摘要目的: 研究德赢vwin登录 水提物的安全性。方法: SPF 级昆明种小鼠、清洁级SD 大鼠，分别进行急性经口毒性试验、Ames 试验、小鼠骨髓嗜多染细胞微核试验、小鼠精子畸形试验及90 天喂养试验，观察德赢vwin登录 提取物毒性、致突变作用。结果: 德赢vwin登录 提取物急性经口毒性试验MTD ＞ 20g /kg，属无毒级; 骨髓微核实验、精子畸形实验、Ames 实验表明该样品无致突变作用; 90 天喂养试验对大鼠未见明显毒副作用。结论: 德赢vwin登录 提取物有较好的安全性。

关键词德赢vwin登录 提取物安全性评价

德赢vwin登录 Cistanche tubulosa( Schrenk) Wight 为肉苁蓉药用品种之一［1］，具有补肾阳、益精血、润肠通便之功效，现代药理学研究表明其具有壮阳、抗衰老、增强记忆力、降血脂、调节免疫、抗疲劳等多种药理作用［2 － 6］。德赢vwin登录 主产于新疆南疆地区，当地少数民族常将其作为炖汤、煮肉、泡茶、泡酒、下面之品食用，具有较好的药食两用价值。但由于德赢vwin登录 只是在局部地区有食用习俗，研究者更多的是关注其药理活性，对于德赢vwin登录 的食用安全性文献研究较少。本实验对德赢vwin登录 水提物进行安全性研究，为其开发利用提供更充分的科学依据。

1 材料

1. 1 样品的制备将德赢vwin登录 水煮、浓缩、干燥制得，1g提取物中相当于6g 药材。

1. 2 主要仪器MD200 － 3 上皿式电子天平; CXA 奥林巴斯双瞳显微镜; XTL － I 型连续变倍体视显微镜; 500 石蜡旋转式切片机; TS － 12H 生物组织自动脱水机; BM － VI 生物组织冷冻包埋机; LEIT220 显微镜; 雅培CD3700 全自动血球计数仪; OLYMPUS AU400 全自动生化分析仪。

1. 3 动物SPF 级昆明种小鼠，SD 大鼠，由长沙市天勤生物技术有限公司提供，许可证号SCXK( 湘) 2009 － 0012.

2 实验方法

2. 1 急性经口毒性实验清洁级昆明种小鼠20 只，体质量18 ～ 22g，雌雄各半。采用最大耐受剂量法，剂量为20g /kg，称取德赢vwin登录 提取物50g，加灭菌蒸馏水定容至100 mL，按0. 2mL/10g，间隔4 小时，分2 次给予，灌胃后连续观察14 天，记录中毒表现及死亡情况。

2. 2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验清洁级昆明种小鼠50 只，体质量25 ～ 30g，随机分5 组，雌雄各半。采用间隔24小时两次经口灌胃法，设低、中、高剂量组( 2. 5、5. 0、10. 0g /kg 肉苡蓉提取物) 、阴性对照组( 灭菌蒸馏水) 、阳性对照组( 0. 04g /kg 环磷酰胺) 。末次给药后6 小时颈椎脱臼处死动物，常规取材、制片、镜检，每只鼠计数1 000 个骨髓嗜多染红细胞，观察含有微核的嗜多染红细胞数，并计数200 个嗜多染红细胞，观察与成熟红细胞的比值( PCE/ＲBC) ，计算微核率( ‰) 。

2. 3 小鼠精子畸形实验雄性清洁级昆明种小鼠25 只，体质量25 ～ 35g，随机分5 组。受试剂量、溶液配制及灌胃量均同2. 2 微核试验，阳性对照组( 0. 04g /kg 环磷酰胺) 腹腔注射。每日1 次，连续5 天，末次给受试物后30 天处死动物，取副睾滤液涂片，伊红染色，每只动物计数1 000 个结构完整的精子，计算畸变精子发生率( %) 。

2. 4 Ames 实验用经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102 菌株和多氯联苯( PCB) 诱导的大鼠肝微粒体酶( S － 9) 进行试验。设5 个实验剂量组( 0. 008、0. 040、0. 200、1. 000、5. 000mg /皿) 及自发回变组、溶剂对照组( 蒸馏水) 和阳性对照组( 突变剂) 。阳性剂: － S9: TA97、TA98 为9 － 芴酮( 0. 2μg /皿) ，TA100 为NaN3 ( 1. 5μg /皿) ，TA102 为MMC ( 0. 5μg /皿) 。+ S9:TA97、TA98、TA100 为2 － AF( 100. 0μg /皿) ，TA102 为1. 8 －二羟基蒽醌( 50. 0 μg /皿) ，观察各组回变菌落数变化。

