摘要：目的　测定德赢vwin登录 药渣中多糖含量及其抗氧化活性。方法　采用水提醇沉法提取德赢vwin登录 药渣中多糖成分，采用蒽酮硫酸法测定含量，利用二苯代苦味酰基（ＤＰＰＨ）、羟自由基（·ＯＨ）以及铜离子还原能力清除实验综合评价德赢vwin登录 药渣中多糖的体外抗氧化活性，通过红外光谱对多糖进行初步结构鉴定。结果　德赢vwin登录 药渣中多糖含量为０．０２５ ｍｇ／ｇ，当多糖浓度为０．０４ｍｇ／ｍＬ 时，对ＤＰＰＨ 自由基清除率为５９％，Ｖｃ的清除率为８９％，当多糖浓度为０．０３μｇ／ｍＬ时，对铜离子还原能力为６４％，Ｖｃ的还原能力为８８％，当多糖浓度为０．０１５ ｍｇ／ｍＬ时，多糖对羟自由基清除率为７０％，Ｖｃ的清除率为７０％。红外光谱分析表明德赢vwin登录 药渣中多糖提取物中含有α多糖。结论　德赢vwin登录 药渣中多糖含量较高，具有抗氧化活性。

关键词：德赢vwin登录 ；多糖；红外光谱；抗氧化活性

管花肉从蓉为列当科肉苁蓉属植物，主产于我国新疆，在于田、民丰县有大面积栽培，具有补肾精、益精血、润肠道的功效［１－３］。研究表明德赢vwin登录 中含有苯乙醇苷类、环烯醚萜类、木质素类、多糖类及生物碱类等多种生物活性成分［４］，具有抗氧化、增强机体免疫力、保护肝脏、改善大脑记忆力等药理作用［５－９］。本研究采用水提醇沉法提取德赢vwin登录 药渣中的多糖成分，采用蒽酮硫酸法测其多糖含量，运用红外光谱技术对多糖结构进行初步鉴定，通过３种抗氧化模型测定多糖的抗氧化活性，现报道如下。

１　材料与方法

１．１　仪器　ＦＡ１００４型分析天平（上海友声衡器有限公司），Ｔ６新世纪型紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司），ｔｉｇｅ２１ 型红外分光光度计（日本岛津公司）。

１．２　试剂　无水葡萄糖（天津市永大化学试剂有限公司，批号：２０１３０２２５），９５％ 乙醇（天津市富宇精细化工有限公司），蒽酮（国药集团化学试剂有限公司，批号：２０１７０４２０），浓硫酸，二苯代苦味酰基（ＤＰＰＨ，上海梯希爱化成工业发展有限公司），新亚铜（上海梯希爱化成工业发展有限公司），醋酸铵（天津市盛奥化学试剂有限公司，批号：２０１３０４１２），硫酸铜（天津市盛奥化学试剂有限公司，批号：２０１４１１０３），氢氧化钠（天津永晟精细化工有限公司），过氧化氢（天津市盛奥化学试剂有限公司），试剂均为分析纯。

１．３　药材　德赢vwin登录 药渣２０１８年５月购买于新疆金骏阳光生物科技有限公司。

１．４　方法

１．４．１　德赢vwin登录 中药渣中多糖提取方法　将德赢vwin登录 药渣粉碎，用９５％乙醇回流脱脂，在８０℃的条件下按照料液比（１∶１０）回流提取２ 次，每次２ｈ，在８０℃的条件下合并滤液浓缩，用９５％乙醇醇沉，４℃过夜。

１．４．２　多糖含量测定方法　称取葡萄糖样品２０．０ｍｇ于５０ｍＬ 容量瓶中，制成０．４ ｍｇ／ｍＬ 的葡萄糖标准溶液，分别吸取３、４、５、６、７ ｍＬ 置于５０ｍＬ容量瓶，定容至刻度，分别吸取各个浓度梯度的葡萄糖溶液２．０ ｍＬ 于试管中，另取等量蒸馏水作空白对照，在各管加入０．２％硫酸蒽酮（称取０．１ｇ蒽酮加入５０ ｍＬ 浓硫酸）４．０ ｍＬ，用沸水加热１５ｍｉｎ，取出用冷水冷却至室温，在６２０ｎｍ 处测其吸光度值，以吸光度（犃）为纵坐标（犢），葡萄糖浓度（犆）为横坐标（犡），绘制标准曲线，得回归方程犢＝１６．４５犡－０．２０２４（犚２＝０．９９１１）。吸取德赢vwin登录 药渣中粗多糖溶液２．０ ｍＬ 于１０ ｍＬ 具塞试管中，按上述方法测定样品溶液中多糖含量。

１．４．３　红外光谱分析　将多糖与溴化钾按１∶１００的比例均匀混合，充分研磨，取适量用压片机压片，在４０００～４００ｃｍ－１范围内进行红外光谱扫描，对多糖结构进行初步鉴定。

