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［摘 要］ 为探索德赢vwin登录 活性成分多糖的最佳提取方法初步评价其抗氧化活性分别采用超声-微波协同萃取、微波、水浴及超声波4种不同方法提取德赢vwin登录 中的粗多糖并对其清除DPPH 自由基的效果进行了初步研究。结果表明超声-微波协同提取效果最佳其次是微波、水浴和超声波。德赢vwin登录 粗多糖的最佳提取条件为：提取温度95℃提取时间180min料液比1∶20。德赢vwin登录 粗多糖对DPPH 自由基具有较好的清除作用
［关键词］ 管花肉苁。蓉；粗多糖；超声-微波协同萃取；DPPH
中药肉苁蓉（Cistanche deserticola Y．C．Ma）为列当科肉苁蓉属植物由于药源紧缺本属其他种也在各地使用。德赢vwin登录 主产于我国新疆分布于南疆的塔克拉玛干沙漠周围资源丰富为目前中药肉苁蓉的主要基源植物［1］ 。随着肉苁蓉需求量的急剧增长其自然资源受到掠夺式的采挖现已被列为我国濒危保护植物［2-3］ 。近年来很多学者开展了肉苁蓉活性成分多糖的研究但对德赢vwin登录 的研究主要集中在苯乙醇苷类成分方面［4-6］ 对多糖的研究较少尤其是超声-微波协同提取多糖及清除DPPH自由基方面的研究尚未见报道。多糖作为德赢vwin登录 活性成分之一对其提取方法进行探讨尤为重要笔者旨在通过对超声-微波协同萃取、微波、水
浴及超声波4种不同方法提取德赢vwin登录 粗多糖效果的比较确定最佳提取方法并初步确定最佳方法提取条件同时通过清除DPPH 自由基试验初步评价德赢vwin登录 多糖的抗氧化活性以期为德赢vwin登录 多糖的进一步研究提供依据。
1 材料与方法
1．1 材料、仪器与试剂
1．1．1 材料德赢vwin登录 于2008年11月采自新疆塔里木盆地经塔里木大学植物科学学院邱爱军老师鉴定为Cistanche tubulosa （Schenk ） R．Wight。
1．1．2 仪器SartoriusBS210S 电子天平（北京赛多利斯天平有限公司）723分光光度计（上海光谱仪器有限公司）DZF-6021型真空干燥箱（上海精宏实验仪器设备有限公司）CW-2000型超声-微波协同萃取仪（上海新拓微波溶样测试有限公司）WTS03-1型微波提取设备（中国南京杰金微波设备有限公司）SK3200LH 超声波清洗器（上海科导超声波仪器有限公司）HH-S 型恒温水浴锅（江苏省金坛市医疗仪器厂）RZ52-99型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。
1．1．3 试剂葡萄糖（上海山浦化工有限公司）蒽酮（上海山浦化工有限公司）二苯代苦味酰基自由基（DPPH·）（Sigma 公司）无水乙醇（洛阳市化学试剂厂）浓硫酸（乌鲁木齐化学试剂厂）均为分析纯。
1．2 试验方法
1．2．1 标准曲线的绘制参照赵小亮等［7］ 方法制备标准溶液于620nm 处测定吸光度以葡萄糖浓度为横坐标（C）以吸光度为纵坐标（A）绘制标准曲线。
1．2．2 德赢vwin登录 粗多糖的提取将德赢vwin登录 阴干粉碎过40目筛称取一定量用95％乙醇回流去除色素及脂溶性杂质残渣挥干溶剂备用。分别采用超声-微波协同萃取、微波、超声波及水浴法提取德赢vwin登录 粗多糖。水浴法：取次干粉5．000g加蒸馏水50mL85℃水浴提取1h2次重复合并滤液定容至100mL备用。其余3种方法除辅以超声、微波手段外料液比、提取时间、提取温度皆同水浴法。
1．2．3 德赢vwin登录 粗多糖含量的测定取1．000mg／mL样品溶液按标准曲线制备方法在2h内测定其吸光度计算德赢vwin登录 粗多糖含量。粗多糖含量／％＝（C ·D ·f／W ）×100其中C 为多糖质量浓度（mg／mL）D 为稀释因素f ＝0．4167W 为样品质量（mg）。
1．2．4 不同因素对德赢vwin登录 粗多糖提取率的影响1） 提取温度。考察65℃、70℃、75℃、80℃、85℃、90℃、95℃、100℃条件下德赢vwin登录 粗多糖提取率其他条件：料液比1∶10提取时间1h。2） 提取时间。考察提取时间为60min、90min、120min、150min、180min、210min、240min、270min时德赢vwin登录 粗多糖提取率其他条件：料液比1∶10提取温度85℃。3） 料液比。考察料液比为1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35、1∶40时德赢vwin登录 粗多糖提取率其他条件：提取温度85℃提取时间1h。
