摘要: 目的研究不同浓度的黄酒炮制肉苁蓉后，肉苁蓉通便作用的变化。方法调配黄酒的4 个浓度级别( 0． 0%、4． 1%、9．5%、25． 1%) ，分别用以炮制肉苁蓉并煎得提取物，以昆明小鼠为对象，灌胃给予药液后一定时间处死，迅速剖腹取出小肠，测量幽门至回盲部为小肠全长，测量幽门至标记物行进最远处为推进长度，后者除以前者得推进度，通过组间比较标记物推进度讨论肉苁蓉通便作用的变化。结果阳性组及肉苁蓉各组大于正常组( P ＜ 0． 01) ; 9． 5% 和25． 1% 两组均大于0． 0% 和4． 1% 两组( P ＜ 0． 05) 。结论在一定范围内，黄酒浓度增加会促进肉苁蓉的通便作用。关键词: 肉苁蓉; 黄酒; 通便作用//www.wagawa.com肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉Cistanche deserticola Y． C． Ma的带鳞叶肉质茎，具补肾助阳、润肠通便之功效［1］。张百舜等［2］所做研究证实肉苁蓉水煎液能显著增强小鼠肠蠕动，促进排便。肉苁蓉现行炮制方法有加黄酒蒸、炖等［3］。现行炮制方法以没有加工的普通黄酒炮制，考虑到黄酒中的酒精含量高低可能会对炮制功效产生影响，本文探讨了加工过的不同浓度的黄酒对肉苁蓉通便作用的影响。1 材料和方法1． 1 材料1． 1． 1 动物及分组昆明种小白鼠54 只，体重( 19 ± 3) g，由西安交通大学医学院提供。上述动物随机分成6 组，每组9只。1． 1． 2 药物肉苁蓉药材购于陕西省药材市场，产地新疆，经西安医学院药学院汪兴军鉴定; 市售黄酒( 商品名《古越龙山》，产地浙江绍兴，标示酒精度为15． 0%) 、吗叮啉( 西安杨森制药有限公司生产) 、浓度稀释为65%的蓝墨汁( 标记物) 、蒸馏水。1． 1． 3 实验仪器酒精计、旋转蒸发仪。1． 2 实验方法1． 2． 1 不同浓度黄酒的调配本实验以黄酒中酒精的含量( 用体积分数表示) 代表黄酒浓度。所购同一批次黄酒标示酒精度为15． 0%，从中取100 ml，按GB/T13662-2008 中国国家标准黄酒［4］中的酒精度测定方法测定，浓度为16． 5%，以此为准。取100 ml 的黄酒3 份，前两份分别加入312 ml 和83 ml的蒸馏水稀释后，测定酒精度分别为4． 1%、9． 5%，后一份转入蒸馏瓶，在旋转蒸发仪上60℃减压浓缩至50 ml，补入16． 5ml 食用酒精，测定酒精度为25． 1%。另取蒸馏水备用，视为黄酒浓度为0%。1． 2． 2 肉苁蓉炮制及药液准备取4 份肉苁蓉每份100 g，分别加30 ml 的0%、4． 1%、9． 5%、25． 1% 的黄酒及25 ml水［5］，闷润2 h，然后隔水蒸4 h，取出放凉，再水煎3 次，首次加水300 ml，煎30 min; 第2 次及第3 次加水量200 ml，煎20min。收集3 次所得药液，浓缩至100 ml。正常组为蒸馏水，阳性组为0． 5 mg·L － 1的吗叮啉水溶液。1． 2． 3 给药方法及推进度测定［6］ 肉苁蓉各组药液先稀释为含生药量375 g·L － 1。6 组药液均按0． 1 ml /10 g 给小鼠灌胃，连续8 d。第8 天给药前断食供水18 h，给药后间隔20min，按每只0． 2 ml 灌以蓝墨汁，再20 min 后行颈椎脱臼法处死，迅速剖腹取出小肠，测量幽门至回盲部为小肠全长，测量幽门至蓝墨汁行进最远处为推进长度，后者除以前者得推进度，用( x ± s) 表示，见表1。2 结果见表1。由于给药灌胃时操作不当，阳性组、4． 1% 组、25． 1%组各死亡一只小鼠。对实验数据进行方差分析，结果表明: 阳性组及肉苁蓉各组推进度显著大于正常组推进度;0%组与4． 1%组无显著差异; 9． 5% 组与25． 1% 组无显著差异; 9． 5%组大于4． 1%组; 25． 1%组大于4． 1%组。3 讨论本实验用不同浓度的黄酒对肉苁蓉进行炮制，采用肠推进方法说明肉苁蓉通便作用的变化，结果表明在一定范围内黄酒浓度增加，肉苁蓉通便作用会有所加强。有研究证实肉苁蓉通便的有效成分为半乳糖醇［7］，高浓度的黄酒炮制肉苁蓉使得其通便作用增加是否与半乳糖醇的溶出度增加有关，有待进一步研究。参考文献:［1］ 国家药典委员会． 中国药典: 一部［S］． 北京: 中国医药科技出版社，2010: 126．［2］ 张百舜，鲁学书，张润珍，等． 肉苁蓉的通便作用［J］． 中药材，1992，15( 7) : 33 － 5．［3］ 蔡宝昌主编． 中药炮制学［M］． 北京: 中国中医药出版社，2008:261．［4］ 全国食品工业标准化技术委员会酿酒分技术委员会． GB/T13662 － 2008 中华人民共和国国家标准( 黄酒) ［S］． 北京: 中国标准出版社， 2008: 10．［5］ 陈妙华，张思巨，张淑运，等． 肉苁蓉最佳炮制方法的筛选［J］．中药材，1996， 19( 10) : 508 － 10．［6］ 王欢，周永学． 通便玉容丸对便秘小鼠胃排空和小肠推进的影响［J］． 现代中医药，2011，31( 3) : 52 － 3．［7］ 张百舜，陈双厚，赵学文，等． 肉苁蓉提取物半乳糖醇通便作用的量效研究［J］． 中国中医药信息杂志，2003，10( 12) : 28 － 9．

[摘要] 目的：探究《中医方剂大辞典精选本》中隋唐及之前，宋元时期与明清及近代的虚劳病组方用药规律。方法：利用R语言数据挖掘软件对《中医方剂大词典精选本》中的方剂药物信息进行描述性分析（药物药类及药物性味与归经）、关联规则分析与聚类分析。结果：3个历史时期使用频率最高的药物分别为甘草、人参与熟地黄，使用药类居前的均包含补虚药、清热药、收涩药、利水渗湿药、温里药，累计频率均高于62.40%，药性以温性居多，药味都以甘、辛、苦为主，药物归经中归肾经药物的使用频率最高。关联规则与聚类分析共得出45个药对与药组，27个聚类方。结论：虚劳病的治疗在隋唐及之前取法经方以调和气血，宋元时期以补阳与补土为特点，明清及近代则重视阴精补益，呈现由气血并治，到倾向阴阳分治的特点。[关键词] 虚劳；中医方剂大辞典精选本；数据挖掘；R语言；组方用药规律；历史时期；肉苁蓉中医方剂的组方用药规律是方剂运用变化的精髓。虚劳是以多种慢性虚弱证候为表现的疾病，历代中医在对其辨证论治过程中积累了为数众多的方剂。本研究通过划分隋唐及之前、宋元、明清及近代三个时期的虚劳方剂，运用数据挖掘方法分析研究[1]，探讨各历史时期其组方用药规律的特色，从中寻找对虚劳病治疗的演变规律，以期为临床治疗与科研提供相应的文献查找依据与方剂选用化裁思路[2-3]。1 资料与方法1.1 数据来源与规范化[4] 检索查阅《中医方剂大辞典精选本》，收集整理虚劳方剂药物信息。利用Excel 2013软件建立数据收集表，经剔除未给出明确药物或其他基本信息不全的方剂后分类录入方剂信息（方名、成方时间、药物组成等）。经整理后共得有效方剂520首，并以此为基础构建虚劳方剂药物信息数据库。通过成方时间的排序并参考中国历史时期划分，查找出隋唐及之前，宋元时期与明清及近代的方剂。以《中华人民共和国药典（2015年版）》[5]与《中药大辞典》[6]为参考标准，药物各信息加以统一规范[7]。因芍药在古代方剂中常未明确说明为赤芍与白芍，考虑数据的完整性与可靠性仍予以保留芍药的药名。1.2 资料处理与数据分析通过Excel 2013分别建立3个不同时期虚劳方剂数据库并转换数据格式，对药物各信息进行分类筛选并加以频数频率统计分析。采用R语言中的Hierarchical聚类算法对核心药物进行聚类分析[8]。通过R软件中的Apriori算法对核心药物开展关联规则分析。2 结果2.1 描述性分析结果2.1.1 药物频数、频率分析结果经统计虚劳方剂中共涉及416味药物，总用药频次为5303次。其中隋唐及之前为33首方，用药频次为312次；宋元时期收录193首方，用药频次为1933次；明清及近代294首方，用药频次为3058次。（见表1）2.1.2 药类频数、频率分析结果3个历史时期治疗虚劳药物主要分属8个药类，排名前5位均包含补虚药、清热药、收涩药、利水渗湿药、温里药，累计频率均高于62.40%。其中补虚药在各时期的用药频率均超过37%，居第一位。（见表2）2.1.3 药物药性、药味与归经分析结果各时期用药的药性以温为主，明清之前凉性用药较为少见。药味均以甘、辛、苦三者居多，药物归经中归肾经与脾经药物的使用频率较高，均超过了38%。（见表3～5）2.2 关联规则分析结果设置参数为支持度≥11%，置信度≥60%，得出各时期药对与药组关联规则，选取各时期置信度最高的15个关联规则。（见表6～8、图1～3）2.3 聚类分析结果运用Hierarchical算法[9]对各时期用药进1032020 年1月第26卷第2期January.2020 Vol.26 No.2行聚类分析。经过分析后认为聚成8类比较合适，依次命名为聚类方1至聚类方8。（见表9、图4～6）3 讨论虚劳是以多种慢性虚弱证候为表现的疾病，对其的治疗也遵循以补虚为主。3个不同历史时期，药物与药类使用频率最高的都是补虚药，在明清及近代时期达到最高。药性以温性最多，药味都以甘、辛、苦居前列，归经以脾经、肾经、肝经与心经居多。药物关联配伍主要涉及补虚药、利水渗湿药、收涩药与活血化瘀药等。组方上，各具不同时期的特色与风格。