摘要:目的:观察苁蓉总苷对氢化可的松所致肾阳虚模型小鼠学习记忆障碍的影响。方法:连续灌胃给予苁蓉总苷30d , 于实验的第11 ～ 18 天灌胃氢化可的松(正常对照组除外)复制肾阳虚模型, 观察记录小鼠的一般状态及死亡情况, 使用跳台法观察小鼠的学习记忆功能。结果:(1)苁蓉总苷各剂量组少动、竖毛、少食、少饮、颤抖等阳虚症状均有明显改善, 动物死亡数明显减少。(2)苁蓉总苷各剂量组在给予氢化可的松后, 各动物的跳台潜伏期明显延长, 5min 内的错误次数明显减少。结论:苁蓉总苷能明显改善氢化可的松致阳虚小鼠的一般状况及学习记忆功能障碍, 并能明显降低小鼠的死亡率。

关键词:苁蓉总苷;肾阳虚模型;学习记忆

人口的老龄化已使寻找安全有效的防治老年痴呆症药物成为药物研究的热点。近年来, 中医学使用以补肾益髓为主、兼补心脾的方法治疗老年痴呆症取得了较大的进展。中药肉苁蓉始载于《神农本草经》, 具有补肾阳、益精血、润肠通便之功效, 现广泛用于治疗老年性痴呆、阳痿、习惯性便秘等病症[ 1 、2] 。研究表明, 其具有抗痴呆、抗氧化、抗缺氧、抗辐射、增强免疫功能等作用, 主要成分为苯乙醇苷类[ 3 ～ 6] 。苁蓉总苷从管花肉苁蓉Cistanche tubulosa(Schenk)Wight 的干燥肉质茎中提取精制而成, 含苯乙醇苷类90.7 %, 其中主要成分松果菊苷(echinacoside)44.3 %。本文研究了苁蓉总苷对氢化可的松致肾阳虚小鼠学习记忆障碍的影响, 为其开发成为促智和防治老年性痴呆症的新药提供依据。

1 　材料与方法

1.1 　动物

健康昆明种小白鼠120 只, 体重18g ～ 22g , 雌雄各半, 由中国药科大学动物中心提供, 合格证号为苏动(质)97004 号。

1.2 　药物与试剂

苁蓉总苷、管花肉苁蓉的提取物, 含苯乙醇总苷90.7 %、松果菊苷(echinacoside)44.3 %, 深褐色粉末,由北京大学中医药现代研究中心化学室提供, 批号为980601 。金匮肾气丸由河南宛西制药厂生产, 批号为980607 。氢化可的松注射液由扬州制药厂生产, 批号为980301 。前述各药用前以蒸馏水配成实验所需浓度。

1.3 　仪器

WX-Z 型小鼠跳台仪由中国医学科学院药物研究所生产。

1.4 　方法

1.4.1 　分组与给药　按体重将小鼠随机分为正常对照组(简称正常组)、模型对照组(简称模型组)、阳性对照组(简称阳性组, 金匮肾气丸1.5g kg)以及苁蓉总苷高剂量组(简称高剂量组, 400mg kg)、中剂量组(200mg kg)、低剂量组(100 mg kg), 每组20只, 雌雄各半。灌胃给药, 0.2ml 10g 体重, 正常组及模型组给予等体积的蒸馏水, 每日1 次, 连续给药30d 。于实验的第11 天起除正常组外, 各组灌胃氢化可的松1mg 只, 连续给予8d 。

1.4.2 　一般观察　实验期间每日观察记录各组小鼠的一般状态及死亡情况, 并于氢化可的松给药8d 后(实验第19 天)及氢化可的松停药10d 后(实验的第30 天)分别计算两个阶段各组小鼠的死亡率。

1.4.3 　跳台训练与测试[ 7] 　于实验的第19天, 将小鼠放入跳台仪的反应箱内适应环境3min ,然后立即通以36V 的交流电, 小鼠受电击后, 多数跳上跳台逃避电击, 小鼠从跳台跳下受到电击后又跳回跳台, 训练5min 。24h 后测试, 将小鼠放于跳台上, 记录小鼠第一次跳下跳台的时间(作为潜伏期)和5min 内的错误次数。于实验的第30 天再次进行测试, 记录各动物的潜伏期及5min 内的错误次数。

1.5 　统计处理

潜伏期及5min 内的错误次数结果均以( x ±s)表示, 用组间比较的t 检验对数据进行统计处理。对于动物的死亡率则选用简化直接概率法进行统计处理。

2 　结果

2.1 　对氢化可的松所致阳虚模型小鼠的一般状态及死亡率改善作用

模型组小鼠灌胃氢化可的松8d 后, 出现明显的少动、竖毛、少食、少饮、颤抖等阳虚症状, 且有部分动物死亡, 死亡率达42.1 %。阳性组(金匮肾气丸1500mg kg)及苁蓉总苷各剂量组前述症状均有明显改善, 动物死亡数减少, 与模型组比较有显著性差异, 说明苁蓉总苷及金匮肾气丸均能明显改善氢化可的松致阳虚小鼠的一般状况, 并能降低小鼠的死亡率(表1)。

