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摘 要：目的 建立苁黄补肾胶囊的质量标准。方法 采用TLC 法鉴别处方中的肉苁蓉、熟地黄、菟丝子、五味子；用HPLC 法测定肉苁蓉中的松果菊苷。其中HPLC 法采用Kromasi-l C18柱（250mm×4∙6mm5μm）；柱温：30℃；流动相为甲醇-乙腈-1％醋酸溶液（13∶10∶77）；体积流量：1mL／min；检测波长为334nm。结果 TLC 鉴别色谱特征斑点明显；松果菊苷在0∙48～1∙92μg 存在良好的线性关系平均回收率为99∙1％RSD 为1∙52％。结论 所建立的TLC 和HPLC 法专属性强重复性好可用于苁黄补肾胶囊的质量控制。
关键词：苁黄补肾胶囊；肉苁蓉；熟地黄；菟丝子；五味子；松果菊苷；薄层色谱；高效液相色谱
苁黄补肾胶囊由肉苁蓉、熟地黄、菟丝子、五味子（酒蒸）制成丸剂标准收载于《国家药品监督管理局国家中成药标准汇编》内科肾系分册具有滋补肾阴、强筋壮骨的功效。为了提高该药质量的可控性和检验方法的专属性本研究建立了熟地黄、菟丝子、五味子的薄层色谱鉴别方法改变了肉苁蓉鉴别供试品溶液的制备方法。通过试验发现检测本品的毛蕊花糖苷存在比较大的干扰所以改为测定肉苁蓉另一活性成分松果菊苷并建立了HPLC 检测方法。
1 仪器和材料
紫外点样仪（上海安亭电子仪器厂）；SPD—10Avp 紫外检测仪（日本岛津公司）；P4000四元泵（美国热电公司）；AT —130色谱柱恒温箱（天津市恒奥科技发展有限公司）；HN1006超声清洗机（华南超声设备厂）；HM202电子分析天平（日本AND公司）；4K15C 高速冷冻离心机（德国Sigma 公司）。硅胶G（青岛海洋化工有限公司）；甜菜碱（批号894-200202）、5-羟甲基糠醛（批号111626-200402）、五味子乙素（批号765-200104）、山柰酚（批号0861-200002）、松果菊苷（批号111670-200502）对照品由中国药品生物制品检定所提供；苁黄补肾胶囊（450mg／粒批号070701、070702、070703）及缺肉苁蓉、熟地黄、菟丝子、五味子阴性样品为广州美晨药业有限公司提供；乙睛为色谱纯（迪马公司）其余试剂为分析纯。
2 薄层色谱鉴别
2∙1 肉苁蓉的薄层色谱鉴别：取本品内容物适量研细称取粉末0∙5g加水20mL超声10min 使溶散离心（4500r／min）5min取上清液再真空抽滤滤液过强酸性阳离子交换树脂（120cm×3cm）用20mL 水洗柱再用2mol／L 氨水溶液40mL 洗脱收集洗脱液蒸干用乙醇2mL 溶解静置取上清液作为供试品溶液。另取缺肉苁蓉的阴性样品0∙3g同法制成阴性供试液。取甜菜碱对照品适量加乙醇制成5mg／mL 的对照品溶液。吸取供试品溶液和阴性供试液各10μL对照品溶液5μL分别点样于同一硅胶G 薄层板上以甲醇-冰醋酸-水（18∶1∶4）为展开剂展开取出晾干喷以改良碘化铋钾试液。结果供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点而阴性样品色谱无对应斑点见图1。
2∙2 熟地黄的薄层色谱鉴别：取本品内容物适量研细称取粉末2∙0 g加水30 mL超声处理10min离心（4500r／min）5min取上清液用醋酸乙酯提取2次每次15mL合并提取液回收醋酸乙酯至干残渣加乙醇1mL 溶解作为供试品溶液。另取缺熟地黄的阴性样品1∙5g同法制成阴性供试液。取5-羟甲基糠醛对照品适量加乙醇制成0∙5mg／mL 对照品溶液。吸取供试品溶液和阴性供试液各10μL对照品溶液5μL分别点样于同一硅胶
GF254薄层板上以石油醚（60～90℃）-醋酸乙酯（1∶1）上层液为展开剂展开取出晾干置于254nm 紫外灯下检视。结果供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的暗斑点阴性样品色谱无对应暗斑点见图2。
2∙3 菟丝子的薄层色谱鉴别：取本品内容物适量
研细称取粉末2∙0g加无水乙醇10mL超声处理15min滤过滤液浓缩至干加无水乙醇1mL 溶解残渣作为供试品溶液。另取缺菟丝子的阴性样品1∙9g同法制成阴性供试液。取山柰酚对照品适量加乙醇制成0∙2mg／mL 对照品溶液。吸取供试品溶液和阴性供试液各10μL对照品溶液5μL分别点样于同一硅胶G 薄层板上以甲苯-醋酸乙酯-甲醇（5∶5∶3）为展开剂展开取出晾干喷以3％三氯化铝乙醇溶液置于365 nm 紫外灯下检视。结果供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点阴性样品色谱无对应斑点见图3。
