摘要目的: 采用HPLC 法同时测定肉苁蓉饮片中京尼平苷酸、松果菊苷、肉苁蓉苷A、管花苷A、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、2’-乙酰毛蕊花糖苷和管花苷B 的含量。方法: 采用HPLC 法，色谱柱为Agilent ZOＲBAX C18柱( 250 mm×4．6 mm，5 μm) ，流动相为乙腈-0．5%乙酸，梯度洗脱。检测波长为237 nm，流速为1．0 ml·min－1，柱温为30℃。采用SPSS 19．0 软件对24 批次肉苁蓉饮片中8种成分含量进行相关性分析。结果: 京尼平苷酸、松果菊苷、肉苁蓉苷A、管花苷A、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、2’-乙酰毛蕊花糖苷和管花苷B 的进样质量分别在0．098～9．800 μg、0．105～10．520 μg、0．104～ 10．440 μg、0．095～ 9．530 μg、0．099～ 9．860 μg、0．108～10．780 μg、0．118～11．810 μg、0．099 ～ 9．860 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系; 平均加样回收率分别为95．4%( ＲSD =1．86%) ，99．2%( ＲSD= 1．50%) ，96．5%( ＲSD= 0．99%) ，94．8%( ＲSD= 1．75%) ，102．5%( ＲSD= 1．13%) ，97．2%( ＲSD= 1．46%) ，105．1%( ＲSD= 1．39%) ，96．8%( ＲSD= 1．97%) ( n= 6) 。松果菊苷和毛蕊花糖苷含量呈显著正相关( P＜0．01) 。管花苷A、异毛蕊花糖苷含量与松果菊苷、毛蕊花糖苷呈显著正相关( P＜0．01) 。2’-乙酰毛蕊花糖苷与毛蕊花糖苷的含量呈正相关( P＜0．05) 。结论: 该方法操作简便快捷，准确有效，专属性强，有助于全面评价肉苁蓉饮片质量。

关键词:肉苁蓉饮片;高效液相色谱法;苯乙醇苷;环烯醚萜苷;京尼平苷酸;含量测定

肉苁蓉又名地精、大芸，始载于《神农本草经》，列为上品，具有极高的药用价值［1］。中国药典2015 年版收载的肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉Cistanche deserticola Y． C．Ma 或德赢vwin登录 Cistanche tubulosa ( Schenk) Wight 的干燥带鳞叶的肉质茎［2］，主产于内蒙古、新疆、宁夏、甘肃和青海等地［3］，具有补肾阳、益精血、润肠通便等功效，用于治疗肾阳不足、精血亏虚、阳痿不孕、腰膝酸软、筋骨无力、肠燥便秘［2］。目前，国内外报道肉苁蓉化学成分包括苯乙醇苷类、环烯醚萜及其苷类、木质素及其苷类、单萜苷类、生物碱和糖类等［4～ 6］。其中主要成分为苯乙醇苷类成分，包括松果菊苷、毛蕊花糖苷等，为肉苁蓉补肾壮阳、润肠通便、保肝作用的主要成分［6～ 8］。环烯醚萜及其苷类成分，包括京尼平苷酸、8-表马钱子苷酸等，具有雄性激素样作用［8～ 11］。目前，已有关于HPLC 法测定肉苁蓉中松果菊苷、毛蕊花糖苷、管花苷A、异毛蕊花糖苷、京尼平苷酸等含量的文献报道［11～ 16］，但是未见同时测定苯乙醇苷类和环烯醚萜苷类两大活性成分中主要成分含量的报道。本研究收集肉苁蓉饮片样品24 批次，采用HPLC 法同时测定苯乙醇苷类成分肉苁蓉苷A、管花苷A、管花苷B、松果菊苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、2’-乙酰毛蕊花糖苷和环烯醚萜苷类成分京尼平苷酸共8 种成分含量，以期为肉苁蓉饮片的全面质量评价和质量控制提供科学依据，现报道如下。

