5 mL·min1，洗脱剂为90%的乙醇。按最佳工艺苯乙醇苷的纯度由25.1%上升为51.2%。结论 该法简便、可行，为肉苁蓉中苯乙醇苷的纯化提供了参考。关键词：肉苁蓉；苯乙醇苷；大孔吸附树脂；纯化肉苁蓉为列当科肉苁蓉Cistanche deserticolaY.C. Ma 或德赢vwin登录 Cistanche tubulosa(Schrenk)Wight 植物的干燥带鳞叶的肉质茎[1]，是常用中药之一，具有补肾壮阳、填精补髓、养血润燥、悦色延年等功效，主治男子阳痿、女子不孕、带下、血崩、腰膝冷痛、血枯便秘等症。肉苁蓉中含有多种活性成分，如苯乙醇苷类、环稀醚萜类、多糖、木质素、生物碱等[2]。苯乙醇苷为肉苁蓉的主要活性成分，现代药理研究表明苯乙醇苷具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、免疫调节、增强记忆和性功能等作用[3]。大孔吸附树脂为一种有机高聚吸附剂，具有选择性吸附有机化合物的能力，但其吸附性能及解吸、纯化条件参数因化合物的理化性质的不同而不同。本实验以7 种大孔吸附树脂对肉苁蓉中苯乙醇苷吸附、解析，筛选出DA-201 大孔吸附树脂，与任璐等[4]所选的AB-8 大孔吸附树脂在相同实验条件下比较，对肉苁蓉中苯乙醇苷的富集较为理想，它吸附量大，且易解吸。同时本实验又考察确定了吸附、解析最佳的DA-201 大孔吸附树脂富集苯乙醇苷的工艺条件与参数，以期确定更合理的肉苁蓉苯乙醇苷分离纯化方法。1 仪器与试药BS 224 S 型电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；DJ-02 型中药粉碎机(上海淀久中药机械制造有限公司)；UV9100 型紫外-可见分光光度计(北京瑞利分析仪器厂)；RE-52A 型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；DG/20-002 型台式干燥箱(中国重庆实验设备厂)；AL204 型电子分析天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。松果菊苷对照品(中国药品生物检验所，批号：0781-20031，纯度≥99.5%)；肉从蓉采自于新疆，经甘肃中医学院药学系李成义教授鉴定为德赢vwin登录 Cistanche tubulosa(Schenk)Wight 的干燥带鳞叶的肉质茎；7 种大孔吸附树脂(AB-8、DM301、DM130、D1400、DA-201、HPD-100、D-101-I)均购于天津市海光化工有限公司；其余试剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 苯乙醇苷测定方法的建立2.1.1 对照品溶液的制备 精密称定干燥至恒重的松果菊苷对照品5 mg，置于25 mL 量瓶中，加入甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。2.1.2 上样液的制备 精确称取肉苁蓉粉末过80目筛30 g，10 倍量75%乙醇回流提取3 次，每次3 h，合并提取液，减压浓缩，浸膏用水定容至50mL，用同体积的乙酸乙酯和水饱和的正丁醇依次萃取，直至萃取完全为止，合并正丁醇萃取液，减压浓缩至干，用水溶解，过滤，将溶液定容至50 mL 量瓶中，摇匀，备用[5]。2.1.3 测定波长选择 精密量取“2.1.1”项下对照品溶液l mL，加入5%亚硝酸钠溶液l mL，摇匀，静置6 min；加入10%硝酸铝溶液l mL，摇匀，静置6 min；加入10%氢氧化钠溶液l0 mL，用水定容至25 mL，摇匀，静置18 min，作为对照品溶液。以“2.1.2”上样液同法配置，作为供试品溶液。以不加对照品和供试品溶液的平行样为空白同法配制空白溶液。在紫外分光光度计上， 波长200~800 nm范围对上述3 种溶液进行全波长扫描，对照品和供试品溶液在507 nm 处均有最大吸收峰，所以确定507 nm 为吸收波长，与文献[6]确定的最大吸收波长基本一致。2.1.4 标准曲线的制备 准确吸取“2.1.1”项下对照品溶液5 mL，以水定容至25 mL，分别吸取以上溶液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL，以“2.1.3”项下方法显色、定容，在507 nm 处测定吸光度值。以浓度对吸光度作回归曲线，得回归方程为：Y=0.042 5X0.000 1(r=0.999 9)，线性范围为1.6~9.6 μg·mL1。2.2 大孔吸附树脂的筛选2.2.1 树脂的预处理 根据树脂附带的说明书，按醇洗-水洗-酸洗-水洗-碱洗-水洗的步骤处理树脂：用95%乙醇浸泡各型号树脂24 h，充分溶胀后，80%乙醇洗涤，用纱布过滤，洗至加水后水液澄清为止；再用水洗涤数次，随后对树脂进行酸碱处理，先用5%的HCl 溶液浸泡3 h，过滤，水洗至滤液中性，接着用2%的NaOH 溶液浸泡3 h，过滤，再用水洗至中性。