目的，观察中药肉苁蓉含药血清对PC12细胞同亡的影响 方法 采用1甲基4＋苯基毗啶离子（Fmrily）4plenybyriliniam MPP＊）建立PC12细胞减亡模型应用血清药理学方法 结合光镜荧光染色核形分析，透射电镜，流式细胞位等检测，研究中药免血清对PCI2细胞同亡的保护作用。结果：含1／2和2信等效剂量组中药免血清Gg剂量为肉苁蓉生药L63.2和6.4／kg）处理的PC12细胞经MPP＊作用后两亡率分别为16.0％，10.2％和2.8％与空白组（18．6％）相比差异显著（P＜0.05），结论：肉苁客具有拮抗MPP＋导致的细胞测亡作用。引言帕金森病（Parkinson disaes PD）的发病机制为黑质多巴胺能神经元损害和缺失，细胞凋亡可能为其重要原因，我们应用流式细胞术（FACS）、透射电镜。荧光染色的核形分析等方法对中药肉苁蓉含药血清和神经毒素1-甲基-4-苯基吡啶离子（1-methyl-4-phenylpyridiniom，MPP＊）处理的PC12细胞进行检 测，以探索肉苁蓉对神经元的保护作用机制。1 材料和方法1.1 材料 PC12细胞购自日本生命科学基金会：KP-M11640培养液，小牛血清，鼠尾胶原购自Gibco公司；MPP＇.Anmesin V-FITC.PL.PBS.细胞培养瓶及培养 板购自Sigma公司；中药肉苁蓉购自西安市饮片厂；新西兰大耳白兔（维，体质量2.5～3kg）由学校动物中心提供：Hancht33342购自碧云天公司；多聚甲醛为国产分析纯：LD4-2型离心机（北京医用离心机厂）仪器荧光显微镜（Lda公司），例置是微镜（Olympss公司）JEM-2000EX 型透射电镜（日本），CO2恒温孵箱（Hrrar-HERAordL 德国）Cadter EPICS 流式细胞仪（B-ck-man Codter公司，美国。1.2 方法 PC12细胞生长于RPM11640细胞培养基，其中含体积分数为100 mL／L小牛血清，细胞培养瓶及培养板使用前均用0.2g／L．鼠尾胶原覆壁。培养细胞置于37℃，50mL／LCO2培养箱中，3d换液，待单层培养细胞将要融合时，用1.25g／L胰蛋白酶消化，传代培养，当传代细胞进入对数生长期即可加药，根据家免的体质量，按体表面积折算动物的等效剂量，中药肉苁蓉制备为冻干粉，用时以蒸馏水稀释，动物给药采用每日2次，给药3d的方法（中国实验方剂学杂志199844：13-15x于最后1次ig后11颈动脉放血，4℃过夜，2500 ／min离心25 min分离血清．56℃，30 min 灭活，经0.22Pm滤膜抽滤除菌，-20℃保存，同等条件下，分别制备空白家兔对照血清，1／21和2倍签效剂量血清，实验分为5组：A 组为空白兔血清组，B组为2倍等效剂量血清＋MPP＊组（灌胃剂量为肉苁蓉生药6.4g／kg）．C组为等效剂量血清＋MPP＊组（灌胃剂量为肉苁蓉生药3.2g／kg），D组为半等效剂量血清＋MPP＊组（ig剂量为肉苁蓉生药1.6g／kg），E组为空白兔血清＋MPP＋组，传代培养12h以后在倒置显微镜下观察细胞即将汇合前加药，各组血清含量均为10％培养3d后，加入MPP＋，终浓度为200／mml／L置37℃50 mL／LCO2培养箱培养24h后检查。1.2.1 PC12细胞荧光染色观察 特Harchs33342加入培养的PC12细胞中，终浓度为10mg／L 37℃孵育30min．40g／L多聚甲醛和培养液以3混合，使多聚甲醛的终浓度为10g／L．固定5～10 min 后，弃去上清用PBS洗涤，于荧光显微镜下观察。1.2.2 造射电镜观察 药物处理24h后，将细胞收集井移至离心管中，1500 t／min 4离心5 min 再用10 mmol／L PBS洗涤2次，1500 ／min 4℃离心5min，弃上清，沿管壁缓缓加入25mL／L戊二醛4℃固定21．用直头滴管剥离细胞团块，PBS洗涤3次每次5min 钱酸4℃后固定1b后梯度丙酮脱水，环氧树脂浸透和包埋，用LKB-2188 型超薄切片机切片.醋酸一柠檬酸铅染色透射电镜观察并照相。1.2.3 流式细胞仅检测 MPP＊作用24b用1.25g／L胰蛋白酶消化贴壁的PC12细胞取10f个．PBS洗2次，加入490＃L结合缓冲液，充分混匀细胞，加入SPL Annexin V-FITC和10PL溶解的PI于细胞 悬浮液中，轻轻混匀，将试管置于4℃，避光孵育10min．上流式细胞仪检测，每组设4个复孔。统计学处理：数据用又士，表示。多组间的比较采用 Kruskal-Wallis检验，两两比较采用Mauruhit-mry 检验，以P＜0.05为有显著差异。2 结果2.1 PC12细胞荧光显微镜观察 正常生长的PC12细胞经 Hoech33342染色后均可发出均匀的荧光在凋亡的细胞核内可见浓染致密的颗粒块状荧光和点状白色荧光。正常组大部分细胞的胞核中呈现较为均匀的兰色荧光，隐约可见点状凝聚的点状荧光其凝聚的点状荧光较MPP＋对照组细胞弱，正常生长的细胞经Hoechst染色后显示均匀的蓝色荧光，胞核形态规则（Fig IA），经MPP＊作用后细胞核染色质出现浓缩状态，或高度凝聚呈不规则点状荧光，或边缘化：晚期细胞核裂成碎块（Fig 1B）．等效剂量和2倍等效剂量的肉苁蓉含药血清＋MPP＋组细胞基本国1 PC12细胞Harchu33342 染色核形分析2.2 投射电镜观察 正常培养的PC12细胞，核染色质均匀 核膜清楚完整，胞质线粒体丰富，细胞器完整（Fig 2A）．MPP＊作用后，PC12细胞变化明显，细胞膜完整，表面微绒毛消失，胞质浓缩染色质固缩，断裂，高度凝聚，并边集于核膜内面，呈凋亡的特征，以早，中期凋亡细胞为主（Fig 2B．C）．含有肉苁蓉血清各组码亡细胞明显减少，细胞核染色质分布均匀，核膜清楚完整，细胞器完整，接近Fig 2A所示细胞。2.3 流式细胞仪检测结果 在细胞凋亡早期位于细胞膜内侧的磷酯酰丝氨酸（PS）迁移至细胞膜外侧，各组细胞祠亡率分别为（2.3±0.11）％（2.8±0.21）％（10.2±0.60）％，（16.0±0.87）％和 （18.6±0.67）％．经秩和检验分析B．C．D组与E组相比P＜0.05．含有中药血清与空白血清组相比差别3 讨论MPP＋的神经毒性是多成分作用的复杂过程，其中包括阻码线粹体和突触囊泡多巴胺的置换产生的细胞码亡以及内源性多巴胺的神经毒作用导致细胞凋亡有关！性观察MPP＋对黑须多巴胺细胞系 SN4741两亡的过程中，存在着Cmpas-1 和Caspas-3的激活”．1Pmo／L的MPP＋作用于肾上腺神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系数天后可以引起凋亡相关 Bel-2蛋白表达增加“，肉苁蓉为列当科肉苁蓉属（Cis-unche）植物的干燥带鳞叶的肉质茎，治疗老年痴某，PD等有较好的疗效，肉苁蓉总苷能有效地清除各种活性氧自由基能保护OH＇引发的DNA氧化Sheng 等研究证实内苁蓉提取物tubuloside B可以减弱MPP＊诱导的细胞毒性，削弱细胞内活性氧的积家，对MPP＊诱导的凋亡和氯化应激有对抗的作用。我们观察到肉苁蓉具有拮抗MPP＊诱导的PC12细胞的两亡的作用，而且随者剂量的增加对PC12细胞的保护作用增加。【参考文献】(49),38581-38588 Narel 2003 249( Smpl 23,4-10 13月 Cus HSChn GE．DCargie L t al Depumige oll 2001.76143,1010-1021. naci Res 2000.6(10,693-700 0H引发的INA损伤的保护作用［具，中国药学杂志2001；36(1.29-32 hmile dmiting foe radiale anl peetiog the injeral DA 2003.68(11)966-970 

肉苁蓉( Herba Cistanches)为列当科植物肉苁蓉( CistanchedeserticnIn Y.C.Ma)的干燥带鳞叶的肉质茎习称大芸属寄生草本植物。始于《神农本草经》等多有记载。肉苁蓉性温，味甘、咸。归肾、大肠经具有补肾阳、益精血、润肠通便的功能3《中囯药典￥(20052010年版收录荒漠肉苁蓉( istanche deserticola Y C Ma)和德赢vwin登录 ( Cistanchetubulosa(schn) Wight)为正品药材现代药理学表明肉苁蓉除作为传统的补肾壮阳中药外，更兼具有神经系统保护、抗衰老、增强记忆、提高免疫力等多种功能。1、肉苁蓉植物化学成分研究进展肉苁蓉含有多种类型的化学物质，上世纪八十年代中后期国内学者开始关注肉苁蓉属植物的化学成分研究。迄今为止从肉苁蓉属植物中分离出近70种化合物，主要包括苯乙醇苷类环烯醚萜及其苷类木脂素及其苷类以及多糖和生物碱等1.I、苯乙醇苷类苯乙醇总苷是肉苁蓉中主要活性成分具有壮阳抗氧化、增强记忆力等多种功能。目前共分离得到22个苯乙醇苷类成分包括1个单糖苷A4个双糖苷和7个三糖苷4。堵年生等首次从荒漠肉苁蓉中分离得到4种苯丙醇苷类化合物分离到是毛蕘花苷、海胆苷、肉苁蓉苷A和2-乙酰麦角甾苷。宋志宏等采用高效液相色谱法( High Performance Liquid Chro Matography HPL)从德赢vwin登录 中分离出2-乙酰基类叶升麻苷、红景天苷、黄药苷等7个苯乙醇苷类化合物。松果菊苷(ECH)和麦角甾苷是肉苁蓉中苯乙醇总苷的主要成分其含量分别为0.10%0.53%、006%046%2环煣醚萜及其苷类：环煣醚萜苷是肉苁蓉属植物主要化学成分类别之一，此类化合物有多种生物活性。具有以下特征1位连有葡萄糖59位为B-H；位有些存在羧基为78或10位常常含有羟基或失去羟基形成双键或环氢醚键。小林弘美冂对我国内蒙古产的肉苁蓉进行了系统研究从中分得8-表马钱子酸、8-表去氧马钱子酸、京尼平酸、苁蓉素等10个化合物。罗上夙等从荒漠肉苁蓉中分离出了8-表马钱子酸葡萄糖苷井测定出其中含有的18种氨基酸含量13其它类物质在分离提取肉苁蓉中的苯乙醇苷类成分时从肉苁蓉属植物中已分离得到木脂素和木脂素苷。另有学者測定其挥发性组分中的三十多个化合物分为正构烷烃C16-C28、酯类化合物和含氧含氮化合物。肉苁蓉中还含有酚苷、单萜苷、生物碱、糖类、糖醇、甾醇等成分关于其氨基酸无机微量元素成分等的报道显示肉苁蓉的铁、锌锰的含量比一般中药高2、肉苁蓉有效化学成分对神经系统作用研究1、促进学习记忆作用：有学者早年就研究称肉苁蓉总苷有促进记忆改善化学药物所造成的记忆损害作用。胡余明等设苁蓉总苷低、中、高剂量分别为0.3glkg?lhw、0.25gkg?bw0675g/kg?hw按02ml/O?bw体积给小鼠灌胃对照组灌胃予避暗实验重复检测正常小鼠学习记忆水平观察苁蓉总苷正常小鼠学习记忆功能的影响。实验结果显示肉苁蓉总苷可以明显降低水迷宫实验到达终点的时间2min内到终点的动物数显著增多。可以使跳台的潜伏期明显延长5mi内的错误次数明显减少。在防治老年痴呆症药物研究中王传社等进行了苁蒈总苷对氨化可的松所致肾阳虚模型小鼠学习记忆障碍影响的现察。实验将小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组(金匮肾气丸L5g/kg)以及苁蓉总苷高剂量组400mg/kg)、中剂量组(20mg/kg)、低剂量组(100mgkg)每组20只雌雄各半。灌胃给药ρ.3ml/O体重正常组及模型组给予等体积的蒸馏水每日1次连续给药30M。于实验的第11天起除正常组外，各组灌胃氢化可的松Ig只连续给予8d制成肾阳虛模型使用跳台法瑰察小鼠的学习记忆功能。观察结果模型组与正常组比较跳台測试的君伏期明显縮短、错误次敔明显增加說明模型小鼠出现学习记忆功能障碍。阳性组及的松引起的小鼠学习记忆功能障碍(与模型组比较：*P<00P<001)。模型组小鼠在停用氢化可的松10l后跳台测试的潜伏期及错误次数均有明显的恢复与正常组小鼠无显著差异阳性坦及苁蓉总苷各剂量组在停用氢化可的松井继续给药10d后，与模型组比较跳台测试的潜伏期及锴误次数仍有一定程度的改善但无统计学差异。实验证实阳虚模型小鼠可以作为学习己忆功能碍模型使用，以及苁蓉总苷可显著改善氢化可的松所致肾阳虛模型小鼠的学习记忆功能障碍，进一步说明肉苁蓉确有促智作用2.2神经保护怍用2.2.1、对神经元的保护作用：凋亡是多种致病因素导致的细胞程序性死亡在神经系统发育、神经退行性病变和兴奋性神经元损伤中均起重要作用。蒲小平等用肉苁蓉成分 campnensidleⅡ预先孵育大小脑颗粒细胞，经神经毒剂1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP＋）处理这些细胞后 用甲基绿-派诺宁染色.DNA 凝胶电泳和流式细胞仪检测，发现浓度为50μmol／L的MPP＋可使大鼠小脑颗粒细胞发典型亡，而25mg／L．的Camgerosid-II具有抗神经元凋亡作用。邓敏等“发现松果菊苷（ECH）也能有效地减轻肿瘤坏死因子a（TNF-a）诱导细胞凋亡的发生 在1-100mg＊L-1的剂量范围内，其神经细胞保护作用呈现一定的剂量依赖关系，其作用可能与通过抑制细胞内活性氧自由基的生成和半胱氨酸蛋白酶3（Casqpasr-3）活性的升高并维持线粒体膜电位处于正常状态有关2.2.2、对缺血性脑损伤保护作用：脑缺血再灌注引起大量神经元变性、坏死，导致严重的脑损伤，其机制包括兴奋性氨基酸释放增加，细胞内钙超载，自由基生成，NO大量释放及免疫炎症反应等。詹合琴等“通过观察沙鼠脑电图和大脑皮层组织Ca2＋。Na＋及水含量等指标，发现含肉苁蓉为主要成分的天麻醒脑胶囊可降低沙土鼠脑缺血再灌注损伤后皮屋的Ca2＋浓度，提示该药物可通过防止钙超载来发挥保护神经元因缺血缺氧导数的损伤。另一项研究“则通过结扎小鼠右侧颈总动脉建立脂缺血再灌注模型，研究肉苁蓉总苷对清醒小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。主要观察小鼠脑缺血后24h和48h超氧化物歧化酶（SupemsileDismmtase，SOD）活性，丙二醛（maloatiald-lyde，MDA） 含量及一氧化氮合酶（NOS）的变化情况 结果发现肉苁蓉总苷能有效增强脑缺血再灌注组织中的SOD活性，减少MDA 含量并降低NOS的活性 提示肉苁蓉不仅具有对缺血再灌注脑组织的保护作用，而且其脑保护机制主要在于清除氧自由基及减轻脂质过氧化对脑组织的损害。2.2.3、对阿尔茨海默病（Alhrimer＇sddisrae）保护作用-阿尔茨海默病即所谓的老年衡呆症。是一种进行性发展的数死性神经退行性疾病 临床表现为认知和记忆功能不断恶化 并有各种神经精神症状和行为障碍 罗兰等＂从慢性神经毒物-铝可增强脑组织中的脂质过氧化水平从面反映神经元受损，是导致阿尔茨海默病的一个重要危险因素“人手探讨了肉苁蓉总苷（ghonidre of cis-tanche，GCS）对三氯化铝（AICIB）皮下注射致阿尔茨海默病（AD）模型小鼠“学习记忆障碍的保护作用及其机制，结果显示GC-能改善AICI3所致学习记亿障碍 增加脑组织中SOD活性 降低 MDA含量并使脑重系数增加。