１．４．４　德赢vwin登录 药渣中多糖的抗氧化活性研究

１．４．４．１　ＤＰＰＨ 自由基清除能力测定　称取４０ ｍｇＤＰＰＨ 试剂，用无水乙醇溶解定容于２５０ ｍＬ 容量瓶内，配置成浓度为２×１０－４ ｍｏｌ／Ｌ 的溶液。取５支具塞试管依次加入不同浓度的样品溶液各２ ｍＬ及２×１０－４ ｍｏｌ／Ｌ 的ＤＰＰＨ 溶液，加入１ ｍＬ 无水乙醇使反应总体积为５ｍＬ，摇匀，避光放置３０ｍｉｎ，在５１７ｎｍ 处测定吸光度（Ａｉ），按公式ＤＰＰＨ 清除率／％＝Ａ０－（Ａｉ－Ａｊ）／Ａ０×１００％（式中：Ａ０ 为无水乙醇２ ｍＬ＋ＤＰＰＨ２ ｍＬ＋ 无水乙醇１ ｍＬ 时的吸光度值；Ａｊ 为无水乙醇２ｍＬ＋待测样品２ ｍＬ＋无水乙醇１ｍＬ 时的吸光度值；Ａｉ 为待测样品２ｍＬ＋ＤＰＰＨ２ｍＬ＋无水乙醇１ ｍＬ 时的吸光度值）计算清除率，以Ｖｃ为阳性对照，每组实验重复３ 次，求平均值。

１．４．４．２　铜离子还原能力测定　取０．５ｍＬ 不同浓度的样品液，分别加入０．０１ｍｏｌ／ＬＣｕＳＯ４ 和７．５ｍｍｏｌ／Ｌ新亚铜试剂各０．１２５ｍＬ混合，再加入０．２ｍｏｌ／ＬｐＨ值为７．０的ＮＨ４Ａｃ缓冲液至总体积为１．０ ｍＬ，摇匀，静置３０ｍｉｎ，在４５０ｎｍ 波长处测定吸光度，按公式相对总还原百分率／％＝（Ａ－Ａ０）／（Ａｍａｘ－Ａ０）×１００％ （式中：Ａ０为不加样品时的吸光度值；Ａｍａｘ为在系列样品溶液中溶液浓度最高时的吸光度值；Ａ 为样品在４５０ｎｍ 处的吸光度值）计算还原百分率。以Ｖｃ为阳性对照，每组实验重复３ 次，求平均值。

１．４．４．３　羟自由基清除能力测定　取５支具塞试管依次向其中加入２．０ ｍｍｏｌ／Ｌ 的ＦｅＳＯ４ 溶液２．０ｍＬ，１．０ ｍｍｏｌ／Ｌ 的Ｈ２Ｏ２２．０ ｍＬ，振荡，摇匀，再加入６．０ ｍｍｏｌ／Ｌ 水杨酸３．０ ｍＬ，摇匀，于３７℃水浴加热１５ｍｉｎ，在５１０ｎｍ 处测定吸光度（Ａ０），然后分别向５ 支试管中加入待测样品０．２、０．４、０．６、０．８、１．０ ｍＬ，再分别加入超纯水０．８、０．６、０．４、０．２、０ｍＬ，摇匀，３７℃下水浴加热１５ ｍｉｎ，在５１０ｎｍ 处测定吸光度（ＡＸ），按公式·ＯＨ 自由基清除率／％＝（Ａ０－ＡＸ）／Ａ０×１００％ 计算清除率。以Ｖｃ为阳性对照，每组实验重复３次，求其平均值。

２　结果

２．１　德赢vwin登录 药渣中多糖的含量　按“１．４．２”项下方法测定德赢vwin登录 药渣中多糖含量为０．０２５ｍｇ／ｇ。

２．２　德赢vwin登录 药渣中多糖结构分析　在４０００～６５０ｃｍ－１有多糖类物质的特征吸收峰，在３５００～３２００ｃｍ－１处有１ 个强和宽的吸收峰，为多糖上·ＯＨ的吸收峰。在２９１０ｃｍ－１处出现的峰为ＣＨ的变角振动，和ＣＨ 伸缩振动形成的糖类特征吸收峰。在１６０４ｃｍ－１ 处出现的峰为ＣＯ 吸收峰，在８４０ｃｍ－１处出现的峰为α型糖苷键的特征吸收峰，说明提取物为α多糖。以波数为横坐标（犡），透过

率为纵坐标（犢）绘制红外光谱图，见图１。

２．３　德赢vwin登录 药渣中多糖体外抗氧化活性　当多糖浓度为０．０４ｍｇ／ｍＬ 时，对ＤＰＰＨ 自由基清除率为５９％，相同浓度阳性对照品Ｖｃ 的清除率为８９％；当多糖浓度为０．０３μｇ／ｍＬ 时，对铜离子总还

原百分率为６４％，相同浓度阳性对照Ｖｃ的还原率为８８％；当多糖浓度为０．０１５ ｍｇ／ｍＬ，对·ＯＨ 自由基清除率为６０％，相同浓度阳性对照Ｖｃ的清除率为７０％，见图２－４。

３　讨论

目前对德赢vwin登录 的研究主要集中在其醇提物的化学成分及药理作用方面，如苯乙醇苷类在体外对黑色素瘤细胞抑制率达到９０％以上，对人体内黑色素瘤生长的抑制率达到５０％以上，对德赢vwin登录 水提物的研究主要在多糖成分的提取和含量测定［１０－１４］。本研究对德赢vwin登录 药渣进行二次利用，从药渣中提取多糖类成分，提高了德赢vwin登录 药材的利用率，通过３种抗氧化模型研究德赢vwin登录 药渣中多糖成分的抗氧化活性，为更好地开发利用德赢vwin登录 多糖的生物活性打下了实验基础。

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