1 仪器与材料

1．1 仪器

安捷伦1260 高效液相色谱仪( 美国Agilent 公司) ;XS105 十万分之一电子天平( 瑞士METTLEＲ TOLEDO 公司) ; AB104-S 万分之一电子天平( 瑞士METTLEＲ TOLEDO公司) ; FＲQ-1010T 超声波清洗器( 杭州法兰特超声波科技

有限公司) ; Milli-Q Advantage A10 超纯水仪( 默克密理博公司) 。

1．2 材料

松果菊苷对照品( 批号: 111670-201706，含量89．7%) 、毛蕊花糖苷对照品( 批号: 111530-201713，含量92．5%) 均购自中国食品药品检定研究院; 肉苁蓉苷A( 批号: 17062001，含量95%) 、管花苷A( 批号: 18032105，含量98%) 、管花苷B( 批号: 17052704，含量97%) 、异毛蕊花糖苷( 批号:18102404，含量98%) 、2’-乙酰毛蕊花糖苷( 批号: 19011705，含量96%) 和京尼平苷酸( 批号: 18112101，含量98%) 均购自成都普菲得生物技术有限公司; 甲醇、乙腈( 色谱纯) 均购自德国默克公司; 乙酸( 优级纯) 购自德国默克公司; 其余试剂均为分析纯，水为超纯水。

24 批次肉苁蓉饮片来源信息见表1，经菏泽市食品药品检验检测研究院马海春副主任中药师鉴定为列当科植物肉苁蓉Cistanche deserticola Y． C．Ma 的干燥带鳞叶的肉质茎。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱: Agilent ZOＲBAX C18 柱( 250 mm × 4．6 mm，5μm) ; 流动相: 乙腈( A) -0．5%乙酸( B) ，按表2 条件梯度洗脱; 检测波长: 237 nm; 流速: 1．0 ml·min－1 ; 柱温: 30 ℃; 进样量: 10 μl。在此色谱条件下，各成分保留时间及分离度较好，对照品和供试品色谱图见图1。

含京尼平苷酸0．980 0 mg·ml－1、松果菊苷1．052 0 mg·ml－1、肉苁蓉苷A 1．044 0 mg·ml－1、管花苷A 0．953 0 mg·ml－1、毛蕊花糖苷0．986 0 mg·ml－1、异毛蕊花糖苷1．078 0 mg·ml－1、2’-乙酰毛蕊花糖苷1．181 0 mg·ml－1、管花苷B 0．986 0mg·ml－1的混合对照品储备溶液。精密量取上述储备溶液5 ml，置25 ml 量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。

2．3 供试品溶液的制备

精密称取过四号筛的肉苁蓉粉末1．0 g，置于50 ml 棕色量瓶中，加入50%甲醇40 ml，超声提取( 600 W，42 kHz) 40min，放冷后加50%甲醇定容至刻度，摇匀，用0．45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。如样品测定结果超过标准曲线范围，稀释后再进行测定。

2．4 方法学考察

2．4．1 线性关系考察分别精密吸取“2．2”项下配制的混合对照品溶液0．5，1，5，10，15，20，50 μl，按“2．1”项下色谱条件进样测定。以峰面积( Y) 为纵坐标，以对照品质量( X，μg)为横坐标绘制标准曲线，结果见表3。

2．4．2 精密度试验精密吸取同一供试品溶液，按照“2．1”项下色谱条件连续进样测定6 次，记录峰面积，计算8 种成分的峰面积ＲSD。结果京尼平苷酸、松果菊苷、肉苁蓉苷A、管花苷A、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷2’-乙酰毛蕊花糖苷、管花苷B 峰面积ＲSD 分别为1．24%，0．93%，1．35%，0．77%，1．48%，1．73%，1．36%，1．59%( n = 6) ，表明仪器精密度良好。

