李媛，宋媛媛，褚春明，张洪泉”（扬州大学医药研究所，江苏扬州 225001）

摘要：目的 探讨肉苁蓉提取物松果药苷（BH）延线衰老的药理作用及其可能的作用机制，方法 小鼠皮下注射 106 D-GAL 10 ml，W1每天1次，连续8周，建立亚急性表老模型，阳性组和BCH各组分别问时灌胃给 予维生素 E40m KF1和 ECH 20 40 60m kg1每天1次。检测小风抗应激绝力，血清中1-2 1-6含量以及脑组织中一氧化素（NOy．超氧化物歧化酶（SOD）和丙二経（MDA）含量。结果 与正常组比较，模型组小风抗应激烧力下降，血清 L-2含量和脑组织 N．SOD含量均显著下降，1-6和脑组织MDA含量显著升高。BCH各剂量组和维生素E阴性对照组均能提高衰老小鼠抗应激能力，血清L-2含量和脑组织N1 SOD含量，降低 L-6和脑组织 MDA含量，结论 ECH能够提高衰老小鼠的免疫能力、NO含量，减轻 D-GAL诱导衰老小鼠的活性氧自由基损伤，这些可能是其延缓衰老的机制之一

关键词内苁蓉；松果菊苷；表老；超氧化物歧化酶

中图分类号：R282   文献标志码：A   文章编号：1001-2494（2011）14-1077-04

肉苁蓉（Heba Cisanchg为常用的传统补益中药，在历代抗老防衰类方剂中仅次于人参占第2位。松果菊苷（echnacoside ECH是肉苁蓉中苯乙醇总苷的主要成分，近年研究表明，ECH具有神经保护，抗炎、促进伤口愈合和保肝”等作用。本实验建立衰老小鼠模型，观察 HCH对各衰老相关指标的影响，研究 ECH对衰老大鼠延缓衰老的作用及其机制，为进一步开发利用 ECH提供实验依据。

1 实验材料

1.1 实验动物

3月龄 IR小鼠，清洁级，26～32号雌雄各半［扬州大学实验动物中心，生产许可证：SCNK（苏）2002-0009使用许可证：SYXK（苏）2002-0045］，动物于实验前适应环境饲养 1周，控制室温 20～22℃.给予充足的标准饲料和饮用水，光照充足，实验过程符合相关动物伦理学要求。

1.2 药物与试剂

ECH（纯度＞90％，棕色粉末，蒸馏水溶解）（和田帝辰沙生药物开发有限公司）；维生素 E淡黄色透明胶丸，食用油溶解，上海东海制药股份有限公司，批号：090102）；D半乳糖（D-gajaciose D-Gal BioBast n公司，批号：GS0417B2091）；考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒（批号：20090924）、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒（批号：20090916）、丙二醛（MDA）试剂盒（批号：20091009），NO（批号：20090814）、11-2L6 ELEA试剂盒（批号：20091124），均购自南京建成生物工程研究所；其他所用试剂均为国产分析纯。

1.3 仪器

722型紫外分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）：ELX8ooUV酶标仪（美国 BiaTk公司）：PT-MR3100D组织匀浆机（瑞士 Popuom公司）：MODEL．550台式冷冻离心机（德国 EPPenddor公司）：BH10S型电子天平（德国 Sanorins公司）。

2 实验方法

2.1 动物分组、模型制备及给药

取 CR小鼠．随机分成6组．即正常对照组，衰老模型组，维生素 F阳性对照组 ECH20． 40和 60mg．k组，每组 36只，雌雄各半，除正常组外，各组按文献1方法制备衰老小鼠模型，注射用水配置10％ DG小鼠颈背部皮下注射10mL·kg，正常组小鼠相应注射等体积注射用水，每天1次，连续8周，同时，正常对照组和衰老模型组每天灌胃生理盐水，容量为20mL·kg，对照组每天灌胃等体积食用油溶解的维生素 E其余3组每天灌胃等体积的 20 40和60 mgkg＇ECH

2.2 ECH对小鼠的抗应激的作用

2.2.1 耐缺氧实验 取250 ml广口磨口瓶若干只，瓶内放置钠石灰 10多以吸收二氧化碳和水蒸气，每组取 12只小鼠，雌雄各半，分别放入备用的广口瓶内，每瓶一只，在常温常压下，将涂有凡士林的磨口瓶瓶盖严密封紧，自封紧瓶口开始计时，直至呼吸停止，用秒表记录每只小鼠的存活时间。

2.2.2 小鼠负重游泳实验 末次给药 24 h后，每组取小鼠12只，给小鼠尾部负重其体重5％的重物，放入水温25℃，水深30m游泳测试箱中，以小鼠头部沉入水面下超过10的时间为标准，记录各组动物游泳时间。