3.1 隋唐及之前组方用药规律3.1.1 以经方为法度隋唐及之前时期，药物性味以温平甘辛为主，归经以脾、肾、心经为多，以甘草、大枣与桂枝等经方常用药物为核心用药。组方药味相对较少（4到5味药），可见如桂枝汤（隋唐方6：桂枝、甘草、大枣、芍药）、黄芪建中汤（隋唐方1：生姜、饴糖、半夏、黄芪）等经方为基础的变方。隋唐及之前时期受经方的组方思想影响较大，呈现师法于经方的基础上加以方剂的变化运用[10]。3.1.2 调和气血为主[11] 此时期的药物关联为补虚药、利水渗湿药、收涩药与活血化瘀药间的相互配伍，治法上以益气养血为主，佐以祛湿、填精、活血。如{当归,茯苓}=>{人参}、{人参，五味子}=>{熟地黄}、{牛膝}=>{熟地黄}。从气血调和的角度，对气血进行补益填精以扶正，同时兼顾对痰湿与瘀血的祛邪运用，切合于虚劳病“虚则补之”“实则泻之”的治疗原则[12]。3.2 宋元时期组方用药规律3.2.1 注重补益阳气宋元时期以人参与肉苁蓉为核心用药，特别是附子与肉桂的使用频率高于其他历史时期。药类上，以补虚药、温里药为主，达到益气温阳的治疗效果。3.2.2 补阳的多种治法配伍[13] 从药物七情与君臣佐使配伍角度分析，补阳药相须为用以纯补于阳，如{鹿茸}=>{肉苁蓉}、{巴戟天}=>{肉苁蓉}；补阳药与收涩药相使配伍，温阳益精，如{五味子}=>{肉苁蓉}；活血化瘀药反佐补阳药，温阳化瘀，如{牛膝}=>{肉苁蓉}。3.2.3 补阳与补土的兼顾宋元时期药物的药味以甘、辛为主，归经多取为肾经，相互结合可起到辛甘化阳，温补脾胃阳气与肾阳的作用。组方上，可见补土方有宋元方3[甘草、白术、柴胡、陈皮（补中益气汤）]与宋元方4[黄芪、人参（人参补气汤，《兰室秘藏》）]。补阳方则有宋元方1与方2。宋元时期的虚劳治疗重视温补阳气。在受宋元脾土学说影响的同时，在临证运用中也重视从补阳角度加以论治，达到脾肾同调。故临床运用补阳法治疗虚劳病处方时，可适当参考此时期的医家论著观点加以发挥运用。3.3 明清及近代组方用药规律明清及近代组方用药重视阴精，补益为用。3.3.1 清热利湿以补益阴精[14] 由明清时期药物关联规则中可见，{清热药}=>{补血药}（{生地黄}=>{熟地黄}），补血凉血滋阴，使补而不燥。{收涩药}=>{利水渗湿药}（{五味子}=>{茯苓}），收涩阴精与渗利水湿相结合，去粗取精，达到益精养阴利水的效果。3.3.2 补益肝肾以滋阴益精[15] 明清药物使用以熟地黄、人参与当归等归肝经、肾经药为重点用药，且高频药物归经也以肾经、肝经居前。在药物配伍运用时，选取肝经、肾经药物组合，补益肝肾以滋阴益精。如{枸杞子}=>{熟地黄}、{牛膝}=>{熟地黄}等。3.3.3 单味药的补益运用明清时期组方以单味药物为一个方剂的单方使用，较其他两个历史时期多见。单方药专力宏，性味纯厚，适合单一虚损证型的患者长期服用。明清及近代关于虚劳的论治，更注重对于以阴精的滋养运用[16]，与此时期温病学说与滋补学派[17]的观点兴起相切合，具有鲜明的时期特色。综上，对于虚劳病的治疗在隋唐及之前侧重取法经方以调和气血，宋元时期以补阳与补土为特点，明清及近代则重视阴精补益，呈现由气血并治，到倾向阴阳分治的特点[18]。参考文献[1] C LEE VENTOLA. Big Data and Pharmacovigilance：Data Mining for Adverse Drug Events and Interactions.[J].P＆T community，2018，43(6)：340-351.[2] 刘超，王志宏，季旭明.基于中医传承辅助系统的治疗虚劳方剂组方规律分析[J].中国实验方剂学杂志，2012，18(17)：1-4.[3] 肖光磊.名老中医经验传承中的数据挖掘技术研究[D].南京：南京理工大学，2008：5-8.[4] YOU X，XU Y K，HUANG J，et al. A Data Mining-Based Analysis of Medication Rules in Treating BoneMarrow Suppression by Kidney-Tonifying Method[J].Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine，2019(2)：1-9.[5] 国家药典委员会.中国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2015.[6] 南京中医药大学.中药大辞典[M].上海：上海科学技术出版社，2006.[7] 韦薇，郑玉琴，李海燕，等.清代《虚损启微》对“虚劳”治疗的用药规律分析[J].世界中西医结合杂志，2015，10(2)：275-277.[8] 于兴文，李新霞，龚庆悦，等.密度聚类算法在卵巢早衰古代方用药分析中的应用[J].时珍国医国药，2017，28(7)：1789-1791.[9] GIORGIO VALENTINI. Hierarchical Ensemble Methods forProtein Function Prediction[J].ISRN Bioinform，2014，5(4)：1-34.[10] 何流，刘鹏，邱模炎.甘味药在张仲景治疗虚劳病中的应用探析[J].中医杂志，2018，59(10)：890-892.[11] 范铁兵，杨志旭“. 和法”治疗虚劳研究概况[J].辽宁中医药大学学报，2017，19(9)：78-81.[12] 何流，邱模炎，刘鹏，等.张仲景虚劳病学术思想对血透患者虚弱综合征的诊疗指导[J].中华中医药杂志，2018，33(6)：2520-2522.[13] 刘树春，刘洋，张晓伟.基于方剂数据的补肾常用中药及其配伍规律的挖掘分析[J].中国实验方剂学杂志，2015，21(20)：208-212.[14] 胡渊龙，罗伟康.基于数据挖掘的理脾阴法治疗虚劳(重症迁延期)规律探讨[J].中国中医急症，2018，27（4）：573-575.[15] 薛益明.明代医家对虚损治法的研究[J].浙江中医杂志，1994，29(9)：386-387.[16] 章思京，茹清静，吕婷婷.基于关联规则的中医膏方治疗虚劳病用药规律研究[J].中国现代医生杂志，2018，56（9）：137-140.[17] 陈素枝，陈文军，檀金川.真阴不足为虚损性疾病的根源[J].中华中医药杂志，2017，32(12)：5427-5429.[18] 夏洁楠.中医虚劳理论研究[D].北京：中国中医科学院，2015：19-97.

摘要目的: 研究不同寄主植物以及不同产地对肉苁蓉4 种苯乙醇苷和可溶性多糖含量的影响。方法: 分别采用HPLC 法和蒽酮－ 硫酸法测定肉苁蓉4 种苯乙醇苷和可溶性多糖含量。结果: 在不同寄主植物对肉苁蓉有效成分影响的研究中，秋季采收的四翅滨藜寄生肉苁蓉中4 种苯乙醇苷和可溶性多糖含量均高于梭梭寄生肉苁蓉; 春季采收的四翅滨藜寄生肉苁蓉中松果菊苷、肉苁蓉苷A 和毛蕊花糖苷含量高于梭梭寄生肉苁蓉，而管花苷A 和可溶性多糖含量低于梭梭寄生肉苁蓉。在不同产地对肉苁蓉有效成分影响的研究中，以甘肃民勤松果菊苷和管花苷A 含量最高; 甘肃景泰肉苁蓉苷A 和可溶性多糖含量最高; 毛蕊花糖苷含量则以甘肃靖远最高。4 种苯乙醇苷含量均以春季采收时最佳; 春季采收的梭梭寄生肉苁蓉中可溶性多糖含量高于秋季，四翅滨藜寄生肉苁蓉则以秋季最佳。结论: 不同寄主、产地及采收期肉苁蓉药材中5 种有效成分含量存在较大差异，可为肉苁蓉后续的开发利用提供实验依据。关键词：肉苁蓉; 梭梭; 四翅滨藜; 苯乙醇苷; 可溶性多糖肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉( Cistanches deserticolaY. C. Ma) 或德赢vwin登录 ( Cistanche tubulosa( Schenk) Wight) 干燥带鳞叶的肉质茎，亦称大芸［1］，是我国名贵的中药材，也是甘肃省道地药材之一，主要活性成分为苯乙醇苷类和可溶性多糖［2 － 5］。现代药理学研究表明，肉苁蓉具有助阳通便、抗氧化、抗肿瘤、增强机体免疫力等药理作用［6 － 13］，主要用于阳痿、不孕、肠燥便秘等［1，4］。肉苁蓉传统寄主植物为藜科植物梭梭( Haloxylonammodendron ( C. A. Mey. ) Bunge) 和白梭梭( Haloxylon persicum Bunge ex Boiss. et Buhse) ，具有耐旱、耐寒、耐盐碱、耐贫瘠等特性［15］，以梭梭为寄主植物种植肉苁蓉已经获得了成功，但梭梭年生长量较小，经济价值较低［15 － 16］。为了解决传统寄主植物的弊端，甘肃地区技术人员成功种植以四翅滨藜( Atriplex canescens ( Pursh) Nutt. ) 为寄主植物的肉苁蓉，四翅滨藜和梭梭都属于藜科属植物，两者基源相同，这为接种肉苁蓉提供了科学依据，四翅滨藜生物量大，接种成功可为肉苁蓉提供更多的养分，有益于肉苁蓉的生长，研究表明，四翅滨藜在高盐碱地的造林成活率明显高于红柳、多枝柽柳、梭梭等抗盐碱树种［17］，不同寄主植物生长的肉苁蓉，产地、采收期的不同也会使肉苁蓉的有效成分含量存在差异［18 － 20］。2015 年版《中国药典》只规定了以松果菊苷和毛蕊花糖苷2 种苯乙醇苷成分作为指标成分，而中医理论研究表明，中药药效的发挥是多种有效成分共同作用的结果，有效成分含量的多少将直接影响中药药效，因此仅以2 种苯乙醇苷成分并不足以全面反映肉苁蓉的整体质量［21 － 22］。