肉苁蓉总苷对AICI3数小鼠学习记忆障碍具有保护作用其作用机制可能与其抗氧化作用有关刘风霞等＂利用脑室注射喹啉酸iquinolinic aril.QA）制备了AD小鼠模型 研究发现GCS可以提高AD小鼠的学习记亿水平，降低QA所致脑组织 MIDA含量的升高 提高SOD.GSH-Px活性，降低 AChE活性，脑细胞馮亡率和脑组织中的钙积聚。王晴对CC-胶囊的抗AD疗效进行了研究，发现口服CC-胶囊对AD患者具有治疗作用 能改善患者的认知能力，提高患者的生活自理能力，延缓痛呆的进展，其效果与AD治疗药物盐酸多奈呱齐片相似但GC-胶囊的不良反应明显低于盐酸多奈哌齐片。2.2.4抗氧化和延缓衰老作用：衰老既是人体神经系统功能退行性改变的一个重要方面，也是许多神经系统疾病的初始阶段，超氧阴离子（02-）．羟自由基（OH-）．过氧化氢（H202）和单线态氧（102）等属于机体代谢过程中产生的活性氧族，过多时易导致细胞膜和细胞器膜损伤，出现脂质过氧化反应并产生大量有害代谢产物MDA 加速神经元凋亡等病变过程，是衰老及其他神经退行性疾病的主要发病机制之一。肉苁蓉总苷能有效地清除各种活性氧自由基 能保护OH·引发的DNA氧化损伤 故有延缓衰老的作用。张涛等”发现GC.能明显增强D-半乳糖致衰老小鼠的免疫机能 使其恢复或接近了青年小鼠状态。刘凤霞等2四研究肉苁蓉总苷对β-淀粉样肽所致阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆能力提高 其作用机制可能与其增强自由基清除酶活性，防止脂质过氧化作用，抑制β-淀粉样肽在脑内的沉积及抑制脑细胞亡有关。肉苁蓉成分（苯乙醇甙类化合物）对神经毒素MPP＋诱发细胞凋亡具有明显的保护作用，以MPP＋为诱导剂建立的大鼠小脑颗粒细胞凋亡模型，可用于研究与帕金森病有关的细胞凋亡的调控机制和筛选抗 PD药物，徐辉等叫研究结果表明肉苁蓉醇溶成分能显著提高衰老模型大鼠肝脏Ca2＋-ATP酶活性 肝线粒体膜流动性，显著降低肝线粒体 MIDA含量，磷脂酶A2（PLA2）活性、对囊老模型大鼠肝线粒体具有保护作用。2.2.5对帕金森病（Parkison＇sdisrase，PD）保护作用：PD是中老年人最常见的中枢神经系统变性疾病主要是中脑黑质细胞发生变性死亡后多巴胺合成减少多巴胺能功能降低而与其相对应的另一种神经递质乙酰胆碱功能相对亢进。Geng等研究证实 肉苁蓉提取物苯乙醇总苷能显著改善MPTP诱导的C57BL／6小鼠PD模型的行为学特征 增加纹状体内多巴胺（Dopamine DA）的含量及黒质部位酪氨酸羟化酶（iyrosine lydosylase，TH）的表达，赵欣等”从蛋白质组学的角度研究了其机制，发现松果菊苷可少胆绿索还原酶B的过表达，提示其可能通过抗氧化而减少氧化应激导致的胆绿素还原酶B的升高，保护多巴胺能神经元免受氧化应激损伤。肉苁蓉是一种临床应用价值很高的传统中草药，其对机体的药理作用相当广泛。其有效成分的研究极有可能产生出防治阿尔茨海默病和帕金森病等的新药，但与其他具有脑保护作用的药物研究相比较，针对肉苁蓉的研究尚嫌薄弱，范围亦较局限，其未知有效化学成分（苯甲醇苷类，萜类等）及诸药理作用机制有待进一步闸明，有待从整体、器官、组织、细胞，分子，基因、蛋白表达等不同层研究，寻找药物作用的靶点，相信肉苁蓉在神经精神疾病領域中有广阔的应用前景。

摘要目的: 采用HPLC 法同时测定肉苁蓉饮片中京尼平苷酸、松果菊苷、肉苁蓉苷A、管花苷A、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、2’-乙酰毛蕊花糖苷和管花苷B 的含量。方法: 采用HPLC 法，色谱柱为Agilent ZOＲBAX C18柱( 250 mm×4．6 mm，5 μm) ，流动相为乙腈-0．5%乙酸，梯度洗脱。检测波长为237 nm，流速为1．0 ml·min－1，柱温为30℃。采用SPSS 19．0 软件对24 批次肉苁蓉饮片中8种成分含量进行相关性分析。结果: 京尼平苷酸、松果菊苷、肉苁蓉苷A、管花苷A、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、2’-乙酰毛蕊花糖苷和管花苷B 的进样质量分别在0．098～9．800 μg、0．105～10．520 μg、0．104～ 10．440 μg、0．095～ 9．530 μg、0．099～ 9．860 μg、0．108～10．780 μg、0．118～11．810 μg、0．099 ～ 9．860 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系; 平均加样回收率分别为95．4%( ＲSD =1．86%) ，99．2%( ＲSD= 1．50%) ，96．5%( ＲSD= 0．99%) ，94．8%( ＲSD= 1．75%) ，102．5%( ＲSD= 1．13%) ，97．2%( ＲSD= 1．46%) ，105．1%( ＲSD= 1．39%) ，96．8%( ＲSD= 1．97%) ( n= 6) 。松果菊苷和毛蕊花糖苷含量呈显著正相关( P＜0．01) 。管花苷A、异毛蕊花糖苷含量与松果菊苷、毛蕊花糖苷呈显著正相关( P＜0．01) 。2’-乙酰毛蕊花糖苷与毛蕊花糖苷的含量呈正相关( P＜0．05) 。结论: 该方法操作简便快捷，准确有效，专属性强，有助于全面评价肉苁蓉饮片质量。关键词:肉苁蓉饮片;高效液相色谱法;苯乙醇苷;环烯醚萜苷;京尼平苷酸;含量测定肉苁蓉又名地精、大芸，始载于《神农本草经》，列为上品，具有极高的药用价值［1］。中国药典2015 年版收载的肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉Cistanche deserticola Y． C．Ma 或德赢vwin登录 Cistanche tubulosa ( Schenk) Wight 的干燥带鳞叶的肉质茎［2］，主产于内蒙古、新疆、宁夏、甘肃和青海等地［3］，具有补肾阳、益精血、润肠通便等功效，用于治疗肾阳不足、精血亏虚、阳痿不孕、腰膝酸软、筋骨无力、肠燥便秘［2］。目前，国内外报道肉苁蓉化学成分包括苯乙醇苷类、环烯醚萜及其苷类、木质素及其苷类、单萜苷类、生物碱和糖类等［4～ 6］。其中主要成分为苯乙醇苷类成分，包括松果菊苷、毛蕊花糖苷等，为肉苁蓉补肾壮阳、润肠通便、保肝作用的主要成分［6～ 8］。环烯醚萜及其苷类成分，包括京尼平苷酸、8-表马钱子苷酸等，具有雄性激素样作用［8～ 11］。目前，已有关于HPLC 法测定肉苁蓉中松果菊苷、毛蕊花糖苷、管花苷A、异毛蕊花糖苷、京尼平苷酸等含量的文献报道［11～ 16］，但是未见同时测定苯乙醇苷类和环烯醚萜苷类两大活性成分中主要成分含量的报道。本研究收集肉苁蓉饮片样品24 批次，采用HPLC 法同时测定苯乙醇苷类成分肉苁蓉苷A、管花苷A、管花苷B、松果菊苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、2’-乙酰毛蕊花糖苷和环烯醚萜苷类成分京尼平苷酸共8 种成分含量，以期为肉苁蓉饮片的全面质量评价和质量控制提供科学依据，现报道如下。1 仪器与材料1．1 仪器安捷伦1260 高效液相色谱仪( 美国Agilent 公司) ;XS105 十万分之一电子天平( 瑞士METTLEＲ TOLEDO 公司) ; AB104-S 万分之一电子天平( 瑞士METTLEＲ TOLEDO公司) ; FＲQ-1010T 超声波清洗器( 杭州法兰特超声波科技有限公司) ; Milli-Q Advantage A10 超纯水仪( 默克密理博公司) 。1．2 材料松果菊苷对照品( 批号: 111670-201706，含量89．7%) 、毛蕊花糖苷对照品( 批号: 111530-201713，含量92．5%) 均购自中国食品药品检定研究院; 肉苁蓉苷A( 批号: 17062001，含量95%) 、管花苷A( 批号: 18032105，含量98%) 、管花苷B( 批号: 17052704，含量97%) 、异毛蕊花糖苷( 批号:18102404，含量98%) 、2’-乙酰毛蕊花糖苷( 批号: 19011705，含量96%) 和京尼平苷酸( 批号: 18112101，含量98%) 均购自成都普菲得生物技术有限公司; 甲醇、乙腈( 色谱纯) 均购自德国默克公司; 乙酸( 优级纯) 购自德国默克公司; 其余试剂均为分析纯，水为超纯水。24 批次肉苁蓉饮片来源信息见表1，经菏泽市食品药品检验检测研究院马海春副主任中药师鉴定为列当科植物肉苁蓉Cistanche deserticola Y． C．Ma 的干燥带鳞叶的肉质茎。2 方法与结果2．1 色谱条件色谱柱: Agilent ZOＲBAX C18 柱( 250 mm × 4．6 mm，5μm) ; 流动相: 乙腈( A) -0．5%乙酸( B) ，按表2 条件梯度洗脱; 检测波长: 237 nm; 流速: 1．0 ml·min－1 ; 柱温: 30 ℃; 进样量: 10 μl。在此色谱条件下，各成分保留时间及分离度较好，对照品和供试品色谱图见图1。含京尼平苷酸0．980 0 mg·ml－1、松果菊苷1．052 0 mg·ml－1、肉苁蓉苷A 1．044 0 mg·ml－1、管花苷A 0．953 0 mg·ml－1、毛蕊花糖苷0．986 0 mg·ml－1、异毛蕊花糖苷1．078 0 mg·ml－1、2’-乙酰毛蕊花糖苷1．181 0 mg·ml－1、管花苷B 0．986 0mg·ml－1的混合对照品储备溶液。精密量取上述储备溶液5 ml，置25 ml 量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。2．3 供试品溶液的制备精密称取过四号筛的肉苁蓉粉末1．0 g，置于50 ml 棕色量瓶中，加入50%甲醇40 ml，超声提取( 600 W，42 kHz) 40min，放冷后加50%甲醇定容至刻度，摇匀，用0．45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。如样品测定结果超过标准曲线范围，稀释后再进行测定。2．4 方法学考察2．4．1 线性关系考察分别精密吸取“2．2”项下配制的混合对照品溶液0．5，1，5，10，15，20，50 μl，按“2．1”项下色谱条件进样测定。以峰面积( Y) 为纵坐标，以对照品质量( X，μg)为横坐标绘制标准曲线，结果见表3。2．4．2 精密度试验精密吸取同一供试品溶液，按照“2．1”项下色谱条件连续进样测定6 次，记录峰面积，计算8 种成分的峰面积ＲSD。结果京尼平苷酸、松果菊苷、肉苁蓉苷A、管花苷A、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷2’-乙酰毛蕊花糖苷、管花苷B 峰面积ＲSD 分别为1．24%，0．93%，1．35%，0．77%，1．48%，1．73%，1．36%，1．59%( n = 6) ，表明仪器精密度良好。2．4．3 稳定性试验取同一供试品溶液，按照“2．1”项下色谱条件分别于制备后0，2，4，6，8，12，24 h 进样测定，记录峰面积。结果得京尼平苷酸、松果菊苷、肉苁蓉苷A、管花苷A、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、2’-乙酰毛蕊花糖苷、管花苷B 峰面积的ＲSD 分别为1．56%，1．16%，1．64 %，0．83%，1．25%，1．49%，0．96%，1．62%( n= 7) ，表明供试品溶液在24 h 内稳定。2．4．4 重复性试验精密称取同一批( 批号: 18122402) 供试品粉末6 份，每份1．0 g，分别按照“2．3”项下方法制备，按“2．1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图并计算8 种成分的含量及其ＲSD。结果京尼平苷酸、松果菊苷、肉苁蓉苷A、管花苷A、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、2’-乙酰毛蕊花糖苷、管花苷B 含量平均值分别为1．542，13．776，1．391，0．593，2．536，2．435，1．467，1．867 mg·g－1，其ＲSD 分别为1．74%，1．37%，0．86%，1．42%，1．05%，1．92%，1．52%，1．07%( n = 6) ，表明方法的重复性良好。2．4． 5 加样回收率试验精密称取同一批( 批号:18122402) 供试品粉末6 份，每份0．5 g，分别加入“2．2”项下混合对照品储备溶液1．0 ml，按照“2．3”项下方法制备加样回收供试品溶液，按“2．1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图，计算8 种成分的加样回收率及其ＲSD。结果表明，京尼平苷酸、松果菊苷、肉苁蓉苷A、管花苷A、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、2’-乙酰毛蕊花糖苷、管花苷B 的平均回收率分别为95．4%，99．2%，96．5%，94．8%，102．5%，97．2%，105．1%，96．8%，ＲSD 分别为1．86%，1．50%，0．99%，1．75%，1．13%，1．46%，1．39%，1．97%( n = 6) 。2．5 样品含量测定分别取24 批次肉苁蓉饮片，按“2．3”项下方法制备供试品溶液，按“2．1”项下色谱条件进行测定，结果见表4。2．6 8 种成分含量相关性分析采用SPSS 19．0 软件对24 批次肉苁蓉饮片中8 种成分含量的关系进行Pearson 相关性分析，采用双侧检验。结果表明，中国药典2015 年版中规定的两种指标性成分松果菊苷与毛蕊花糖苷的含量呈正相关( P＜0．01) ; 管花苷A、异毛蕊花糖苷均与松果菊苷及毛蕊花糖苷的含量呈正相关( P＜0．01) ; 2’-乙酰毛蕊花糖苷与毛蕊花糖苷的含量呈正相关( P＜0．05) 。见表5。3 讨论本研究分别考察了不同溶剂( 甲醇、50%甲醇和水) ，提取方法( 冷浸提取、超声提取和加热回流提取) 及提取时间( 20 min，40 min，60 min) 的提取效果。结果表明，50%甲醇超声提取40 min 提取效果好，且杂质较少，处理过程便捷有效。对不同流动相体系( 乙腈-0．5%乙酸，乙腈-0．1%乙酸和乙腈-水) 进行比较，发现相同条件，乙腈-0．5%乙酸为流动相时，各个色谱峰峰型较好，分离度和理论板数较高。全波长( 190～ 400 nm) 扫描结果表明在237 nm 8 种对照品均有吸收，且峰型好，峰响应较高。