2．4．3 稳定性试验取同一供试品溶液，按照“2．1”项下色谱条件分别于制备后0，2，4，6，8，12，24 h 进样测定，记录峰面积。结果得京尼平苷酸、松果菊苷、肉苁蓉苷A、管花苷A、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、2’-乙酰毛蕊花糖苷、管花苷B 峰面积的ＲSD 分别为1．56%，1．16%，1．64 %，0．83%，1．25%，1．49%，0．96%，1．62%( n= 7) ，表明供试品溶液在24 h 内稳定。

2．4．4 重复性试验精密称取同一批( 批号: 18122402) 供试品粉末6 份，每份1．0 g，分别按照“2．3”项下方法制备，按“2．1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图并计算8 种成分的含量及其ＲSD。结果京尼平苷酸、松果菊苷、肉苁蓉苷A、管花苷A、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、2’-乙酰毛蕊花糖苷、管花苷B 含量平均值分别为1．542，13．776，1．391，0．593，2．536，2．435，1．467，1．867 mg·g－1，其ＲSD 分别为1．74%，1．37%，0．86%，1．42%，1．05%，1．92%，1．52%，1．07%( n = 6) ，表明方法的重复性良好。

2．4． 5 加样回收率试验精密称取同一批( 批号:18122402) 供试品粉末6 份，每份0．5 g，分别加入“2．2”项下混合对照品储备溶液1．0 ml，按照“2．3”项下方法制备加样回收供试品溶液，按“2．1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图，计算8 种成分的加样回收率及其ＲSD。结果表明，京尼平苷酸、松果菊苷、肉苁蓉苷A、管花苷A、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、2’-乙酰毛蕊花糖苷、管花苷B 的平均回收率分别为95．4%，99．2%，96．5%，94．8%，102．5%，97．2%，105．1%，96．8%，ＲSD 分别为1．86%，1．50%，0．99%，1．75%，1．13%，1．46%，1．39%，1．97%( n = 6) 。

2．5 样品含量测定

分别取24 批次肉苁蓉饮片，按“2．3”项下方法制备供试品溶液，按“2．1”项下色谱条件进行测定，结果见表4。

2．6 8 种成分含量相关性分析

采用SPSS 19．0 软件对24 批次肉苁蓉饮片中8 种成分含量的关系进行Pearson 相关性分析，采用双侧检验。结果表明，中国药典2015 年版中规定的两种指标性成分松果菊苷与毛蕊花糖苷的含量呈正相关( P＜0．01) ; 管花苷A、异毛蕊花糖苷均与松果菊苷及毛蕊花糖苷的含量呈正相关( P＜0．01) ; 2’-乙酰毛蕊花糖苷与毛蕊花糖苷的含量呈正相关( P＜0．05) 。见表5。

3 讨论

本研究分别考察了不同溶剂( 甲醇、50%甲醇和水) ，提取方法( 冷浸提取、超声提取和加热回流提取) 及提取时间( 20 min，40 min，60 min) 的提取效果。结果表明，50%甲醇超声提取40 min 提取效果好，且杂质较少，处理过程便捷有效。对不同流动相体系( 乙腈-0．5%乙酸，乙腈-0．1%乙酸和乙腈-水) 进行比较，发现相同条件，乙腈-0．5%乙酸为流动相时，各个色谱峰峰型较好，分离度和理论板数较高。全波长( 190～ 400 nm) 扫描结果表明在237 nm 8 种对照品均有吸收，且峰型好，峰响应较高。

结果发现24 批次肉苁蓉饮片中松果菊苷和毛蕊花糖苷总量均符合中国药典2015 年版含量测定项下规定，但不同批次的肉苁蓉饮片各指标成分含量差异较大。8 种成分中松果菊苷和毛蕊花糖苷含量较高，且两者呈显著正相关，管花苷A、异毛蕊花糖苷含量均与松果菊苷、毛蕊花糖苷呈显著正相关。本试验以肉苁蓉饮片中京尼平苷酸、松果菊苷、肉苁蓉苷A、管花苷A、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、2’-乙酰毛蕊花糖苷、管花苷B 8 种成分为指标，运用HPLC 法建立其含量测定方法，该方法简便、高效、准确，可为肉苁蓉饮片质量评价和质量控制提供参考。

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