由于对四翅滨藜寄生肉苁蓉研究较少，而为了探究这种新型寄主植物对肉苁蓉的药效成分的影响，本研究以春、秋2 个采收期的四翅滨藜寄生肉苁蓉为研究对象，以梭梭寄生肉苁蓉为对照，基于5 种有效成分—松果菊苷、肉苁蓉苷A、管花苷A、毛蕊花糖苷、可溶性多糖对肉苁蓉质量进行较全面考察和分析，进一步揭示了肉苁蓉整体质量特征和道地性品质内涵。同时研究甘肃不同产地梭梭寄生肉苁蓉功效成分的差异性，旨在为肉苁蓉道地产区和采收季节的确定提供科学的理论依据。1 材料与仪器1. 1 材料梭梭寄生肉苁蓉分别采收于甘肃省民勤县、景泰县、靖远县肉苁蓉种植基地，四翅滨藜寄生肉苁蓉采收于甘肃省民勤治沙综合试验站。样品经流水洗净，去除泥沙，蒸制软化，切片，再于70℃烘干，粉碎，过4 号筛，备用。1. 2 仪器与试剂试验仪器: Waters Acquity 液相色谱仪，PDA 检测器，Empower 色谱工作站及四元溶剂管理系统( 美国Waters 公司) ; AL104 分析天平( 梅特勒－ 托利多仪器有限公司) ; 超声波清洗机( 深圳市得康科技有限公司) ; 超纯水器－ 优普系列( 成都优普仪器设备有限公司) ; DK －Ⅱ数显恒温水浴锅( 天津伊若达仪器设备有限公司) ; UV － 2450 紫外－ 可见分光光度计( 东莞市宏诚光学制品有限公司) 。试验试剂: 蒽酮、浓硫酸、乙醇、对照品松果菊苷( 批号82854 － 37 － 3，质量分数≥98%) 、肉苁蓉苷A( 批号93236 － 42 － 1，质量分数≥95%) 、毛蕊花糖苷( 批号61276 － 17 － 3，质量分数≥98%) 均购于成都普菲德生物技术有限公司; 管花苷A( 批号112516－ 05 － 9，质量分数≥98%) 购于上海源叶生物科技有限公司; 无水葡萄糖购于上海源叶生物科技有限公司; 甲酸( 德国Merck 公司，色谱纯) ; 甲醇( 德国Merck 公司，色谱纯) ; 超纯水，其他试剂均为分析纯。2 测定方法2. 1 苯乙醇苷成分的测定2. 1. 1 混合对照品溶液的制备精密称取松果菊苷、肉苁蓉苷A、管花苷A 和毛蕊花糖苷对照品适量，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成浓度分别为0. 57、0. 16、0. 016、0. 048 mg·mL － 1混合溶液，摇匀，即得。2. 1. 2 供试品溶液的制备称定样品粉末1. 0 g，置100 mL 棕色量瓶中，精密加入50% 甲醇50 mL，密塞，摇匀，称定，浸泡30min，超声处理( 功率250 W，频率35 kHz) 40 min，待冷却至室温，称定，加50%甲醇补足减失质量，摇匀，静置，取上清液，用0. 45 μm 微孔滤膜滤过，即得。2. 1. 3 色谱条件色谱柱Waters Symmetry C18( 50 mm × 4. 6 mm，5μm) ; 流动相为甲醇( A) － 0. 1% 甲酸水溶液( B) ，洗脱梯度0 ～ 5 min，15% ～ 20% A; 5 ～ 12 min，20% ～45%A; 12 ～16 min， 45% ～ 55%A; 16 ～ 20 min， 55% ～35%A; 20 ～22 min， 35% ～15%A; 22 ～ 24 min， 15%A;流速1. 0 mL·min － 1 ; 检测波长330 nm; 进样量10μL; 柱温30 ℃。对照品和供试品的色谱图见图1。2. 1. 4 线性关系考察分别取上述混合对照品溶液0. 5、5、10、15、20μL，按“2. 1. 3”项色谱条件进行测定。以对照品进样量为横坐标( X) ，峰面积为纵坐标( Y) ，进行线性回归，得回归方程分别为松果菊苷Y = 1 × 106 X +44933，r = 0. 999 8，线性范围0. 285 ～ 11. 4 μg; 肉苁蓉苷A Y = 1 × 106X － 4454. 9，r = 0. 999 9，线性范围0. 08 ～ 3. 2 μg; 管花苷A Y = 2 × 106 X － 9819. 9，r =0. 999 2，线性范围0. 008 ～ 0. 32 μg; 毛蕊花糖苷Y =1 × 106 X － 12 989，r = 0. 999 4，线性范围0. 024 ～0. 96 μg。2. 1. 5 精密度试验取“2. 1. 1”项混合对照品溶液10 μL，连续进样6 次，记录4 种对照品各自的峰面积，结果松果菊苷、肉苁蓉苷A、管花苷A 和毛蕊花糖苷峰面积ＲSD值分别为0. 20%、0. 18%、2. 10%、1. 45%，表明仪器精密度良好。2. 1. 6 重复性试验取同一批肉苁蓉样品6 份，按“2. 1. 2”项制备供试品溶液，“2. 1. 3”项色谱条件进样，记录峰面积。计算得到松果菊苷、肉苁蓉苷A、管花苷A 和毛蕊花糖苷的ＲSD 值分别为0. 08%、0. 40%、1. 11%、0. 81%，表明该方法重复性良好。2. 1. 7 稳定性试验取同一批肉苁蓉样品6 份，按“2. 1. 2”项制备供试品溶液，“2. 1. 3”项色谱条件下于0、2、4、12、24h 进样，记录松果菊苷、肉苁蓉苷A、管花苷A 和毛蕊花糖苷峰面积，ＲSD 值分别为0. 45%、1. 68%、1. 89%、1. 05%，表明供试品在24 h 内稳定。2. 1. 8 加样回收率试验取已知含量的肉苁蓉样品0. 5 g，精密称取6份，分别加入适量对照品溶液，加50% 甲醇补足至50 mL，按“2. 1. 3”项色谱条件进样，测得松果菊苷、肉苁蓉苷A、管花苷A、毛蕊花糖苷平均加样回收率分别为103. 24%、103. 54%、97. 67%、101. 01%，ＲSD 分别为4. 18%、3. 89%、3. 90%、3. 32%，加样回收率良好。2. 1. 9 含量测定按“2. 1. 2”项下方法制备样品，分别精密吸取供试品溶液各10 μL 注入高效液相色谱仪测定。2. 2 可溶性多糖测定2. 2. 1 供试品溶液制备取干燥后的肉苁蓉粉末1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入95% 乙醇50 mL，超声30 min，趁热过滤，重复提取1 次，滤渣挥干乙醇后加水50 mL，超声处理30 min，重复提取1 次。合并滤液，加活性炭吸附脱色，转移至100 mL 容量瓶中，蒸馏水定容至刻度线，密塞，摇匀，取1 mL 溶液至50 mL 量瓶中，蒸馏水定容至刻度线，即得可溶性多糖供试液。2. 2. 2 对照品溶液的制备精密称定葡萄糖对照品12. 3 mg，加蒸馏水溶解并定容至100 mL 棕色量瓶中。吸取1、3、5、7、8、9 mL 分别置于10 mL 量瓶中，蒸馏水定容至刻度线，即得到不同浓度的对照品溶液。2. 2. 3 含量测定以蒸馏水做空白对照，取蒸馏水与供试品各2mL，冰水浴中缓慢加硫酸－ 蒽酮试液5 mL，摇匀，沸水浴10 min，冷却，于626 nm 波长下测定。2. 2. 4 方法学考察精密度试验ＲSD 值为0. 65%，表明仪器精密度良好; 稳定性试验ＲSD 值为4. 55%，表明供试品在2 h 内稳定性良好; 重复性试验ＲSD 值为0. 05%，表明该方法重复性良好。2. 3 数据分析利用Excel 2010 软件进行数据统计，SPSS 23. 0软件进行方差分析。3 结果及分析3. 1 不同寄主和不同采收季节肉苁蓉苯乙醇苷含量以甘肃省民勤治沙综合试验站采收的四翅滨藜寄生肉苁蓉和甘肃省民勤县采收的梭梭寄生肉苁蓉为研究对象，通过对不同寄主和不同采收季节肉苁蓉苯乙醇苷含量的测定可以看出( 表1) ，不同寄主和不同采收季节肉苁蓉苯乙醇苷含量存在差异。秋季采收的不同寄主肉苁蓉中，寄主在四翅滨藜上的肉苁蓉中松果菊苷、肉苁蓉苷A 和管花苷A 含量均高于寄主在梭梭上肉苁蓉各成分含量，且差异显著( P ＜ 0. 05 ) ，分别高出了49. 05%、49. 31%、59. 39%。春季采收的不同寄主肉苁蓉中，四翅滨藜寄生肉苁蓉松果菊苷、肉苁蓉苷A 和毛蕊花糖苷含量分别高出了梭梭寄生肉苁蓉73. 50%、49. 29%、50. 95%，且差异显著。而以4 种苯乙醇苷成分含量作为评价标准，不论是秋季采收还是春季采收，均以四翅滨藜寄生肉苁蓉苯乙醇苷成分含量高。春季采收的梭梭寄生肉苁蓉中松果菊苷、管花苷A 和毛蕊花糖苷含量都高于秋季采收的肉苁蓉，分别高出了29. 06%、89. 44%、90. 77%，且差异显著，而肉苁蓉苷A 含量差异不显著。春季采收的四翅滨藜寄生肉苁蓉中松果菊苷、管花苷A 和毛蕊花糖苷含量显著高于秋季采收的肉苁蓉，分别高出了63. 10%、68. 67%、95. 03%，而肉苁蓉苷A 含量差异不明显。通过对两种不同寄主植物春秋两季采收肉苁蓉中4 种苯乙醇苷成分含量进行分析，总体来看，以春季采收的质量较好。3. 2 不同寄主和不同采收季节肉苁蓉可溶性多糖含量以甘肃省民勤治沙综合试验站采收的四翅滨藜寄生肉苁蓉和甘肃省民勤县采收的梭梭寄生肉苁蓉为研究对象，通过对不同寄主和不同采收季节肉苁蓉可溶性多糖含量的测定可以看出( 表2) ，秋季采收的不同寄主肉苁蓉中，四翅滨藜寄生肉苁蓉可溶性多糖含量高于梭梭寄生肉苁蓉，高出了24. 73%;春季采收的不同寄主肉苁蓉中，梭梭寄生肉苁蓉可溶性多糖含量显著高于四翅滨藜寄生肉苁蓉( P ＜0. 05) ，高出了84. 97%。