摘　要　目的:研究大孔树脂纯化德赢vwin登录 中松果菊苷的工艺条件。方法:以松果菊苷为指标, 对大孔树脂进行了筛选, 并确定了洗脱条件及树脂的最大吸附量。结果:采用HPD100 大孔树脂, 用6BV的50%乙醇洗脱, 可得到松果菊苷平均含量为32.6%的德赢vwin登录 提取物, 平均收率为91.4%。结论:HPD100大孔树脂适合德赢vwin登录 中松果菊苷的纯化工艺。

主题词　德赢vwin登录 /分析　松果菊苷/分离和提纯　中药制药工艺

　德赢vwin登录 Cistanchetubulosa(Schrenk)Wight主产于新疆南疆地区, 2005年被中国药典收载, 要求松果菊苷含量不小于1.0%, 远远高于另一品种肉苁蓉CistanchedesetticolaY.C.Ma的要求[ 1] 。国内外对肉苁蓉活性成份的研究表明,主要含苯乙醇苷类成份、环烯醚萜苷类、木脂素及其苷类、多元醇、寡糖、多糖类等成份, 其中松果菊苷为主要有效成份[ 2] 。本文研究利用大孔吸附树脂纯化德赢vwin登录 中松果菊苷的工艺, 取得了良好的效果, 可为工业化生产提供一定的理论依据。

1　实验材料

德赢vwin登录 :由新疆和田帝辰沙生物开发有限公司提供;德赢vwin登录 提取物:自制;松果菊苷对照品(批号:111670-200502):购自中国药品生物制品检定所。LC-2010CHT型高效液相色谱仪:日本岛津公司;AE-140型电子天平:瑞士梅特勒-托利多仪器责任有限公司。甲醇为色谱纯, 水为超纯水, 其它试剂均为分析纯。HPD100 树脂:购自沧州宝恩化工有限公司;D101 树脂:购自蚌埠天星树脂有限公司;AB-8树脂:购自天津海光化工有限公司。

2　方法与结果

2.1　树脂的预处理　树脂的处理方法参照文献[ 3] 。

2.2　松果菊苷提取液的制备　称取德赢vwin登录 粗粉, 用10倍量70%乙醇提取两次, 每次1小时, 即得。

2.3　树脂的筛选　选取3种弱极性树脂AB-8、HPD100、D101进行吸附和解析筛选实验。称取处理好的AB-8、HPD100、D101 3种树脂各1g, 置于锥形瓶中, 分别加入已测浓度为1.73mg/ml的松果菊苷提取溶液16ml, 室温下振荡吸附24小时, 过滤, 滤液用蒸馏水定容至25ml, 测定松果菊苷含量并计算树脂的吸附率。将上述吸附后的树脂置锥形瓶中, 加入95%的乙醇15ml, 在室温下振荡解吸24小时, 过滤, 滤液用95%的乙醇定容至25ml, 取定容后的液体测定松果菊苷含量并计算树脂的解吸率。松果菊苷的测定采用HPLC法[ 1] , 结果见表1。

　吸附和解吸结果表明:吸附率:HPD 100 >AB-8 >D101;解吸率:HPD100 >AB-8 >D101。根据吸附率和解吸率, 选择HPD100大孔树脂。

2.4　HPD100大孔树脂最大动态吸附量的检测　称取处理好的HPD 100型大孔树脂10g, 装入层析柱中, 径高比1∶10(1BV=10ml), 取适量德赢vwin登录 提取物配制成浓度为24.1mg/ml的上样液150ml, 控制流速1.5BV/h, 每隔0.5BV收集1次流出液, 利用HPLC测定松果菊苷的峰面积, 以流出液份数为横坐标, 松果菊苷峰面积为纵坐标绘制动态吸附曲线, 结果见图1。

由上图可知, 10gHPD100 大孔树脂吸附此浓度的肉苁蓉提取液, 从2.5BV起可检测到松果菊苷, 7.5BV达到饱和吸附, 8BV起几乎完全开始泄漏。以7.5BV计算, 即10gHPD-100树脂最大动态吸附约1.81g肉苁蓉提取物。2.5　HPD 100大孔树脂的梯度洗脱　称取处理好的HPD100大孔型树脂10g装入层析柱中, 径高比1∶10(1BV=10ml), 取适量松果菊苷提取液上样, 依次用3BV的水和6BV的10%、20%、30%、40%、50%、60%的乙醇梯度洗脱,将相同溶剂的洗脱液合并, 浓缩、干燥, 测定, 结果见表2。由表2 可知:依次洗脱中, 水洗液松果菊苷含量较少,20%乙醇洗脱液中松果菊苷含量最高, 其次为30%乙醇洗脱液, 40%乙醇洗脱液中松果菊苷含量明显减少, 50%乙醇和60%乙醇洗脱液中未检测到松果菊苷。

2.6　洗脱剂的选择　称取处理好的10gHPD 100大孔树脂4份, 分别装入4根层析柱中, 径高比1∶10(1BV=10ml), 分别取4份1g肉苁蓉提取物(松果菊苷含量10.37%)配制成一定浓度的上样液, 上样, 四根柱子均先用3BV的水洗, 然

后再各用6BV的30%、40%、50%、60%的醇洗, 收集醇洗脱液, 浓缩、干燥, 测定。结果见表3。

　由表3可知:50%的乙醇洗脱液中松果菊苷含量相对较高, 收率可达到91.5%, 因此, 选50%醇作为洗脱剂。

2.7　大孔吸附树脂纯化德赢vwin登录 中松果菊苷　由上可知,大孔吸附树脂纯化德赢vwin登录 中松果菊苷最佳工艺条件为:10gHPD100树脂上样最大量为1.81g德赢vwin登录 提取物(松果菊苷含量10.37%), 依次用3BV的水、6BV的50%乙醇溶液进行洗脱, 收集50%乙醇的洗脱液, 浓缩、干燥。采用该方法制备德赢vwin登录 中松果菊苷纯化物3批, 结果见表4。

3　结论　在对树脂的选择过程中, 做过HPD450、HPD500、HPD600 3种极性大孔树脂对松果菊苷的吸附实验, 结果发现极性大孔树脂对松果菊苷的吸附不理想, 而弱极性树脂的吸附较理想, 因此本实验采用3种弱极性的树脂AB-8、HPD100、D101进行实验。通过静态吸附和解吸实验比较, 3 种大孔树脂中HPD100大孔树脂对德赢vwin登录 中松果菊苷吸附量最大, 解吸效果好。HPD100大孔树脂纯化德赢vwin登录 的工艺为:10gHPD100树脂最大可吸附1.81g德赢vwin登录 提取物, 以3BV水洗和6BV的50%乙醇洗脱, 吸附和洗脱流速均控制在1.5BV/h, 收集50%乙醇洗脱液, 浓缩干燥。干燥物松果菊苷平均含量可达32.6%, 平均收率为91.4%。德赢vwin登录 经过提取后, 松果菊苷含量为8% ～ 10%,经过HPD100大孔树脂纯化含量显著提高。HPD100树脂纯化德赢vwin登录 中松果菊苷在技术上具有可行性, 具有潜在的工业应用价值。

　　参考文献

[ 1] 　国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部.北京:化学工业出版社, 2005:90.

[ 2] 　陈绍淑, 何生虎, 曹晓真, 等.肉苁蓉药理及化学成分的研究进展.甘肃畜牧兽医, 2005, 35(3):41.

[ 3] 　韩丽, 谢秀琼, 周淑芳, 等.实用中药制剂新技术.化学工业出版社, 2002:171.