摘要：目的　评价德赢vwin登录 提取物的安全性。方法　清洁级ＳＤ大鼠、昆明种小鼠，分别进行急性经口毒性试验、Ａｍｅｓ试验、小鼠骨髓嗜多染细胞微核试验、小鼠精子畸形试验及致畸试验，观察德赢vwin登录 提取物毒性、致突变及致畸作用。结果　德赢vwin登录 提取物急性经口毒性试验最大耐受剂量（ＭＴＤ）均＞１０ｇ／ｋｇ·ｂｗ，属实际无毒物；骨髓微核试验、精子畸形试验、Ａｍｅｓ试验表明该样品无致突变作用；致畸试验结果为阴性，无致畸作用。结论　德赢vwin登录 提取物有较好的安全性，可以用于保健食品的开发。

关键词：德赢vwin登录 提取物；安全性；评价

　德赢vwin登录 为列当科植物德赢vwin登录 Ｃｉｓｔａｎｃｈｅｔｕｂｕｌｏｓａ （Ｓｃｈｒｅｎｋ．）Ｒ．Ｗｉｇｈｔ的干燥带鳞叶的肉质茎，多年寄生草本植物［１］。其具有补肾阳、益精血、润肠通便之功效［２］，有“沙漠人参”之美誉。现代药理学研究也表明，其具有提高肾功能、抗疲劳、降血压、抗衰老、调节免疫功能等多方面的药理作用［３－４］。德赢vwin登录 因其显著的药理活性在新疆民间有着悠久的应用历史。２００５年日本厚生省批准其为食品应用。开发其相关保健食品有较高的应用价值。但目前德赢vwin登录 还不是国家公布的可以用于保健食品的原料，其安全性及食用剂量是保健产品开发中的难点。本研究通过急性经口毒性试验、Ａｍｅｓ

试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、致畸试验对德赢vwin登录 提取物的安全性进行评价，为其开发应用提供更充分的科学依据。

１　材料与方法

１．１　主要仪器、器材与试剂　ＭＤ２００－３上皿式电子天平，电子称，ＣＸＡ奥林巴斯双瞳显微镜，ＸＴＬ－Ｉ型连续变倍体视显微镜，５００石蜡旋转式切片机，ＴＳ－１２Ｈ生物组织自动脱水机，ＢＭ－ＶＩ生物组织冷冻包埋机，ＬＥＩＴ２２０显微镜，迈瑞ＢＣ－３０００血细胞分析仪，迈瑞ＢＣ－２８００Ｖｅｔ血细胞分析仪，罗氏－４００全自动生化仪。

１．２　方法

１．２．１　急性经口毒性试验　清洁级昆明种小白鼠２０只，体质量１８～２２ｇ，雌雄各半。称取德赢vwin登录 提取物２５ｇ，加灭菌蒸馏水定容至１００ｍＬ，按２０ｍＬ／ｋｇ·ｂｗ，间隔３ｈ，分２次给予，灌胃后连续

观察１４ｄ，记录中毒表现及死亡情况。

１．２．２　小鼠骨髓嗜多染红细胞（ＰＣＥ）微核试验　清洁级昆明种小白鼠５０只，体质量２５～３０ｇ，随机分５组，雌雄各半。采用间隔２４ｈ２次经口灌胃法，设德赢vwin登录 提取物低、中、高剂量（１．５、３．０、６．０ｇ／ｋｇ·ｂｗ）组、阴性对照（灭菌蒸馏水）组、阳性对照（４０ｍＬ／ｋｇ·ｂｗ环磷酰胺，１０ｍＬ／ｋｇ·ｂｗ腹腔注射）组。末次给受试物后６ｈ颈椎脱臼处死动物，常规取材、制片、镜检，每只鼠计数１　０００个骨髓嗜多染红细胞，观察含有微核的嗜多染红细胞数，并计数２００个嗜多染红细胞，观察其与成熟红细胞的比值（ＰＣＥ／ＲＢＣ），计算微核率（‰）。微核率（‰）＝（含微核的嗜多染红细胞数／嗜多染红细胞总数）×１００％。

１．２．３　小鼠精子畸形试验　雄性清洁级昆明种小鼠２５只，体质量２６～３３ｇ，随机分５组。受试剂量、溶液配制及灌胃量均同微核试验，阳性对照（４５ｍＬ／ｋｇ·ｂｗ环磷酰胺）按１１．２５ｍＬ／ｋｇ·ｂｗ腹腔注射，每日１次，连续５ｄ。末次给受试物后３０ｄ处死动物，取副睾滤液涂片，伊红染色，每只动物计数５　０００个结构完整的精子，计算畸变精子发生率（％）。畸变精子发生率（％）＝（畸变精子数／精子总数）×１００％。

１．２．４　Ａｍｅｓ试验　用经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型ＴＡ９７、ＴＡ９８、ＴＡ１００、ＴＡ１０２菌株和多氯联苯（ＰＣＢ）诱导的大鼠肝微粒体酶（Ｓ９）进行试验。设５个试验剂量组（０．００８、０．０４０、０．２００、１．０００、５．０００ｍｇ／皿）及自发回变组、溶剂对照（蒸馏水）组和阳性对照（突变剂）组。阳性剂：－Ｓ９：ＴＡ９７、ＴＡ９８ 为２，４，７－三硝基芴酮（０．２μｇ／皿），ＴＡ１００为叠氮钠（１．５μｇ／皿），ＴＡ１０２为丝裂霉素Ｃ（４μｇ／皿）。＋Ｓ９：ＴＡ９７、ＴＡ９８、ＴＡ１００为２－氨基芴（１０μｇ／皿），ＴＡ１０２为１，８－二羟基蒽醌（５０μｇ／皿）。观察各组回变菌落数变化。