结果发现24 批次肉苁蓉饮片中松果菊苷和毛蕊花糖苷总量均符合中国药典2015 年版含量测定项下规定，但不同批次的肉苁蓉饮片各指标成分含量差异较大。8 种成分中松果菊苷和毛蕊花糖苷含量较高，且两者呈显著正相关，管花苷A、异毛蕊花糖苷含量均与松果菊苷、毛蕊花糖苷呈显著正相关。本试验以肉苁蓉饮片中京尼平苷酸、松果菊苷、肉苁蓉苷A、管花苷A、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、2’-乙酰毛蕊花糖苷、管花苷B 8 种成分为指标，运用HPLC 法建立其含量测定方法，该方法简便、高效、准确，可为肉苁蓉饮片质量评价和质量控制提供参考。参考文献1 吴晓春，史颖． 肉苁蓉的研究与临床应用［J］． 甘肃中医，2007，20( 12) : 49-512 中国药典［S］． 2015 年版．一部． 376-3773 彭芳，徐荣，徐常青，等． 肉苁蓉药用及其食疗历史考证［J］． 中国中药杂志，2017，52( 5) : 377-3834 丁燕，张开梅，苍小鑫，等． 肉苁蓉属化学成分及生物活性研究进展［J］． 大连工业大学学报，2016，35( 6) : 395-4025 胡佳琦，冯佳媛． 肉苁蓉的化学成分和药理作用［J］． 中医临床研究，2012，4( 15) : 26-286 李媛，宋媛媛，张洪泉． 肉苁蓉的化学成分及药理作用研究进展［J］． 中国野生植物资源，2010，29( 1) : 7-117 方鉴． 肉苁蓉的药理研究进展［J］．光明中医，2017，32( 14) : 2140-21428 于连云． 肉苁蓉的药理作用及临床应用［J］．内蒙古中医药，2016，( 4) : 87-889 杨建华，堵年生，热娜·卡斯木． 高效液相法测定肉苁蓉中8-表马钱子苷酸的含量［J］．药物分析杂志，2006，26( 10) : 1395-139710 刘晓明，姜勇，孙永强，等． 肉苁蓉化学成分研究［J］．中国药学杂志，2011，46( 14) : 1053-105811 李莉，曹进，张庆生． 高效液相色谱法测定肉苁蓉中京尼平苷酸的含量［J］．食品安全质量检测学报，2016，7( 3) : 933-93712 郭卫红． 不同产地肉苁蓉中麦角甾苷含量测定［J］．世界中西医结合杂志，2014，9( 5) : 496-49713 甄亚钦，田伟，王鑫国，等． HPLC 同时测定肉苁蓉配方颗粒中4种成分的含量［J］．现代中医药，2019，39( 1) : 83-8714 马学琴，董彦红，郭琪，等． 肉苁蓉药材中6 种苯乙醇苷类成分含量的一测多评法测定［J］． 时珍国医国药，2018，29( 10) : 2309-231215 熊慧，刘宇琦，屈文佳，等． 酒苁蓉HPLC 特征图谱及5 个苯乙醇苷类成分含量测定［J］．药物分析杂志，2019，39( 2) : 233-23916 任荣军． 一测多评法测定肉苁蓉中2 种有效成分的含量［J］．中国药师，2015，18( 8) : 1404-1406

摘要：目的建立HPLC 法测定肉苁蓉水提液中松果菊苷的含量。方法采用HPLC 法测定松果菊苷的含量，色谱柱为Inertsil ODS-SP C18 柱；流动相为乙腈（A）-0.4%磷酸溶液（B），梯度洗脱；检测波长为333 nm；柱温为30 ℃；流速为1.0 mL·min-1；进样量为10 μL。结果松果菊苷在44.939 7 ~ 539.276 4 μg·mL-1 的浓度范围内线性关系良好（r = 0.999 8）；加样回收率为94.59% ~ 105.31%（RSD = 2.93%，n = 9）；3 批肉苁蓉水提液中松果菊苷的平均含量分别为15.527、7.347、12.267 mg·g-1。结论所建立的HPLC 法准确、重复性好、简单易行，适用于肉苁蓉水提液中松果菊苷的含量测定。关键词：高效液相色谱法；肉苁蓉水提液；松果菊苷；含量测定肉苁蓉为临床常用的一种补益中药，有“沙漠人参”的美誉。《中国药典》2015 年版收载的肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉Cistanche deserticola Y. C. Ma 或德赢vwin登录 Cistanche tubulosa（Schenk）Wight 的干燥带鱗叶的肉质茎。其性温，味甘、咸，归肾、大肠经，具有补肾阳、益精血、润肠通便的功效。《神农本草经》谓之可“补中，养五脏，强阴养精气”。肉苁蓉主要含有苯乙醇苷类、环烯醚萜及其苷类、木脂素及其苷类、多糖类、酯类化合物和生物碱等。苯乙醇苷类化合物是肉苁蓉的主要活性成分，其中松果菊苷和毛蕊花糖苷是《中国药典》对肉苁蓉进行鉴别和含量测定的指标性成分。药理研究[4]表明，肉苁蓉具有润肠通便、保肝、抗骨质疏松、抗氧化、抗衰老、抗疲劳等多种药理作用。肉苁蓉水提液能促进大鼠成骨细胞骨形态发生蛋白2 基因，以及去卵巢小鼠血清中抗酒石酸酸性磷酸酶、骨钙素和骨髓中Smad1、Smad5 基因，转化生长因子-β等的表达，有抗骨质疏松的作用[5-6]。松果菊苷能促进成骨细胞的增殖以及促进体外培养的骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化[7-9]。近年，肉苁蓉醇提物及其复方制剂中松果菊苷和毛蕊花糖苷含量测定的研究报道较多[10-12]，但肉苁蓉水提液中指标性成分含量测定的相关报道少见。本研究采用高效液相色谱法（HPLC）测定肉苁蓉水提液中松果菊苷的含量。1 材料1.1 仪器LC-20AT 高效液相色谱仪、SPD-20A 检测器、SIL-20A 自动进样器、CTO-10ASvp 柱温箱、LC solution 液相色谱工作站，日本岛津公司；MES125P-OCE-DU 电子分析天平，德国Sartorius 公司；SHZ-D（Ⅲ）循环水式多用真空泵，河南省予华仪器有限公司；RC2B SO25 旋转蒸发仪冷却循环系统、RV 10 D S96 旋转蒸发仪，德国IKA 公司；DK-S26电热恒温水浴锅，上海精宏实验设备有限公司；UPR系列超纯水机，四川优普超纯科技有限公司。1.2 药材与试剂肉苁蓉药材，购自广州岭南中药饮片有限公司， 批号： 1801001、1806001、181001。经广州中医药大学第三附属医院涂兴明主任中药师鉴定为列当科植物肉苁蓉Cistanche deserticola Y. C.Ma 的干燥带鳞叶的肉质茎，样本存放在广州中医药大学第三附属医院药检室；松果菊苷对照品，含量89.7%，中国食品药品检定研究院，批号：111670-201706；乙腈为色谱纯（德国默克公司）；甲醇、磷酸为分析纯（天津市富宇精细化工有限公司）；水为超纯水。2 方法与结果2.1 肉苁蓉水提液的制备取肉苁蓉药材粗粉，加入10 倍量蒸馏水，加热回流提取2 次，每次1 h，过滤，合并滤液，滤液用旋转蒸发仪浓缩至含生药量为0.100 g·mL-1，4 ℃保存备用。2.2 色谱条件与系统适用性色谱柱：Inertsil ODSSPC18 柱（150 mm × 4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-0.4%磷酸溶液（B），梯度洗脱：0 ~ 5 min，17%A；5 ~ 25 min，20% A；25 ~ 30 min，17% A；检测波长：333 nm；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；进样量：10 μL。在该色谱条件下，松果菊苷与相邻组分峰之间的分离度大于1.5，理论塔板数以松果菊苷峰计应不低于4 000。色谱图见图1。图1 松果菊苷对照品（A）和肉苁蓉水提液（B）的HPLC 图2.3 溶液的制备2.3.1 对照品溶液称取松果菊苷对照品适量，精密称定，置于10 mL 容量瓶中，加甲醇溶解，制成每毫升含松果菊苷898.794 μg 的对照品溶液，4 ℃保存备用。2.3.2 供试品溶液精密量取2.0 mL 肉苁蓉水提液，水浴蒸干，加甲醇溶解，定容至10 mL 容量瓶中，摇匀，0.22 μm 微孔滤膜过滤，即得。2.4 线性关系考察精密量取2.3.1 项下的对照品溶液0.25、0.50、1.00、2.00、2.50、3.00 mL 置于5 mL容量瓶中， 加甲醇定容， 摇匀， 得梯度浓度为44.939 7、89.879 4、179.758 8、359.517 6、449.397 0、539.276 4 μg·mL-1 的对照品溶液，0.22 μm 微孔滤膜过滤。按2.2 项下色谱条件进行测定，记录峰面积。以对照品质量浓度为横坐标（X，μg·mL-1），峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归，得回归方程：Y=13 185.0X-32 273.0，r = 0.999 8。结果表明，松果菊苷在44.939 7 ~ 539.276 4 μg·mL-1 的浓度范围内线性关系良好。2.5 精密度试验取539.276 4 μg·mL- 1 对照品溶液，按2.2 项下色谱条件连续进样测定6 次，记录峰面积。结果松果菊苷峰面积的RSD 为1.81%，表明仪器精密度良好。2.6 稳定性试验精密量取2.0 mL 肉苁蓉水提液，水浴蒸干，加甲醇溶解，定容至10 mL 容量瓶中，摇匀，0.22 μm 微孔滤膜过滤，按2.2 项下色谱条件，分别于0、2、4、8、12、24 h 进样测定，记录峰面积。结果松果菊苷峰面积的RSD 为1.16%，表明供试品溶液在24 h 内稳定性良好。2.7 重复性试验精密量取2.0 mL 肉苁蓉水提液6 份，按2.3.2 项下方法平行制备6 份供试品溶液，按2.2 项下色谱条件，分别进样测定，记录峰面积。结果松果菊苷质量浓度的RSD 为1.28%，表明方法的重复性良好。2.8 加样回收率试验精密量取1.0 mL 肉苁蓉水提液9 份，分别加入0.8、1.0、1.2 mL 的对照品溶液（1.552 mg·mL-1），水浴蒸干，加甲醇溶解，定容至10 mL 容量瓶中；摇匀，0.22 μm 微孔滤膜过滤，制得高、中、低浓度的供试品溶液，每个浓度平行制备3 份，按2.2 项下色谱条件进行测定，记录峰面积并计算加样回收率。结果见表1。2.9 样品含量测定精密量取2.0 mL 肉苁蓉水提液各3 份，水浴蒸干，加甲醇溶解，定容至10 mL 容量瓶中，摇匀，0.22 μm 微孔滤膜过滤，按2.2 项下色谱条件进行测定，记录峰面积，计算松果菊苷的含量。结果见表2。3 讨论3.1 供试品制备方法肉苁蓉水提液中含有苯乙醇苷类、多糖类等多种化学成分，对待测成分产生一定的干扰。本研究考察了50%甲醇和甲醇两种不同浓度的溶剂。结果表明，以50%甲醇为溶剂的供试品色谱图中松果菊苷与相邻组分峰的分离效果较差；以甲醇作为溶剂，松果菊苷峰的分离度较好，且无其他杂质峰干扰。故选用甲醇作为供试品溶液的溶剂。以甲醇为溶剂，肉苁蓉水提液水浴蒸干，采用甲醇溶解定容摇匀和甲醇超声（10 min）溶解两种处理方法。结果显示，两种方法无明显差异。因甲醇溶解定容摇匀操作简便，故选用此方法制备供试品溶液。3.2 流动相的选择本研究参考2015 年版《中国药典（一部）》[2]肉苁蓉药材项下含量测定的流动相（甲醇-0.1%甲酸）进行测定，结果发现，松果菊苷峰展宽且出现前沿现象，可能与流动相洗脱能力弱有关；参考相关文献[12-13]，以乙腈-0.5%醋酸为流动相，但松果菊苷峰形较差，且出现拖尾现象，考虑为流动相pH 值的问题，最终以乙腈-0.4%磷酸为流动相，结果理论塔板数以松果菊苷峰计大于4 000，松果菊苷与相邻组分峰之间的分离度大于1.5，峰形对称，无杂质峰干扰，基线稳定。因此，本研究松果菊苷含量测定采用乙腈-0.4%磷酸为色谱流动相。本研究采用HPLC 法测定肉苁蓉水提液中松果菊苷的含量，该方法操作简单，结果准确，重复性好，适用于肉苁蓉水提液中松果菊苷的含量测定，可作为肉苁蓉水提液的质量控制方法。本研究仅测定了肉苁蓉水提液中松果菊苷的含量，后续拟对肉苁蓉复方汤剂中松果菊苷的含量进行测定，以探讨各种因素对松果菊苷含量的影响，为含肉苁蓉的汤剂的质量控制提供参考。参考文献：[1] 钟平. 沙漠人参肉苁蓉[J]. 森林与人类，2004，24（11）：25.[2] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典（一部）[M]. 北京：中国医药科技出版社，2015：135-136.[3] 陈飞，陈卓，邢雪飞，等. 肉苁蓉的研究进展[J]. 药物评价研究，2013，36（6）：469-475.[4]方鉴. 肉苁蓉的药理研究进展[J]. 光明中医，2017，32（14）：2140-2142.[5] 邢晓旭，刘钟杰，韩博. 肉苁蓉水提液对大鼠成骨细胞骨形态发生蛋白2基因表达的影响[J]. 中国畜牧兽医，2013，40（1）：17-21.[6] LIANG H，YU F，TONG Z，et al. Cistanches herba aqueous extractaffecting serum BGP and TRAP and bone marrow Smad1 mRNA，Smad5 mRNA，TGF-β1 mRNA and TIEG1 mRNA expression levelsin osteoporosis disease[J]. Molecular Biology Reports， 2013， 40（2）：757-763.[7] 方海林，李军考，姚森明，等. 松果菊苷通过激活ERK/BMP-2信号通路促进大鼠成骨细胞增殖观察[J]. 基层医学论坛，2015，19（4）：435-438.[8] 田原. 松果菊苷诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化及作用机制研究[D]. 沈阳：辽宁中医药大学，2015.[9] 尉大为，葛锌雨，刘奕含，等. 松果菊苷诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的研究[J]. 中药药理与临床，2017，33（2）：48-52.[10] 田玉彪，杨广安，黄维杰，等. HPLC测定肉苁蓉微粉中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量[J]. 安徽农业大学，2015，43（3）：171-173.[11] 杨素德，胡军华，李家春，等. HPLC法同时测定苁蓉总苷胶囊中松果菊苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷的含量[J]. 世界科学技术-中医药现代化，2015，17（3）：609-613.[12] 许晓雪. 肉苁蓉及其有效成分抗骨质疏松药效学及代谢组学研究[D]. 银川：宁夏医科大学，2017.[13] 闫瑶，孟新源，许欢欢，等. 高效液相色谱法测定芪蓉润肠口服液中松果菊苷与毛蕊花糖苷的含量[J]. 新疆医科大学学报，2018，41（7）：886-888，892.

