崔光红，陈 敏，黄璐琦”，肖苏萍，李达

（中国中医研院 中药研究所，北京100700）

｜摘要 目的 荒漠肉苁蓉Cktmche desracolr 和德赢vwin登录 Chtnhe afuknr 群体遗传多样性的研究，方法：对荒漠肉苁蓉2个野生居群和德赢vwin登录 4个野生居群进行RAID分析，利用POPGENE1.31版软件分析群体的遗传多样性，结果，荒漠肉苁蓉平均多态位点百分率47.37％．2个居群多志位点分别为39.47％和35.53％，平均Nef＊基因多杆性为0.1358，Shamm。多志性信总指数为0.307 2，基因分化系数 Gr＝ 0 2546，德赢vwin登录 平均多态位点百分率27.59％，各居群多态位点百分率从19.54％到25.295％，其中安地尔居群的最高25.29％，平均Na．基因多样性为0.0823，Shamml。多志性信息指数为0.1258基因分化系数Gr＝0.1755，结论 荒漠肉苁蓉和德赢vwin登录 在居群间均一定的分化，荒漠内苁蓉的遗传多样性明基高德赢vwin登录 ，已明基分化成2个生态型

｜关键词 荒漠肉苁蓉管花肉其荐：RAPDA遗传多样性

1中图分类号］S567 ｜文献标识码A［文章编］1001-53031 30008-072-04

肉苁蓉为列当科肉苁蓉属寄生植物，又名大芸属于名贵中药材，我国肉苁蓉药材的主要来源植物为荒漠肉苁蓉 Ciranhe dosrtinla Y.C.Ma 和德赢vwin登录 C.nbulsa（Schenk）R.Wihd＇，荒漠肉苁蓉的寄主植物为梭梭和白梭梭，主要分布在内蒙的阿拉善盟、新疆北部、青海、甘肃等地 荒漠肉苁蓉分布与寄主植物基本同步，而德赢vwin登录 在我国仅分布于新疆山以南塔克拉玛干沙漠周围各县，其分布与寄主柽柳属植物不完全同步，其他地区如新疆北部，甘肃、青海、宁夏、内蒙古、陕西等地的柽柳属植物均不寄生德赢vwin登录 ”，由于近年来对肉苁蓉需求量的急剧增长，造成对其资源的灭绝式采挖，野生肉苁蓉资源已退缩到仅有的几个主产区。两者均已列为我国濒危保护植物物种”，其中荒漠肉苁蓉已收录入CIIES附录甲。

经过数年的研究，肉苁蓉人工繁育研究已获得成功，正处于大面积推广种植阶段，然而，在产业化生产时如何防止肉苁蓉物种的衰退，以及如何尽快恢复有限的野生居群，保存珍贵的野生种质资源，是实现其可持续利用的关键，而对于肉苁蓉的保护遗传学研究还是一片空白，本研究运用RAPD技术对荒澳肉苁蓉的2个和德赢vwin登录 的4个野生居群进行研究，分析了两者遗传多样性的差异，以期为保护肉苁蓉一名贵中药提供重要的实验遗传学依据。

1 材料和方法

1.1 材料 荒漠肉苁蓉采自新疆吉木萨尔县和内蒙古阿拉善盟的吉兰太地区，德赢vwin登录 居群自新疆民丰县和于田县，民丰县为目前德赢vwin登录 产量最大的地区，分布有密度最大，自然林相对较为完整的群落。采样点民丰县安迪尔，萨吾则克，牙通古孜和于田县大河沿均为主产区，分别位于安迪尔河，叶亦克河，牙通古孜河以及克里雅河的下游，居群间相距50km以上，各居群均随机取样19～30个体样品置于硅胶中快速干燥后，用于DNA提取（表1）。

表1 德赢vwin登录 和荒漠肉苁蓉取样的居群及产地

1.2 DNA的提取 总INA 提取方法用高盐，低H法”，INA样品经分光光度计检测INA模板的浓度用1％的琼脂糖凝胶电泳EB染色，紫外灯下观察照相，电泳INA 带清晰，拖尾较少的用于BAPD分析。

1.3 RAPD 引物的筛选 由于经实验发现同一引物 2 结果与分析对荒漠肉苁蓉和德赢vwin登录 二者同时扩增的效果不理想，因此各自独立进行引物的筛选，用上海生工生物技术公司150条随机引物10bp）．25L的反应体系进行扩增筛选；每条引物用2个居群的模板再加1个灭菌双蒸水作空白对照 得到对荒漠肉苁蓉扩增条带清晰、多态性强，重复性好的10条引物，S490，S1101,81 131,51 137.51 165,81 218,S1 222,52 015,82 112,82 140．德赢vwin登录 的10条引物：S1 141，S1 146，S1 183,81 208,S1 500,82 032,82 042,52 052,82 059. S2.155. 