2. 5 90 天喂养实验清洁级SD 大鼠80 只，雌雄各半，随机分4 组。低、中、高剂量组分别为1. 33、2. 67、4. 00 g /kg，各组均按1. 0mL/100g 灌胃，溶剂对照为蒸馏水，每日1 次，连续90 天。每天记录给食量和剩食量，每周称1 次体重，计算食物利用率。实验中期，禁食16 小时，采血至抗凝管和非抗凝管，抗凝管全血用雅培CD3700 全自动血球计数仪测定血红蛋白、红细胞压积，进行红细胞、白细胞、血小板计数及白细胞分类; 非抗凝管血分离血清后用OLYMPUSAU400 全自动生化分析仪测定总蛋白、白蛋白、肌酐、尿素氮、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、胆固醇、甘油三酯和血糖。实验末期同上禁食，摘眼球采血测定血常规及血生化指标，禁食前和禁食后称重动物体重，采血后颈椎脱臼处死动物作大体解剖，取肝、肾、脾、胃、肠、睾丸( 卵巢) 做病理切片检查。

2. 6 统计学处理采用SPSS11. 0 统计软件，先对数据进行方差齐性检验，若方差齐，采用单因素方差分析进行总体比较，发现差异再用Dunnett 法进行检验。若方差不齐，则对原始数据进行适当的变量转换，满足方差齐性检验后，用转换后的数据进行统计; 若变量转换后仍方差不齐，改用秩和检验进行统计，发现总体比较有差异，采用不要求方差齐性的Tamhane’sT2检验进行两两比较。检验水准α = 0. 05。

3 结果

3. 1 急性经口毒性实验以20g /kg 剂量灌胃后，未出现任何不良体征，观察14 天，未见明显中毒症状，无死亡。解剖检查主要脏器未见明显异常变化。雌雄小鼠急性经口毒性实验最大耐受剂量( MTD) 均＞ 20g /kg。德赢vwin登录 提取物属无毒级。

3. 2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验经灌胃，雌雄小鼠各剂量组骨髓微核发生率未发生明显改变( 受检PCE 数为5000) ，各剂量组小鼠嗜多染红细胞微核率与阴性对照组比较差异无统计学意义( P ＞ 0. 05) ，阳性组与阴性组比较差异有统计学意义( P ＜ 0. 01) ，即德赢vwin登录 提取物微核实验结果为阴性，见表1。

3. 4 Ames 试验对鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102 4 株菌株，加与不加S － 9 时，各剂量组回变菌落数均未超过自发回变菌落数的2 倍，亦无剂量－ 反映关系，未见有致突变作用，而阳性对照组明显大于自发回变菌落数，见表3。

3. 5 90 天喂养试验90 天喂养试验期间，各剂量组动物生长发育、活动正常，无异常行为和中毒症状，无死亡。喂养期间，各剂量组雌、雄大鼠体重增长、进食量、食物利用率、血常

规指标、血生化指标、脏器重量、脏器/体重比值与对照组比较无显著性差异( P ＞ 0. 05) ，各剂量组大鼠的肝、脾、肾、胃、肠、睾丸( 卵巢) 均未见与实验因素有关的组织病理学变化。

4 讨论

4. 1 本实验根据《保健食品检验与评价技术规范》［7］，急性经口毒性试验表明德赢vwin登录 水提物MTD ＞ 20g /kg，属无毒物; 3 项遗传毒性实验结果均为阴性，德赢vwin登录 水提物无致突变作用; 90 天喂养试验未见样品对大鼠有明显毒副作用; 德赢vwin登录 水提物有较好的安全性。

4. 2 德赢vwin登录 产业是生态经济型产业，种植肉苁蓉必先种植红柳，红柳为防风固沙的先锋植物，对生态环境有良好的保护作用。新疆和田地区人工种植德赢vwin登录 已达30 万亩以上，伴随着德赢vwin登录 种植规模与产量的逐渐扩大，仅在药品上的使用规模是无法促进该产业的良好发展。本实验依据民间食用德赢vwin登录 的方法，对德赢vwin登录 的水提物进行了安全性评价研究，为其在食品等领域的使用提供了一定的科学参考依据。

参考文献

［1］ 中华人民共和国药典委员会. 中华人民共和国药典. 北京:化学工业出版社， 2010: 126．

［2］ 侯志华，常国文. 肉苁蓉的药理学研究进展. 中国民族医药杂志，2003，9( 4) : 3．

［3］ 李勇，熊元君，贾晓光，等. 德赢vwin登录 提取物对高盐饲养大鼠血压、红细胞膜流动性及全血黏度的影响. 天然产物研究与开发， 2009，21( 2) : 220．

［4］ 吴波，顾少菊，傅玉梅，等. 肉苁蓉和德赢vwin登录 通便与补肾壮阳药理作用的研究. 中医药学刊， 2003， 21( 4) : 539．

［5］ 张洪泉，翁晓静，陈莉莉，等. 德赢vwin登录 麦角甾苷对衰老小鼠端粒酶活性和免疫功能的影响. 中国药理学与毒理学杂志，2008， 22( 4) : 270．

［6］ 卿德刚，张娟，倪慧，等. 德赢vwin登录 复方制剂缓解体力疲劳功能研究. 新疆中医药，2011，29( 2) : 37．

［7］ 中华人民共和国卫生部. 保健食品检验与评价技术规范．2003: 167．