2∙4 五味子的薄层色谱鉴别：取本品内容物适量研细称取粉末10∙0g加入氯仿20mL加热回流30min滤过滤液浓缩至约1mL作为供试品溶液。另取缺五味子的阴性样品20∙0g同法制成阴性供试液。取五味子乙素对照品适量加乙醇制成0∙4mg／mL 对照品溶液。吸取供试品溶液、阴性供试液和对照品溶液各10μL分别点样于同一硅胶GF254薄层板上以石油醚-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）上层液为展开剂展开取出晾干置于254nm 紫外灯下检视。结果供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的暗斑点阴性样品色谱无对应暗斑点见图4。
3 松果菊苷的HPLC 法测定
3∙1 色谱条件：Kromasi-l C18 柱（250 mm ×4∙6mm5μm）；柱温：30℃；流动相为甲醇-乙腈-1％醋酸溶液（13∶10∶77）；体积流量：1mL／min；检测波长为334nm。理论塔板数按松果菊苷峰计算应不低于4000。
3∙2 对照品溶液制备：精密称取松果菊苷对照品适量置棕色瓶中加流动相配成0∙16mg／mL 的对照品溶液。
3∙3 供试品溶液的制备：取本品内容物研细取0∙5g精密称定置50mL 棕色量瓶中精密加流动相20mL密塞摇匀称定质量浸泡0∙5h超声处理40min取出放冷再称定质量加流动相补足减失的质量摇匀离心取上清液用0∙45μm 微滤膜滤过滤液置棕色瓶中即得。取缺肉苁蓉的阴性样品0∙3g同法制成阴性供试品溶液。
3∙4 线性关系考察：精密吸取0∙16mg／mL 松果菊苷对照品溶液3、5、7、10、12μL 分别注入液相色谱仪测定峰面积值。以峰面积为横坐标进样质量为纵坐标计算得回归方程W ＝7∙97149×10—10 A—3∙3143×10—5r＝0∙99996。结果表明松果菊苷在0∙48～1∙92μg 有良好的线性关系。
3∙5 阴性对照试验：精密吸取松果菊苷对照品溶液、供试液和供试品溶液各5μL注入液相色谱仪结果在松果菊苷保留时间位置上阴性供试品溶液色谱没有明显干扰。见图5。
3∙6 精密度试验：精密吸取0∙16mg／mL 松果菊苷对照品溶液5μL 注入液相色谱仪重复6次记录峰面积结果其RSD 为1∙03％。
3∙7 稳定性试验：分别于0、2、4、6、8h 精密吸取苁黄补肾胶囊供试品溶液各5μL 注入液相色谱仪记录松果菊苷峰面积计算结果其RSD 为1∙41％
表明供试品溶液在8h 内稳定。
3∙8 重现性试验：对批号070701样品取样6份制备供试品溶液测定记录松果菊苷的质量分数计算得其RSD 为1∙01％。
3∙9 回收率试验：取同一批（批号070701含松果菊苷9∙2mg／g）样品按照0∙4、0∙25、0∙1g 分别精密称定3份共9份分别精密加入1∙10mg／mL 松果菊苷对照品溶液3、2、1mL制备供试品溶液测定计算结果平均回收率为99∙1％RSD 为1∙52％。
3∙10 样品测定：按照上述方法对3批供试品进行测定按外标法计算结果见表1。
4 讨论
甜菜碱的提取如果用原剂型标准中的方法供试品色谱中的斑点与对照品的斑点位置对应不上总是差一段距离具体原因有待进一步的研究。采用过强酸性阳离子树脂的提取法后两者斑点位置能很好的对应。
松果菊苷和毛蕊花糖苷均为肉苁蓉中活性成分原剂型标准检测毛蕊花糖苷但是相同方法检测
本品中毛蕊花糖苷时发现有比较大的干扰。试验了甲醇-乙腈-1％乙酸（13∶10∶7711∶9∶8015∶10∶75）、甲醇-0∙1％甲酸（28∶7235∶65）流动相以及Kromasi-l C18（250mm×4∙6mm5μm）和Ultimate-
C18（250mm×4∙6mm5μm）色谱柱结果均不能使干扰峰与毛蕊花糖苷的峰分开。而检测松果菊苷时没有发现明显干扰峰。所以选择松果菊苷作为测定成分。
松果菊苷对照品试过用甲醇溶解注入色谱仪后在其色谱峰前会有一个大包峰且峰面积与进样量不呈线性。改用流动相溶解后一切正常。松果菊苷和毛蕊花糖苷同为苯乙醇苷类化合物有文献报道毛蕊花糖苷在甲醇中不稳定而在微酸性溶液中能保持稳定［1］ 。试验结果表明松果菊苷也有相同性质。
有文献报道检测松果菊苷用波长330nm［2］ 但是经试验发现其最大吸收波长在334nm。并且使用334nm 检测本品时并没有发现明显干扰峰。
参考文献：
［1］ 陈发奎∙ 常用中草药有效成分含量测定［M ］∙北京：人民卫生出版社1997∙
［2］ 中国药典［S］∙一部∙2005∙
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