胡余明, 胡怡秀, 刘秀英, 马征, 易传祝

【摘要】　目的　观察苁蓉总苷对正常小鼠学习记忆功能的影响。方法　使用水迷宫实验、跳台法、避暗法重复2 次检测正常小鼠学习记忆水平。结果　2 次实验结果显示苁蓉总苷可以明显降低水迷宫实验到达终点的时间, 2 min内到终点的动物数显著增多;可以使跳台的潜伏期明显延长, 5 min 内的错误次数明显减少。结论　苁蓉总苷可以提高正常小鼠的学习记忆功能。

【关键词】　苁蓉总苷;正常小鼠;学习记忆功能

　随着我国人口的老龄化以及脑血管疾病的增加,老年痴呆症的发病率呈不断上升的趋势。再加上现代社会激烈的竞争, 每个人压力都很大, 导致记忆减退、疲劳综合征的发病率快速增长。如何预防老年痴呆症, 如何防止记忆力减退成为各国科学家们关心的课题。肉苁蓉提取物(苁蓉总苷)近年来逐渐成为人们关注的重点, 肉苁蓉始载于《神农本草经》, 味甘、咸, 性温, 具有补肾阳、益精血、润肠通便之功效,现广泛用于治疗老年性痴呆、阳痿、习惯性便秘等病症〔1 , 2〕。现代药理学表明, 肉苁蓉具有抗衰老、增强记忆、提高免疫力等多种功能, 苁蓉总苷是从德赢vwin登录 的干燥肉质茎中提取精制而成〔3-6〕。本研究观察了苁蓉总苷对正常小鼠学习记忆功能的影响, 为其开发成为防止老年痴呆症的新资源提供依据。

1 　材料和方法

1.1 　动物

南华大学实验动物学部〔实验动物生产许可证号为SCXK (湘)2004-0009〕提供的雄性清洁级昆明种小鼠2 批, 每批120 只, 体重18 ～ 23 g 。

1.2 　样品

由某药业有限公司提供, 棕色粉末。作者单位:湖南省疾病预防控制中心, 长沙　410005

1.3 　实验环境条件

环境温度21 ～ 24 ℃, 湿度56 %～ 58 %。

1.4 　剂量选择及受试物给予方式

每批小鼠分为3 大组(Ⅰ 、Ⅱ 、Ⅲ组), 每大组40 只动物, Ⅰ 组进行避暗实验, Ⅱ组进行水迷宫实验, Ⅲ组进行跳台实验。每大组按动物体重排序后随机分为对照组、低、中、高剂量组, 每组10 只小鼠。据人体口服推荐量, 设苁蓉总苷低、中、高剂量分别为0.113 g/kg bw 、0.225 g/kg bw 、0.675 g/kg bw (分别相当于人体推荐剂量的5 、10 、30 倍)。低、中、高剂量受试液配制时分别取样品1.13 g 、2.25 g 、6.75 g 加蒸馏水至200 ml , 按0.2 ml/10 g bw 体积给小鼠灌胃, 对照组灌胃予以等体积蒸馏水, 每天1 次, 连续30 d 。

1.5 　主要仪器

水迷宫、避暗仪、跳台仪。

1.6 　实验方法

1.6.1 　跳台实验:小鼠按1.4 给予受试物30 d 后进行跳台实验:将动物放入反应箱内适应3 min , 立即通以36 V 交流电刺激小鼠。然后将小鼠放在绝缘平台上, 记录各鼠第一次跳下平台的潜伏期、5 min 内每鼠受到电击的次数(跳下平台的错误次数)和各组跳下平台的动物数, 以此作为学习成绩。24 h 后重复测验, 记录第一次跳下平台的潜伏期、3 min 内跳下

平台的错误次数和各组跳下平台的动物数。停止训练

5 d 后进行消退实验。

1.6.2 　避暗实验:小鼠按1.4 给予受试物30 d 后进行避暗实验:记录每鼠从放入明室至进入暗室遭电击所需的时间(潜伏期)、5 min 内进入暗室的错误次数和各组进入暗室的动物数。24 h 后同一时间, 再进行测验, 记录每鼠进入暗室的潜伏期、5 min 内进入暗室的错误次数和各组进入暗室的动物数。停止训练