摘 要　目的：HPLC测定在液氮条件研磨以及在自然风干条件下研磨不同种肉苁蓉中松果菊苷的含量，比较野生肉苁蓉和人工培养的肉苁蓉中松果菊苷含量。方法：采用日本岛津LC-20A高效液相色谱仪测定。色谱柱为YMC-Inertsil ODS-SP(4.6 mm×150 mm，5μm；YMC Co Ltd，Japan)；流动相：乙腈-甲醇-1%甲酸（10∶15∶75）；检测波长334 nm；流速0.7 mg·mL-1。柱温30 ℃。结果：处理条件的不同对松果菊苷含量有非常明显影响，液氮条件下研磨的肉苁蓉中松果菊苷的含量普遍高于自然风干条件下研磨的肉苁蓉；野生肉苁蓉的有效成分含量要远高于人工培养。关键词　肉苁蓉；松果菊苷；高效液相色谱法肉苁蓉（Herba Cistanches Y.C.Ma）又称红柳、大芸，属于濒危物种，是一种寄生在沙漠树木梭梭、红柳根部的寄生植物。在我国主要分布于内蒙古、宁夏、甘肃和新疆[1]，素有“沙漠人参”之美誉，具有极高的药用价值。中国药典规定，以列当科植物肉苁蓉的干燥带鳞片肉质茎入药[2]，其主要药用成分有苯乙醇苷类，根据其取代基的不同可分为松果菊苷、类叶升麻苷、肉苁蓉苷等[3]。其中，松果菊苷（Echinacoside）具有改善性功能、抗氧化和清除自由基作用，而且具有一定的抗凋亡作用[4]。20世纪80年代以来，高速液相色谱技术（HPLC）广泛应用于天然产物的分离中，这种技术为苯乙醇苷类化合物的分离提供了一种简单快速的方法[5-6]。选择采用HPLC法，分析不同生长时期野生肉苁蓉和人工栽培肉苁蓉主要有效成分松果菊苷的含量，为合理开发和利用肉苁蓉及有效评价肉苁蓉的质量提供一定科学依据。1　仪器与试剂日本岛津LC-20A高效液相色谱仪，LC-20AT串联双柱塞泵，CTO-20A柱温箱，SPDA-20A紫外可见双波长检测器；昆山KQ-100型超声波清洗器；乙腈（色谱纯，天津光复化工研究所）；甲醇（色谱纯，天津光复化工研究所）；甲酸（色谱纯，天津光复化工研究所）；水（屈臣氏蒸馏水）。对照品：松果菊苷，含量≥98.43%（上海原叶生物科技有限公司）。肉苁蓉样品5种：人工鲜一年期以下（未出头）肉苁蓉，人工鲜（出头）肉苁蓉，人工干肉苁蓉，野生鲜肉苁蓉，野生三年期以上干肉苁蓉。2　方法与结果2.1　色谱条件的确定为使所测松果菊苷在液相色谱图中的峰与其他物质分离，以及控制泵压、时间能在合适的范围内，对色谱的条件进行了实验改进，经流动相的优化实验得出结论：温度越高，液相的保留时间越短，浓度越低，泵压越小且保留时间变短，但峰高变低，不利于测量。根据室温、泵的最大承压等客观状况，最终确定以流动相为乙腈-甲醇-1%甲酸（10:15:75）、检测波长334 nm、流速0.7 mL/min、柱温30 ℃的条件进行分析，得到的信息较为丰富，各成分峰形尖锐而且分离度良好。2.2　色谱柱的确定色谱柱：YMC-Inertsil ODS-SP(4.6 mm×150 mm，5 μm；YMC Co Ltd，Japan)。2.3　实验溶液制备2.3.1 标准品溶液的制备精密称取松果菊苷标准品适量，加流动相乙腈-甲醇-1%甲酸（10:15:75），分别制成0.06 mg·mL-1、0.05 mg·mL- 1、0.04 mg·mL- 1、0.03 mg·mL- 1、0.02 mg·mL-1、0.01 mg·mL-1和0.005 mg·mL-1的松果菊苷标准品溶液。2.3.2 供试品溶液的制备取适量的人工一年期以下（未出头）鲜肉苁蓉、人工鲜肉苁蓉、野生鲜肉苁蓉用研钵在液氮下研磨成粉末；同样再取适量的上述3种肉苁蓉切成块状，在阴凉通风处自然风干，干燥后，将其粉碎研磨成粉末状。人工干肉苁蓉及野生三年期以上干肉苁蓉直接粉碎研磨成粉末状。取上述制的肉苁蓉粉末（过100目筛）0.5 g，置于离心管中，加入流动相25 mL，称重后浸泡30 min，超声处理40 min，冷却后再称定重量，用流动相补足缺失的重量，摇匀后离心，取上清液用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。2.4　松果菊苷标准样品回归曲线的绘制将配制好的松果菊苷标准样品分别注入液相色谱仪，以对照品的浓度（mg·L-1）为横坐标，相应的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线图，得到回归方程为Y=66 867 100X-46 360.83，R2=0.986 37，显示松果菊苷在0.1~1.2μg内呈良好线性关系。2.5　样品测定按照2.3所示方法，制备样品液，然后在色谱条件项下测定，标样及样品的HPLC图谱见图1。各样品中松果菊苷的含量见表1。3　讨论松果菊苷是肉苁蓉主要的有效成分之一，松果菊苷能够很好地代表肉苁蓉药理作用的化学物质基础，使药材的质量评价和其药理作用相对应，提高肉苁蓉质量评价的针对性。处理条件的不同对松果菊苷含量有明显的影响，在液氮条件下研磨的肉苁蓉要比在自然风干条件下研磨的肉苁蓉中松果菊苷的含量普遍都高。普通的风干会降低松果菊苷的含量，可能是在风干过程中损耗或是松果菊苷发生了转化。为防止有效成分含量减少、保证肉苁蓉药效，应选取合适的处理方法。一直以来，大部分人认为肉苁蓉的人工栽培环境以及生长习性与野生品没有明显区别，质量也相差无几，往往只重视产量，并未对质量进行分析。本研究表明，人工栽培的肉苁蓉松果菊苷的含量低于野生肉苁蓉松果菊苷的含量。最高的为野生鲜肉苁蓉0.336 0%，含量最低的是人工鲜肉苁蓉0.007 0%。因此在栽培技术上仍需研究，提高有效成分的含量。肉苁蓉质量的好坏取决于其有效成分松果菊苷含量的多少，而有效成分又与采收的季节、时间、方法有很大的关系，所以肉苁蓉的采收应该考虑有效成分的积累状态和生长发育阶段。既考虑质量，又考虑产量。本方法测定松果菊苷的含量，简便、精密度高、重复性好，结果准确可靠。可用于肉苁蓉药材的含量测定。参考文献：[1] 雷载权.中药学[M].上海:上海科学技术出版社,2001.[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[M].北京:化学工业出版社,2000.[3] 吴培培,闫明,霍仕霞.苯乙醇苷类化合物的药理研究进展[J].医药导报,2006,30(3):142-143.[4] 蒲小平,李晓蓉,李慧浓,等.肉苁蓉成分campneosideⅡ对神经毒索MPP+诱发细胞凋亡的保护作用[J].北京大学学报(医学版),2001,33(3):217-220.[5] Lei L, Yang F, Zhang T, et al. Ito. preparative isolationand Purification of Acteoside and 2’-acety-lacteosidefrom Cistanches Salsa (C.A.Mey.)G.Beck by High-speedCounter-current Chromatography[J].J. Chromatogr. A.,2001,912:181-185.[6] Li L, Tsao R, Liu Z, et al. Isolation and Purification ofActcoside and lsoacteoside from Plantago Psyllium L,byHigh-speed Counter-current Chromatography[J].J.Chromatogr. A.,2005,1063(1):161-169.

摘要：肉苁蓉和锁阳是分布于我国荒漠地区的２种营寄生高等沙生植物，作为名贵的补益药物被广泛应用于中药复方中，目前又发现其新的药理作用并分离出相应的药效成分。肉苁蓉和锁阳的开发利用已初步实现了产业化，系列产品涵盖药物、保健食品和食品添加剂。但因人们的乱挖滥采加之生态环境的恶化，野生肉苁蓉和锁阳现已成为世界濒危保护植物。目前，肉苁蓉和锁阳的人工接种法繁育初获成功，其与寄主之间的相互关系也进一步明晰，从而为这２种资源植物的保护以及可持续利用带来了契机。就近年来对肉苁蓉和锁阳形态特征、生境分布、经济价值、开发利用、人工繁育及其对寄主植物生长发育影响等方面的研究进展进行了综述，并就其今后的主要研究方向进行了分析与展望。关键词：肉苁蓉；锁阳；综述肉苁蓉（Ｃｉｓｔａｎｃｈｅ　ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａ）又名大芸（淡大芸）、寸芸、苁蓉（甜苁蓉、淡苁蓉）、地精、查干告亚（蒙语），为列当科（Ｏｒｏｂａｎｃｈａｃｅａｅ）多年生草本植物，多寄生于藜科（Ｃｈｅｎｏｐｏｄｉａｃｅａｅ）梭梭属（Ｈａｌｏｘｙｌｏｎ）植物梭梭（盐木）（Ｈａｌｏｘｙｌｏｎ　ａｍｍｏｄｅｎｄｒｏｎ）和白梭梭（Ｈａｌｏｘｙｌｏｎ　ｐｅｒｓｉｃｕｍ）的根部［１，２］。锁阳（Ｃｙｎｏｍｏｒｉｕｍ　ｓｏｎｇａｒｉｃｕｍ）又名铁棒槌、锈铁棒、地毛球、乌兰高腰（蒙语），是锁阳科（Ｃｙｎｏｍｏｒｉａｃｅａｅ）锁阳属（Ｃｙｎｏｍｏｒｉｕｍ）的单科单属单种草本植物，多寄生于蒺藜科（Ｚｙｇｏｐｈｙｌｌａｃｅａｅ）白刺属（Ｎｉｔｒａｒｉａ）植物根部［３，４］。肉苁蓉和锁阳均属全寄生种子植物，天然生长于半荒漠和荒漠地区，具有极强的抗旱、抗寒、耐盐碱特性［５］。在历代中医补肾壮阳类处方中，肉苁蓉和锁阳的使用频度极高，且因其功效显著、长于沙漠被美誉为“沙漠人参”。现代医学则对肉苁蓉和锁阳的药理学进行了大量研究，进一步发掘出其多种新用途并提取分离出了主要的药效成分，拓展了这２种资源植物在医药方面的应用领域［６－１９］。目前，以肉苁蓉和锁阳为原料生产的系列产品涵盖药品、保健食品以及食品添加剂等，且其新产品的研发仍在继续，从而极大地推进了其开发利用的产业化进程［１２，１３，２０－２９］。然而，近年来随着国内外市场需求的急剧增加，乱挖滥采导致了肉苁蓉和锁阳野生资源几乎丧失殆尽；加之当地生态环境的不断恶化，野生肉苁蓉和锁阳已被列为世界濒危保护植物［３０－４１］。鉴于此，众多科学工作者开展了肉苁蓉和锁阳及其寄主植物梭梭和白刺的人工繁育研究，探索出了人工接种和组织培养繁育肉苁蓉和锁阳的方法，其中人工接种法虽已基本初获成功，但在促进肉苁蓉和锁阳种子萌发方面的研究还有待深入；组织培养法的研究仅在起步阶段，相关报道还很少。肉苁蓉和锁阳寄主植物梭梭和白刺的人工繁育技术已日趋成熟，其与寄主植物相互关系的研究也有所突破。１　形态特征、生境及分布肉苁蓉株高４０～１８０ｃｍ，形体呈圆柱形，下部较扁、较粗、叶紧密且宽短而厚，向上渐细、叶渐稀疏且狭长而薄；茎肉质；叶三角形、鳞片状、淡黄色；穗状花序，顶生、呈圆柱形、长１５～５０ｃｍ、粗大；果褐色、椭圆形、种子微小，种皮上有１层可保持种仁水分的果胶质。肉苁蓉天然分布于我国内蒙古自治区、新疆、甘肃和青海等地，主要产地为内蒙古巴彦淖尔盟乌拉特前旗和阿拉善盟。锁阳茎埋于沙中，无叶绿素，呈暗紫红色，圆柱形、直立、高１０～１００ｃｍ、直径３～６ｃｍ，基部略增粗或膨大；叶鳞片化、卵状、三角形，长０．５～１．２ｃｍ、宽０．５～１．５ｃｍ，呈螺旋状排列；穗状花序，呈棒状，矩圆形或狭椭圆形，长５～１２ｃｍ、直径２～４ｃｍ，伸出地面；花较小、花被片１～８片、杂性；雄花有雄蕊１枚，蜜腺１个；雌花具雌蕊１枚，子房１室、下位或半下位，胚珠、花柱、柱头各１；果皮白色，种子近球形、深红色、径约１ｍｍ，种皮坚硬；花期５－６月，果期６－８月。锁阳生境为极度干旱（年降水量一般在１５０ｍｍ以下）、日照时间长、夏季高温、冬季严寒、昼夜温差极大、土壤盐碱且沙质的半荒漠或荒漠地带；天然分布于我国甘肃、新疆、内蒙古、青海、宁夏等地区，主要产于浑善达克沙地西部、毛乌素沙地西部、河西走廊沙地、腾格里沙漠等地，尤其是甘肃河西走廊出产的锁阳因疗效好而被历代中医认为是锁阳的道地性产区。２　经济价值及开发利用与保护肉苁蓉是我国的传统名贵中药材，有“沙漠人参”之称，应用历史已有１　８００余年。目前，肉苁蓉的开发利用主要体现在以下３方面：１）保健食品。国内外已经开发了多种以肉苁蓉为主要成分的保健食品，如肉苁蓉口服液、苁蓉酒、苁蓉烟、苁蓉饮料、苁蓉糕点等，经济价值可观。２）药用。肉苁蓉的肉质茎可入药，味甘咸，性温。自古以来，肉苁蓉就因其具有补肾阳、益精血、润肠通便、延缓衰老、提高免疫力等多种功效而在中药复方中被广泛应用。现代医学研究发现，肉苁蓉还在增强记忆力，提高机体耐力，调节内分泌，保肝，治疗各种机能性障碍，特别是性机能障碍和健忘症等方面具有功效，并提取出了其主要药效成分聚丙烯酰胺（ＰｈＧｓ）和肉苁蓉苷；同时，其新的用途仍在不断发现之中。我国已开始在临床上用肉苁蓉治疗老年慢性便秘和消除子宫积瘤。３）食品添加剂。美国已将肉苁蓉作为食品添加剂大量使用。截止２００６年，在欧洲专利局数据库所收录的５１个国家的专利中，有２８０余项是有关肉苁蓉的药理学作用或用其作为药用成分生产药物、保健品等。锁阳亦是我国传统的名贵中药材，具有滋补强壮、抗衰老、抗应激、清除自由基、抑制血小板聚集和增强免疫功能等作用；同时，从锁阳中提取的齐墩果酸丙二酸半酯具有抗艾滋病毒蛋白酶活性作用，为锁阳的应用又开拓了一个全新的领域；此外，锁阳富含鞣质，可提炼烤胶；含淀粉，荒漠等植被稀疏贫瘠地区的家畜喜采食。近年来，锁阳系列产品的研究开发已取得突破性进展，涉及到医药、食品、发酵等各个方面：锁阳冲剂、锁阳胶囊、锁阳精、锁阳茶、锁阳饮片等，尤其是锁阳保健酒、锁阳啤酒、锁阳保健饮料和锁阳口服液的生产已实现了产业化。尽管如此，目前肉苁蓉和锁阳活性成分的提取分离、药理学、药材质量标准等方面的研究还相对薄弱，从而限制了其深层次的开发利用。