不同季节采收的梭梭寄生肉苁蓉中，春季采收的肉苁蓉可溶性多糖含量显著高于秋季采收的肉苁蓉; 不同季节采收的四翅滨藜寄生肉苁蓉中，秋季采收的肉苁蓉可溶性多糖含量显著高于春季采收的肉苁蓉( P ＜ 0. 05) 。性多糖含量高于梭梭寄生肉苁蓉，高出了24. 73%;春季采收的不同寄主肉苁蓉中，梭梭寄生肉苁蓉可溶性多糖含量显著高于四翅滨藜寄生肉苁蓉( P ＜0. 05) ，高出了84. 97%。不同季节采收的梭梭寄生肉苁蓉中，春季采收的肉苁蓉可溶性多糖含量显著高于秋季采收的肉苁蓉; 不同季节采收的四翅滨藜寄生肉苁蓉中，秋季采收的肉苁蓉可溶性多糖含量显著高于春季采收的肉苁蓉( P ＜ 0. 05) 。3. 3 不同产地梭梭寄生肉苁蓉苯乙醇苷含量通过对甘肃省不同产地4 种苯乙醇苷含量的测定可以看出( 表3) ，不同产地的肉苁蓉样品中4 种苯乙醇苷类含量存在差异，这可能是由于不同产地药材种植环境差异较大，甘肃民勤肉苁蓉松果菊苷含量为最高，达19. 463 mg·g － 1，分别高出了甘肃靖远和甘肃景泰74. 62%、26. 15%，且差异显著( P ＜0. 5) 。甘肃景泰肉苁蓉肉苁蓉苷A 含量相比其他两个产地较高，达到了5. 239 mg·g － 1，且显著高于甘肃靖远72. 09%。甘肃民勤肉苁蓉管花苷A 含量最高为0. 260 mg·g － 1，高出了甘肃靖远54. 74%。甘肃靖远肉苁蓉毛蕊花糖苷//www.wagawa.com//www.wagawa.com含量最高，达到了1. 898 mg·g － 1。通过对3 个产地肉苁蓉4 种苯乙醇苷含量分析，整体来看还是以甘肃民勤的质量最优。3. 4 不同产地梭梭寄生肉苁蓉可溶性多糖含量通过对甘肃省不同产地可溶性多糖含量的测定可以看出( 表4) ，甘肃景泰肉苁蓉中可溶性多糖含量最高为20. 467 mg·g － 1，与其他两个产地的肉苁蓉存在显著差距( P ＜ 0. 05) ，3 个产地肉苁蓉可溶性多糖含量依次为甘肃景泰＞ 甘肃民勤＞ 甘肃靖远。4 讨论与结论产地、品种及采收期对中药材成分含量的影响一直是学者关注的热点问题，如赵志红等［18］研究发现，肉苁蓉在不同产地种药材的化学成分含量会产生变化; 王雪媛等［12］研究发现，肉苁蓉春季、秋季样品中有效成分波动差异较大。本研究结果显示，不同寄主肉苁蓉药材中5 种有效成分含量存在较大差异。四翅滨藜寄生肉苁蓉药材中苯乙醇苷和可溶性多糖的含量整体高于梭梭寄生肉苁蓉，原因可能与不同寄主植物、生长条件、水分等多种因素有关［24］。此外，因为四翅滨藜本身生物量大，可能给肉苁蓉提供了大量的养分，而到底是如何传递养分，需要后续的进行进一步说明。现阶段四翅滨藜寄生肉苁蓉研究较少且样本不够多，可为开发四翅滨藜寄生肉苁蓉提供一定的参考价值，为后续肉苁蓉的开发利用提供理论依据。对于春秋两季采收的肉苁蓉，两种不同寄主肉苁蓉药材苯乙醇苷含量均以春季采收的含量最高，梭梭寄生肉苁蓉药材可溶性多糖含量以春季最高，四翅滨藜寄生肉苁蓉可溶性多糖含量以秋季最高。这可能与不同采收期环境中生态因素( 如土壤温度、空气温度、空气湿度、光合有效辐射等) 会发生不同程度的变化等有关［25 － 26］，而中国药典规定松果菊苷和毛蕊花糖苷含量作为肉苁蓉质量评价标准，可以得出肉苁蓉以春季采收较好，为后续肉苁蓉采收季节提供理论依据。甘肃不同产地梭梭寄生肉苁蓉苯乙醇苷含量有较大差距，说明产地对肉苁蓉质量有一定的影响，而不同产地肉苁蓉中可溶性多糖含量无较大变化，综合评价出甘肃民勤梭梭寄生肉苁蓉质量最优。研究结果显示产地和寄主及采收季节均会影响肉苁蓉中苯乙醇含量和可溶性多糖含量。苯乙醇苷类成分，具有较强的补肾阳和神经保护作用，而肉苁蓉含有丰富多糖，具有较强的抗衰老和润肠通便之功效［27 － 29］。由上述可知，肉苁蓉寄主植物的不同对肉苁蓉质量有一定影响，且各成分含量存在较大差异性。新兴发现的四翅滨藜寄生肉苁蓉质量较好，且春季采收明显好于秋季采收，这需要后续研究学者对四翅滨藜寄生肉苁蓉进行大量研究，制定更加客观统一的质控标准。新兴寄主植物四翅滨藜的成功引入对于提高肉苁蓉资源以及开发利用具有深远意义。参考文献:［1］ 国家药典委员会. 中华人民共和国药典( 一部) ［S］. 北京:中国医药科技出版社，2015: 281 － 282.［2］ 毕萃萃，刘银路，魏芬芬，等. 肉苁蓉的主要化学成分及生物活性研究进展［J］. 药物评价研究，2019，42 ( 9 ) : 1896－ 1900.［3］ Lei L，Jiang Y，Liu X，et al. New glycosides from Cistanche deserticola［J］. Helv Chim Acta，2010，90( 1) : 79.［4］ Liu X M，Li J，Jiang Y，et al. Chemical constituents fromCistanche deserticola ( Orobanchaceae) ［J］. Biochem Syst Ecol，2013，47( 8) : 21.［5］ Tu P F，Shi H M，Song Z H，et al. Chemical constituents ofCistanche deserticola ［J］. J Asian Nat Prod Ｒes，2007，9( 1) : 79.［6］ 范亚楠，黄玉秋，贾天柱，等. 星点设计－ 效应面法优化肉苁蓉软化切制工艺［J］. 中药材，2017，40( 3) : 656 － 659.［7］ 颜昱. 中药肉苁蓉化学成分及体内成分分析［D］. 北京: 中央民族大学，2018.［8］ 刘文静，刘瑶，宋青青，等. 利用～ 1H － NMＲ 比较德赢vwin登录 野生品和栽培品的化学成分组［J］. 中国中药杂志，2018，43( 17) : 3506 － 3512.［9］ 薛海燕，焦婵媛，姚军． 肉苁蓉总苷药理作用的研究现状［J］． 中国临床药理学杂志，2018，34( 4) : 486 － 488.［10］ 王晓琴，黄慧，李彩峰，等. 列当属、肉苁蓉属与草苁蓉属药用植物亲缘学初探［J］. 中国中药杂志，2018，43( 23) : 4608.［11］ Li F，Yang X，Yang Y，et al. Antiosteoporotic activity of echinacosidein ovariectomized rats［J］. Phytomedicine，2013，20( 6) :549.［12］ 王雪媛，肖波，张治峰，等. 不同采收期肉苁蓉中松果菊苷、毛蕊花糖苷、半乳糖醇、甜菜碱及可溶性多糖量的测定及其道地性研究［J］. 中草药，2017，48( 18) : 3841 － 3846.［13］ 王晓琴，黄慧，李彩峰，等. 列当属、肉苁蓉属与草苁蓉属药用植物亲缘学初探［J］. 中国中药杂志， 2018， 43( 23) : 4608.［14］ 斯琴巴特尔，刘杰，席琳图雅，等. 浅谈肉苁蓉的临床价值及人工种植情况［J］. 世界最新医学信息文摘，2019，19( 93) : 260，271.［15］ 董法祥，李富有. 梭梭人工接种肉苁蓉技术［J］. 农村科技，2020( 01) : 48 － 50.［16］ 马旭东，郭晔红，于霞霞，等. 荒漠肉苁蓉规范化栽培技术研究进展［J］. 中药材，2018，41( 12) : 2958 － 2961.［17］ 费绍全，邓刚，吴雪松，等. 临夏州四翅滨藜引种试验初报［J］. 2016，41( 1) : 26 － 28.［18］ 赵志红，邢桉荣，王志强，等. 不同产地肉苁蓉品质特征研究［J］. 辽宁中医药大学学报，2019，21( 12) : 65 － 69.［19］ 覃文婷，宿美凤，雒晓梅，等. 定性分析不同产地荒漠肉苁蓉苯乙醇苷类及多糖类成分［J］. 辽宁中医药大学学报，2018，20( 07) : 77 － 81.［20］ 钱浩，喻芳君，耿宗成，等. 不同季节采收的肉苁蓉中4 种苯乙醇苷的含量比较研究［J］. 药物分析杂志，2016，36( 11) : 1971 － 1976.［21］ 王欣，覃瑶，王德江，等. 一测多评法在中药质量控制中的应用进展［J］. 中成药，2016，38( 2) : 395 － 402.［22］ 李婷婷，王新芳，马玲，等. 谱效关系与一测多评相结合全面提升中药材质量控制标准［J］. 中国实验方剂学杂志，2014，20( 19) : 225 － 228.［23］ 孟祥才，黄璐琦，陈士林，等. 论中药材栽培主产区的形成因素及栽培区划［J］. 中国中药杂志，2012，37 ( 21) : 3334－ 3339.［24］ 刘付松，陈翠莎，孙佩，等. 不同品种及采收期党参药材中5 种有效成分含量的比较研究［J］. 中国药房，2020，31( 14) : 1677 － 1682.［25］ 钱浩，喻芳君，耿宗成，等. 不同季节采收的肉苁蓉中4 种苯乙醇苷的含量比较研究［J］. 药物分析杂志，2016，36( 11) : 1971 － 1976.［26］ 黄翔，郭晔红，贾存勤，等. 肉苁蓉提取工艺及干燥方式研究［J］. 中草药，2019，50( 15) : 3622 － 3630.［27］ 高妍，过立农，马双成，等. 基于UPLC 特征图谱及主要成分含量的3 种肉苁蓉比较研究［J］. 中国中药杂志，2019，44( 17) : 3749 － 3757.［28］ 肖星辉，高海霞，李鸿辉，等. 荒漠肉苁蓉多糖提取及纯化工艺优化［J］. 中国中药杂志，2019，44( 3) : 475 － 481.