2.3 小鼠脏器指数的测定

末次给药24 h后，每组取小鼠12只，称体重，摘眼球取血，然后断椎处死，解剖取其胸腺和脾脏，分别称重，计算脾指数和胸腺指数，胸腺指数＝胸腺质量（m号／身体质量（10 ％：脾脏指数＝脾脏质量（mg／身体质量（10号。

2.4 血清 L-2和 IL6水平的测定

摘眼球取血后，室温放置1b离心（3000 Fmir．10 min分离血清，根据试剂盒使用说明书操作，在酶标仪 450 m处检测各组小鼠血清中 1-2和 IL-6的水平。

2.5 脑组织中 NO SOD和 MDA的测定

末次给药24 h后，取出胸腺和脾脏后断头处理

小鼠，迅速剥离出脑（除掉小脑），称重后，用冷生理盐水制成10％组织匀浆，按试剂盒要求严格操作。NO测定采用硝酸还原酶法，SOD采用黄嘌呤氧化酶比色法，MDA用硫代巴比妥酸法。

2.6 统计学处理

多组间比较用单因素方差分析，各组间用配对！检验，P＜0.05为统计学上有意义，所有计数资料采用均数 士标准差（）表示，采用 SPS软件通过Pean法进行相关分析。

3 实验结果

3.1 ECH对小鼠抗应激能力的影响

衰老模型组连续给 D-Gal8周后，毛色逐渐枯槁没光泽，易脱落、皮肤弹性差，精神萎靡，倦怠嗜睡，群体喜扎堆，进食明显减少，体质量增加缓慢，呈现出明显衰老体征。与正常对照组相比，衰老模型组耐缺氧时间明显缩短，结果显著（R＜0.01）：ECH组显著改善衰老小鼠的耐缺氧时间，统计结果有差异（R＜0.0L P＜0.05）．与模型组小鼠相比，ECH可延长衰老小鼠游泳时间，低剂量组有差异（P＜0.05）．高剂量组差异显著（R＜0.01），雌雄各组间数据无差异，结果见表1

3.2 ECH对小鼠脏器指数的影响

胸腺和脾脏是机体主要的免疫器官，免疫器官指数可反映免疫器官的发育和免疫细胞的功能状态，间接反映了机体的免疫水平，实验结果显示，ECH能促进衰老小鼠胸腺和脾脏重量的增加，与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.01P＜0.05）．雌雄各组间数据无差异，结果见表2

3.3 EXCH对衰老小鼠血清1-2L-6含量的影响与正常对照组比较，模型组小鼠血清 11-2含量

表1 EXCH对小鼠抗应激能力的影响，n＝12±”

Tah 1 EffcrofECH on te ansstess biav of aggg mjce n=12%±*

wihD.Gajmddgoup 

明显降低，血清 1-6含量明显升高，有显著性差异（P＜0 05）：EOH各组能剂量依赖性升高血清 1-2含量．降低 L6含量，与衰老模型组比较，有显著性差异（P＜0.05）．雌雄各组间数据无差异，结果见表3．

3.4 ECH对衰老小鼠脑组织中 NOQ SOD MDA的影响

与正常对照组小鼠相比，衰老模型组小鼠脑组织中的 NO含量、SOD活性明显降低，而MDA含量则明显高于正常对照组，在统计学上差异显著（P＜0.01），给药后各组脑组织 NO含量、SOD活性和MDA含量与正常对照组相比差异不显著，与衰老模型组相比，差异显著（P＜0.01 P＜0.05）．雌雄各组间数据无差异。结果见表4

4讨论

免疫系统作为一个完整的，自主的系统在维护和调整生命活动中起着重要作用，免疫功能下降是衰老最突出的特征，胸腺、脾脏是动物体内主要的免疫器官，免疫器官的重量是反应机体非特异性免

表2 ECH对小鼠脏器指数的影响，12±

Tab 2 Effct ofEXH on the vicem] ndex ofagjng mjoe T ＃干x21

注，与正常对照比，2）RC0.01 与视型组比，＜0.05FC0.01

表3 ECH对血清 L-2 1-6含量的影响，R＝12Tab:3 Effct ofECH on conens of pertukh-2(L-2) and tekukn6(1-6)a8gmn=12*±

注：与正常对照比，2RC0.01与型组比 3，PC0 05 1）RC0.01

表4 ECH对脑组织 NO． SOO MDA含量的影响，n＝12＊±Tab:4 EffetofECH on he NO SOD and MDA conte ns be bap ssue ofagjngmjce n=12 X±8

GRp

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