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郭卫红
【摘要】目的测定同属肉苁蓉、德赢vwin登录 、盐生肉苁蓉及其不同产地药材中麦角甾苷含量。方法采取麦角甾苷稀甲醇溶液予200 ~ 400 nm 波长扫描,以332 nm 为检测波长。精密吸取对照品溶液1、2、4、6、8 μL 进样,按拟定的色谱条件测定。分别以乙酸乙酯、氯仿、石油醚、乙醚脱脂,然后以甲醇提取,测定含量。精密称取已测知含量的样品适量,添加适量麦角甾苷对照品并测定。结果麦角甾苷在0. 1 ~ 0. 8 μg 范围内与峰面积呈良好的线性关系。不同地区肉苁蓉麦角甾苷含量差异巨大。结论中药产地因素不可忽略,检测样品越多,含量变异程度越大。
【关键词】肉苁蓉; 生品; 麦角甾苷
肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉( Cistanche deserticolaY. C. Ma. ) 的带鳞叶的肉质茎。主产于内蒙古、青海、甘肃、新疆等地。中医认为本品甘、咸、温,归肾、大肠经,《神农本草经》记载肉苁蓉“主五劳七伤,补中,除茎中寒热痛,养五脏,强阴,益精气,妇人癥瘕。久服轻身。”药效学研究表明[1 - 3]肉苁蓉通过干扰机体免疫功能、老化代谢产物、老化相关酶而延缓衰老,可延缓脾、脑、肺、肝等组织器官的衰老与退化。肉苁蓉通过麦角甾苷、苯乙醇苷、松果菊苷、甜菜碱、肉苁蓉苷A、甘露醇等活性成分发挥抗衰老作用[4]。本文测定了同属三种肉苁蓉、德赢vwin登录 、盐生肉苁蓉及其不同产地药材中麦角甾苷含量,希冀有助于评价肉苁蓉药材的质量优劣。
实验材料
一、仪器与试剂
国产YWG - C18色谱柱( 4. 6 × 250 mm) ,日本岛津LC - 3A 高相液相色谱仪,日本岛津UV - 3000紫外分光光度计,甲醇为优级纯,醋酸等试剂均为分析纯。麦角甾苷对照品( 山西中医学院中药鉴定室) 含量98%以上。
二、实验药物
所有药物经山西中医学院中药鉴定室鉴定为正品。
方法与结果
一、色谱条件
1. 选择检测波长: 取麦角甾苷稀甲醇溶液,予200 ~ 400 nm 波长扫描,确认其最大吸收波长为332nm,作为检测波长。
2. 流动相选择: 对照品和样品溶液在不同浓度的乙酸和甲醇组成的流动相中进行分析试验[5],选择分离度满意的流动相为甲醇- 1% 乙酸( 35∶ 65) ,流速为1 mL·min - 1。
二、线性关系考察
精密称取麦角甾苷对照品5 mg,置50 mL 量瓶中,加流动相( 或优级纯甲醇) 溶解并定容,摇匀,为对照品溶液。精密吸取对照品溶液1、2、4、6、8 μL 并进样,按拟定的色谱条件测定,以麦角甾苷的峰面积为纵坐标,进
样量为横坐标,得一直线,回归方程为Y = 299 492X +1 165,r = 0. 999 9。麦角甾苷在0. 1 ~ 0. 8 μg 范围内与峰面积呈良好的线性关系。
三、精密度试验
精密吸取上述对照品溶液4 μL,重复进行5 次含量测定,测定峰面积RSD < 2%。
四、样品测定
1. 提取方法选择: 药材( 过20 目筛) 置索氏提取器,分别以乙酸乙酯、氯仿、石油醚、乙醚脱脂,然后以甲醇提取,测定含量[6],发现以上脱去溶液均含麦角甾苷,只是数量不同,可能和药材中含一定量水分有关。直接以甲醇提取,结果表明麦角甾苷能完全溶出,其他成分能与基线分离。
2. 样品液置备: 称取待测样品( 过20 目筛) 5 g,精密称定,置索氏提取液中,加入甲醇60 mL,提取至无色,滤过,定容于50 mL 棕色量瓶中,制成每1mL 溶液含0. 1 g 样品的样溶液。同时称取3 g 待测样品粉末,进行水分测定。按上述色谱条件进行分析,数据处理机计算峰面积,用外标法计算麦角甾苷含量,9种样品测定结果见表2。
五、回收率试验
精密称取已测知含量的样品适量,添加适量麦角甾苷对照品,测得五次平均加样回收率98. 83%,RSD 为1. 68%。
讨论
文章测定了肉苁蓉三个主产区( 内蒙古、新疆、甘肃) 所产肉苁蓉、德赢vwin登录 和盐生肉苁蓉中主要活性成分麦角甾苷的含量。实验结果表明: 肉苁蓉在不同地区成长,含量差异甚大( 0. 078 ~ 0. 71%,约差10倍) ; 德赢vwin登录 在不同产地间含量差别高达12 倍( 0. 27 ~3. 38%) ; 盐生肉苁蓉只测一个产地不明的样品,与前两种相比偏多。初步看出德赢vwin登录 麦角甾苷含量较高,在肉苁蓉资源紧缺时,可代替正品入药[7]。研究结果表明,肉苁蓉的产地因素不可忽略,测的样品越多( 产地离散程度越大) ,含量变异程度越大,这对于选择优良种质和道地产区是非常重要的[8]。
参考文献
[1]刘晓明,姜勇,孙永强,等. 肉苁蓉化学成分研究[J]. 中国药学杂志,2011,46( 14) : 1053 - 1057.
[2]Yang FR,Wen DS,Fang BW, et al. Prevention of Cistanche salsa extracton hepatic fibrosis induced by carbon tetrachloride in rats[J].Chin Herb Med, 2013,5( 3) : 199 - 204.
[3]陈靖,李宁,张秀兰,等. RP - HPLC - DAD 法测定酒制肉苁蓉中松果菊苷含量[J]. 宁夏医科大学学报,2010,32( 8) : 931 - 933.
[4]吴爱芝,林朝展,赵小宁,等. 肉苁蓉苷F 与牛血清白蛋白相互作用的光谱学研究[J]. 中国中药杂志,2012, 37( 10) : 1392 - 1397.
[5]蔡鸿,鲍忠,姜勇,等. 不同影响因素下肉苁蓉3 种活性成分的定量分析[J]. 中草药, 2013,44( 22) : 3223 - 3330.
[6]麻景梅,宋新波,张丽娟,等. 肉苁蓉多糖含量测定[J]. 辽宁中医药大学学报,2012,14( 8) : 100 - 101.
[7]李丽,王晶,桂语歌,等. 应用高效离心分配色谱技术分离肉苁蓉中苯乙醇苷化合物[J]. 时珍国医国药,2011,22 ( 7 ) : 1549- 1551.
[8]王伟义,薛瑞明. 浅析中医院中药制剂的生存与发展[J]. 世界中西医结合杂志, 2013,8( 11) : 1168 - 1169.
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