1．2．5 德赢vwin登录 粗多糖对DPPH 自由基的清除效果分别取2mL 不同浓度的德赢vwin登录 粗多糖溶液各加入0．0002mol／LDPPH 溶液2．0mL摇匀黑暗中放置30min以60％ 乙醇为空白在517nm 下测定吸光值A样品同时测定2．0mL 粗多糖溶液与2．0mL60％乙醇混合液吸光度值A对照再测定2．0mL DPPH 溶液与2．0mL60％乙醇吸光度值A空白。清除率／％＝［1－（A样品－A对照）／A空白］×100运用Graphpad Prism5．0软件计算IC50（半抑制率）。
2 结果与分析
2．1 标准曲线的绘制按1．2．1方法绘制标准曲线得回归方程A ＝0．0162C＋0．0042r＝0．9992。表明葡萄糖浓度在25．08～100．3μg／mL 范围内与吸光度线性关系良好。2．2 提取方法的比较由表1可知超声-微波协同萃取效果最好其次是微波、水浴及超声波法。微波具有穿透加热的特性可被极性溶剂（如水等）选择性吸收从而被加热适于水溶性多糖的提取。超声波萃取可加速介质质点运动其空化作用可加速有效成分的浸出振动匀化使样品介质内各点受到的作用一致萃取更均匀。超声-微波协同萃取法兼有超声和微波提取的优点可加速目标物从固相进入溶剂的过程［7］ 。此外微波较水浴、超声波提取效果好可见微波的穿透加热在多糖提取过程中发挥了重要的作用。超声波提取效果尚不如水浴提取可见温度也是多糖提取中重要的影响因素。
2．3 不同因素对德赢vwin登录 粗多糖提取率的影响由图示可见随着提取温度的升高粗多糖提取率逐渐提高至95℃达到最高（13．01％）之后逐渐下降这可能是温度过高导致杂质溶出量增多所致；随着提取时间的延长粗多糖提取率逐渐提高至180min 达到最高（13．37％）之后开始下降这可能是因为时间过长增加了其他干扰物质的溶出抑制了粗多糖的提取；粗多糖提取率随着料液比的升高而提高1∶20时达到最高（13．45％）随后粗多糖提取率随料液比的升高而下降这说明增大料液比有利于提高粗多糖提取率但料液比过高不利于粗多糖的提取。根据以上结果得出德赢vwin登录 粗多糖提取的最佳工艺条件为提取温度95℃、提取时间180min、料液比1∶20。2．4 德赢vwin登录 粗多糖对DPPH 自由基的清除效果由表2可以看出在一定浓度范围内DPPH 自由基清除率与粗多糖浓度呈正相关。当德赢vwin登录 粗多糖浓度为200μg／mL 时德赢vwin登录 粗多糖对DPPH 自由基的清除率达76．2％IC50为79μg／mL。
3 讨论
笔者首次运用超声-微波协同萃取法从德赢vwin登录 中提取粗多糖并对其含量进行测定粗多糖提取率较传统的水浴法提高了1．28％。与微波、超声波、传统的水浴提取法相比超声-微波协同萃取法可使样品介质内各点受到的作用一致降低目标物与样品基体的结合力加速目标物从固相进入溶剂的过程提取效果最好可作为德赢vwin登录 粗多糖提取的首选方法。温度、时间、料液比对德赢vwin登录 粗多糖的提取率均有较大影响最佳提取条件为：提取温度95℃提取时间180min料液比1∶20可为其工业化生产提供理论依据。德赢vwin登录 粗多糖具有较强的清除DPPH 自由基的能力说明肉苁蓉及德赢vwin登录 多糖可能通过清除机体内自由基从而起到延缓衰老的作用这
与薛德钧等［8］ 的研究结果一致。
［参考文献］
［1］ 蔡鸿鲍忠姜勇等．不同产地德赢vwin登录 中有效成分的定量分析［J］．中草药200738（3）：452-455．
［2］ 屠鹏飞何燕萍楼之岑．肉苁蓉类药源调查与资源保护［J］．中草药199425（4）：205-208．
［3］ 傅立国．中国植物红皮书－－－稀有濒危植物［M］．北京：科学出版社1991：502．
［4］ 杨太新张喜焕蔡景竹．德赢vwin登录 松果菊苷次生代谢部位研究［J］．中国中药杂志200732（24）：2591-2594．
［5］ 任 璐顾小红汤 坚等．栽培德赢vwin登录 中苯乙醇苷的乙醇提取工艺［J］．食品与生物技术学报200625（3）：33-36．
［6］ 陈 敏肖苏萍崔光红等．德赢vwin登录 中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量测定［J］．中国中药杂志200530（11）：839-841．
［7］ 赵小亮白红进汪河滨等．杜梨果实多糖提取方法及含量测定的研究［J］．西北农业学报200716（4）：279-281．
［8］ 薛德钧章明吴小红等．肉苁蓉抗衰老活性成分的研究［J］．中国中药杂志199520（11）：687-688．
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