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刘德华，朱咏华
（1．湖南农业大学食品科学技术学院，湖南长沙 410128：2．湖南中医学院药学院，湖南长沙 410007）
摘要：为了探讨用组织培养的方法生产肉苁蓉药用成分的可行性，以肉苁蓉的茎片段、花为外植体进行了组织培养试验，结果表明，茎片段，子房外植体在添加2.4-D的培养基上诱导的愈伤组织分别呈块状、颗粒状，都为白色：而在添加KT的培养基上诱导的愈伤组织都呈颗粒状，黄绿色-添加KT，NAA的MT培养基对肉苁蓉愈伤组织的诱导及其生长效果最好，愈伤组织在从外植体母体上分割继代培养前，使愈伤组织与培养基接触培养15d后，有利于愈伤组织的生长。
关键词：肉苁蓉：愈伤组织：诱导
中图分类号：Q949.778.3 文献标识码：A
肉苁蓉 Cistanche salsa（C.A.Mey·）G-Beck是 列当科肉苁蓉属的寄生植物，有人统计，在中医历代增力处方中出现率占第1位肉苁蓉能增强人体免疫力，提高机体耐力，具有较高的药用价值·近几年来，肉苁蓉野生资源遭到了严重破坏，已列为国家2级保护植物；是国家组织种植培养、集中开发的5种中药材之一·通过生物技术方法生产肉苁蓉生理活性成分是生产肉苁蓉药用成分的途径·目前，在肉苁蓉组织培养上，已对Cistanche Deserticda的肉质茎上幼芽、鳞片与Cistanche tubulosa Wight的种子培养进行了培养基的组分、培养环境条件等的研究，但愈伤组织的诱导率较低，生长速率较慢。笔者于2001至2002年着重对青海产肉苁蓉愈伤组织的诱导进行了初步研究，现将结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 材料
盐生肉苁蓉取自青海，以MT培养基的无机成分（无机成分与MS相同，再加入V-B10mg／L，V-Ba 5mg／L，烟酸5mg／L，肌醇100mg／L，甘氨酸2mg／L）为基本成分，添加不同种类、不同质量浓度的固化，pH5.7．所有培养在温度25℃，每天光照时间12h，光照度1500k下进行
表1 培养基组成
Table 1 Composition of media mg/L
培养基 | BA KT | 数素 2.4p NAA | GAS | 其他 | 添加物 |
CH | 活性岚 | ||||
MTe 0 | .17 | 2.00 1.00 | 0.5 | 500 | 30.00 |
MT | 5 | 1 | 1 | 500 | 30.00 |
MT: | 10 | 1 | 500 | 30.00 | |
MT | 5 | 1 | 500 | 30.00 | |
MT | 10 | 1 | 500 | 30.00 | |
MT | 4 | 1 | |||
MT | 4 | 1 | 1 | ||
MT | 4 | 1 | |||
MT | 5 | 1 | |||
MT | 4 | 0.2 | 1 |
1.2方法
1.2.1 愈伤组织诱导培养
肉苁蓉经灭菌消毒洗净，切取花作为外植体F：将茎横切成长约1cm，并纵切成4～8份，取厚约0.5cm的皮层及皮下组织（含鳞片）作为外植体T：在Mo培养基上预培养．20d后，将外植体F纵切成2～4块，作为外植体F1，将外植体F：及外植体T分别置于MTo～MT，培养基上培养，每隔7d观察、记载愈伤组织诱导、生长情况。
1.2.2 愈伤组织继代培养
按照外植体上诱导的愈伤组织在生长过程中是否自然接触培养基生长，将外植体F，T 诱导的愈伤组织各分为2组：由外植体F上诱导的，愈伤组织在生长过程中接触培养基的愈伤组织小颗粒作为外植体FA，不接触培养基生长的作为外植体FB-由外植体T诱导的愈伤组织分割成0.009cm左右的小块：外植体上的愈伤组织在生长过程中，由于体积增大已有部分愈伤组织自然接触培养基生长的，其分割后的小块作为外植体TA：愈伤组织始终在外植体上生长，其边缘也没有接触培养基的分割小块作为外植体TB．置于MTo～MT2．MT～MT，培养基上继代培养，每隔7d观察观察、记载愈伤组织生长情况
2结果
2.1 培养基对诱导愈伤组织的影响
在M。培养基上培养20后，外鲨体T都出境不同程度的褐化，有些甚至变黑·少数外植体开始从
皮层与木质部之间出现愈伤组织，呈白色；外植体F表面没有发现有愈伤组织发生，但大多数花蕾的子房都已膨大、呈白色-外植体Fr.T置于MTe～MT培养基上培养28d后，在MT3～MT；培养基上培养的外植体，其母体及外植体T在MT。培养基上预培养诱导的愈伤组织因褐变死亡，只有在MTo～MT2，MT～MT，培养基上培养的外植体，愈伤组织继续生长或诱导出新的愈伤组织-外植体F1的愈伤组织在子房的内表面发生，都呈颗粒状，表面光滑，在MT。～MT：培养基上诱导的呈白色：；在MT～MT：培养基上诱导的呈浅黄绿色：随着培养的进行，外植体母体逐渐变黑，但愈伤组织继续生长：在外植体母体完全变黑软化后，愈伤组织逐渐褐化·外植体T转至MTo～MT2，MT～MT，培养基上培养后，在MT。培养基上预培养诱导出的愈伤组织继续生长，无愈伤组织的外植体从皮层与木质部之间诱导出了愈伤组织，呈块状；在MTo～MT2培养基上诱导的呈白色：在MT4～MT，培养基上诱导的呈粒状堆积、黄绿色·外植体F1．T都以MT，培养基的愈伤组织生长量最大（表2）
表2 培养基对不同外植体愈伤组织诱导及生长的影响
Table 2 Effects of the media on callus induction and growth in different explant
培养基 | 外植体类 | 盒伤组织形状, | 诱导率 | 愈伤组织 |
色注 | /% | 牛长速度 | ||
MT | 년 | 块状、白色 | 50 | 慢 |
T | 块状、白色 | 33.3 | ||
9 | 块状白色 | 100 | ||
MT: | T | 块状、白色 | 50 | 慢 |
LK | 년 | 块状、白色 | 33.3 | 备 |
T | 块状、白色 | 50 | ||
MT | 년 | 粒状，黄绿色 | 001 | 较快 |
T | 粒状黄绿色 | 33.3 | ||
년 | 粒状黄绿色 | 50 | ||
MT | 1 | 粒状、黄绿色 | 66.7 | 较快 |
MT MT | 년 | 粒状、黄绿色 | 001 | 最快 较快 |
T T | 粒状、黄绿色 粒状、黄绿色 | 66.7 33.3 |
2.2 愈伤组织继代培养
将MT．～MT2．MT～MT，培养基上诱导、生长的愈伤组织转接或分割后分别接至原同样组分的培养基上维代培养，培养6周后的结果表明，外植体FA，TA生长量都不同程度地增加，以MT培养基的生长量最大（表3）-外植体FB．TB在上述培养基上培养28d后，都出现褐化，至42d全部褐化死亡但在对比试验中发现，将原外植体母体连同愈伤组织原封不动转至上述培养基上培养，即使培养时间较长，下部愈伤组织褐化死亡，上部愈伤组织仍继续生长
表3 培养基对愈伤组织生长的影响
Table 3 The influence of the media on callus growth
培养基 | 外植体类型 |
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