摘要：目的 筛选富集肉苁蓉中苯乙醇苷的最佳树脂和工艺条件，使分离纯化工艺达到最优化。方法 选择7 种大孔吸附树脂(AB-8、DM301、DM130、D1400、DA-201、HPD-100、D-101-I)，通过树脂对苯乙醇苷的静态吸附和解析能力，筛选出最佳树脂，再通过树脂的静态特性和动态特性的筛选优化工艺。结果 DA-201 的吸附解析最佳条件为：上样流速为1.5 mL·min1，洗脱剂为90%的乙醇。按最佳工艺苯乙醇苷的纯度由25.1%上升为51.2%。结论 该法简便、可行，为肉苁蓉中苯乙醇苷的纯化提供了参考。

关键词：肉苁蓉；苯乙醇苷；大孔吸附树脂；纯化

肉苁蓉为列当科肉苁蓉Cistanche deserticolaY.C. Ma 或德赢vwin登录 Cistanche tubulosa(Schrenk)Wight 植物的干燥带鳞叶的肉质茎[1]，是常用中药之一，具有补肾壮阳、填精补髓、养血润燥、悦色延年等功效，主治男子阳痿、女子不孕、带下、血崩、腰膝冷痛、血枯便秘等症。肉苁蓉中含有多种活性成分，如苯乙醇苷类、环稀醚萜类、多糖、木质素、生物碱等[2]。苯乙醇苷为肉苁蓉的主要活性成分，现代药理研究表明苯乙醇苷具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、免疫调节、增强记忆和性功能等作用[3]。大孔吸附树脂为一种有机高聚吸附剂，具有选择性吸附有机化合物的能力，但其吸附性能及解吸、纯化条件参数因化合物的理化性质的不同而不同。本实验以7 种大孔吸附树脂对肉苁蓉中苯乙醇苷吸附、解析，筛选出DA-201 大孔吸附树脂，与任璐等[4]所选的AB-8 大孔吸附树脂在相同实验条件下比较，对肉苁蓉中苯乙醇苷的富集较为理想，它吸附量大，且易解吸。同时本实验又考察确定了吸附、解析最佳的DA-201 大孔吸附树脂富集苯乙醇苷的工艺条件与参数，以期确定更合理的肉苁蓉苯乙醇苷分离纯化方法。

1 仪器与试药

BS 224 S 型电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；DJ-02 型中药粉碎机(上海淀久中药机械制造有限公司)；UV9100 型紫外-可见分光光度计(北京瑞利分析仪器厂)；RE-52A 型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；DG/20-002 型台式干燥箱(中国重庆实验设备厂)；AL204 型电子分析天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。松果菊苷对照品(中国药品生物检验所，批号：0781-20031，纯度≥99.5%)；肉从蓉采自于新疆，经甘肃中医学院药学系李成义教授鉴定为德赢vwin登录 Cistanche tubulosa(Schenk)Wight 的干燥带鳞叶的肉质茎；7 种大孔吸附树脂(AB-8、DM301、DM130、D1400、DA-201、HPD-100、D-101-I)均购于天津市海光化工有限公司；其余试剂均为分

析纯。

2 方法与结果

2.1 苯乙醇苷测定方法的建立

2.1.1 对照品溶液的制备 精密称定干燥至恒重的松果菊苷对照品5 mg，置于25 mL 量瓶中，加入甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。

2.1.2 上样液的制备 精确称取肉苁蓉粉末过80目筛30 g，10 倍量75%乙醇回流提取3 次，每次3 h，合并提取液，减压浓缩，浸膏用水定容至50mL，用同体积的乙酸乙酯和水饱和的正丁醇依次萃取，直至萃取完全为止，合并正丁醇萃取液，减压浓缩至干，用水溶解，过滤，将溶液定容至50 mL 量瓶中，摇匀，备用[5]。

2.1.3 测定波长选择 精密量取“2.1.1”项下对照品溶液l mL，加入5%亚硝酸钠溶液l mL，摇匀，静置6 min；加入10%硝酸铝溶液l mL，摇匀，静置6 min；加入10%氢氧化钠溶液l0 mL，用水定容至25 mL，摇匀，静置18 min，作为对照品溶液。以“2.1.2”上样液同法配置，作为供试品溶液。以不加对照品和供试品溶液的平行样为空白同法配制空白溶液。在紫外分光光度计上， 波长200~800 nm范围对上述3 种溶液进行全波长扫描，对照品和供试品溶液在507 nm 处均有最大吸收峰，所以确定507 nm 为吸收波长，与文献[6]确定的最大吸收波长基本一致。

2.1.4 标准曲线的制备 准确吸取“2.1.1”项下对照品溶液5 mL，以水定容至25 mL，分别吸取以上溶液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL，以“2.1.3”项下方法显色、定容，在507 nm 处测定吸光度值。以浓度对吸光度作回归曲线，得回归方程为：Y=0.042 5X0.000 1(r=0.999 9)，线性范围为1.6~9.6 μg·mL1。

2.2 大孔吸附树脂的筛选

2.2.1 树脂的预处理 根据树脂附带的说明书，按醇洗-水洗-酸洗-水洗-碱洗-水洗的步骤处理树脂：用95%乙醇浸泡各型号树脂24 h，充分溶胀后，80%乙醇洗涤，用纱布过滤，洗至加水后水液澄清为止；再用水洗涤数次，随后对树脂进行酸碱处理，先用5%的HCl 溶液浸泡3 h，过滤，水洗至滤液中性，接着用2%的NaOH 溶液浸泡3 h，过滤，再用水洗至中性。