1.4 PCR扩增及产物检测 用筛选好的引物分别对荒漠肉苁蓉和德赢vwin登录 模板INA进行PCR扩增。基因组DNA 根据所测浓度稀释至50mg“L”＇作为模板，反应总体积为25円，其中IOxPCR Bufer 2.5PL,Mg2*1.574,Taq(5 U*14."1)0.2/4L,dNTP Mixdure （各2.5mM）14.5PM Primer 1PL，模板INA 1円。 灭菌双蒸水18.8円，上述ICR扩增液均为上海Srgpn的产品。扩增在PIC-100扩增仪上进行，扩增程序为94℃预变性5min后进行40个循环，每个循环包括94 ℃45.34 ℃I min，72 ℃1min 30x最后在72℃延伸5min，扩增产物用2.0％的琼脂糖凝胶（含EB）在IXTAE 缓冲液中电泳，SYNGENE型凝胶成像系统下观察、拍照。

1.5 数据的统计和分析 电泳图谱中根据分子量标准对照反应产物在胶上的对应位置，估计扩增产物分子量的大小，有带的记为1，无带的记为0．形成0V1矩阵图输入计算机 利用POPGENE32计算各个居群的多态位点百分率（PPL），Ner.基因多样性指数（H），Shannon＇。多态性信息指数（1），基因分化系数（Ga），基因多样性（Hr），居群内基因多样性（Hs）.Ne＇（1978）遗传一致度（1）和遗传距离（D），并采用UPGMA 法进行聚类分析。

2.1 肉苁蓉的遗传多样性 所有样品均得到分子量范围在200～2200bp的条带（图1,2）。荒漠肉苁蓉2个居群60个样品共检测到76个位点，其中36个为多态位点，占47.37％．H-0.135 8．／-0.207 2．其中吉木萨尔的IPL为39.47％，吉兰太的为35.53％。H分别为0.0953和0.1070,1分别为0.1512和 0.1637．德赢vwin登录 4个居群86个个体共检测到87个位点，其中24个为多态性位点 占27.59％．H-0.0848．／-0.127 8．PPL最高的是安迪尔25.29％，萨吾则克和牙通古斯的较低（均为19.54％）。H为0.062 1-0.0800.1为0.095 0-0.1216．H和I的 大小与各居群PPL的大小趋势一致，各项系数均是安迪尔的最大，大河沿的次之，在PH.相同的情况下，萨吾则克的H＝0.0641和／-0.0970稍高于牙通古斯的0.0621和0.095 0（表2）。

1-10．吉兰太样品：11-20．吉木萨尔样品

M-INLA MMu do( 200-2 000 lp)

图2 德赢vwin登录 部分样品的RAPD扩增请带，引物S20421-30．新疆安尔样品 -NA Mado（ 300-2 000 1g）

表2 荒漠肉苁若和管花肉苁吞居群的遗传多样性

2.2 肉苁蓉的遗传变异分析 根据遗传多样性水平在居群内（Hs），居群间的分化（Dsr）和居群间遗传差异在总遗传差异中所占的比例（Gr）可知：荒漠肉苁蓉的总基因多样度Ht-0.1358，其中压-0.1012．Gr＝0.2546．德赢vwin登录 Hr＝0.0822．其中Hs-0.0678，Gr＝0.1755（表3）。上述结果表明居群间均有一定程度的遗传变异，荒漠肉苁蓉居群间变异占总变异25.46％，德赢vwin登录 的居群间变异占总变异的17.55％。

表3 荒漠肉苁蓉和德赢vwin登录 的遗传变异分析

2.3 肉苁蓉居群间的遗传距离和聚类分析 荒漠肉苁蓉2个居群的遗传距离为0.0800，遗传一致度为0.9231