摘要目的: 考察不同初加工温度对肉欢蓉中主要有效成分含量的影响。方法: 以3 33n m 为测定波长, 以松果菊普为时照品, 采用大孔吸附树脂一U v 法测定不同初加工温度下肉欢蓉中苯乙醉普的含量; 采用20 05 年版《中国药典》“ 肉苁蓉”项下H P L C 法, 测定不同初加工温度下肉欢蓉苯乙醇普中主要成分松果菊等和毛蕊花糖普的含量; 采用硫酸一苯酚法, 测定不同初加工温度下肉苁蓉中多糖的含量。结果: 苯乙醇等的含量以自然晾干和干燥箱内40 ℃ 干燥的结果为高; 随着初加工温度的升高, 苯乙醇普的含量大部分有下降的趋势。松果菊普和毛蕊花糖普的总量以自然晾干为最高, 但不呈规律性的变化。多糖的含量以干燥箱内40 ℃ 和60 ℃干燥的结果为高, 其中以60 ℃ 干燥的结果为最高; 其后, 随着初加工温度的升高, 多糖的含量下降。春季药材上部(有少许中空) 苯乙醇普的含量低于药材下部的含量; 且上部松果菊普和毛蕊花糖普的总量大大低于药材下部的含量, 最大相差约27 倍; 多糖的含量也以药材下部为高。秋季药材中的多糖含量比春季药材(上部有少许中空)的含量高。结论: 本研究结果为肉苁蓉的初加工方法提供了科学依据。关键词：肉苁蓉; 初加工; 温度; 苯乙醇普; 松果菊普; 毛蕊花糖苍; 多糖; 含量//www.wagawa.com肉苁蓉( C i s t a n c 人c d e s e r t i c o l a Y.C.M a )为列当科肉苁蓉属多年生高等寄生植物, 其味甘咸微辛酸、微温, 在《神农百草经》中列为上品, 具有补肾益精、润肠通便、延缓衰老等功效, 被誉为“沙漠人参” 。肉苁蓉中主要活性成分是苯乙醇昔类化合物、肉苁蓉多糖等, 其中苯乙醇昔的主要作用是调节内分泌、促进代谢和强壮作用以及清除自由基和抗衰老作用; 肉苁蓉多糖可以增强机体的免疫功能1 .2] 。由于过度开发利用, 其野生资源濒临枯竭。肉苁蓉及其寄主固沙植物梭梭已被列为国家二级保护植物, 并收人《国际野生植物保护名录》川。肉苁蓉传统的初加工方法有晾晒法、盐渍法、窖藏法等, 这些方法费工费时,受自然条件的影响, 质量不稳定, 严重影响药材的利用率及疗效; 并且, 传统的初加工方法己远远不能满足产地大量药材初加工的需要。因此, 如何提高珍稀濒危药材肉苁蓉的利用率, 制定符合产地大量药材初加工的方法, 以保证药材质量的稳定可靠, 是待解决的关键问题。本研究以栽培获得成功的宁夏肉从蓉为研究对象, 采用多指标质量评价体系, 对产地初加工的肉苁蓉药材中主要有效成分苯乙醇昔、多糖的含量进行了测定, 并对苯乙醇苷中松果菊昔和毛蕊花糖苷的含量也进行了测定, 为肉从蓉的产地初加工方法提供了科学依据。1 材料1.1 仪器2 5 50 型紫外可见分光光度计( 日本岛津公司) ; D H G -91 43 B S 一皿电热恒温鼓风干燥箱( 无锡市苏嘉实验设备厂) ;T P 1 50 超声波清洗机(北京天鹏新技术有限公司)。1.2 试药松果菊苷对照品(供含量测定用, 中国药品生物制品检定所, 批号: 1 1 1 670 一2 0 05 0 2 ) ; 毛蕊花糖苷对照品(供含量测定用, 中国药品生物制品检定所, 批号: 11 530 一2 0 0 4 04) ; 葡萄糖( 分析纯, 广州化学试剂厂) ; 苯酚、硫酸(分析纯, 北京化学试剂二厂) ; 甲醇、乙睛(色谱纯, 美国F i s h e r S e i e n t if i c 公司)。苯酚试剂: 取苯酚2 009 , 加铝片0.2 9 和碳酸氢钠0. 1 9 , 蒸馏, 收集1 82℃ 馏份, 称取10 9 于棕色瓶内, 加水150 m L 溶解,置冰箱中, 备用。肉苁蓉药材采于宁夏永宁县肉从蓉种植基地, 由中国协和医科大学药用植物研究所栽培室陈君研究员鉴定。于春季采挖2 批药材, 秋季采挖1 批药材。由于春季采挖药材上部有少量中空, 将此部分药材分为上下2 个部分, 每部分再均分为4 等份进行初加工, 以便含量测定时减少取样的误差; 秋季药材整株纵向均分为4 等份进行初加工。样品按表1 所示进行编号。初加工方法为: 各部分的新鲜药材切成厚约2m m 的小丁状, 分别置室内自然晾干( 约25℃ ) , 以及干燥箱内分别置40 ℃ 、60℃ 、8 0 ℃ 干燥至干, 粉碎, 过4 号筛。2 方法与结果2.1 苯乙醇苷的含t 测定2.1.1 对照品溶液的制备: 精密称取松果菊苷对照品适量,置棕色量瓶中, 用甲醇制成每l m L 含0.4m g 的溶液, 即得。2.1.2 供试品溶液的制备: 取本品粉末约19 , 精密称定, 加人5 0% 乙醇50 m L , 密塞, 称定重量, 回流提取h5, 放冷, 再次称定重量, 用50 % 乙醇补足, 摇匀, 滤过, 精密量取续滤液25 m L, 置水浴上蒸至近干, 残渣加水10 m L 使溶解, 放冷, 通过D 一10 1 一I 型大孔吸附树脂柱(柱长20c m、内径cZ m ) , 依次以水5 0 m L、2 0% 乙醇50 m L 洗脱; 弃去洗脱液, 继用70 % 乙醇8 0m L 洗脱, 收集洗脱液, 蒸干, 用甲醇溶解并转移至1 0m L 量瓶中, 精密量取0.5s m L 置10 m L 量瓶中, 加甲醇至刻度, 摇匀,即得。2.1.3 测定方法: 以甲醇为空白对照, 取对照品溶液和供试品溶液分别在3 3 n m 波长处测定吸收度, 根据吸收度值, 按2 00 5 年版《中国药典》(一部) 附录V A 紫外一可见分光光度法含量测定中对照品比较法计算样品中苯乙醇昔的含量(均以干燥品计算)。2.1.4 样品含量测定: 采用上述苯乙醇苷的含量测定方法,对肉从蓉样品进行苯乙醇苷的含量测定, 结果详见表l( 均以干燥品计算)。2.2 松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量测定采用2 0 0 5 年版《中国药典》(一部)“肉苁蓉” 项下含量测定方法睁’ , 对表1 肉苁蓉样品中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量进行测定。2.2.1 色谱条件: 色谱柱为K r o m a s i l C l , ( 2 5 0 m m 只4.6 m m ,5拌m ), 流动相为乙醇一甲醇一1% 醋酸( 10 : 15 : 7 5) , 检测波长为33 n m , 进样量为1 0解L, 流速为l m L·m in ` , 柱温为25℃ 。理论塔板数按松果菊苷峰计算应不低于4 00。在此条件下, 样品中松果菊苷和毛蕊花糖苷与其他相关峰均能达到基线分离, 详见图1。2.2.2 对照品溶液的制备: 精密量取松果菊苷对照品和毛蕊花糖苷对照品适量, 分别加流动相制成每l m L 含松果菊苷o.14m g 和毛蕊花糖苷0.10 m g 的溶液, 即得。2.2.3 供试品溶液的制备: 取肉苁蓉样品粉末约0.59 , 精密称定, 置50 m L 棕色容量瓶中, 精密加人流动相25 m L, 称重, 浸泡0.5h, 超声处理40 m 讯, 放冷, 再称定重量, 用流动相补足, 摇匀, 离心, 静置, 取上清液过滤, 取续滤液, 即得。2.2.4 测定方法: 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1mL , 注人液相色谱仪, 测定。2,2,5 样品含量测定: 采用上述含量测定方法, 测定肉苁蓉样品中松果菊苷和毛蕊花糖苷含量, 计算松果菊苷和毛蕊花糖苷的总量, 结果详见表l( 均以千燥品计算)。2.3 多糖的含量测定肉苁蓉中多糖提取方法有超声提取! 、微波提取、索氏提取团以及水煎煮提取 ; 含量测定方法多采用硫酸一苯酚法” 。本研究参考文献。川, 采用硫酸一苯酚法, 并对样品前处理进行改进, 以缩短分析时间。2.3.1 对照品溶液的制备: 精密称取干燥至恒重的葡萄糖适量, 置容量瓶中, 用水制成每l m L 含0.104 7m g 的溶液, 即得。2.3.2 供试品溶液的制备: 取本品粉末约19 , 精密称定, 加人8 0% 乙醇回流提取1h( 2 次,50 m L·次一` ) , 过滤, 弃去滤液, 滤渣待挥干乙醇后, 加水煎煮2 h( 2 次,50 m L·次一` ) , 过滤, 合并2 次滤液, 洗至10 0m L 容量瓶中, 加水定容, 摇匀, 精密吸取l m L,加水定容至1 0m L, 摇匀, 即得。2.3.3 测定波长的选择: 精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1.0 m L, 分别置干燥试管中, 加水至2.0 m L, 再分别加入苯酚试剂1.0m L , 摇匀; 迅速加人浓硫酸5.0 m L , 并在刻度试管中定容至8.0m L, 振摇5 m in , 沸水浴加热1 5m in , 放冷, 同时做一空白, 在4 50 一550 n m 波长范围内进行扫描。