5 d 后进行消退实验。

1.6.3 　水迷宫实验:小鼠按1.4 项给予受试物30 d后进行水迷宫实验, 训练期间继续给予受试物。每天训练1 次, 连续5 d 。第一天训练前将小鼠放在梯子附近, 使其自动爬上3 次, 以后每次训练前将小鼠放在梯子附近, 使其自动爬上1 次。第一天训练时,用挡板在A 处挡死, 从A 点开始进行训练;第二天从B 处开始, 此路程训练3 d , 至80 % 的动物在2 min 内到达终点;第5 天从起点开始训练;最后以5 d 的总学习成绩进行评价(即各组5 d 到达终点的总时间、总错误次数和各组2 min 内到达终点的动物数)。停止训练5 d 后进行消退实验。

1.7 　实验数据统计

水迷宫实验中到达终点的时间、跳台实验和避暗实验中的潜伏期、错误次数属计量资料, 可用方差分析, 但需先进行方差齐性检验, 若方差齐, 采用单因素方差分析进行总体比较, 发现差异再用Dunnett 法进行多个剂量组与一个对照组均数间的两两比较。若方差不齐则对原始数据进行适当的变量转换, 满足方差齐性检验后, 用转换后的数据进行统计;若变量转换后仍未达到方差齐的目的, 改用秩和检验进行统计, 发现总体比较有差异, 则采用不要求方差齐性的Tamhane′s T2 检验进行两两比较。到达终点的动物数(百分率)为计数资料, 用χ2 检验, 四格表总例数小于40 , 或总例数等于或大于40 但出现理论数等于或小于1 时, 改用确切概率法。

2 　结　果

2.1 　苁蓉总苷对小鼠水迷宫实验的影响见表1 。水迷宫实验中, 各剂量组小鼠到达终点的时间、到达终点前的错误次数方差齐, 采用单因素方差分析, 结果显示两者总体比较差异有统计学意义(P <0.05)。进一步用Dunnett 法进行多个剂量组与一个对照组均数间的两两比较, 发现高剂量组小鼠达终点时间较对照组显著缩短(P <0.05), 到达终点前的错误次数较对照组显著减少(P <0.05)。采用χ2检验比较各剂量组和对照组动物2 min 内到达终点的动物数, 结果显示, 高剂量组小鼠2 min 内到终点的动物数显著多于对照组(P <0.05)。

2.2 　苁蓉总苷对小鼠避暗实验记忆的影响见表2 。避暗实验中, 训练潜伏期、测验潜伏期、训练错误次数、测验错误次数均方差齐, 采用单因素方差分析, 结果显示四者总体比较差异均无统计学意义(P >0.05)。采用确切概率法比较各剂量组和对照组动物测验错误反应率, 结果显示各剂量组与对照组比较差异无统计学意义(P >0.05)。

2.3 　苁蓉总苷对小鼠跳台实验的影响见表3 。跳台实验中训练潜伏期方差不齐, 采用秩和检验, 各组之间总体比较差异无统计学意义(P >0.05)。测验潜伏期、训练错误次数、测验错误次数方差齐, 采用单因素方差分析, 结果显示训练错误次数各组之间总体比较差异无统计学意义(P >0.05)。测验潜伏期、测验错误次数各组之间总体比较差异有统计学意义(P <0.05), 进一步用Dunnett 法进行多个剂量组与一个对照组均数间的两两比较, 发现高剂量组小鼠测验潜伏期较对照组显著延长(P <0.05), 中、高剂量组小鼠测验错误次数较对照组显著减少(P <0.05 或P <0.01)。采用确切概率法比较各剂量组和对照组动物测验错误反应率,结果显示各剂量组与对照组比较差异无统计学意义

(P >0.05)。

2.4 　苁蓉总苷对小鼠水迷宫消退实验的影响见表4 。水迷宫消退实验中, 各组动物到达终点时间、到达终点前的错误次数方差齐, 采用单因素方差分析, 结果显示, 两项指标总体比较差异无统计学意义(P >0.05)。χ2检验确切概率法显示各剂量组小鼠2 min 内到达终点的动物数与对照组比较, 差异无统计学意义(P >0.05)。