2.2.2 树脂静态吸附量考察 称取“2.2.1”预处理好的树脂20 g，加入“2.1.2”上样液400 mL，静置24 h，期间3 h 振摇一次，过滤，按“2.1.3”项下方法制备溶液，按“2.1.4”项下方法测定，计算各种树脂对苯乙醇苷单位吸附量qe=(C0-Ce)V/W 式中qe：吸附量(mg·g1)；C0：吸附前溶液中苯乙醇苷浓度(mg·mL1)；V：溶液体积(mL)；Ce：吸附后溶液中苯乙醇苷浓度(mg·mL1)；W：树脂质量(g)。结果见表1。

2.2.3 树脂静态解吸量考察 根据工业应用要求，好的吸附树脂不仅应该具备良好的吸附性能，同样需要具备良好的解析性能，即可逆性。由于树脂极性、孔径、比表面积不同，对苯乙醇苷吸附作用力强弱的不同，解吸难易程度也有区别。将“2.2.2”中已吸附饱和的树脂中加入100 mL 95%的乙醇，静置24 h，期间2 h 振摇一次，每次5 min，使苯乙醇苷充分解析，过滤，滤液按“2.1.3”项下方法制备溶液，按“2.1.4”项下方法测定，计算各树脂对苯乙醇苷计算解吸率D%=Qd/Qe=Cd·100/(qe·W)。式中Qd-解吸量(mg )；Qe-吸附量(mg)；Cd-解吸液浓度(mg·mL1) ； qe- 单位树脂的吸附量(mg·mL1)；W-树脂质量(g)。结果见表2。

从表1 和表2 可知DA-201 不仅吸附量较大，而且具有较高的解吸率。因此选择DA-201 树脂进一步考察其对苯乙醇苷的吸附分离特性。

2.3 DA-201 树脂吸附动力学考察

2.3.1 静态吸附动力学 称取“2.2.1”项下预处理好的DA-201 树脂2.0 g，加入“2.1.2”项下上样液400 mL 静态吸附，每2 h 测定一次，以吸附时间对吸附量作图，见图1。树脂对苯乙醇苷的吸附量随时间而变化，吸附时间延长，吸附量增加，吸附8 h 后，吸附量趋势减缓，树脂逐渐达到饱和吸附量。同时计算出相应时间间隔内树脂对苯乙醇苷的平均吸附速率，再以吸附时间对吸附速率作图，见图2。DA-201 树脂在室温条件下，初始的1~8 h 内吸附速率较快，8 h 以后吸附减缓，10 h后基本达到吸附平衡。

2.3.2 吸附透过曲线 取“2.2.1”项下预处理好的DA-201 树脂60 g 上柱，取“2.1.2”项下的上样液，以1.5 mL·min-1 的速率上柱，以60 mL 为单位收集流出液，测定流出液中苯乙醇苷的含量，以上样液体积对流出液浓度绘制吸附透过曲线，见图3。由图3 可知，当进样溶液为吸附树脂柱量的8 倍时，试样溶液开始泄露树脂柱，即为吸附树脂的泄漏点，此时单位树脂吸附量为15.41 mg·g1；但此时树脂的吸附并没有达到饱和，继续进样至树脂柱体积的11 倍时，吸附曲线趋于平缓，说明树脂吸附已经达到饱和，此时单位体积树脂吸附量为18.21 mg·g1。

2.4 洗脱剂浓度的选择 取“2.3.2”项下吸附饱和的DA-201 树脂4 份，用10%，30%，60%，90%乙醇以5 mL·min1速度洗脱，每隔2 h 收集洗脱液，按“2.1.3”项下方法制备溶液，按“2.1.4”项下方法测定，以时间对洗脱液浓度作图，见图4。90%乙醇可在较短的时间内将苯乙醇苷大部分洗脱下来。同时计算树脂解析率，结果90%乙醇洗脱率可达97.50%，解析率高。

2.5 工艺验证

按“2.1.2”项下方法制备，按“2.1.3”项下方法测定得到浸膏中苯乙醇苷含量为25.12%；以DA-201 为树脂，1.5 mL·min1 的速度上样，再以90%乙醇洗脱，洗脱液回收溶剂，干燥，浸膏中苯乙醇苷含量为51.23%，重复测定5 次，RSD 为1.52%。

3 讨论

通过对7 种大孔吸附树脂的静态吸附特性的研究，确定了DA-201 树脂对肉苁蓉中苯乙醇苷的富集较为理想，它吸附量大，且易解吸。分子的极性大小直接影响分离效果，极性较大的分子一般适于在中极性的树脂上分离，极性小的分子适于在非极性树脂上分离[7-8]，苯乙醇苷由咖啡酸、苯乙醇苷元、糖基构成，分子中多有羧基和糖苷链，具有一定的极性和亲水性，有利于极性和弱极性树脂的吸附，DA-201 树脂为极性树脂，这和理论上基本吻合。

本实验除对“2.2”项下的内容考察外，又以上样液的pH 值(2.0，2.5，3.5，4.0，5.0，6.0)对吸附影响进行筛选，确定了上样液的pH 3.5 吸附较好，上样液原液的pH 即为3.5；此外对控制流速分别以0.5，1.0，1.5，2.0 mL·min1 进行动态吸附，确定流速为1.5 mL·min1 DA-201 树脂对肉苁蓉的吸附量较大。比色法测定苯乙醇苷，设备简单，易于操作，但易受其他物质干扰，尝试检测结果偏高，本实验采取在大孔吸附树脂富集前，对药材溶液先采用溶剂萃取纯化，可减少干扰；又苯乙醇苷结构类似黄酮化合物，含有邻苯二羟基，邻苯二羟基在亚硝酸的作用下被氧化成邻苯二酰基，加入铝盐使邻苯二酰基结构与Al3+形成稳定的配合物，呈酒红色，故可采用可见分光光度计进行比色定量测定。

REFERENCES

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