结果, 在4 90 n m波长处有最大吸收, 故选择4 90 n m 为测定波长。2.3. 4 标准曲线的绘制: 精密吸取葡萄糖对照品溶液0.5、0.7、0.9、1.1、1.3 m L 置干燥试管中, 分别加水至2.0 m L , 照’,2.3.’3 项下 “加人苯酚试剂1.0ml  起操作, 在4 90 n m 波长处测定吸光度, 以吸光度( Y ) 对葡萄糖对照品的进样量( X )进行线性回归, 得回归方程为Y = 5.924 S X 一0.154 3(r = O,9 9 8)。结果表明, 葡萄糖进样量在0.0 52 4 一0.136 1 9范围内与吸光度呈良好线性关系。2.3.5 多糖的提取及精制: 精密称取肉苁蓉粉末20 g , 以8 0 % 乙醇回流提取l h ( 2 次, 15 0 m L·次), 过滤, 残渣挥干乙醇后, 用水回流提取2h ( 2 次, 150ml·次 )。合并提取液, 加人1% 活性碳脱色, 浓缩到25 m L, 放冷后加入乙醇使溶液含醇量为8 0 % , 静置过夜, 过滤, 残渣用80 % 乙醇洗涤后干燥至恒重, 得粗多糖。2.3.6 换算因素的计算: 精密称取干燥至恒重的粗多糖0.1 02 2g 溶解定容至100m L , 取此溶液。0.1 m L, 加水至2 m L ,照“2.3.3”项下“加人苯酚试剂1.0m L”起操作, 在4 9 0 n m 波长处测定吸光度, 按公式f =w/cd 计算换算因素。式中, W 为多糖重量( ug ) , c 为多糖溶液中葡萄糖的重量( ug ) ,D 为多糖的稀释倍数。结果, 测得f =1,52, 相对标准差( R S D ) 为1.46 %( n = 3 )。2.3.7 精密度试验: 取葡萄糖对照品溶液, 按“2.3.4’ 项下方法进行测定。结果, 吸光度的R S D = 1.58 % ( n = 5) , 表明仪器精密度良好。2.3.8 稳定性试验: 取本品供试品溶液, 置干燥试管中, 加水至2.0 m L, 照“2.3.3 ’ 项下“加人苯酚试剂1.0m L’ 起操作, 分别于10、15、20、25、30 m in 在49 0n m 波长处测定吸光度。结果, 总多糖的测定在30 m in 内基本稳定, 吸光度的R SD =1.7 8 %。2.3.9 重现性试验: 取同一批号的肉苁蓉药材粉末适量, 按上述方法进行测定。结果, R S D =1.93 % ( n=5) , 表明重现性良好。2.3.10 加样回收率试验: 取已知含量的肉从蓉药材粉末5份, 分别精密加人葡萄糖对照品适量, 各份均按上述多糖含量测定方法进行测定, 结果详见表2。2.3.1 样品含量测定: 采用上述多糖的含量测定方法, 对肉苁蓉样品进行多糖的含量测定, 结果详见表l( 均以干燥品计算)。3 讨论肉苁蓉中苯乙醇苷的含量测定方法有硝酸铝一比色法、重氮盐一比色法、紫外分光光度( U v ) 法!。在硝酸铝-比色法中, 以海胆昔为对照品, 由于海胆昔结构中有2 个邻二经基, 故可与铝盐络合形成稳定的有色化合物, 在5 10 n m 波长处可进行比色测定, 但肉从蓉中其它非苯乙醇营类的邻二经基物质对本法测定有干扰, 造成结果偏高。在重氮盐一比色法中, 应用苯乙醇昔类中的酚性基团与重氮盐能生成有色物质为原理, 在4 86n m 波长处进行测定, 但肉从蓉中其它非苯乙醇苷类含酚性基团的物质对本测定方法亦有干扰, 影响结果的准确性。目前文献报道的U V 法, 均是采用大孔吸附树脂除去糖等杂质, 富集纯化苯乙醇昔类有效成分, 测定方法较比色法确,但其样品前处理要经过多次回流提取、萃取等步骤, 操作烦琐。针对上述问题, 笔者以松果菊昔为对照品, 采用大孔吸附树脂一U v 法, 对样品前处理方法进行了改进, 并对最佳提取时间和提取溶剂等进行了方法学考察( 另文发表)。从样品含量测定结果来看, 苯乙醇苷的含量以自然晾干和干燥箱内40 ℃ 干燥的结果为高; 随着初加工温度的升高, 苯乙醇苷的含量大部分有下降的趋势。松果菊苷和毛蕊花糖苷的总量以自然晾干为最高, 但不呈现规律性的变化。多糖的含量以干燥箱内60 ℃ 干燥的结果为最高; 其后, 随着初加工温度的升高, 多糖的含量下降。此外, 春季药材上部(有少量中空)的苯乙醇苷的含量低于药材下部的含量, 且松果菊苷和毛蕊花糖苷的总量大大低于药材下部的含量, 最大相差约2 7 倍, 例如编号12号(上部) 和16 号(下部) 样品。多糖的含量也以药材下部为高。再者, 秋季采收药材的多糖含量比春季采收药材( 上部有少许中空)多糖的含量高。以上结果提示, 肉从蓉药材需在出土萌动期之前采收, 其初加工温度以40 ℃ 和60 ℃ 干燥省时, 且主要有效成分含量高、质量好。因此, 在提取肉苁蓉中不同有效成分时, 必须同时考虑药材的不同采收时间、不同部位、不同初加工方法和温度以及干燥效率。本研究结果为肉从蓉的产地初加工方法提供了科学依据。 

人民网新疆和田地区于田县，位于昆仑山与塔克拉玛干沙漠之间，是古丝绸之路南线重镇。这里大陆荒漠气候特征突出，自然条件恶劣，生态环境脆弱经济发展滞后。如今，种植经济农作物德赢vwin登录 ，成为于田县的特色农业之一，既带动了当地经济发展，也有效改善了沙漠的生态环境。近日，中国科学院南京土壤研究所的施卫明教授及安利植物研发中心的科学家，前往兵团第十四师昆玉市二二五团喀孜纳克德赢vwin登录 种植基地进行有机认证，并制定了有机种植模式下的肉苁蓉土壤培肥操作规程，实行合理的、安全的土壤培肥。德赢vwin登录 属名贵中药材，在传统中医领域的使用有着悠久的历史，拥有巨大的药用及保健价值，在我国只出产于新疆南部。德赢vwin登录 产业是新疆和田地区于田县的特色产业之一，肉苁蓉的生长繁殖对气候和环境的要求十分苛刻，其峰值产量仅能维持5-6年，且目前肉苁蓉种植基地，因绝大多数农户没有进行土壤培肥，还是实行原生态的种植模式进行种植，严重制约整体产能的提升和生产收益的增加。据施卫明教授介绍，土壤培肥的有机种植技术可使德赢vwin登录 增产显著，尤其在新林可实现增产和保值的双重效果。若当地农户掌握该技术，可进一步调动当地农户开垦新林种植苁蓉，苁蓉早发、增产、增收，其寄主植物柽柳（红柳）在治沙防沙方面有重要作用，生态环境意义重大。win德赢官方 多年来一直致力于德赢vwin登录 产业化、商品化的事业，多年的技术积累不仅仅使得帝辰的产品品质提升迅速，而且也积累了大量的人工种植肉苁蓉的经验，公司在和田当地政府的配合下通过推动有机农业种植，进一步提升肉苁蓉产业的经济效益，同时也通过柽柳种植防治土壤沙漠化， 从而实现当地农户脱贫致富、西部生态环境保护的双赢目标。

目前，且末县人工接种的肉苁蓉面积已达到6.5万亩，成为新疆南部最大的肉苁蓉种植基地，产品远销国内外。　刘雨珊　摄中新网乌鲁木齐4月15日电 (刘雨珊 苏鑫 阿曼江)眼下，新疆巴州且末县农户们正忙着采收肉苁蓉。肉苁蓉俗称大芸，是一种寄生在梭梭根部的植物，具有极高的药用价值。素有“沙漠人参”之美誉。目前，且末县人工接种的肉苁蓉面积已达到6.5万亩，成为新疆南部最大的肉苁蓉种植基地，产品远销国内外。且末县地处塔克拉玛干沙漠腹地，全县三分之二的面积为沙化土地，县城四面环沙，犹如一座“沙漠孤岛”，生态环境极为脆弱。多年来，在防沙治沙的工作实践中，且末人民积极探索发展生态经济型产业，在梭梭林下接种肉苁蓉，走出了“以生态产业养生态工程”可持续发展的路。经过多年的实践，且末县成功探索出梭梭根部接种肉苁蓉的产业化治沙模式。　刘雨珊 摄新疆鹏程生态农业科技发展有限公司负责人田野说：“肉苁蓉既能药用，也能食用。且末的肉苁蓉名气越来越大了，很受大家欢迎，国内外的订购单子越来越多。”田来群是一名经验丰富的肉苁蓉种植户，2017年，田来群来到且末县，在当地政府工作人员的指导下，田来群尝试着在梭梭林中套种肉苁蓉，肉苁蓉带来的经济效益让他看到向沙漠要效益的前景，经过几年的摸索，田来群套种的肉苁蓉面积已达两千亩。目前，田来群已经收获了30多吨的新鲜肉苁蓉。田来群说：“2017年我来到且末，看到当地人为了防风固沙去种树。我也加入了他们的团队。开始在且末种梭梭林。种防风固沙林，同时也在种肉苁蓉。在干旱的沙漠当中，向沙漠要效益并不是一件容易的事情。”新疆巴州且末县防风治沙工作站站长阿巴斯·艾萨介绍说：“且末县开春的时候风沙比较大，最头疼的一件事就是刮风，大风把管子吹到其它地方，肉苁蓉经常吃不上水而枯死，后来我们在摸索中发现，用铁丝做的植被针，把管子固定到沙漠中间，肉苁蓉全部能吃上水。”肉苁蓉产业成了风沙沿线农民增收和壮大集体经济实力的一条重要渠道。　刘雨珊 摄经过多年的实践，且末县成功探索出梭梭根部接种肉苁蓉的产业化治沙模式。与此同时，且末县积极将沙漠化治理与经济发展、调整优化农业结构有机结合起来，使肉苁蓉的种植更加智慧化、科技化。肉苁蓉的丰收，给且末生态治沙工作带来了良好的经济效益，也解决了生态治沙成本高的瓶颈制约。阿巴斯·艾萨说：“今年我们种植肉苁蓉的面积已经达到了6.5万亩，预计今年春季和秋季，我们收获1400吨左右的新鲜肉苁蓉，从中受益的农民5000余人。”目前，且末县通过招商引资建设、股份制经营、发展乡村集体经济等多种经营方式，积极探索发展沙漠种植、生态旅游、生态养殖、观光、休闲等产业。通过不断拓宽沙产业发展渠道，已走上了一条“以生态产业养生态工程”可持续发展的路。新疆巴州且末县农业农村局党组书记、自然资源局党组副书记周斌说：“我们计划到2025年，种植20万亩肉苁蓉，通过有机绿洲发展战略的推动下，我们的防沙、治沙、用沙这套可循环的模式，高质量的推动且末县的生态文明建设，为且末县的持续发展，造福全县群众奠定坚实的基础。”