2.2.2 树脂静态吸附量考察 称取“2.2.1”预处理好的树脂20 g，加入“2.1.2”上样液400 mL，静置24 h，期间3 h 振摇一次，过滤，按“2.1.3”项下方法制备溶液，按“2.1.4”项下方法测定，计算各种树脂对苯乙醇苷单位吸附量qe=(C0-Ce)V/W 式中qe：吸附量(mg·g1)；C0：吸附前溶液中苯乙醇苷浓度(mg·mL1)；V：溶液体积(mL)；Ce：吸附后溶液中苯乙醇苷浓度(mg·mL1)；W：树脂质量(g)。结果见表1。2.2.3 树脂静态解吸量考察 根据工业应用要求，好的吸附树脂不仅应该具备良好的吸附性能，同样需要具备良好的解析性能，即可逆性。由于树脂极性、孔径、比表面积不同，对苯乙醇苷吸附作用力强弱的不同，解吸难易程度也有区别。将“2.2.2”中已吸附饱和的树脂中加入100 mL 95%的乙醇，静置24 h，期间2 h 振摇一次，每次5 min，使苯乙醇苷充分解析，过滤，滤液按“2.1.3”项下方法制备溶液，按“2.1.4”项下方法测定，计算各树脂对苯乙醇苷计算解吸率D%=Qd/Qe=Cd·100/(qe·W)。式中Qd-解吸量(mg )；Qe-吸附量(mg)；Cd-解吸液浓度(mg·mL1) ； qe- 单位树脂的吸附量(mg·mL1)；W-树脂质量(g)。结果见表2。从表1 和表2 可知DA-201 不仅吸附量较大，而且具有较高的解吸率。因此选择DA-201 树脂进一步考察其对苯乙醇苷的吸附分离特性。2.3 DA-201 树脂吸附动力学考察2.3.1 静态吸附动力学 称取“2.2.1”项下预处理好的DA-201 树脂2.0 g，加入“2.1.2”项下上样液400 mL 静态吸附，每2 h 测定一次，以吸附时间对吸附量作图，见图1。树脂对苯乙醇苷的吸附量随时间而变化，吸附时间延长，吸附量增加，吸附8 h 后，吸附量趋势减缓，树脂逐渐达到饱和吸附量。同时计算出相应时间间隔内树脂对苯乙醇苷的平均吸附速率，再以吸附时间对吸附速率作图，见图2。DA-201 树脂在室温条件下，初始的1~8 h 内吸附速率较快，8 h 以后吸附减缓，10 h后基本达到吸附平衡。2.3.2 吸附透过曲线 取“2.2.1”项下预处理好的DA-201 树脂60 g 上柱，取“2.1.2”项下的上样液，以1.5 mL·min-1 的速率上柱，以60 mL 为单位收集流出液，测定流出液中苯乙醇苷的含量，以上样液体积对流出液浓度绘制吸附透过曲线，见图3。由图3 可知，当进样溶液为吸附树脂柱量的8 倍时，试样溶液开始泄露树脂柱，即为吸附树脂的泄漏点，此时单位树脂吸附量为15.41 mg·g1；但此时树脂的吸附并没有达到饱和，继续进样至树脂柱体积的11 倍时，吸附曲线趋于平缓，说明树脂吸附已经达到饱和，此时单位体积树脂吸附量为18.21 mg·g1。2.4 洗脱剂浓度的选择 取“2.3.2”项下吸附饱和的DA-201 树脂4 份，用10%，30%，60%，90%乙醇以5 mL·min1速度洗脱，每隔2 h 收集洗脱液，按“2.1.3”项下方法制备溶液，按“2.1.4”项下方法测定，以时间对洗脱液浓度作图，见图4。90%乙醇可在较短的时间内将苯乙醇苷大部分洗脱下来。同时计算树脂解析率，结果90%乙醇洗脱率可达97.50%，解析率高。2.5 工艺验证按“2.1.2”项下方法制备，按“2.1.3”项下方法测定得到浸膏中苯乙醇苷含量为25.12%；以DA-201 为树脂，1.5 mL·min1 的速度上样，再以90%乙醇洗脱，洗脱液回收溶剂，干燥，浸膏中苯乙醇苷含量为51.23%，重复测定5 次，RSD 为1.52%。3 讨论通过对7 种大孔吸附树脂的静态吸附特性的研究，确定了DA-201 树脂对肉苁蓉中苯乙醇苷的富集较为理想，它吸附量大，且易解吸。分子的极性大小直接影响分离效果，极性较大的分子一般适于在中极性的树脂上分离，极性小的分子适于在非极性树脂上分离[7-8]，苯乙醇苷由咖啡酸、苯乙醇苷元、糖基构成，分子中多有羧基和糖苷链，具有一定的极性和亲水性，有利于极性和弱极性树脂的吸附，DA-201 树脂为极性树脂，这和理论上基本吻合。本实验除对“2.2”项下的内容考察外，又以上样液的pH 值(2.0，2.5，3.5，4.0，5.0，6.0)对吸附影响进行筛选，确定了上样液的pH 3.5 吸附较好，上样液原液的pH 即为3.5；此外对控制流速分别以0.5，1.0，1.5，2.0 mL·min1 进行动态吸附，确定流速为1.5 mL·min1 DA-201 树脂对肉苁蓉的吸附量较大。比色法测定苯乙醇苷，设备简单，易于操作，但易受其他物质干扰，尝试检测结果偏高，本实验采取在大孔吸附树脂富集前，对药材溶液先采用溶剂萃取纯化，可减少干扰；又苯乙醇苷结构类似黄酮化合物，含有邻苯二羟基，邻苯二羟基在亚硝酸的作用下被氧化成邻苯二酰基，加入铝盐使邻苯二酰基结构与Al3+形成稳定的配合物，呈酒红色，故可采用可见分光光度计进行比色定量测定。REFERENCES[1] Ch. 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