2.5 　苁蓉总苷对小鼠避暗消退实验的影响见表5 。避暗消退实验中, 小鼠进入暗室的潜伏期、进入暗室的错误次数方差齐, 单因素方差分析显示二者总体比较差异无统计学意义(P >0.05)。确切概率法χ2 检验显示, 各剂量

组小鼠进入暗室的动物数与对照组比较差异无统计学意义(P >0.05)。

2.6 　苁蓉总苷对小鼠跳台消退实验的影响见表6 。跳台消退实验中, 小鼠跳下平台的潜伏期和错误次数均方差不齐, 采用秩和检验, 结果显示两项指标总体比较差异无统计学意义(P >0.05),采用确切概率法比较各剂量组和对照组动物错误反应率, 结果显示各剂量组与对照组比较差异无统计学意义(P >0.05)。

3 　讨　论

学习记忆是脑的高级功能, 是构成智能的要素。可分为获得、巩固及再现3 个基本神经过程。检测学习记忆功能的实验方法有多种, 但水迷宫法、跳台法及避暗法是运用得比较多且经典的检测学习记忆功能的方法〔7〕。从我们的实验结果证实苁蓉总苷对正常小鼠的学习记忆功能有显著促进作用, 苁蓉总苷对学习记忆活动中的记忆获得与记忆巩固具有明显的改善作用, 对记忆再现有一定的作用。由此我们初步看出苁蓉总苷对学习记忆整个神经活动中的获得、巩固及再现3 个基本神经活动均有保护作用。传统医学认为, 肾与脑紧密相关。头者精明之府, 脑为髓之海, 肾藏精生髓。若肾亏髓枯, 脑失所养, 则出现记忆、智能、精神等方面的障碍, 进而影响全身的生理功能。肉苁蓉是传统的补益壮阳药, 具有补肾填精的作用, 《本草经疏》称其为补精血、滋肾之要药, 对肾虚所倦怠、健忘、听力减退等症状有较好的疗效。从现代医学角度上来讲苁蓉总苷可能是由于促进了中枢胆碱能神经系统的传递功能, 而中枢胆碱能神经系统与学习记忆关系密切, 中枢胆碱能通路是构成学习记忆的主要通路〔7, 8〕。苁蓉总苷可能通过调节与记忆有关的递质系统, 增加其递质合成酶的活性, 达到改善学习记忆功能的作用。总之, 学习记忆的改善过程相当复杂, 涉及多系统、多环节。肉苁蓉是一种多年生寄生草本植物, 而苁蓉总苷是肉苁蓉的提取物, 源于自然, 多效、安全、无毒副作用, 苁蓉总苷改善学习记忆功能是通过多系统多环节多途径, 具有独特的优势。作者通过对苁蓉总苷的毒性(另文发表)和学习记忆功能的研究, 为开发和利用肉苁蓉作为改善学习记忆功能的资源提供了实验依据。

参　考　文　献

〔1〕　朱志明, 周永生, 欧阳剑虹.治疗老年期痴呆46 个复方的药物分析.湖南中医杂志, 2001 , 1 :60-61.

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〔3〕　Sato T , Kozma S , Kobayashi K, et al.Pharmacological studies on Ci stanchis Herba.Ⅰ.Effects of the constituents of Cistanchis Herba on sexand learning behavior in chronic stressed Mice (1).Yakugaku Zasshi ,1985 , 105 :1131-1144.

〔4〕　雷丽, 宋志宏, 屠鹏飞.肉苁蓉属植物的化学成分研究进展.中草药, 2003 , 34 :473-476.

〔5〕　梁明华, 孙沛毅, 曹毅.苁蓉总苷对兔失血性休克/ 再灌注损伤时脂质过氧化的影响.中国微循环, 2000 , 4 :230-231.

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〔7〕　王传社, 李寅增, 宋志宏, 等.苁蓉总苷对乙醇诱导小鼠学习记忆再现缺失的影响.中国科技信息, 2005 , 17 :240-243.

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