此外，不但国内市场对肉苁蓉和锁阳有巨大的需求，而且日本、韩国以及东南亚等地区也从我国大量进口。这已造成我国野生肉苁蓉、锁阳被乱挖滥采而成为濒危植物；同时，也殃及其寄主———我国荒漠地区重要的防风固沙植物梭梭和白刺，严重破坏了该地区的生态环境。而解决这一问题的关键是研究和探索出成熟的肉苁蓉和锁阳人工繁育技术。这样才能保证肉苁蓉和锁阳规模化、产业化、可持续的开发与利用。３　人工繁育近年来，科研工作者从肉苁蓉和锁阳寄主———梭梭和白刺的育苗造林技术及其自身的培育繁殖技术等方面进行了一系列的研究并取得了如下重要的进展。３．１　肉苁蓉的人工繁育技术目前，肉苁蓉人工繁殖培育技术主要有组织培养法和人工接种法，二者面临的共同技术难点是肉苁蓉种子萌发十分困难，其原因是肉苁蓉种子存在复杂的休眠特性及特殊的根专性寄生生物学特性，从而严重阻碍了肉苁蓉的人工繁育。３．１．１　肉苁蓉种子的休眠机理及破除其休眠的方法　成熟肉苁蓉种子的胚为球形原胚，发育简单，无胚根、胚芽和子叶的分化。在自然环境条件下，肉苁蓉种子成熟后迸裂，散落在沙土表面，停留１～２年后才能萌发。在可控条件下，对肉苁蓉种子进行高（５０℃）／低（４℃）变温及外源赤霉素（ＧＡ３）预处理或直接进行５０℃高温预处理，可以使其部分种子萌发。进一步研究表明，在肉苁蓉种子经２～５℃低温层积处理后，种子内源激素ＧＡ３含量逐渐增加，脱落酸（ＡＢＡ）含量逐渐降低［５８］。由此可见，肉苁蓉种子至少需要一个化学信号ＧＡ３和一个物理信号高温的诱导，才能最终萌发。但其深层次的种子休眠机理尚有待于进一步研究。３．１．２　组织培养法繁育肉苁蓉　用组织培养法来繁殖培育肉苁蓉的研究较少，仅欧阳杰等报道采用５０℃高温预处理肉苁蓉种子后，诱导种子形成了愈伤组织。因此，笔者着重介绍研究较多的人工接种法繁育肉苁蓉。３．１．３　人工接种法繁育肉苁蓉　肉苁蓉寄主———梭梭的育苗造林：梭梭人工造林的方法主要分为植苗造林和直播造林。然而，根据梭梭在我国的分布及生长特点，其适于先育苗而后进行植苗造林。梭梭的人工育苗方法有裸根育苗和容器育苗２种。裸根育苗前应将种子用０．１％～０．３％的高锰酸钾或硫酸铜溶液浸种２０～３０ｍｉｎ后捞出晒干再育苗。容器育苗可采用自制纸质容器（高１５ｃｍ、直径５ｃｍ）或购置专用育苗容器，选用沙壤土与腐熟的农家肥按４∶１或５∶１混合装入容器育苗。梭梭人工造林时，需要注意以下４方面，１）林地选择：宜选择沙质土、半固定沙丘上造林，在流动沙丘迎风坡中下部也可造林；水位较高的下湿地，盐化的滩地或粘土地上不宜造林。２）整地方法：可根据具体情况采用带状、沟状或块状整地。３）造林时间：春秋季均可，但春季比秋季好，每年３月底至４月初最佳，这样可使机械化接种肉苁蓉的效果更好。４）栽植技术：容器苗栽植时，尽量选用可降解的容器；裸根苗栽植前要对苗木根系进行修剪、浸水、蘸泥浆等处理；应用ＬＧ复合材料、蓄水渗膜材料、保水剂、生根粉等抗旱保水造林技术，可提高造林成活率和保存率。造林成功后，为保证梭梭接种肉苁蓉获得较好的经济效益，抚育管理尤为重要，应定时为梭梭林补水、锄草；同时，要严防梭梭主要的病、虫、鼠害：白粉病、根腐病、种蝇和大沙鼠害。白粉病发病时从绿色嫩枝上形成一层肉眼可见的白色粉状物，严重时会导致植株死亡，可用２５％粉锈宁４　０００倍液喷雾防治；根腐病多发生在幼苗期，常因土壤潮湿板结，通气不良引起，可通过及时拔去死株或用５０％多菌宁１　０００倍液灌根防治；种蝇多发生在肉苁蓉出土开花季节，危害嫩茎，并可钻隧道、蛀入地下茎基部，可用９０％敌百虫８００倍液或４０％乐果乳油1000倍液地上部喷雾或灌根防治；大沙鼠害可用乙型肉毒素、猫王等防鼠药剂拌诱饵防治，也可用设鼠夹和引入天敌的方法进行防治。梭梭天然林复壮更新技术是近年来应用较广的一项生态林恢复技术。该技术是将新疆林科院造林治沙所提出的理论依据和途径加以完善而形成的。首先应采取围栏封育管护措施，使现有梭梭残林休养生息；其次采取植苗造林、容器育苗造林，使用生根抗旱保水剂以及结合接种肉苁蓉给梭梭残林施肥浇水等人工措施，加速其更新，使封育区梭梭林尽快达到成林标准，缩短封育周期。肉苁蓉的人工接种：肉苁蓉接种时应注意４方面。１）种子处理：将千粒重在０．１３ｇ以上，粒大、饱满、有光泽、成熟度好、保存期在２年以内的Ⅰ、Ⅱ级肉苁蓉种子置于烈日下，暴晒１０ｈ以上，然后用500ｐｐｍ　ＡＢＴ　３号生根粉或５００ｐｐｍ萘乙酸浸泡６０ｍｉｎ。２）接种时间：全年均可，但以３月中下旬至４月中下旬为最好。此时是梭梭根系年生长高峰的开始时期，接种可提高肉苁蓉接种成功率，同时也可使肉苁蓉有一个完整的生长周期。３）接种地选择：土壤以通气性良好的沙土为宜，且天然或人工梭梭林能良好生长的地区。４）接种方法：肉苁蓉接种方法主要有破皮法、断根法、营养诱导法和接种纸接种法；其中营养诱导法和接种纸接种法利用植物根系的趋水趋肥性，成功定向诱导了梭梭根系的生长方向，显著提高了肉苁蓉的接种成功机率，且接种省时、省力，易操作，容易被基层接种人员接受，是生产上应用的最佳接种方法；接种时，距梭梭主干４０～６０ｃｍ处挖１～２穴，穴深４０～６０ｃｍ。肉苁蓉的抚育管理：肉苁蓉接种后的抚育管理主要通过对其寄主梭梭的抚育管理来实现；肉苁蓉常见病害主要有腐烂病，发病时会使肉质茎腐烂，可在接种时施入一定量的杀菌剂进行预防；虫害主要有金龟子和蛴螬，其幼虫钻入地下啃食肉苁蓉，影响肉苁蓉生长和质量，可用４０％锌硫磷乳油１　０００～１　２００倍液防治。肉苁蓉的采收与保存：一般情况下，接种２～３年后的肉苁蓉即可采挖。当穴面出现裂缝时，距肉苁蓉植株２０～４０ｃｍ处挖坑，用手刨开肉苁蓉周围沙土以充分暴露苁蓉群，采挖高大粗壮的肉苁蓉；然后将其平放在光照充足、通风的场地晾晒；当肉质由黄色变为棕褐色时，即为干苁蓉。同时，肉苁蓉采收与保存时，应注意以下几点１）采挖肉苁蓉时，可将挖出来的肉苁蓉从距地表１０ｃｍ处去头摘除茎顶端优势，限制生殖生长，集中营养生长，然后覆土埋藏，待第２年采挖，这样产量可增加数倍；保留幼小、瘦弱的待秋季或隔年采挖；同时，尽可能不要伤及梭梭根系，挖至底部块状吸盘时要特别小心；此外，保持外型平直，较长的植株不应折断，否则会降低商品等级。２）采挖出的肉苁蓉若已形成花序应及时切除，否则使茎体中空，失去药用价值。３）制干时，最好采取快速烘干，这可提高干苁蓉的有效成分含量。４）制干后，肉苁蓉仍易发霉、虫蛀，应勤翻晒，置通风、干燥处存放。３．２　锁阳的人工繁育技术３．２．１　锁阳寄主———白刺的育苗造林　白刺造林同样有植苗造林和直播造林２种，植苗造林又有裸根植苗造林和容器植苗造林之分，在降水量不足２００ｍｍ 的地区不宜直播造林，干旱半干旱地区一般常用裸根植苗造林。育苗时，白刺种子播种前需进行催芽处理，即将干燥的白刺种子取出，用６０～７０℃热水浸泡２４～４８ｈ，捞出混湿沙（体积比１∶３）堆放在避风向阳处，盖草帘催芽。但此种方法费时、费力，且条件难以控制。近来研究表明，白刺种子经适当的变温、硫酸和ＧＡ３等物理和化学的联合处理后，其发芽率可在１０ｄ内达到６９％，且发芽整齐；目前，该方法已获授权国家发明专利。苗床最好选择土壤沙质，土层深厚、肥沃，地势较高，排水良好的土地作苗圃。育苗（或造林）一般在春季土壤解冻后进行。整地方法常采用带状整地、沟状整地和穴状整地３种方式。出苗后，应及时开展间苗除草、浇水施肥等适当的苗期管理措施，并严防病、虫、鼠、鸟害。苗木立枯病是白刺苗期容易发生的病害，严重时可造成苗木大量死亡；其症状为感染病菌的茎、叶、根霉变腐烂；可通过土壤消毒，播种前７ｄ采用甲基托布津（７５％）溶液、代森锌３～４ｇ／ｍ２ 混拌适量细沙，撒于土壤中，出苗后在苗期２／３时，每周喷１次波尔多液１００～１５０倍液或硫酸亚铁１００～２００倍液（３０ｍｉｎ）连续２～３次，以后定期（１０～１５ｄ）喷１次等措施进行预防；发病初期，应及时喷洒烂根快治、多菌灵、甲基托布津等药品防治。鼠类和鸟类危害白刺种子和幼苗；可根据鸟、鼠取食的特点，采取对苗床覆盖，驱赶、设毒饵等方法进行预防，在危害特别严重的地块，可设专人定期轮流值班，进行人工驱赶。白刺林地的管理措施类似育苗，这里不再赘述。３．２．２　锁阳的人工繁育技术　在自然条件下，锁阳种子从在寄主根部萌发并与其建立寄生关系，到地下生长、出土、开花、结实等完成其生活史的全过程十分漫长。其主要原因为白刺根埋在沙层深处，锁阳种子仅靠沙层自然流动而被反复埋没的方式进入沙层深处，因此锁阳种子遇到白刺根部的几率很低；同时，即使种子遇到白刺根部，也只有在适宜的条件下才有可能萌发并与白刺建立寄生关系［４１］。跟踪标记观察试验证明，锁阳的人工繁殖可大大缩短其繁殖周期。而人工繁殖成功与否，关键在于了解锁阳种子的萌发条件并提高其萌发率。锁阳种子的休眠机理及破除其休眠的方法：研究表明，导致锁阳种子不易萌发的主要原因是包被种子的果皮非常坚硬及其种皮中存在萌发抑制物———脱落酸（ＡＢＡ）。当除去种皮中的萌发抑制物ＡＢＡ 或加入外源ＧＡ３时，锁阳去果皮种子可完全脱离寄主而萌发；如再加入一定浓度比例的外源细胞分裂素和生长素时，其可以完全脱离寄主而形成吸器。此外，锁阳种子较好的萌发还需满足下列４个条件：１）萌发前需要一段时期的低温处理；２）萌发温度在２５～３５℃，且有较高的昼夜温差；３）萌发要在黑暗条件下；４）ｐＨ 值在６或９时种子萌发率较高。上述条件不但有利于锁阳的人工接种，而且为锁阳的组织培养奠定了基础。锁阳的人工接种：接种前，种子以清水在０～５℃下浸泡２个月左右后，用适当试剂（ＧＡ３）除去萌发抑制物以破除锁阳种子的休眠；这样至少可缩短锁阳繁殖周期１年；接种最适宜时间为６－８月。锁阳的无性繁殖：形态解剖学观察证明，锁阳在寄主白刺根部具有独特的无性繁殖方式，锁阳植株可在寄主根内繁殖“类生殖根状物组织”，通过这类组织的生长繁殖增加锁阳的个体；“类生殖根状物组织”的细胞核较大、细胞质浓、具有较强的分生能力，它们直接来源于锁阳芽体植入寄主根内的部分组织，或来源于锁阳植株上的不定根，后者的根尖粘于寄主根上并将“类生殖根状物组织”的细胞植入寄主根的皮层中并向四周分裂生长，在寄主根的一定部位膨大突出于根外形成新的锁阳芽体，由此进行无性繁殖；锁阳种子一旦与寄主根接种上并发育为锁阳植株后，在靠近锁阳植株附近的寄主根部就可不断产生新的锁阳芽体，并继续长成锁阳植株。锁阳的采收与保存：锁阳春冬季采挖均可，春季采挖，除去花序，半埋于沙滩中晒干，也可趁鲜切片晒干。冬季采挖疗效更为显著，故有“三九三的锁阳赛人参”的俗语。对寄主生长发育的影响４．１　肉苁蓉对其寄主梭梭生长发育的影响研究表明，梭梭寄生肉苁蓉后其本身的形态特征、生物量，体内主要矿质元素含量、水分生理特征、保护酶活性及渗透调节物质、生理生化代谢以及对周围生态系统等都有不同程度的影响；此外，肉苁蓉采挖坑对梭梭根际土壤水分及梭梭天然林的影响也不容忽视。与未寄生肉苁蓉梭梭相比，寄生肉苁蓉梭梭的株高、地径和冠幅普遍变小；枝的生长受到一定程度的抑制；细根所占比例较高而当年生枝的生长却受到一定程度的抑制；总生物量表现出衰弱的态势；植株内矿质营养元素含量没有明显的差别；其同化枝的组织含水量、相对含水量、蒸腾速率、保水力及叶绿素含量降低，束缚水／自由水、水分饱和亏、可溶性蛋白质含量、脯氨酸含量及丙二醛含量提高；同时，保护酶系统及渗透调节系统受到破坏；抗旱能力减弱。此外，未寄生肉苁蓉梭梭以积累葡萄糖为主，而寄生肉苁蓉梭梭在夏季休眠期以积累葡萄糖为主，进入秋季旺盛生长期时以积累蔗糖为主。肉苁蓉是一种专性根寄生植物，其生长所需要的水分、无机盐及营养物质等均来自寄主，而其自身并不进行相应的物质合成。由此可见，肉苁蓉从寄主梭梭处摄取了大量水分与养分，使寄主处于逆境状态从而影响到梭梭的水分代谢及其生理代谢，致使其寄主梭梭生长衰退。与此同时，接种肉苁蓉对梭梭天然林林下植被的种类组成、植株数量、植被盖度、物种多样性、生物量以及天然更新的幼苗幼树等都将产生不同程度的影响。在肉苁蓉采挖坑对梭梭根际土壤水分影响的研究中发现，采挖肉苁蓉后，坑内回填土壤的结构发生改变，致使土壤含水率较采挖前降低，不利于梭梭生长。同时，受采挖和回填接种穴影响的地表面，植物种类和分种盖度、植被总盖度、物种多样性指数等有所下降；植物的生态优势度却有所提高。４．２　锁阳对其寄主白刺生长发育的影响有关锁阳寄生对其寄主白刺影响的研究尚未见报道。只在高永等的研究中发现，在同一条白刺根上，可以寄生不同年龄的锁阳；锁阳的个体大小，每丛的数量及长势与白刺长势呈正相关。因此，锁阳寄生对其寄主白刺的影响还有待进一步深入研究。５　展望目前，在肉苁蓉和锁阳的形态胚胎学特征、种子生理、药性及药理学分析等方面已进行了系统的研究。以此为基础，以肉苁蓉与锁阳为主要原料的系列产品也步入产业化、规模化的轨道。然而，相关产品的质量与技术含量偏低，致使其难以达到国际标准，进入国际市场。因而，还需对这２种资源植物在有效成分的提取与分离、药理学、加工工艺、产品标准等方面进行深入的研究。同时，肉苁蓉和锁阳的人工培育技术虽然取得了重大进展，但是尚未形成系统的培育体系，尤其是锁阳资源并未因此而得到充分的保护和利用，仍处于自生自灭乃至被掠夺性地采挖状态。因此，今后在肉苁蓉和锁阳的人工培育技术体系，尤其是其无性培育技术体系方面需要继续完善和深入的研究。与此同时，在肉苁蓉和锁阳与其寄主梭梭和白刺生长发育相互关系方面的研究，无论是研究数量还是研究水平均相对薄弱。此外，关于肉苁蓉和锁阳的分子、生理、生态等基础性理论研究还极为不足，这是目前最急需共同解决的问题。不过，有理由相信，随着科学技术的发展和对肉苁蓉、锁阳研究的不断深入，这２种资源植物的社会经济价值将会越来越大。参考文献：［１］　中国科学院中国植物志编辑委员会．中国植物志（第六十九卷）［Ｍ］．