任荣军（岳阳市食品药品检验所 湖南岳阳414000）

摘要目的：建立同时測定肉苁蓉中松果菊普、毛蒸花糖普的高效液相色语一测多评法。方法：以松果菊苷和毛藻花糖苷为考察指标，建立两者间的相对校正固子，并用校正固子计算另一个成分的含量，将一测多评法的计算值与外标法实测值进行比较。结果：建立的相对校正因于重现性良好，采用校正固于计算的含量值和外标法实测值之间没有显著性差异。结论：同时测定肉苁蓉中2种成分的测多评法方法可靠，结果准确，可用于控制肉苁蓉药材及其饮片的质量。

关键词 肉苁蓉；松果菊苷；毛蕊花糖苷；一测多评法；高效液相色谱法

中图分类号：R927.2 文献标识码：A 文章编号：1008049X（2015）08-4404-03

Simultaneous Determination of Two Effective Components in Cistanche by Quantitative Analysis of Multi- components by Single-marker

Ren Rongjun (Food and Drug Inspection in Yueyang City,Hunan Yueyang 414000,China)

ABSTRACT Objective:To establish a determination method for tuo effective components echinacoide and acteoside in cistanche by quantitative analysis of multi-components by single marker (QAMS).Methods:With echinacea glycosides and mmullein indican as the examining indices,the relative correction factor(RCF)between echinacea glyoosides and mullein indican was established,and then uwed to calcalate the content of the other components,Meanwhile,the calculated value was compared with that of the exdernal standard method.Results:The RCFs had good repodacibility wiathout significant dfferences betwren the quantitative resuls of QAMS method and those of the external standand method.Condusion:The described method is eliable and accurate, and can be used to control the quality of echinacoside and acteoside in cistanche.

KEY WORDS Cistanche:Echinacoside:Acteoide:Quantitative analysis of multi-components by single maker:HPLC 

肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉（Cistanche doenicola Y.C.Ma）或管花肉灰蓉［Cistanche tubulosa（Sehrenk）Wighi］的 燥带鳞叶的肉质茎。具有补肾阳，益精血、润肠通便之功效。临床常用于治疗肾阳不足，精血亏虚，阳痿不孕，腰膝酸软，筋骨无力，肠燥便秘等症0。《中国药典》收载了松果菊苷（echinacoside，EC）与毛蕊花糖苷（acteoside，AC）2个成分的高效液相含量测定方法，本试验在此基上，改进了该测定方法，并利用以上2种成分内在的函数和比例关系，采用一测多评的方法，计算EC、AC相互之间的相对校正因子（fAc），并用校正因子计算EC.AC的含量，为客观评价肉苁蓉药材及其饮片的质量提供了新的分析模式。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters 2695e／2489 高效液相色谱仪：电子分析天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）：超声波清洗机（济宁奥波超声电气有限公司）。

1.2 试药

松果菊苷对照品（批号：111670-201304，纯度：97.1％），毛蕊花糖苷对照品（批号：111530-201411，纯度：94.4％）均购自中国食品药品检定研究院：肉苁蓉药材收集自不同产地，经作者鉴定为列当科植物肉苁蓉（Cistanche desenicola Y.C．Ma）的干燥带鳞叶的肉质茎（编号：1～5）；甲醇（色谱纯）：水为重蒸馏水：其余化学试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Ulhimate-C（250 mmx4.6mm，5 μm）；流动相：甲醇（A）0.1％甲酸（B），梯度洗脱（0～17min，28％A:17~25 min,28%→→33% A:25~40 min,33%:40~41 min, 33％-28％ A：41～45 min，28％ A）：流速为1.0ml·min-，检测长为330nm，柱温为30℃；进样量为10 μl。在上述色谱条件下，松果菊苷，毛蕊花糖苷与其他成分能达到较好的分离。

2.2 溶流的制备

2.2.1 对照品溶液 松果菊苷对照品，毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含松果菊目0.3008mg，ml-1，毛蕊花糖苷0.2032mg＊ml＂＇的混合溶液，即料。

2.2.2 供试品溶液取本品粉末（过四号即）的1g-精密称定·置100 ml色量中-糖密加入50％甲醇50＝l，密富摇匀，称定重量，浸泡30 min．超声处理40 min（250W．351Hz），故冷，再称定重量，加50％甲醇补足减失的重量，据匀。静置-取上清液，滤过，取续滤液，即得。取对照品溶液与供试品溶液各10 μl-注入液相色谱仪·定。结果见图1。

A．对照品 1．供试品 1．松果菊苷 2．毛花糖费图1 HPC色谱图

2.3 或性关系考察

精密吸取上述合对照品溶液1.5.10.15.20.25.30μl注入高效液相色谱仪，按“2.1”项下色进条件进行分析。分别以对照品进样量（C.ua）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标，绘制标准曲线并进行回归处理，得松果菊苷，毛蕊花糖苷的标准曲线回归方程：松果菊苷Y-1.47x10＃C-8.74x10·1.0000；毛蕊花糖营Y-1.86x10＊C- 1.20x10-＝1.0000：结果表明：松果菊苷对照品在0.201～6.024μ范围内线性关系良好，毛蕊花糖苷对照品在0.203-6.095 pg范国内线性关系良好。

2.4糖密度试验

精密吸取同一合对照品溶液10pl，连续进样6次，记录松果菊苷与毛蕊花糖苷的峰面积，其峰面积的SD分别为0.3％，0.2％（m＝6）。表明仪器精密度良好。

2.5 德定性试验

取同一供试品溶液，分于配制后的0.2.4.8,12.24 5精密吸取 10 μl-注入液相色退仪·测定·结果峰面积SD分别为1.2％，1.8％（m＝6），表明供试品溶液在配制后24k内稳定·

2.6 重复性试验

称取同一批肉苁蓉饮片粉末（过四号称）约1.0g共6份，精密移定，按供试品溶液处理方法制备样品并测定，松果菊苷与毛蕊花糖苷含量的RSD分别为0.8％、1.0％（-6），表明该方法重复性较好。

2.7 加样回收率试验

精密称取同一批肉苁蓉饮片粉末（过四号期）1.0g-分别加入一定量的松果菊苷对照品与毛蕊花糖苷对照品，按

供试品溶液处理方法制备样品并测定，计算加样回收率，松果菊日的平均回收率为99.34％，RSD为1.42％（m＝6）：毛菱花糖苷平均回收率为98.08％，RSD为1.67％（m＝6），表明该方法准确度良好。

2.8 相对税立四予的计算

以红为内步物，根据相对校正因子计算公式，计算毛蕊花糖登与内参物的相对校正因子，见表1．表2。

表1 以区：为内参物的相对校正因子计算结果（u＝2）

表2 以AC为内参物的相对校正因子计算结果（m＝2）

2.9 色请峰定位

“一测多评“法色谢峰的准确定位一股可以采用保留时间差或相对保留值等参数合光谱图整体特征，以及每个峰的紫外吸收特征未定位其余持测成分（a．b-％1⑦色进终，相对保留值指待测成分与内参物S间保留时间的比值，计算公式：＊1．／1。：保留时间差指待成分与内参物5间保留时间的差值，计算公式：.-一般保留时间的差值受色谱柱及柱温等影响，有一定的波动·采用相对保留值合紫外光进图整体特征进行EC，AC的定位较为可行·结果见表3-表4及图2。

表3 以E为内参物的相对保留值计算结果（m＝2）

A.IC B.AC

图2 对照品的紫外光谱围

中松果菊苷与毛蕊花