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王国卫 赵 芳②
(石河子大学化学化工学院 新疆石河子市北四路 832000)
摘 要 研究了肉苁蓉多糖体外抗氧化活性。 以抗坏血酸为对照 ,以类 Fento n反应产生羟自由基 ,多巴胺自氧化反应产生超氧阴离子自由基 ,次氯酸钠与过氧化氢反应产生单线态氧、二苯代苦味肼基自由基为实验模型 , 采用紫外 -可见分光光度法和化学发光分析法 ,首次测定新疆肉苁蓉多糖对超氧阴离子自由基、羟自由基、 D PP H· 自由基 (二苯代苦味肼基自由基 )、单线态氧的清除作用。结果表明: 新疆肉苁蓉多糖对上述自由基均有明显清除作用 , 且清除作用与多糖浓度呈正相关性。
关键词 肉苁蓉 ; 多糖; 自由基
中图分类号: O657. 32 文献标识码: A 文章编号: 1004-8138( 2011) 03-1545-04
机体在生命活动的氧化代谢过程中不断产生各种活性氧自由基 ( ROS) ,它是人体有氧代谢的氧化还原反应所产生的中间产物。研究发现过剩的自由基会攻击生命大分子物质及各种细胞器 ,造成机体在分子水平、细胞水平及组织器官水平的各种损伤,加速机体的衰老进程并诱发诸如血栓、 糖尿病、动脉粥样硬化、肿瘤等疾病[ 1]。 由于化学合成抗氧化剂对人体有毒性,寻找高效、低毒能够清除氧自由基的天然抗氧化剂研究是医药、食品、化工等领域近年来研究的热点。
肉苁蓉[Cistanche deserticola( Y . C. Ma. ) ]多寄生于红柳、白刺、梭梭的根部,是我国名贵中药, 被誉为 “沙漠人参” [2]。 肉苁蓉多糖为肉苁蓉的主要生物功能活性成分之一,但是对于肉苁蓉多糖是否有清除自由基的作用未见报道。本文采用光谱分析的方法 ,测定了肉苁蓉多糖对超氧阴离子自由基、羟自由基、 DPP H· 自由基、单线态氧 4种自由基的清除作用,从而对其抗氧化活性做出评价,为充分开发利用这一天然资源提供科学依据。
2. 1 仪器与试剂
UV -2401紫外可见分光光度计 (日本岛津公司 ) ; Lumat LB9507超灵敏管式发光仪 (德国Berthold Tech nologies公司); R E-52CS型旋转蒸发仪 (上海亚荣生化仪器厂) ; HW -SY电子恒温水浴锅(金坛市新航仪厂 ) ; p HS-3C型酸度计 (上海精密科学仪器有限公司 ) ; DZF-6020真空干燥箱(上海一恒科技有限公司)。
肉苁蓉: 购于奎屯药材总公司。鲁米诺 ( Luminol,美国 Sigma公司) ,多巴胺(中国药品生物制品检定所) , FeSO4 , EDTA,维生素 C, H2 O2 , NaClO, N a2 CO3 , Na HCO3 等均为国产分析纯试剂。实验用水为离子交换蒸馏水。
2. 2 实验方法
2. 2. 1 肉苁蓉多糖的提取方法
取 30g 肉苁蓉粉末,置于 500m L锥形瓶中,分别用石油醚 ( 60— 90℃ )、乙醚和体积分数 80% 乙醇热溶液( 30℃ )浸泡 6h,残渣挥干溶剂。在滤渣中按固液比 1∶ 10加水浸泡 24h,加热 30℃提取100min,提取结束后,离心获得上清液。上清液经减压浓缩后加入 3倍体积的 95% 乙醇沉淀, 4℃下静置 24h,离心后收集沉淀,真空干燥即可获得肉苁蓉粗多糖。称取 1. 00g 粗多糖,用水溶解并定容于 50m L容量瓶中,待测备用。
2. 2. 2 肉苁蓉多糖对 O- · 自由基清除能力的试验
利用多巴胺自氧化产生超氧自由基( O- · )试验肉苁蓉多糖对 O- · 的清除能力[3]。 干燥带刻
度试管依次加入 0. 1mm ol / L pH= 10. 12碳酸盐缓冲液 3. 0m L、水 3. 0m L、不同浓度的多糖样品溶液 0. 5m L,置于 30℃水浴中预热 5min后 ,加入在 30℃水浴中预热过的 2. 0mmol / L多巴胺 1. 0m L, 立即混匀计时, 30℃保温反应 5min, 立即用 2滴 10m ol / L HCl中止反应。 用缓冲液作参比, 在221nm 处测吸光度 ( A样 ) ,空白组以 0. 5m L水代替样品( A空白 ) ,对照组以 0. 5m L抗坏血酸代替样品,每一样品平行测 3次,取其平均值。
O2 · 清除率(% ) = ( A空白 - A样 ) / A空白× 100%
2. 2. 3 肉苁蓉多糖对· O H自由基清除能力的试验
采用 EDTA-Fe(Ⅱ ) -亚甲基蓝-H2 O2 体系试验肉苁蓉多糖对羟自由基清除能力。 原理为 EDT A-Fe(Ⅱ )与过氧化氢发生类 Feton反应产生· O H自由基,使亚甲基蓝溶液在 660nm特征吸收峰降低。
在系列 10m L具塞试管中,加入 5mm oL / L FeSO4 溶液 1. 0m L、 5m mo L / L EDTA溶液 1. 2m L、
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