北京：科学出版社，１９９０：８６－８７．［２］　许小英，裴丽霞，李冬梅，等．荒漠肉苁蓉的人工栽培技术［Ｊ］．内蒙古林业，２００８，（１０）：３０．［３］　中国科学院植物研究所．中国高等植物图鉴（第二册）［Ｍ］．北京：科学出版社，１９７２：１０２５．［４］　中国科学院中国植物志编辑委员会．中国植物志（第五十三卷第二分册）［Ｍ］．北京：科学出版社，２０００：１５２－１５４．［５］　Ｘｕ　Ｒ，Ｃｈｅｎ　Ｊ，Ｃｈｅｎ　Ｓ　Ｌ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｉｓｔａｎｃｈｅ　ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａ　Ｍａ　ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ　ａｓ　ａ　ｎｅｗ　ｃｒｏｐ　ｉｎ　Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　ａｎｄ　Ｃｒｏｐ　Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ，２００９，５６（１）：１３７－１４２．［６］　杨波，刘曙艳．肉苁蓉总苷治疗血管性痴呆的疗效分析［Ｊ］．中国实用神经疾病杂志，２０１０，１３（２３）：６８－６９．［７］　罗慧英，杨焕，朱丽娟，等．肉苁蓉总苷对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用［Ｊ］．中国临床药理学与治疗学，２０１０，１５（１２）：１３５８－１３６１．［８］　朱祖成．肉苁蓉总苷对大鼠脑缺血再灌注后脑组织兴奋性氨基酸的作用［Ｊ］．安徽医药，２０１０，１４（１２）：１３９３－１３９４．［９］　杜娟，陈虹．肉苁蓉及其有效成分对脑损伤的保护作用研究进展［Ｊ］．时珍国医国药，２０１０，２１（９）：２３３３－２３３４．［１０］　曾建春，樊粤光，刘建仁，等．肉苁蓉含药血清诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的实验研究［Ｊ］．中国骨伤，２０１０，２３（８）：６０６－６０８．［１１］　杨建华，胡君萍，热娜·卡斯木，等．肉苁蓉苯乙醇总苷对酪氨酸酶活性的抑制作用［Ｊ］．华西药学杂志，２０１０，２５（５）：５３３－５３５．［１２］　芮飞龙，李东哲．锁阳水煎剂对大鼠骨骼肌自由基代谢及运动能力的影响［Ｊ］．赤峰学院学报（自然科学版），２０１０，２６（１０）：１１４－１１５．［１３］　贾丹兵，巩沅鑫，李乃民，等．参姜锁阳益气片对高寒地区运动性疲劳人群血液流变学的影响［Ｊ］．中国新药杂志，２０１０，１９（２１）：１９３６－１９３８．［１４］　杨烨烨，李伟民，徐容，等．化学发光法研究锁阳提取液消除Ｏ２－ 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ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｙ　ｍｏｄｕｌａｔｅ　ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ　ｏｆγ－ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃａｃｉｄ　ａｎｄ　ｍｏｎｏａｍｉｎｅ［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１０，３５（４）：６６６－６７６．［４８］　Ｍａ　Ｃ　Ｍ，Ｎａｋａｍｕｒａ　Ｎ，Ｍｉｙａｓｈｉｒｏ　Ｈ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｕｒｓｏｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ　ｆｒｏｍＣｙｎｏｍｏｒｉｕｍ　ｓｏｎｇａｒｉｃｕｍ，ａｎｄｒｅｌａｔｅｄ　ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｅｓ　ｏｎ　ｈｕｍａｎ　ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｖｉｒａｌ　ｐｒｏｔｅａｓｅ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９８，１２（１）：１３８－１４２．［４９］　马超美，中村宪夫，服部征雄，等．锁阳的抗艾滋病毒蛋白酶活性成分（２）－齐墩果酸丙二酸半酯的分离和鉴定［Ｊ］．中国药学杂志，２００２，３７（５）：３３６－３３８．［５０］　初雨，潘晓玲．新疆药用资源植物及其开发利用现状［Ｊ］．中国野生植物资源，２００１，２０（１）：２１－２３．［５１］　赵忠，何毅，李青，等．肃南裕固族自治县草原资源调查［Ｊ］．草业学报，２０１０，１９（６）：２３１－２４７．［５２］　赵忠，何毅，李青，等．肃南、肃北草地类型及草地植物物种多样性现状［Ｊ］．草业学报，２０１０，１９（５）：２２７－２３８．［５３］　江小雷，岳静，张卫国，等．生物多样性，生态系统功能与时空尺度［Ｊ］．草业学报，２０１０，１９（１）：２１９－２２５．［５４］　马雄，张荣．浅谈甘南高原草地现状及保护对策［Ｊ］．草业科学，２０１０，２７（１０）：１８２－１８４．［５５］　牛东玲，宋玉霞，郭生虎，等．肉苁蓉种子休眠与萌发特性的初步研究［Ｊ］．种子，２００６，２５（２）：１７－２４．［５６］　张汝民，白静，吕春玲，等．变温层积处理诱导肉苁蓉种子的萌发［Ｊ］．林业科学，２００８，４４（９）：１７０－１７３．［５７］　欧阳杰，王晓东，陈书安，等．肉苁蓉种子愈伤组织诱导条件的研究［Ｊ］．中国药学杂志，２００２，３７（７）：４９１－４９３．［５８］　盛晋华，张雄杰，刘宏义，等．肉苁蓉种子后熟阶段内源激素含量变化［Ｊ］．种子，２００６，２５（４）：１－７．［５９］　李天然．寄生被子植物的种子生理及其与寄主的相互关系［Ｊ］．植物生理学通讯，１９９６，３２（６）：４５０－４５７．［６０］　马东明，徐淑莲，翟志席，等．寄生药用植物德赢vwin登录 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摘要:为深入研究肉苁蓉(Cistanche deserticola Ma． )活性部位体内作用的物质基础，应用高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(HPLC-Q-TOF MS)技术对肉苁蓉拟雌激素活性部位入血成分进行分析，并与空白血清、肉苁蓉拟雌激素活性部位和对照品之间的色谱图和质谱碎片信息进行对比，共鉴别出13 个化学成分，其中包括6 个药材原型:京尼平苷酸、红景天苷、肉苁蓉苷A、松果菊苷、毛蕊花糖苷，肉苁蓉苷D;7个代谢成分:3，4-二羟基苯乙醇苷、甲基化毛蕊花糖苷、乙酰化肉苁蓉苷G、3，4-二羟基苯乙醇、乙酰基管花苷B、肉苁蓉苷B 葡萄糖醛酸代谢物、甲基化3，4-二羟基苯乙醇苷。该方法可为进一步研究肉苁蓉药理活性和作用机理提供理论支持。关键词:肉苁蓉;含药血清;拟雌激素活性;高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(HPLC-Q-TOF MS)肉苁蓉(Cistanche deserticola Ma． ) 是一种寄生在沙漠树木( 如梭梭、红柳等) 根部的植物，作为一种滋补、强壮的名贵中药，具有滋补肾阳、调节免疫力、延缓衰老、抗辐射、保护中枢神经系统等多种药理功效，素有“沙漠人参”之称［1-2］。目前，国内外对肉苁蓉的活性研究大多局限于对药理活性的评价［3-9］，而其药效物质基础尚未阐明，这严重阻碍了肉苁蓉的合理开发和应用。中药成分复杂多样，以适当途径给药后，在体内经过吸收、代谢等过程，最终入血的成分才可能是中药的药效物质基础。这些有效成分可能是中药的原型或代谢产物，也可能是中药中各成分相互反应所形成的新成分，还可能是药物直接作用于机体生成的内源性生理活性物质。因此，这些入血成分能够代表中药及复方的药效物质基础。分析口服给药后能进入血液的成分及其代谢产物，寻找成分间的相互作用规律，可以为药效物质基础研究提供一定的依据。采用小鼠子宫增重法和MTT 比色法，对肉苁蓉拟雌激素活性部位及给药剂量进行筛选。前期实验结果表明，用肉苁蓉的乙醇(95% ) 提取物、每天30 g /kg 的剂量，灌胃给药后能使性未成熟小鼠的子宫系数显著增加，且其含药血清对MCF-7 细胞增殖的促进作用显著(P ＜ 0. 01) ，为肉苁蓉拟雌激素作用的活性部位［10］。本工作拟采用高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法(HPLC-Q-TOF MS) 分析鉴定大鼠灌服肉苁蓉拟雌激素活性部位后的入血成分和其原型成分及代谢产物，并对代谢途径进行推测，以期为肉苁蓉拟雌激素作用的药效物质基础研究提供依据。1 实验部分1. 1 仪器与试剂Waters-600 型液相色谱仪:美国Waters 公司产品，配有四元梯度泵、自动进样器、真空脱气机、柱温箱、DAD 检测器、Empower 化学工作站;Agilent-1290 型6530 系列Q-TOF LC-MS 质谱联用仪:美国Agilent 公司产品;XW-80A 旋涡混合器:上海宇工机械有限公司产品;DK-80 电热恒温水浴锅:上海一恒科技有限公司产品;ALC-110. 4 分析天平:上海人和科学仪器有限公司产品;H66MC 超声震荡仪:美国Ohaus 科技有限公司产品。肉苁蓉:购自三棵树药材市场，由哈尔滨商业大学张德连教授鉴定为Cistanche deserticolaMa． ;毛蕊花糖苷( 批号111530-200505)、松果菊苷( 批号111670-200503)、红景天苷( 批号110736-200628):均由中国药品生物制品检定所提供;乙烯雌酚:广州市汉普医药有限公司产品;甲醇、乙腈:均为HPLC 级，山东禹王试剂有限公司产品;其余试剂均为分析纯;实验用水:市售某品牌纯净水。雌性Wistar 大鼠:批号SCXK-(吉) 2003—2004，体重(220 ± 20) g，由长春国家生物产业基地实验动物中心提供。1. 2 灌胃药液的制备将肉苁蓉药材粗粉用95% 乙醇回流提取，依次以8 倍量溶剂提取150 min、6 倍量溶剂提取75 min、6 倍量溶剂再提取75 min，然后将3次提取液合并，减压浓缩，得到浸膏，保存于冰224 质 谱 学 报 第36卷箱中，备用。使用前，用蒸馏水配制成浓度约为1. 5 g /mL 的灌胃药液。1. 3 对照品溶液的制备精密量取适量的毛蕊花糖苷、红景天苷及松果菊苷，用甲醇充分溶解，配制成1 mL 混合对比液，3 种对照品各含0. 2 mg，将对照品溶液过0. 45 μm 滤膜，备用。1. 4 含药血清及空白血清的制备含药血清的制备:称量雌性Wistar 大鼠体重，按每天1 mL /100 g 的剂量给药，分别给予大鼠蒸馏水和灌胃药液，灌胃分早晚两次，连续给药3 天，末次给药60 min 后，用10% 水合氯醛以2 mL /kg 腹腔注射麻醉，肝门静脉取血，充分凝血后，以3 000 r /min 离心10 min，上清液即为含药血清。空白血清的制备:每天以等体积的蒸馏水给大鼠灌胃，其他制备方法同含药血清。取2 mL 含药血清，加入5 倍量甲醇，于离心管中充分涡旋10 min，再以14 000 r /min 离心10 min，吸取上清液，挥干溶剂。用微量移液器精密加入0. 5 mL 甲醇，充分溶解残留物，经0. 22 μm 微孔滤膜过滤后，进行色谱分析。1. 5 实验条件1. 5. 1 色谱条件色谱柱:Waters SymmetryShieldTM ＲP18 柱(4. 6 mm × 250 mm × 5 μm);预柱:Nova-PakC18 Guard-PakTM;流速:0. 5 mL/min;进样量:10 μL;流动相:乙腈-0. 2%甲酸水溶液;梯度条件:0 ～35 min、5% ～34%乙腈，35 ～65 min、24%～26%乙腈;柱温:30 ℃;检测波长:254 nm。1. 5. 2 质谱条件离子源:大气压电喷雾电离源(ESI);流速:0. 5 mL/min;雾化气压力:0. 2 MPa;干燥气流速:8. 0 L/min;干燥气温度:30 ℃;毛细管电压:3. 5 kV;鞘气流速:12. 0 L/min;鞘气温度:400 ℃。选择正负离子扫描方式，质量扫描范围m/z 100 ～3 000。2 结果与讨论2. 1 肉苁蓉拟雌激素活性部位含药血清化学成分HPLC-ESI-Q-TOF MS/MS 分析肉苁蓉拟雌激素活性部位大鼠含药血清样品通过ESI-MS 检测器进行定性分析，分别使用正离子模式和负离子模式进行扫描，结果示于图1。对比图1 中2 种扫描模式的一级质谱总离子流图，发现负离子模式下得到的总离子流特征性较强、灵敏度较高，故本实验选择负离子模式扫描。在负离子模式下，应用ESI-MS 检测器对肉苁蓉拟雌激素活性部位给药后的大鼠血清进行定性分析，通过对比分析空白血清与给药血清的一级扫描总离子流图，共标示出13 个分子离子峰，示于图2。通过分析含药血清与肉苁蓉体外药材，推测2、3、5、7、9、10 号峰为原型成分，1、4、6、8、11、12、13 号峰为代谢成分。