　　新疆于田县德赢vwin登录 人工种植试验基地，成片的红柳生长旺盛，其根部由人工种植的德赢vwin登录 正等待采挖。　　近年来，和田地区采取有力措施加大德赢vwin登录 产业扶持力度，将其打造成为拉动经济发展的支柱产业和惠民工程，有效促进了农牧民增收致富和经济发展，取得了显著的生态效益、经济效益和社会效益。　　新疆于田县德赢vwin登录 人工种植试验基地内，中国科学院南京土壤研究所施卫明教授、安利植物研发中心高级植物研究科学家董刚强与当地种植户一起查看德赢vwin登录 的生长情况。　　新疆于田县德赢vwin登录 人工种植试验基地内，工作人员正在清理红柳及杂草。（中新社记者 刘新 摄）

说起肉苁蓉，想必很多人都不陌生，它是一种极具保健功效和药用功效的一种食材，在市面上往往出现供不应求的现象，因此现在很多人都想要种植它。不过在种植之前，关于它的利润是大家比较关心的一件事情。其实只要种植的好，利润基本上一亩等达到一万左右的样子。肉苁蓉种植成本及利润分析一、种植成本：首先是它的租地费用，一亩地的费用大概在1000元左右一年。一亩地所需要的种子费是300元左右。水肥的价格大概在1200元左右的样子。那么一亩地所需要的成本大概在2500元。二、利润：一般没一亩地能产肉苁蓉大概800斤的样子，而现在肉苁蓉的收购价格大概在16元一斤，所以每一亩地的产量价格就在12800元。除开它的成本2500元，其亩产的利润一般在一万元左右的样子。并且种植肉苁蓉之后，一般可以连续稳产六七年，所以效益还是非常好的。不过也并不是每个人种植肉苁蓉都能达到这么高的效益，主要还是要看个人的种植技巧和当年的一些气候等因素是否利于它的生长。只有当自然和认为的因素都达到了，才能有更高的效益。肉苁蓉产地在什么地方1、肉苁蓉喜欢生长在气温昼夜温差较大，且比较干旱的地方，如果当地的雨水比较多的话，其实是不利于肉苁蓉生长的。土壤的话，一般选择沙性的土壤是最好的，它的生命力很强，在一些比较干枯的河床上面都能生长，它还喜欢寄生在红柳（怪柳）根部，因此种植肉苁蓉要先种植红柳或是梭梭2、目前肉苁蓉在我国主要分布的地方就是西北地区，比如：新疆的和田、宁夏、甘肃、内蒙古等地是它的主要产区。肉苁蓉还有沙漠人参的说法，由此可见它的价值是非常高的，自古就是一种珍贵的药材，以前是作为贡品进献给皇族的人来食用的。它最主要的功效就是在补肾壮阳方面，是一般的药物都不能比拟的。看了上文中关于肉苁蓉的一些分析，想必大家心里也有了一个底。其实肉苁蓉想要亩产好，利润高，其外在因素和自己的因素都是很重要的。肉苁蓉喜欢在干旱的地方生长，所以在选址上面需要多加注意。

巴哈尔古丽·阿尤甫 郭泉水全寄生植物是指体内不含叶绿素，不能自制养料面依靠吸收寄主体内的水分和营养物质，以维持自身生活的一类植物。在新疆这样干早或半干早的荒漠地区，由于其特殊的地理和气候条件，分布着3科4属11种之多的具有药用价值的寄生植物，肉苁蓉即为其中一种。肉苁蓉主要寄生于黎科校梭属校梭柴和白梭梭以及柽柳的根部。肉苁蓉植株高80-100厘米，地下茎黄色，肉质肥厚，肉质鳞片叶密集：顶生圆锥花序；蒴果，卵形：种子褐色，多数，极细小，椭圆状卵形，具网纹与光泽：胚后熟，花期5-6月，采期6-7月。肉苁蓉（Cistncho deserticoh）为列当科（Orobanchacene）肉苁蓉属（Cistnche）多年生专性寄生草本植物，该属全世界约20种。肉苁蓉为我国濒危物种，也是传统名贵的中草药，其带鳞叶的肉质茎为主要的药用部分。作为补益药始载于《神农本草经》，被列为上品，具有补肾阳、益精血、润肠通便之功效，主治男子阳痿、女子不孕、血枯便秘等症。其在补肾阳方剂中出现的频率最高，有“沙漠人参”之称。肉苁蓉在世界上的分布主要是在北半球温暖的干早地区，从欧洲的伊比利亚半岛，经非洲北部、亚洲的阿拉伯半岛、伊朗、阿富汗、巴基斯坦、印度北部、哈萨克斯坦，到我国西北部内蒙古都有分布。在我国，肉苁蓉主要分布于北纬36＊-37＊范围内的乌兰布和沙漠、腾格里沙漠、巴丹吉林沙漠、河西走廊沙地、塔克拉玛干沙漠和古尔班通古特沙漠。东西横跨内蒙古、陕、甘、宁及新疆等5省区。新疆是我国校梭灌木林分布最为广阔的地区，也是我国肉苁蓉的主要产区，据新疆中药普查办公室1986-4988年对肉苁蓉自然分布状况的调查结果显示：从新疆西部艾比湖洼地西麓，至东部新疆行政边界，从额尔齐斯河北岸，向南抵天山北麓广阔区域的荒漠生境上都有肉苁蓉生长，并形成一个肉苁蓉连续分布区。在北疆的奇台、木垒一带，肉苁蓉的寄主-梭校分布于海拔700-1200米的山前洪积扇及冲积平原，生长在土壤为沙砾质碱化棕钙土和砾质石膏灰棕荒漠土中，在长期的适应环境的过程中，校梭形成了耐干早、耐高温、耐严寒、耐盐碱、耐贫瘠、抗风沙等特性.盆地南部广阔的冲积平原的荒漠灰钙土上，分布有大面积的梭校。在处于原始阶段的龟裂土上，梭梭生长较差，多半着生耐盐的小灌木和猪毛菜等类植物。由于寄主植物梭梭所生存的环境，使得肉苁蓉适宜生长在干早，降雨量少，蒸发量大，日照时数多，昼夜温差大的沙漠环境，以及透气性好、偏碱性的沙壤土中，肉苁蓉的花为两性花，花冠较大，花药中花粉量大，蜜腺较发达，开花时有香味，颜色多样，属于虫媒花或异花授粉植物。为其传粉的昆虫主要有蚂蚁、苍绳、叶蜂等。肉苁蓉的繁殖策略为异株异花授粉，结实率及结实质量均优于同株异花授粉。肉苁蓉的种子属于球形原胚类型，胚发育简单。由数十个细胞组成，无胚根、胚轴、胚芽的分化。由于胚发育不完全，需要生理后熟而引起的胚体眠和因种皮具蜡质透性差的种皮强迫体眠，结果导致肉苁蓉的种胚要经过两个冬季才能完成。在长期系统发育过程中，肉苁蓉种子的体眠是适应荒漠与半荒漠地区冬季严寒的结果。种子传播要靠风力与洪水携带的方式进行。肉苁蓉种皮上有果胶质，可保持种仁水分：种子吸水力强，可以诱导寄主植物校校的毛细根向种子延伸并接触形成寄生关系通常，寄生植物种子萌发时需要有来自寄主植物的萌发刺激物质，即在种子萌发前，由寄主植物释放化学信号，激活体眠种子内部酶的活性，从而打破休眠，促进萌发，在自然条件下，肉苁蓉种子需要接受寄主植物根系分泌物的刺激才能萌发，起初是从种子的珠孔端（即形态学的胚根端）生长出一个管状突起，称之为“芽管状器官”，与寄主的根接触、穿刺和连接。其前端在与寄主植物根的接触处膨大，最后产生一个“瘤状物”。随着寄主植物根的生长和分化，“瘤状物”逐步长大，约2～4周后，直径达0.1-0.3厘米，其前端伸入寄主的皮层内，此时“芽管状器官”逐渐萎缩并脱落，而在“瘤状物”上，远离寄主根部的一端分化产生芽原基，发育为肉苁蓉植株。肉苁蓉的长势、直径、重量和质量与校梭的生长状况成正比。除此之外，与寄主生长地区的土壤质地与土壤剖面结构有关。在沙质土壤生长的肉苁蓉，具有生长快、植株直立、茎的大小较为均一等特点：在普通土壤或黏土中生长的肉苁蓉，其形状一般不规则。肉苁蓉不同植株之间的形状有差别，同一植株各年份生长的形状也有差别，不同的土壤质地，寄生点的深度也会不同。近些年，由于肉苁蓉的药理作用越来越被重视，肉苁蓉不仅在我国民间与中医药中广泛使用，而且出口东南亚与欧洲一些国家，这也使一些采挖者受到经济利益的驱使，对肉苁蓉进行不合理的乱采滥挖，结果不仅致使肉苁蓉与其寄主所赖以生存的生态环境遭到了严重的破坏，导致沙漠化迅速扩展，而且加刷了肉苁蓉野生资源濒临枯竭的速度。这种恶性循环，不仅造成野生肉苁蓉的产量下降。同时影响到肉苁蓉的自然繁殖能力，由于肉苁蓉只有在出土开花前才具有高质量的药用价值，一旦出土开花结实便降低和失去了药性，故不科学的采挖会使保存下来的肉苁蓉种子越来越少，长此以往，野生肉苁蓉将处于濒临灭绝的境地。当然，由于肉苁蓉种子的生长发育特性，以及生存环境的恶化与自身对环境的要求严苛也是造成资源减少的原因之一。发展肉苁蓉人工种植和规范种植技术，不仅能为国家提供大量急需药材，也能有效保护沙漠植被，因其寄生于荒漠卫士-梭梭和柽柳等植物的根部，发展人工种植首先要恢复沙漠植被，这将有利于沙漠地区生态建设与经济建设。日前，肉苁蓉已被国家列为二级保护植物，并被收入《国际野生植物保护名录》。由于意识到肉苁蓉具有广泛的药用价值，我国各省有肉苁蓉和其寄主分布的地区都相维开展了肉苁蓉的人工种植。内蒙古和新疆相继在上世纪80年代和90年代开展了对肉苁蓉的人工裁植研究，都取得了不同程度的进展。