１．２．５　致畸试验　清洁级ＳＤ雌性大鼠１００只，体质量２０８～３８０ｇ，雄性大鼠６０只，体质量３０２～４５０ｇ，雌雄大鼠以２∶１进行交配。每组孕鼠不少于１２只，于受孕的第７～１６ｄ，各组动物分别按德赢vwin登录 提取物０．２５、０．５０、１．００ｇ／ｋｇ·ｂｗ的剂量给予，各组均按１０ｍＬ／ｋｇ·ｂｗ灌胃，溶剂对照为蒸馏水。妊娠第２０ｄ剖腹取出子宫称重，记录并检查死胎数、活胎数，记录胎鼠体质量、体长，检查胎鼠外观有无异常。５０％胎鼠进行骨骼检查，另５０％的胎鼠进行内脏检查。

１．３　统计学处理　数据采用ＰＥＭＳ３．１Ｆｏｒ　Ｗｉｎｄｏｗｓ进行转化和统计分析。先对数据进行方差齐性检验，若方差齐，采用单因素方差分析进行总体比较，发现差异再用Ｄｕｎｎｅｔｔ检验比较各剂量组与对

照组。若方差不齐，改用非参数（秩和检验）进行统计。计数数据采用卡方检验。小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸形试验按Ｐｏｉｓｓｏｎ分布统计处理，检验水准α＝０．０５。

２　结果

２．１　急性经口毒性试验　以１０ｇ／ｋｇ·ｂｗ的剂量灌胃后，未出现任何不良体征，观察１４ｄ，未见明显中毒症状，无死亡。解剖检查主要脏器未见明显异常变化。雌雄小鼠急性经口毒性试验最大耐受剂量（ＭＴＤ）均＞１０ｇ／ｋｇ·ｂｗ。德赢vwin登录 提取物属实际无毒级。

２．２　小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验　经灌胃，雌雄各剂量组小鼠骨髓微核率未发生明显改变（受检ＰＣＥ数为５　０００个），各剂量组小鼠嗜多染红细胞微核率与阴性对照组比较差异无统计学意义（Ｐ ＞０．０５），阳性对照组微核率高于阴性对照组，差异有统计学意义（Ｐ ＜０．０１），即德赢vwin登录 提取物微核试验结果为阴性，见表１。

２．３　小鼠精子畸形试验　各剂量组对雄性小鼠精子畸变率未产生明显改变，各组与阴性对照组比较，差异无统计学意义（Ｐ ＞０．０５），阳性对照组小鼠精子畸变率高于阴性对照组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。表明德赢vwin登录 提取物对小鼠精子未产生畸变作用，见表２。

２．４　Ａｍｅｓ试验　各剂量组回变菌落数均未超过自发回变菌落数的２倍，亦无剂量－反映关系，而阳性对照组明显大于自发回变菌落数，故对鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型ＴＡ９７、ＴＡ９８、ＴＡ１００、ＴＡ１０２　４株菌株，在加与不加Ｓ９时，均未见有致突变作用，见表３。

２．５　致畸试验　各剂量组孕鼠及胎鼠的各项指标及死胎率与对照组相比较，差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）；各组胎鼠内脏检查均未发现有畸形，但各剂量组和对照组动物骨骼检查均发现个别胎鼠胸骨骨化不全。根据ＧＢ１５１９３－２００３中的致畸试验评价标准判定，各剂量组未发现有致畸作用。

３　结论

为了给德赢vwin登录 相关产品开发提供更充分的依据，本研究对德赢vwin登录 提取物的安全性进行了评价，急性经口毒性试验表明德赢vwin登录 提取物最大耐受剂量（ＭＴＤ）＞１０ｇ／ｋｇ·ｂｗ，属实际无毒物；３项遗传毒性试验（骨髓微核试验、精子畸形试验、Ａｍｅｓ试验）结果均为阴性，表明该样品无致突变作用；致畸试验结果为阴性，表明无致畸作用。德赢vwin登录 提取物有较好的安全性，可以用于保健食品的开发。

参考文献：

［１］　国家药典委员会．中华人民共和国药典：一部［Ｓ］．２０１０年版．北京：化学工业出版社，２０１０：１２６．

［２］　侯志华，常国文．肉苁蓉的药理学研究进展［Ｊ］．中国民族医药杂志，２００３，９（４）：３－４．

［３］　金秀莲，张庆荣．肉苁蓉化学成分研究进展［Ｊ］．中国中药杂志，１９９４，１９（１１）：６９５－６９７．

［４］　李勇，熊元君，贾晓光，等．德赢vwin登录 提取物对高盐饲养大鼠血压、红细胞膜流动性及全血黏度的影响［Ｊ］．天然产物研究与开发，２００９，２１（５）：２２０－２２２．