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新疆肉苁蓉多糖清除活性氧自由基

发布日期:2021-10-21 15:10:00

王国卫  

(石河大学化学化工学 新疆石河子市北四 832000)

 

要  研究了肉苁蓉多糖体外抗氧化活性。 以抗坏血酸为对照 ,以类 Fento n反应产生羟自由基 ,巴胺自氧化反应产生超氧阴离子自由基 ,次氯酸钠与过氧化氢反应产生单线态氧二苯代苦味肼基自由基为实验模型 , 采用紫外 -可见分光光度法和化学发光分析法 ,首次测定新疆肉苁蓉多糖对超氧阴离子自由羟自由基 D PP H· 自由基 (二苯代苦味肼基自由基 )单线态氧的清除作用。结果表明: 新疆肉苁蓉多糖对上述自由基均有明显清除作用 , 且清除作用与多糖浓度呈正相关性。

关键词 肉苁蓉 ; 多糖; 自由基

中图分类号: O657. 32 文献标识码: A 文章编号: 1004-8138( 2011) 03-1545-04


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引言

机体在生命活动的氧化代谢过程中不断产生各种活性氧自由基 ( ROS) ,它是人体有氧代谢的氧化还原反应所产生的中间产物。研究发现过剩的自由基会攻击生命大分子物质及各种细胞器  ,成机体在分子水平细胞水平及组织器官水平的各种损伤,加速机体的衰老进程并诱发诸如血栓 糖尿病动脉粥样硬化肿瘤等疾病[ 1] 由于化学合成抗氧化剂对人体有毒性,寻找高效低毒能够清除氧自由基的天然抗氧化剂研究是医药食品化工等领域近年来研究的热点。

肉苁蓉[Cistanche deserticola( Y . C. Ma. ) ]多寄生于红柳白刺梭梭的根部,是我国名贵中药, 被誉为 沙漠人参[2] 肉苁蓉多糖为肉苁蓉的主要生物功能活性成分之一,但是对于肉苁蓉多糖是否有清除自由基的作用未见报道。本文采用光谱分析的方法  ,测定了肉苁蓉多糖对超氧阴离子自由基羟自由基 DPP H· 自由基单线态氧 4种自由基的清除作用,从而对其抗氧化活性做出评,为充分开发利用这一天然资源提供科学依据。

实验部分

2. 1 仪器与试剂

UV -2401紫外可见分光光度计 (日本岛津公司 ) ; Lumat LB9507超灵敏管式发光仪 (德国Berthold Tech nologies公司); R E-52CS型旋转蒸发仪 (上海亚荣生化仪器厂) ; HW -SY电子恒温水浴锅(金坛市新航仪厂 ) ; p HS-3C型酸度计 (上海精密科学仪器有限公司 ) ; DZF-6020真空干燥箱(上海一恒科技有限公司)

肉苁蓉: 购于奎屯药材总公司。鲁米诺 ( Luminol,美国 Sigma公司) ,多巴胺(中国药品生物制品检定所) , FeSO4 , EDTA,维生素 C, H2 O2 , NaClO, N a2 CO3 , Na HCO3 等均为国产分析纯试剂。实验用水为离子交换蒸馏水。

2. 2 实验方法

2. 2. 1 肉苁蓉多糖的提取方法

30g 肉苁蓉粉末,置于 500m L锥形瓶中,分别用石油醚 ( 6090)乙醚和体积分数 80% 乙醇热溶液( 30)浸泡 6h,残渣挥干溶剂。在滤渣中按固液比 110加水浸泡 24h,加热 30℃提取100min,提取结束后,离心获得上清液。上清液经减压浓缩后加入 3倍体积的 95% 乙醇沉淀, 4℃下静置 24h,离心后收集沉淀,真空干燥即可获得肉苁蓉粗多糖。称取 1. 00g 粗多糖,用水溶解并定容 50m L容量瓶中,待测备用。

2. 2. 2 肉苁蓉多糖对 O- · 自由基清除能力的试验

利用多巴胺自氧化产生超氧自由基( O- · )试验肉苁蓉多糖对 O- · 的清除能力[3] 干燥带刻

度试管依次加入 0. 1mm ol / L pH= 10. 12碳酸盐缓冲液 3. 0m L 3. 0m L不同浓度的多糖样品溶 0. 5m L,置于 30℃水浴中预热 5min ,加入在 30℃水浴中预热过的 2. 0mmol / L多巴胺 1. 0m L, 立即混匀计时, 30℃保温反应 5min, 立即用 2 10m ol / L HCl中止反应。 用缓冲液作参比, 221nm 处测吸光度 ( A ) ,空白组以 0. 5m L水代替样品( A空白 ) ,对照组以 0. 5m L抗坏血酸代替样,每一样品平行测 3,取其平均值。

O2 · 清除率(% ) = ( A空白 - A ) / A空白× 100%

2. 2. 3 肉苁蓉多糖对· O H自由基清除能力的试验

采用 EDTA-Fe( ) -亚甲基蓝-H2 O2  体系试验肉苁蓉多糖对羟自由基清除能力 原理为 EDT A-Fe( )与过氧化氢发生类 Feton反应产生· O H自由基,使亚甲基蓝溶液在 660nm特征吸收峰降低

在系列 10m L具塞试管中,加入 5mm oL / L FeSO4 溶液 1. 0m L 5m mo L / L EDTA溶液 1. 2m L

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