根据各色谱峰在负离子模式下检出的分子离子峰，以及相应的特征碎片给出的相对分子质量，共标出13 个质谱峰;对照各标准品的紫外光谱-质谱信息，并参考文献报道的成分，鉴别出13个峰的化学成分，列于表1。其中包括6 个原型成分，分别为京尼平苷酸、红景天苷、肉苁蓉苷A、松果菊苷、毛蕊花糖苷、肉苁蓉苷D;7 个代谢成分，分别为3，4-二羟基苯乙醇苷、甲基化毛蕊花糖苷、乙酰化肉苁蓉苷G、3，4-二羟基苯乙醇、乙酰基管花苷B、肉苁蓉苷B 葡萄糖醛酸代谢物及甲基化-3，4 二羟基苯乙醇。在7 个代谢产物中，推测1 号峰(3，4-二羟基苯乙醇)、8 号峰(3，4-二羟基苯乙醇)、13 号峰(甲基化3，4-二羟基苯乙醇苷) 为肉苁蓉中苯乙醇苷类化合物水解的片段;4 号峰(甲基化毛蕊花糖苷) 为毛蕊花糖苷的代谢产物;6 号峰(乙酰化肉苁蓉苷G) 为肉苁蓉苷G 的代谢产物;11 号峰(乙酰基管花苷B)为管花苷B 的代谢产物;12 号峰(肉苁蓉苷B 葡萄糖醛酸代谢物)为肉苁蓉苷B 的代谢产物。13 种成分解析如下:1 号峰(tＲ =13. 987 min)m/z 315 为［M － H］－ 峰，推测为母离子失去鼠李糖基，m/z 297 为［M － H － H2O］－ 峰，推测为3，4-二羟基苯乙醇苷;2 号峰(tＲ = 18. 407 min)m/z 373 为［M － H］－ 峰，m/z 211 为［M － H －glc］－ 峰，为母离子失去β-D-葡萄糖基(162 u)而得，推测为京尼平苷酸;3 号峰(tＲ = 24. 309 min)m/z 299，推测为红景天苷，与标准品对照一致;4 号峰(tＲ = 26. 787 min)m/z 637 为［M － H］－峰，m/z 475 为［M － H － caff］－ 峰，m/z 167 为［M－ H － caff － α-L-rhamnopyl － Glc］－ 峰，推测为甲基化毛蕊花糖苷;5 号峰( tＲ = 28. 569 min )m/z 799为［M － H］－ 峰，m/z 637 为［M － H －Caff］－ 峰，为母离子失去咖啡酰基(162 u)而得，推测为肉苁蓉苷A［11］;6 号峰(tＲ = 31. 759 min)m/z487 为［M －H］－ 峰，m/z 327 为母离子失去鼠李糖基，推测为乙酰化肉苁蓉苷G;7 号峰( tＲ =32. 028 min)m/z 785 为［M － H］－ 峰，为松果菊苷失去一个氢特征，推测为松果菊苷，与标准品对照一致;8 号峰(tＲ = 36. 104 min)m/z 153 为［M － H］－ 峰，m/z 123 为［M － H － CH3O］－ 峰，推测为3，4-二羟基苯乙醇;9 号峰( tＲ = 39. 061min)m/z 623 为［M － H］－ 峰，为毛蕊花糖苷失去一个氢特征，推测为毛蕊花糖苷，与标准品对照一致;10 号峰(tＲ = 43. 117 min)m/z 651 为［M－H］－ 峰，m/z 459 为［M － H － Fr］－ 峰，为中性丢失反式阿魏酸所得，推测为肉苁蓉苷D［12］;11 号峰(tＲ =44. 974 min)m/z 707 为［M － H］－ 峰，m/z543 为［M －H － α-L-rhamnopyl －H2O］－ 峰，推测为乙酰化管花苷B;12 号峰(tＲ = 48. 961 min)m/z989 为［M －H］－ 峰，m/z 827 为［M －H － glc］－ 峰，m/z 651［M － H － glc － glucuronyl］－ 峰为在m/z827 基础上失去葡萄糖醛酸基，推测为肉苁蓉苷B葡萄糖醛酸代谢物;13 号峰(tＲ =57. 965 min)m/z329 为［M － H］－ 峰，m/z 137 为［M － H － glc －OCH3］－ 峰，推测为甲基化3，4-二羟基苯乙醇苷。2. 2 讨论本实验应用HPLC-Q-TOF MS 联用技术，在肉苁蓉拟雌激素活性部位给药后的血清中共标识了13 个主要色谱峰，这些可能是肉苁蓉发挥拟雌激素活性的体内直接作用物质，同时也体现了中药药效的产生是多成分相互协调、互补或制约的结果。通过解析13 个血中移行成分，证明了苯乙醇苷类是肉苁蓉的主要活性成分。在后续研究中，将建立相应的谱效关系进行药效相关性研究，以进一步明确药效物质基础，并建立多成分在体内不同时间点的量-时-效关系，从而揭示肉苁蓉的代谢途径和代谢方式。3 结论本实验采用HPLC-ESI-Q-TOF MS /MS 技术对肉苁蓉拟雌激素活性部位入血成分进行分析，共鉴别出13 个化学成分，这对阐明肉苁蓉拟雌激素活性成分的药效物质基础研究具有重要意义，也可为肉苁蓉的进一步研究及临床用药提供可靠依据。

摘要:为深入研究肉苁蓉(Cistanche deserticola Ma． )活性部位体内作用的物质基础，应用高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(HPLC-Q-TOF MS)技术对肉苁蓉拟雌激素活性部位入血成分进行分析，并与空白血清、肉苁蓉拟雌激素活性部位和对照品之间的色谱图和质谱碎片信息进行对比，共鉴别出13 个化学成分，其中包括6 个药材原型:京尼平苷酸、红景天苷、肉苁蓉苷A、松果菊苷、毛蕊花糖苷，肉苁蓉苷D;7个代谢成分:3，4-二羟基苯乙醇苷、甲基化毛蕊花糖苷、乙酰化肉苁蓉苷G、3，4-二羟基苯乙醇、乙酰基管花苷B、肉苁蓉苷B 葡萄糖醛酸代谢物、甲基化3，4-二羟基苯乙醇苷。该方法可为进一步研究肉苁蓉药理活性和作用机理提供理论支持。关键词:肉苁蓉;含药血清;拟雌激素活性;高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(HPLC-Q-TOF MS)肉苁蓉(Cistanche deserticola Ma． ) 是一种寄生在沙漠树木( 如梭梭、红柳等) 根部的植物，作为一种滋补、强壮的名贵中药，具有滋补肾阳、调节免疫力、延缓衰老、抗辐射、保护中枢神经系统等多种药理功效，素有“沙漠人参”之称。目前，国内外对肉苁蓉的活性研究大多局限于对药理活性的评价，而其药效物质基础尚未阐明，这严重阻碍了肉苁蓉的合理开发和应用。中药成分复杂多样，以适当途径给药后，在体内经过吸收、代谢等过程，最终入血的成分才可能是中药的药效物质基础。这些有效成分可能是中药的原型或代谢产物，也可能是中药中各成分相互反应所形成的新成分，还可能是药物直接作用于机体生成的内源性生理活性物质。因此，这些入血成分能够代表中药及复方的药效物质基础。分析口服给药后能进入血液的成分及其代谢产物，寻找成分间的相互作用规律，可以为药效物质基础研究提供一定的依据。采用小鼠子宫增重法和MTT 比色法，对肉苁蓉拟雌激素活性部位及给药剂量进行筛选。前期实验结果表明，用肉苁蓉的乙醇(95% ) 提取物、每天30 g /kg 的剂量，灌胃给药后能使性未成熟小鼠的子宫系数显著增加，且其含药血清对MCF-7 细胞增殖的促进作用显著(P ＜ 0. 01) ，为肉苁蓉拟雌激素作用的活性部位。本工作拟采用高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法(HPLC-Q-TOF MS) 分析鉴定大鼠灌服肉苁蓉拟雌激素活性部位后的入血成分和其原型成分及代谢产物，并对代谢途径进行推测，以期为肉苁蓉拟雌激素作用的药效物质基础研究提供依据。1 实验部分1. 1 仪器与试剂Waters-600 型液相色谱仪:美国Waters 公司产品，配有四元梯度泵、自动进样器、真空脱气机、柱温箱、DAD 检测器、Empower 化学工作站;Agilent-1290 型6530 系列Q-TOF LC-MS 质谱联用仪:美国Agilent 公司产品;XW-80A 旋涡混合器:上海宇工机械有限公司产品;DK-80 电热恒温水浴锅:上海一恒科技有限公司产品;ALC-110. 4 分析天平:上海人和科学仪器有限公司产品;H66MC 超声震荡仪:美国Ohaus 科技有限公司产品。肉苁蓉:购自三棵树药材市场，由哈尔滨商业大学张德连教授鉴定为Cistanche deserticolaMa． ;毛蕊花糖苷( 批号111530-200505)、松果菊苷( 批号111670-200503)、红景天苷( 批号110736-200628):均由中国药品生物制品检定所提供;乙烯雌酚:广州市汉普医药有限公司产品;甲醇、乙腈:均为HPLC 级，山东禹王试剂有限公司产品;其余试剂均为分析纯;实验用水:市售某品牌纯净水。雌性Wistar 大鼠:批号SCXK-(吉) 2003—2004，体重(220 ± 20) g，由长春国家生物产业基地实验动物中心提供。1. 2 灌胃药液的制备将肉苁蓉药材粗粉用95% 乙醇回流提取，依次以8 倍量溶剂提取150 min、6 倍量溶剂提取75 min、6 倍量溶剂再提取75 min，然后将3次提取液合并，减压浓缩，得到浸膏，保存于冰224 质 谱 学 报 第36卷箱中，备用。使用前，用蒸馏水配制成浓度约为1. 5 g /mL 的灌胃药液。1. 3 对照品溶液的制备精密量取适量的毛蕊花糖苷、红景天苷及松果菊苷，用甲醇充分溶解，配制成1 mL 混合对比液，3 种对照品各含0. 2 mg，将对照品溶液过0. 45 μm 滤膜，备用。1. 4 含药血清及空白血清的制备含药血清的制备:称量雌性Wistar 大鼠体重，按每天1 mL /100 g 的剂量给药，分别给予大鼠蒸馏水和灌胃药液，灌胃分早晚两次，连续给药3 天，末次给药60 min 后，用10% 水合氯醛以2 mL /kg 腹腔注射麻醉，肝门静脉取血，充分凝血后，以3 000 r /min 离心10 min，上清液即为含药血清。空白血清的制备:每天以等体积的蒸馏水给大鼠灌胃，其他制备方法同含药血清。取2 mL 含药血清，加入5 倍量甲醇，于离心管中充分涡旋10 min，再以14 000 r /min 离心10 min，吸取上清液，挥干溶剂。用微量移液器精密加入0. 5 mL 甲醇，充分溶解残留物，经0. 22 μm 微孔滤膜过滤后，进行色谱分析。1. 5 实验条件1. 5. 1 色谱条件色谱柱:Waters SymmetryShieldTM ＲP18 柱(4. 6 mm × 250 mm × 5 μm);预柱:Nova-PakC18 Guard-PakTM;流速:0. 5 mL/min;进样量:10 μL;流动相:乙腈-0. 2%甲酸水溶液;梯度条件:0 ～35 min、5% ～34%乙腈，35 ～65 min、24%～26%乙腈;柱温:30 ℃;检测波长:254 nm。1. 5. 2 质谱条件离子源:大气压电喷雾电离源(ESI);流速:0. 5 mL/min;雾化气压力:0. 2 MPa;干燥气流速:8. 0 L/min;干燥气温度:30 ℃;毛细管电压:3. 5 kV;鞘气流速:12. 0 L/min;鞘气温度:400 ℃。选择正负离子扫描方式，质量扫描范围m/z 100 ～3 000。2 结果与讨论2. 1 肉苁蓉拟雌激素活性部位含药血清化学成分HPLC-ESI-Q-TOF MS/MS 分析肉苁蓉拟雌激素活性部位大鼠含药血清样品通过ESI-MS 检测器进行定性分析，分别使用正离子模式和负离子模式进行扫描，结果示于图1。对比图1 中2 种扫描模式的一级质谱总离子流图，发现负离子模式下得到的总离子流特征性较强、灵敏度较高，故本实验选择负离子模式扫描。在负离子模式下，应用ESI-MS 检测器对肉苁蓉拟雌激素活性部位给药后的大鼠血清进行定性分析，通过对比分析空白血清与给药血清的一级扫描总离子流图，共标示出13 个分子离子峰，示于图2。通过分析含药血清与肉苁蓉体外药材，推测2、3、5、7、9、10 号峰为原型成分，1、4、6、8、11、12、13 号峰为代谢成分。根据各色谱峰在负离子模式下检出的分子离子峰，以及相应的特征碎片给出的相对分子质量，共标出13 个质谱峰;对照各标准品的紫外光谱-质谱信息，并参考文献报道的成分，鉴别出13个峰的化学成分，列于表1。其中包括6 个原型成分，分别为京尼平苷酸、红景天苷、肉苁蓉苷A、松果菊苷、毛蕊花糖苷、肉苁蓉苷D;7 个代谢成分，分别为3，4-二羟基苯乙醇苷、甲基化毛蕊花糖苷、乙酰化肉苁蓉苷G、3，4-二羟基苯乙醇、乙酰基管花苷B、肉苁蓉苷B 葡萄糖醛酸代谢物及甲基化-3，4 二羟基苯乙醇。在7 个代谢产物中，推测1 号峰(3，4-二羟基苯乙醇)、8 号峰(3，4-二羟基苯乙醇)、13 号峰(甲基化3，4-二羟基苯乙醇苷) 为肉苁蓉中苯乙醇苷类化合物水解的片段;4 号峰(甲基化毛蕊花糖苷) 为毛蕊花糖苷的代谢产物;6 号峰(乙酰化肉苁蓉苷G) 为肉苁蓉苷G 的代谢产物;11 号峰(乙酰基管花苷B)为管花苷B 的代谢产物;12 号峰(肉苁蓉苷B 葡萄糖醛酸代谢物)为肉苁蓉苷B 的代谢产物。13 种成分解析如下:1 号峰(tＲ =13. 987 min)m/z 315 为［M － H］－ 峰，推测为母离子失去鼠李糖基，m/z 297 为［M － H － H2O］－ 峰，推测为3，4-二羟基苯乙醇苷;2 号峰(tＲ = 18. 407 min)m/z 373 为［M － H］－ 峰，m/z 211 为［M － H －glc］－ 峰，为母离子失去β-D-葡萄糖基(162 u)而得，推测为京尼平苷酸;3 号峰(tＲ = 24. 309 min)m/z 299，推测为红景天苷，与标准品对照一致;4 号峰(tＲ = 26. 787 min)m/z 637 为［M － H］－峰，m/z 475 为［M － H － caff］－ 峰，m/z 167 为［M－ H － caff － α-L-rhamnopyl － Glc］－ 峰，推测为甲基化毛蕊花糖苷;5 号峰( tＲ = 28. 