崔光红，陈 敏，黄璐琦”，肖苏萍，李达（中国中医研院 中药研究所，北京100700）｜摘要 目的 荒漠肉苁蓉Cktmche desracolr 和德赢vwin登录 Chtnhe afuknr 群体遗传多样性的研究，方法：对荒漠肉苁蓉2个野生居群和德赢vwin登录 4个野生居群进行RAID分析，利用POPGENE1.31版软件分析群体的遗传多样性，结果，荒漠肉苁蓉平均多态位点百分率47.37％．2个居群多志位点分别为39.47％和35.53％，平均Nef＊基因多杆性为0.1358，Shamm。多志性信总指数为0.307 2，基因分化系数 Gr＝ 0 2546，德赢vwin登录 平均多态位点百分率27.59％，各居群多态位点百分率从19.54％到25.295％，其中安地尔居群的最高25.29％，平均Na．基因多样性为0.0823，Shamml。多志性信息指数为0.1258基因分化系数Gr＝0.1755，结论 荒漠肉苁蓉和德赢vwin登录 在居群间均一定的分化，荒漠内苁蓉的遗传多样性明基高德赢vwin登录 ，已明基分化成2个生态型｜关键词 荒漠肉苁蓉管花肉其荐：RAPDA遗传多样性1中图分类号］S567 ｜文献标识码A［文章编］1001-53031 30008-072-04肉苁蓉为列当科肉苁蓉属寄生植物，又名大芸属于名贵中药材，我国肉苁蓉药材的主要来源植物为荒漠肉苁蓉 Ciranhe dosrtinla Y.C.Ma 和德赢vwin登录 C.nbulsa（Schenk）R.Wihd＇，荒漠肉苁蓉的寄主植物为梭梭和白梭梭，主要分布在内蒙的阿拉善盟、新疆北部、青海、甘肃等地 荒漠肉苁蓉分布与寄主植物基本同步，而德赢vwin登录 在我国仅分布于新疆山以南塔克拉玛干沙漠周围各县，其分布与寄主柽柳属植物不完全同步，其他地区如新疆北部，甘肃、青海、宁夏、内蒙古、陕西等地的柽柳属植物均不寄生德赢vwin登录 ”，由于近年来对肉苁蓉需求量的急剧增长，造成对其资源的灭绝式采挖，野生肉苁蓉资源已退缩到仅有的几个主产区。两者均已列为我国濒危保护植物物种”，其中荒漠肉苁蓉已收录入CIIES附录甲。经过数年的研究，肉苁蓉人工繁育研究已获得成功，正处于大面积推广种植阶段，然而，在产业化生产时如何防止肉苁蓉物种的衰退，以及如何尽快恢复有限的野生居群，保存珍贵的野生种质资源，是实现其可持续利用的关键，而对于肉苁蓉的保护遗传学研究还是一片空白，本研究运用RAPD技术对荒澳肉苁蓉的2个和德赢vwin登录 的4个野生居群进行研究，分析了两者遗传多样性的差异，以期为保护肉苁蓉一名贵中药提供重要的实验遗传学依据。1 材料和方法1.1 材料 荒漠肉苁蓉采自新疆吉木萨尔县和内蒙古阿拉善盟的吉兰太地区，德赢vwin登录 居群自新疆民丰县和于田县，民丰县为目前德赢vwin登录 产量最大的地区，分布有密度最大，自然林相对较为完整的群落。采样点民丰县安迪尔，萨吾则克，牙通古孜和于田县大河沿均为主产区，分别位于安迪尔河，叶亦克河，牙通古孜河以及克里雅河的下游，居群间相距50km以上，各居群均随机取样19～30个体样品置于硅胶中快速干燥后，用于DNA提取（表1）。表1 德赢vwin登录 和荒漠肉苁蓉取样的居群及产地품하采样数目采集地点거有有吉本萨尔30新疆吉本萨尔县吉兰太30内蒙阿拉善盟管花内队蓉 安迪尔22民县安迪尔农场萨西则克民本县萨吾则克通古斯23民县牙通古斯河油61于田县大河沿1.2 DNA的提取 总INA 提取方法用高盐，低H法”，INA样品经分光光度计检测INA模板的浓度用1％的琼脂糖凝胶电泳EB染色，紫外灯下观察照相，电泳INA 带清晰，拖尾较少的用于BAPD分析。1.3 RAPD 引物的筛选 由于经实验发现同一引物 2 结果与分析对荒漠肉苁蓉和德赢vwin登录 二者同时扩增的效果不理想，因此各自独立进行引物的筛选，用上海生工生物技术公司150条随机引物10bp）．25L的反应体系进行扩增筛选；每条引物用2个居群的模板再加1个灭菌双蒸水作空白对照 得到对荒漠肉苁蓉扩增条带清晰、多态性强，重复性好的10条引物，S490，S1101,81 131,51 137.51 165,81 218,S1 222,52 015,82 112,82 140．德赢vwin登录 的10条引物：S1 141，S1 146，S1 183,81 208,S1 500,82 032,82 042,52 052,82 059. S2.155. 1.4 PCR扩增及产物检测 用筛选好的引物分别对荒漠肉苁蓉和德赢vwin登录 模板INA进行PCR扩增。基因组DNA 根据所测浓度稀释至50mg“L”＇作为模板，反应总体积为25円，其中IOxPCR Bufer 2.5PL,Mg2*1.574,Taq(5 U*14."1)0.2/4L,dNTP Mixdure （各2.5mM）14.5PM Primer 1PL，模板INA 1円。 灭菌双蒸水18.8円，上述ICR扩增液均为上海Srgpn的产品。扩增在PIC-100扩增仪上进行，扩增程序为94℃预变性5min后进行40个循环，每个循环包括94 ℃45.34 ℃I min，72 ℃1min 30x最后在72℃延伸5min，扩增产物用2.0％的琼脂糖凝胶（含EB）在IXTAE 缓冲液中电泳，SYNGENE型凝胶成像系统下观察、拍照。1.5 数据的统计和分析 电泳图谱中根据分子量标准对照反应产物在胶上的对应位置，估计扩增产物分子量的大小，有带的记为1，无带的记为0．形成0V1矩阵图输入计算机 利用POPGENE32计算各个居群的多态位点百分率（PPL），Ner.基因多样性指数（H），Shannon＇。多态性信息指数（1），基因分化系数（Ga），基因多样性（Hr），居群内基因多样性（Hs）.Ne＇（1978）遗传一致度（1）和遗传距离（D），并采用UPGMA 法进行聚类分析。2.1 肉苁蓉的遗传多样性 所有样品均得到分子量范围在200～2200bp的条带（图1,2）。荒漠肉苁蓉2个居群60个样品共检测到76个位点，其中36个为多态位点，占47.37％．H-0.135 8．／-0.207 2．其中吉木萨尔的IPL为39.47％，吉兰太的为35.53％。H分别为0.0953和0.1070,1分别为0.1512和 0.1637．德赢vwin登录 4个居群86个个体共检测到87个位点，其中24个为多态性位点 占27.59％．H-0.0848．／-0.127 8．PPL最高的是安迪尔25.29％，萨吾则克和牙通古斯的较低（均为19.54％）。H为0.062 1-0.0800.1为0.095 0-0.1216．H和I的 大小与各居群PPL的大小趋势一致，各项系数均是安迪尔的最大，大河沿的次之，在PH.相同的情况下，萨吾则克的H＝0.0641和／-0.0970稍高于牙通古斯的0.0621和0.095 0（表2）。            1-10．吉兰太样品：11-20．吉木萨尔样品M-INLA MMu do( 200-2 000 lp) 图2 德赢vwin登录 部分样品的RAPD扩增请带，引物S20421-30．新疆安尔样品 -NA Mado（ 300-2 000 1g）表2 荒漠肉苁若和管花肉苁吞居群的遗传多样性居＃个体数总位点数多态位点数多态位点百分率Na.基因多样性Shnaal，指数荒漠肉苁蓉 吉木萨尔30AT39.470.0530.1512吉兰太76율35.530.10700.1637总计6076電47.370.13580.307.2德赢vwin登录 安迪尔0282225.290.0000.216吾期克22K7019.540.06410.970牙通古斯2387019.540.0210.95.0大河沿1987830.690 990 00.98.6总计868727.590.0230.1258 2.2 肉苁蓉的遗传变异分析 根据遗传多样性水平在居群内（Hs），居群间的分化（Dsr）和居群间遗传差异在总遗传差异中所占的比例（Gr）可知：荒漠肉苁蓉的总基因多样度Ht-0.1358，其中压-0.1012．Gr＝0.2546．德赢vwin登录 Hr＝0.0822．其中Hs-0.0678，Gr＝0.1755（表3）。上述结果表明居群间均有一定程度的遗传变异，荒漠肉苁蓉居群间变异占总变异25.46％，德赢vwin登录 的居群间变异占总变异的17.55％。表3 荒漠肉苁蓉和德赢vwin登录 的遗传变异分析비Gr营询库苁蓉平均值0.13580.0120.2546标准差0.03540@22管花内苁蓉平均值0.0220.05780.755标准差0.02520.00742.3 肉苁蓉居群间的遗传距离和聚类分析 荒漠肉苁蓉2个居群的遗传距离为0.0800，遗传一致度为0.9231