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松果菊苷对脑缺血大鼠纹状体 细胞外液中单胺类神经递质的影响

发布日期:2021-10-28 12:44:00

摘要:目的 研究松果菊苷(ECH)对局灶型脑缺血大鼠纹状体细胞外液中单胺类递质的影响,以探讨ECH对脑神经保护作用的可能机制。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组、ECH高、低剂量组和川芎嗪(CXQ)组。各组大鼠给予相应的药物或生理盐水腹腔注射,每天1次,连续7d。给药第3天,脑纹状体埋置探针套管,末次给药1五后,制作大鼠局灶性脑缺血模型(MCAO),造模后立刻进行微透析,将透析液注入高效液相-电化学检测器(HPLC-ECD)测定各组纹状体细胞外液中去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-IT3.4-二羟苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA).5-羟吲乙酸(HIAA)的含量。结果 与对照组相比,模型组NEDA5HIT水平升高,其酸性代谢产物 DOPACHVAHIAA也随之升高。与模型组比较,ECH高、低剂量组(3015mgkg*'·d-1)和CXQ组的6种物质的含量均有所降低。结论 ECH的神经保护作用可能与对抗脑缺血后单胺类神经递质的升高有关。

关键词:松果菊苷;脑缺血:纹状体;HPLC-ECD:单胺类神经递质及代谢产物。

肉苁蓉的作用

松果菊苷(echinacosideECH)是从新疆特色植物药德赢vwin登录 中分离、纯化的一种苯乙醇苷类有效成分。研究表明,ECH具有抗氧化0-2、保护神经D-0、抗衰老B、改善学习记忆B-等神经保护作用。陈虹等的研究结果证实,ECH对帕金森病的DA能神经元具有保护作用。单胺类神经递质是一类调节机体生理活动的重要物质,组织中的含量能反映神经递质生物合成、释放、摄取、失活等过程[10-i]。目前关于ECH对脑缺血大鼠脑内单胺类递质的影响尚未见相关报道。本研究运用脑微透析技术,考察了ECH对脑缺血大鼠纹状体细胞外液中各单胺类神经递质含量的影响,初步探讨了ECH对脑神经保护的可能机制。

1 材料

1.1 实验动物 SD大鼠,6,体质量250300g(购于新疆实验动物中心,许可证编号:2009-0053)

1.2 药品和试剂 ECH由北京大学药学院屠鹏飞教授惠赠(纯度95%以上);去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(54IT)、3,4-二羟苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA).5羟吲哚乙酸(HIAA)均为Sigma公司:注射用盐酸川芎嗪(CXQ,哈尔滨三联药业有限公司);磷酸锌水门汀(上海医疗器械股份有限公司产品,由液体和粉剂组成,用时调和);1-烷基硫酸钠(DIKMA公司);水合柠檬酸(天津市津科精细化工研究所);柠檬酸三钠(Acros 公司):乙二胺四乙酸二钠(J T Baker Chemical co);甲

醇(DIKMA 公司):乙腈(DIKMA 公司):脑微透析灌流液为复方氯化钠注射液(北京双鹤药业股份有限公司):所用水均为重蒸水。

1.3 仪器 美国BAS4100型大鼠脑立体定位仪:CMA12探针及探针套管;CMA120清醒动物装置:CMA402微量泵;CMA150低温样品自动收集器。Esa 公司5600A型输液泵:Esa公司5600A 型输液泵:Esa公司542型自动进样装置;Esa公司 CoulAr-ray电化学检测器:玻璃碳工作电极和AgAgCl参考电极:C18色谱柱(DIKMA 公司,ODS 5 μm150mmx4.6 mm):CoulArray win 色谱工作站(Exa公司):漩涡混旋器(QL-861型);台式酸度测定仪(HAN-NA211型);台式高速离心机(XYJ-2型)。

2 方法

2.1 动物分组及给药 大鼠30只,随机分为5组:

对照组(Control):生理盐水1ml·kg-·d-1模型组(Model):生理盐水1ml·kg1·d1模型+川芎嗪(CXQ30 mg·kg*'·d"':模型+ECH 高、低剂量组(ECHBECHS):30.15mgkg·d:各组动物均腹腔注射给药7d