2.2 　对氢化可的松所致阳虚模型小鼠学习记忆障碍的改善作用

模型组在给予氢化可的松8d 后, 与正常组比较跳台测试的潜伏期明显缩短、错误次数明显增加, 说明模型小鼠出现学习记忆功能障碍。阳性组及苁蓉总苷各剂量组在给予氢化可的松8d 后, 与模型组比较跳台测试的潜伏期明显延长, 错误次数明显减少,说明金匮肾气丸及苁蓉总苷均可对抗氢化可的松引起的小鼠学习记忆功能障碍(表2)。

模型组小鼠在停用氢化可的松10d 后, 跳台测试的潜伏期及错误次数均有明显的恢复, 与正常组小鼠无显著差异。阳性组及苁蓉总苷各剂量组在停用氢化可的松并继续给药10d 后, 与模型组比较跳台测试的潜伏期及错误次数仍有一定程度的改善,但无统计学差异。

　3 　讨论

学习记忆是脑的高级功能, 是构成智能的要素。学习记忆障碍是多种脑病所共有的症状, 发生率较高, 病因多种多样, 如儿童期的多动症、青年期的舞蹈病、脑叶萎缩症、神经衰弱以及老年期脑血管硬化、脑供血不足、痴呆等。现代医学研究证明, 学习记忆障碍与脑内神经突触传递障碍以及神经递质、脑物质和能量等代谢异常密切相关。中医则认为,智能障碍原因有虚实两类, 其中实证占少数, 多数属虚证, 特别是心、肾、脾气虚。临床及实验研究表明,

许多具有补益作用的中药及方剂均能一定程度地改善学习记忆功能障碍[ 8] 。根据学习记忆的生理生化基础, 常选用M-胆碱受体阻滞剂、中枢神经系统抑制剂、脑蛋白质合成抑制剂、致脑缺氧剂等化学药品造成各种记忆损伤模型[ 7] 。脑缺血、电休克、应激等方法也可以引起学习记忆损伤。此外, 中医对各种“虚证”动物模型, 如气虚、血虚、阴虚、阳虚等, 特别是脾虚和肾虚模型也显示出不同程度的学习记忆功能障碍, 更适用于补益药的研究[ 9] 。本实验中灌胃氢化可的松8d 的小鼠除出现典型的阳虚外观表现外, 还呈现出明显的学习记忆功能障碍, 进一步证实阳虚模型小鼠可以作为学习记忆功能障碍模型使用。

肉苁蓉是传统的补益壮阳药, 具有补肾填精及润肠作用, 《本草经疏》称其为补精血、滋肾之要药, 对肾虚所致倦怠、健忘、听力减退及遗尿等症状有较好的疗效。朱志明等对1990 ～ 1999 年有关杂志发表的治疗老年期痴呆的46 个复方的药物组成进行了分析, 发现苁蓉是常用药物之一[ 1] 。动物实验也证实, 苁蓉确有抗痴呆作用[ 10] 。本实验苁蓉总苷可显著改善氢化可的松所致肾阳虚模型小鼠的学习记忆功能障碍, 进一步证实苁蓉确有促智作用, 并表明苁蓉总苷可能是中药苁蓉补肾填精益智的活性成分。

参考文献:

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[ 4 ] 　商小英, 王晓雯, 王雪飞, 等.苁蓉总苷对60CoY 射线损伤小鼠免疫功能的防护作用[ J] .中草药, 2001 , 32(2):139-142 .

[ 5 ] 　邬利娅·伊明, 王晓雯, 早然木·尼亚孜.苁蓉总苷对小鼠脑缺氧的保护作用[ J] .新疆医科大学学报, 2003 , 26(6):561-562 .

[ 6 ] 　Muteliefu Gulinuer , Liu Mingju , Lu Jingf en .Effect of CistanosideCompounds on Oxidative Stress and Immunity[ J] .Journal of ChinesePharmaceutical Sciences , 2001 , 10(3):157-160 .

[ 7 ] 　张均田.现代药理实验方法学[ M] .北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社, 1998.1020-1021 , 1029-1031 .

[ 8 ] 　阎小青, 王会鑫, 王景洪.中药及其复方对实验动物学习记忆影响的研究进展[ J] .陕西中医学院学报, 2002 , 25(6):62-64 .

[ 9 ] 　陈奇生.中药药理研究方法学[ M] .北京:人民卫生出版社,1993 .738-740 .

[ 10] 　佐藤周, 他.苁蓉の药理学研究[ J] .药学杂志(日), 1985 , 105(12):1131-1135 .