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高建德!,刘雄”,魏舒畅!,金辉2,范凌云2
(甘肃中医学院,甘肃,兰州730000)
摘要目的;研究纤维素酶提取肉苁蓉中苯乙醇苷的工艺。方法:以肉苁蓉中苯乙醇苷作为评价指标,分别考察体系酶用量、酶解温度、料液比,酶解时间,并采用正交优化最佳工艺。结果:纤维素酶解肉苁蓉中苯乙醇苷最佳工艺参数为:纤维素酶0.1%、酶解温度为55℃,酶解时间为2.5h;结论:本方法简便有效,肉苁蓉有效成分提取率高,为对肉苁蓉深入研究奠定基础。
关键词 内苁蓉 苯乙酵苷 纤维素酶 提取工艺
肉苁蓉 Herba Cistanches 为肉苁蓉属植物干燥带鳞叶的肉质茎,始载于《神农本草经》,列为上品,具有补肾阳、益精血、润肠通便之功效,主治男子阳痿、女子不孕等证,有“沙漠人参”之称,列为国家二级保护植物,并收入《国际野生植物保护名录》四。其有效成分主要为苷类化合物、黄酮、多糖等,而苷中苯乙醇苷类成分,为目前研究的热点,主要作用是调节内分泌,促进代谢和强壮作用以及清除自由基和抗衰老作用。纤维素是植物细胞壁的主要成分,也是胞内有效成分溶出的主要屏障,纤维素酶可以破坏细胞壁,有利于有效成分的溶出[21,本文首次采取纤维素酶法结合水煎提取肉苁蓉中苯乙醇苷,并采用正交实验优化了其酶解提取条件,为肉苁蓉药材资源及工业化生产提供了初步的理论依据。
1 材料与仪器
肉苁蓉购于甘肃省安宁医药公司,经甘肃中医学院鉴定教研室杨扶德老师鉴定为列当科植物肉苁蓉Cistanche deserticola Y.C.Ma的干燥带鳞叶的肉质茎。(略)
2 实验方法与结果
2.1 方法(略)
2.2 提取条件单因素考察
2.2.1 不同料液比的影响 准确称取肉苁蓉药材10g,取20mg纤维素酶,于45℃条件下酶解2h,设置5个不同的料液比分别为1:6、1:8、1:10、1:12、1:15,酶解后迅速加热至90℃灭酶活10min,其他工艺同2.1项下。
随着料液比的增加,苯乙醇苷得率也相应增加,料液比为1:8之后,增幅相对不大,料液比为1:10、1:12时苯乙醇苷得率影响甚小。
2.2.2不同温度的影响 准确称取肉苁蓉药材10g,取20mg纤维素酶,加8倍量水,分别在 40、
45、50、55、60℃下处理2h,酶解后迅速加热至90℃灭酶活10min,其他工艺同2.1项下。苯乙醇苷测定按2.3.4项下,结果见图2。
酶解温度对肉苁蓉中苯乙醇苷含量的影响较大,从40℃开始,随着温度的升高,肉苁蓉苯乙醇苷显著增加,当温度为55℃时,苯乙醇苷的得率达到最大值。当温度超过55℃以后,苯乙醇苷得率开始下降,表明肉苁蓉中苯乙醇苷的最佳酶解温度为55℃。
2.4.3 不同时间的影响 准确称取肉苁蓉药材10g,取20mg纤维素酶,加8倍量水,于55℃条件下酶解,设置5个酶处理时间分别为1.0h、1.5h、2.0h、2.5h、3.0h,酶解后迅速加热至90℃灭酶活10min,其他工艺同2.1项下。苯乙醇苷测定按2.3.4项下。
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