2.2 造模方法和微透析 每只大鼠均于给药第3天埋置套管:将大鼠用10%水合氯醛(3.5ml·kg“)麻醉,固定于BAS 4100脑立体定位仪,参照George Paxinos《大鼠脑立体定位图谱》将探针导管植入左侧纹状体(坐标 AP:+0.2 mm;ML:-3.0mm:DV:-3.5mm),末次给药1h后麻醉,采用杨赞章改进 Longa线拴法制作大鼠大脑局灶型脑缺血模型(MCAO模型)。对照组鱼线仅插入10mm,其余步骤同手术组。造模后在清醒自由活动状态下插入微透析探针,用Ringer液以1.5μl·min-的速度灌流,4℃下收集脑微透析液,20min收集1管透析液。每管透析液收集完毕后均立即置于-20℃冰箱保存,并在透析结束后转存-70℃冰箱,择日测定。探针在使用前做回收率测定,用于折算透析液中各单胺类神经递质的浓度。

2.3 HPLC-ECD分析 流动相配置:测定流动相每升含0.15 mol·L-'柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液829 ml0.1 mol·L-'乙二胺四乙酸二钠1ml;甲醇150 ml1-烷基硫酸钠0.283g。设定流动相流速为0.7ml·min-',柱温箱温度为28℃。电化学检测器工作电压为:200 mV400 mV600 mV,分别为234通道;增益为2nA。进样量为25μl。标准曲线用0.0250.050.10.20.5mg·L'的梯度含混合标准溶液绘制。SPSS 13.0 统计软件做重复测量数据的方差分析。

3 结果

Fig16描绘了大鼠纹状体细胞外液中NEDADOPACHIAAHVA5-HT水平的变化情况。从图中可以看出,脑缺血后,纹状体细胞外液单胺类神经递质存在代谢紊乱,各递质含量均有所升高,在一定范围内,随缺血时间的延长而升高的更加明显。在缺血90min时,纹状体细胞外液DANE 浓度可达对照组水平的3倍之多。对照组的NEDADOPACHIAAHVA 5-IT水平由高渐低,其原因可能与结扎其左侧颈总动脉后,左脑暂时性缺血及插入探针时产生的损伤有关。从变化的曲线上看,ECHCXQ均可降低脑缺血后DADOPACHIAAHVA5-IT的达峰浓度,CXQ与高剂量的ECH较为明显。各递质时程曲线下移说明ECH可抑制脑缺血大鼠脑内神经递质及其代谢产物的升

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Fle 1 Elect of ECH os estraceBular level of NE in striatum of rats 

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Flg 2 Ellect of ECH en estracelular level 

4 讨论

脑缺血引起的脑损伤机制较为复杂。在脑缺血情况下,脑内单胺类神经递质发生素乱,NEDA5-HT含量明显降低,脑缺血越重,脑组织NEDA5-HT含量就越低吗。而脑内微透析法证明,脑缺血时单胺类神经递质含量在细胞外液中升高,持续整个缺血期,且随着缺血时间延长而进一步上升,实验结果与报道一致。ECH是从新疆特色植物药德赢vwin登录 中分离、纯化的一种苯乙醇苷类有效成分。其具有抗衰老、改善学习记忆、抗神经元凋亡等多种神经保护作用。本研究采用国内较先进的脑微透析联用HPLC-ECD检测技术,初步探讨ECH 对各脑缺血实验大鼠纹状体细胞外液中单胺类递质及其代谢产物的影响,结果表明,ECH可降低由脑缺血所致的纹状体细胞外液中单胺类神经递质的升高作用,具有较好的改善脑缺血组织的损伤作用。

本实验研究结果发现,模型所致的脑缺血损伤可使细胞外液中DANE5-IT的含量升高,变化的幅度与缺血的时间和程度呈正相关。与此同时,其酸性代谢产物DOPAC.HVAHIAA也随之升高。这是由于脑缺血时,脑组织供血供氧减少,细胞内能量耗竭,神经递质再摄取受到抑制;另一方面单胺氧化酶活性下降,递质降解减少,二者致使单胺类递质及代谢物蓄积在细胞外,进而产生脑缺血性神经损害作用。在ECHCXQ作用下,脑缺血大鼠纹状体细胞外液中 DA5-HTHVAHIAA DOPAC 水平均明显下降,此可能是由于ECHCXQ抑制了缺血期DA、和5-HT的过量释放,减轻了DA、和5-HT合成、存储和再摄取的代谢障碍,进而起到了脑神经保护作用。我们的实验从ECH对脑内单胺类神经递质影响,初步探讨ECH抗脑缺血的作用机制,为临床应用和深入的科学研究奠定了新的理论依据。


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