569 min )m/z 799为［M － H］－ 峰，m/z 637 为［M － H －Caff］－ 峰，为母离子失去咖啡酰基(162 u)而得，推测为肉苁蓉苷A［11］;6 号峰(tＲ = 31. 759 min)m/z487 为［M －H］－ 峰，m/z 327 为母离子失去鼠李糖基，推测为乙酰化肉苁蓉苷G;7 号峰( tＲ =32. 028 min)m/z 785 为［M － H］－ 峰，为松果菊苷失去一个氢特征，推测为松果菊苷，与标准品对照一致;8 号峰(tＲ = 36. 104 min)m/z 153 为［M － H］－ 峰，m/z 123 为［M － H － CH3O］－ 峰，推测为3，4-二羟基苯乙醇;9 号峰( tＲ = 39. 061min)m/z 623 为［M － H］－ 峰，为毛蕊花糖苷失去一个氢特征，推测为毛蕊花糖苷，与标准品对照一致;10 号峰(tＲ = 43. 117 min)m/z 651 为［M－H］－ 峰，m/z 459 为［M － H － Fr］－ 峰，为中性丢失反式阿魏酸所得，推测为肉苁蓉苷D［12］;11 号峰(tＲ =44. 974 min)m/z 707 为［M － H］－ 峰，m/z543 为［M －H － α-L-rhamnopyl －H2O］－ 峰，推测为乙酰化管花苷B;12 号峰(tＲ = 48. 961 min)m/z989 为［M －H］－ 峰，m/z 827 为［M －H － glc］－ 峰，m/z 651［M － H － glc － glucuronyl］－ 峰为在m/z827 基础上失去葡萄糖醛酸基，推测为肉苁蓉苷B葡萄糖醛酸代谢物;13 号峰(tＲ =57. 965 min)m/z329 为［M － H］－ 峰，m/z 137 为［M － H － glc －OCH3］－ 峰，推测为甲基化3，4-二羟基苯乙醇苷。2. 2 讨论本实验应用HPLC-Q-TOF MS 联用技术，在肉苁蓉拟雌激素活性部位给药后的血清中共标识了13 个主要色谱峰，这些可能是肉苁蓉发挥拟雌激素活性的体内直接作用物质，同时也体现了中药药效的产生是多成分相互协调、互补或制约的结果。通过解析13 个血中移行成分，证明了苯乙醇苷类是肉苁蓉的主要活性成分。在后续研究中，将建立相应的谱效关系进行药效相关性研究，以进一步明确药效物质基础，并建立多成分在体内不同时间点的量-时-效关系，从而揭示肉苁蓉的代谢途径和代谢方式。3 结论本实验采用HPLC-ESI-Q-TOF MS /MS 技术对肉苁蓉拟雌激素活性部位入血成分进行分析，共鉴别出13 个化学成分，这对阐明肉苁蓉拟雌激素活性成分的药效物质基础研究具有重要意义，也可为肉苁蓉的进一步研究及临床用药提供可靠依据。参考文献:［1］ 赵新杰，夏华玲，王苏静． 肉苁蓉的药理作用研究进展［J］． 中国药业，2009，18(17):77-79．ZHAO Xinjie，XIA Hualing，WANG Sujing． Ｒesearchon pharmacological activities of Cistanche deserticola［J］． China Pharmaceuticals，2009，18(17): 77-79(in Chinese)．［2］ 玄国东，刘春泉． 肉苁蓉苯乙醇苷对D-半乳糖致衰老模型小鼠的抗衰老作用研究［J］． 中药材，2008，31(9):1 385-1 388．XUAN Guodong，LIU Chunquan． Ｒesearch on theeffect of phenylethanoid Glycosides ( PEG) of theCistanche deserticola on anti-aging in aged mice inducedby D-galactose［J］． Journal of Chinese Me-第3期 李文兰等:HPLC-ESI-Q-TOF MS /MS 分析肉苁蓉拟雌激素活性部位入血成分 227dicinal Materials，2008，31 (9): 1 385-1 388 ( inChinese)．［3］ HU G S，HUＲ Y J，JIA J M，et al． Effect of2-aminoindan-2-phosphonic acid treatment on theaccumulation of salidroside and four pheylethanoidGlycosides in suspension cell culture of Cistanchedeserticola［J］． Plant Cell Ｒeports，2011，30(4):665-674．［4］ DONG J，YAO J，N FANG，et al． Structural characterizationandimmunological activety of two coldwater-extractable polysaccharides from Cistanche deserticolaMa［J］． Carb-ohydrate 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如今，已经85岁的刘铭庭依然忙碌。记者日前见到这位老人时，他刚参加完一项柽柳保护实地考察活动，从青海同德县回到乌鲁木齐。作为植物学家、知名治沙专家，刘铭庭从中国科学院新疆生态与地理研究所退休后，仍在关心红柳研究、肉苁蓉培育和推广工作。“我研究红柳60年，就做了两件事：发现了红柳新品种；发明红柳肉苁蓉人工种植技术，创下小面积亩产2000公斤以上的高产录。”刘铭庭说：“研究了一辈子红柳和肉苁蓉，我放不下它们。”“以苦为乐，以苦为荣”1956年在兰州大学生物系学习的刘铭庭去新疆实习，来到孔雀河下游尉犁县考察塔克拉玛干沙漠。“沙漠里热得很，生态条件差，一定要改善那里的环境。”那次经历，让刘铭庭终生难忘，也让他暗下决心：“把自己的一生献给祖国的治沙事业。”第二年，刘铭庭从兰州大学生物系毕业。毕业前，他满腔热情地给当时的高教部写信，主动请缨到边疆，投身治沙事业。“我到新疆工作，就是要改善生态环境，这是一份事业。”漠，寻找优良的固沙植物品种。“考察中他发现一个很高的沙丘上长满了红柳，针形的叶子与众不同。”红柳又名柽柳，刘铭庭当时意识到这可能是一种新型柽柳会在防风治沙中发挥很大作用。“这种红柳生命力顽强，如果流沙将它掩埋，它还会继续向上生长，而且它的枝条柔性好，抗风沙能力极强。”刘铭庭对这一品种柽柳作了深入研究，后被学术界命名为“塔克拉玛干柽柳”。此后，刘铭庭又相继发现了莎车柽柳、塔里木柽柳、金塔柽柳等新品种，成为柽柳属植物研究领域公刘铭庭说。要胜任工作，先磨炼意志。到新疆两个月后，自治区团委号召广大青年参加义务修渠，从山上修建一条30多公里的引水渠，刘铭庭主动报名参加。整个工程分五期，别人都是一个月轮一期，刘铭庭则是从开始修建到通水，参与了建设全过程。研究红柳，就要与沙漠打交道，必须常往沙漠里钻。一天早晨，因为前一天夜里下了雨，非常凉爽，刘铭庭和同事就光着脚向沙漠腹地行进。10点钟太阳出来了，沙子的水分很快被晒干，滚烫难耐。“我们走两步就跪下来，把脚翘起来凉一下。因为沙子表面太热，几乎没法走。”刘铭庭笑着回忆，“幸亏我们带着采集土壤用的布袋子，把它套在脚上，赶快跑回去”。“刚参加工作时，脑海中就两个想法：一是奉献自己的青春和智慧，积极参与国家建设；二是在艰苦的劳动中锻炼自己。”刘铭庭说：“在沙漠里工作，确实很苦，但保持好的心态，反而以苦为乐、以苦为荣，因为我有明确的目标，就是要研究出成果。”“大自然是最好的老师。”1959年，刘铭庭参加中国科学院塔克拉玛干沙漠科学考察队，走进荒地处塔克拉玛干沙漠南缘的和田地区长年饱受风沙之害，该地区于田县政府部门负责人慕名找到已退休的刘铭庭，寻求治沙之策。于是，刘铭庭从治沙站拿出自己培育的红柳肉苁蓉苗木，赴于田县奥依托格拉克乡试种。为了便于观察和研究，刘铭庭在沙漠里自建的土坯房中住，没有水，也没有电，生活物资要从外面运来，生活、交通条件极为不便。周边几公里，除了他和老伴，再没有人居住。刘铭庭为此买了一辆毛驴车、一只大水桶，从外面拉回漂满虫子的涝坝水饮用。起风沙时，昏天黑地，沙漠中的几间小屋被尘沙包裹，有时门都难以推开。在沙漠中生活，刘铭庭的老伴储慧芳养成每天记日记的习惯，因为怕忘了每周二的集市，一周所需的生活用品都要去集市采购。儿子、女儿来探望，看到艰苦的生活条件，禁不住泪如泉涌，恳请父母回乌鲁木齐生活，被父母回绝：“有淳朴乡亲们的等待，在这里研究、培育肉苁蓉，不觉得苦。”“当试验地里种出肉苁蓉，让乡亲们看到了增收的希望时，这比做多少场报告效果都好，找我学技术的人也越来越多。”刘铭庭高兴地说。“将技术交给老百姓”为了“给群众吃定心丸”，刘铭庭手把手教农民种植肉苁蓉，告诉乡亲们“不仅要种得好，还要卖得好”，带领更多人在治沙中致富。年过80岁，刘铭庭还经常骑着电动车去指导农户生产。如今，和田地区推广红柳、肉苁认的权威。“大自然是最好的老师。”刘铭庭说，“在深入接触自然界的过程中，你会发现可学的东西很多”。从“六五”到“十三五”期间，刘铭庭承担了多项国家和自治区荒漠化治理重点科研项目，成为我国该研究领域学术带头人。在流沙地、重盐碱地通过引洪成功，大面积恢复和发展了红柳灌木林，十余年间推广400万亩，取得了明显的生态、经济和社会效益。刘铭庭获得过联合国、国家、省部级奖28项，在防治荒漠化领域是获得国际奖项最多的科学家。“科研成果要应用于实践，在实践中接受检验。”这是刘铭庭坚持的原则。历史上三次被迫迁移的和田地区策勒县，于20世纪80年代初又面临“流沙围城”困境。在自治区一次现场会上，刘铭庭和同事提出用5年时间治理流沙6万亩，植被覆盖率恢复到30%至40%的目标。随后他将自己多年的科研成果应用在策勒县流沙治理上，取得了显著成效：仅用3年就完成了任务，红柳等植被覆盖在15万亩流沙上，流沙前锋后退了逾4公里。“治沙致富一盘棋”“科研只是第一步，关键是要将红柳的研究成果大面积应用于固沙造林。”刘铭庭认为，治沙致富一盘棋，治沙不能只靠投入，还要有产出，发展沙产业，让沙区群众在治沙中致富。1985年，刘铭庭在中科院新疆生地所策勒沙漠研究站开始试种红柳肉苁蓉。红柳肉苁蓉是寄生在红柳上的肉苁蓉，具有很高的药用价值。功夫不负有心人，一年后试种成功。蓉种植成效明显。在刘铭庭的示范带动下，肉苁蓉种植面积近50万亩，和田已成为我国肉苁蓉药材重要的产地、集散地及交易市场，并开拓出国际市场。于田县沙区红柳肉苁蓉种植面积达到16万亩，总产量达1.6万吨以上；肉苁蓉亩产最高达200公斤以上，一亩收入4000元至8000元。于田县奥依托格拉克乡种植专业户达吾提·阿布都拉说：“以前家里穷得很，在刘教授的指导下，种上了肉苁蓉，日子越过越好，家里不仅盖了新房，还买了小汽车。”由于刘铭庭多年来为肉苁蓉人工种植研究和大面积推广应用作出了突出贡献，群众称他为“红柳老人”“人工肉苁蓉之父”。1995年，联合国环境规划署在第一个“世界防治荒漠化和干旱日”，将首次设立的“全球土地退化和荒漠化控制成功业绩奖”授予了刘铭庭主持研究的“盐碱地、沙地引洪灌溉大面积恢复红柳造林技术”项目。刘铭庭作为“策勒流沙治理研究”成果的主要完成者，也同时获得了这一奖项。对于各种荣誉，刘铭庭看得很淡。刘铭庭似乎忘记了自己的年龄，如今仍继续走在研究推广红柳、肉苁蓉种植的道路上。“科技工作者不能图名利，而是要将技术真正交给老百姓。”现在，许多沙漠边缘地带都被农民种上了红柳和肉苁蓉，既绿化了沙漠，也让农民得到了收获，改善了生活。刘铭庭说：“沙漠边缘绿起来的同时，乡亲们也富起来了，这才是我最高兴的事。”

现在市场上流通着各个种类的肉苁蓉，但是肉苁蓉在我国主要分为有六个种类，其中产量和功效最高的就是肉苁蓉。那么，德赢vwin登录 与肉苁蓉的区别在哪呢？ 一、德赢vwin登录 与肉苁蓉的区别 1、肉苁蓉：呈扁圆柱形，稍弯曲，长3~5厘米，直径2～8厘米，表面棕褐色或灰棕色。密被覆瓦状排列的肉质鳞叶，通常鳞叶先端已断。体重、质硬，微有柔性，不易折断，断面棕褐色，有淡棕色点状维管束，排列成波状环纹。气微味甜、徽苦。 2、德赢vwin登录 ：呈扁圆柱形、扁纺锤形、扁卵圆形、扁圆形等不规则形，长6～8厘米，直径4～6.5厘米，表面红棕色、灰黄棕色或棕褐色，多扭曲。密被略呈覆瓦状排列的肉质鳞片，上部密下部疏、鳞片先端多已断落，残基部宽多在l厘米以上，整个鳞片略呈长三角形，高约1厘米。体重、质坚硬，无韧性，难折断，断面颗粒性，多呈灰棕色，有的外圈呈黑色硬胶质样。黑褐色点状维管束众多，不规则散在，有的有小裂隙。气微，味甜、微苦。 二、有效成分含量区别 德赢vwin登录 寄生在红柳根部，主要产区为新疆和田。晾干后非常坚硬，被药商誉为硬大芸。德赢vwin登录 鲜材的松果菊苷和麦角甾苷一般含量在100g当中含1.5g-4g不等，年份越高其含量越多，会随着水份的流失而减少。因有效成分含量较高因此在制药方面应用非常广泛，如肾宝片，鸿茅药酒，劲酒等都是选用德赢vwin登录 为主要原料，出口也以硬大芸为主。 肉苁蓉寄生在梭梭根部，主要产品为内蒙阿拉善地区，因成分多糖，晾干后非常柔软。简称软大芸，油苁蓉。荒漠肉苁蓉松果菊苷的含量100g当中含0.3g左右。因产稀少，市场价格略高于德赢vwin登录 。因产品油性大，开水冲泡后，发黑，连续冲泡多次颜色依旧发黄。更多消费者故以为效果会更好，因此一般中药房选用比较广泛。