摘要:目的提高完善固精补肾丸质量标准。方法在原标准基础上增订了山药、茯苓、小茴香的显微鉴别及山茱萸、肉苁蓉的薄层鉴别。结果显微鉴别明显, 易于辨别;薄层色谱中斑点清晰, 阴性对照无干扰。结论该法快速简便, 重现性好, 专属性强。

关键词:固精补肾丸;显微鉴别;薄层鉴别

　固精补肾丸收载于卫生部标准中药成方制剂第九册, 标准编号:WS3-B-1754 -94。处方由杜仲、南五味子、菟丝子、山茱萸、肉苁蓉、熟地黄等18味药组成, 具有温补脾肾之功效, 临床上用于治疗脾肾虚寒, 食减神疲, 腰酸体倦, 早泄梦遗等症。原标准仅有2项化学反应鉴别, 因专属性不强删去。为了提高固精补肾丸的质量标准, 根据国家药品标准提高行动计划的任务的要求, 本文在原标准的基础上增订了山药、茯苓、小茴香的显微鉴别及山茱萸、肉苁蓉的薄层鉴别。该法快速简便、专属性强、重现性好, 结果准确可靠, 为固精补肾丸的检验提供了质量依据。

1　仪器与试药

仪器:Olympu显微镜( sbx41) 定量毛细管( Drummond,U.S.A) ;薄层板:Kieselgel60GF254 ( MERCK)自制10 cm×10 cm;预制板GF254(青岛海洋化工厂分厂) ;聚酰胺薄膜(武汉药科新技术开发有限公司)10 cm×10 cm;所用试剂均为分析纯。对照药材:山茱萸( 批号121495 -200401) 、肉苁蓉(批号121101 -200402) 、杜仲(批号12102 -0301)均由中国药品生物制品检定所提供。固精补肾丸(批号070201、070202、070203)及相应阴性对照样品均由广东万年青制药有限公司提供。

2　方法与结果

2.1　性状

原标准的性状规定:本品为黑色水丸。因本品系部分药材提取后与其余药材细粉以水为黏合剂制成的丸剂, 依据《中国药典》2005 年版一部丸剂分类及本品的处方工艺, 应归属于浓缩水丸, 故修订为黑色浓缩水丸。

2.2　显微鉴别

取本品, 置显微镜下观察:淀粉粒单粒, 扁卵形、三角状卵形、类圆形或矩圆形, 直径8 ～ 35 μm, 脐点点状、人字状、十字状或短缝状, 可见层纹(山药, 见图1) 。菌丝无色或淡棕色, 细长, 稍弯曲, 有分支, 直径3 ～ 8 μm, 少数至16 μm(茯苓, 见图2) 。果皮表皮(外果皮)细胞表面观细胞呈类多角形或类方形, 壁稍增厚(小茴香,见图3) 。

2.3　山茱萸的薄层色谱鉴别

供试品溶液的制备:取本品2 g, 加甲醇25 ml, 回流2 h, 滤过, 滤液蒸干, 残渣加水5 ml使溶解, 通过D101 型大孔吸附树脂柱(内径1 cm, 柱高8 cm) , 用水20 ml洗脱, 弃去水液, 加15%乙醇70 ml洗脱, 收集洗脱液蒸干, 残渣加无水乙醇1 ml使溶解, 作为供试品溶液。

对照药材的制备:取山茱萸对照药材0.2 g, 加甲醇20 ml, 回流1 h, 滤过, 滤液蒸干, 残渣加石油醚( 30～ 60℃) 10 ml浸渍1 min弃去, 挥干石油醚, 加无水乙醇1 ml使溶解, 作为对照药材溶液。薄层板:硅胶GF254薄层板;点样量:供试品溶液10 μl, 对照药材溶液5 μl;展开剂:乙酸乙酯-丙酮-甲醇-水( 10∶1∶1.5∶1) ;检视:紫外光灯( 254 nm) 。结果判断:供试品色谱中, 在与山茱萸对照药材色谱相应的位置上, 显相同颜色的条斑, 见图4。

2.4　肉苁蓉的薄层色谱鉴别[ 1]

供试品溶液的制备:取方法“ 2.3”项下的供试品溶液。

对照药材的制备:取肉苁蓉对照药材0.2 g, 加无水乙醇15 ml, 加热回流1 h, 滤过, 滤液蒸干, 残渣加无水乙醇1 ml使溶解, 作为对照药材溶液。薄层板:聚酰胺薄层板;点样量:肉苁蓉对照药材溶液5 μl, 供试品溶液5 μl;展开剂:甲醇-醋酸-水( 2∶1∶7) ;检视:紫外光灯( 365 nm) 。结果判断:供试品色谱中, 在与肉苁蓉对照药材色谱相应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点, 见图5。

3　讨论

3.1　山茱萸的薄层鉴别样品溶液提取条件的优化样品提取溶剂的选择:取本品适量, 分别用甲醇、无水乙醇、60%乙醇提取, 按方法“2.3”项下测定, 结果表明, 甲醇提取物经洗脱净化后, 斑点较清晰。净化柱及洗脱条件的选择:曾试用甲醇提取液直接点样, 由于杂质多, 色谱斑点不够清晰, 故将甲醇提取液通过四种净化柱的试验比较, ( 1)硅胶柱、( 2)中性氧化铝柱、( 3)聚酰胺柱、( 4) D101型大孔吸附树酯柱,结果表明:D101 型大孔吸附树酯柱洗脱效果比较好,色谱斑点清晰, 易于观察判断。曾以40%乙醇、15%乙醇、10%乙醇70 ml作为洗脱剂, 洗脱蒸干后加无水乙醇1 ml使溶解, 点样10 μl, 结果表明:15%乙醇洗脱效果最好, 斑点清晰, 杂质干扰少。

3.2　专属性试验

按该品种的处方和工艺, 分别制成不含山茱萸和肉苁蓉的阴性样品, 作为阴性对照样品溶液。照薄层色谱法( 《中国药典》2005年版一部附录Ⅵ B) 试验。结果表明阴性对照样品均无干扰。验证此方法专属性符合要求, 见图4, 5。

3.3　耐用性试验

取方法“ 2.3”“2.4”项下点样后的薄层板, 分别于室温28℃和6℃ (冰箱)中展开, 依法操作, 结果表明,在28 ～ 6℃范围内进行不同温度条件的试验, 对鉴别无明显影响。另取点样后的薄层板, 分别于用硫酸调节相对湿度为20%和88%的层析缸中展开, 依法操作,结果表明在相对湿度为20%和88%范围内进行不同湿度条件的试验, 对鉴别无明显影响。结果表明:温度和湿度对展开结果影响不大, 本方法的耐用性良好。

参考文献

1 国家药典委员会.中国药典.北京:化学工业出版社,200 5.90.