王晓雯＇，蒋晓燕，邬利娅＊伊明，王雪飞，阿不都热衣木＊玉苏甫（1．新疆医科大学药理教研室，新疆乌鲁木齐．830054.2．新疆维吾尔医研究所自由基室，新疆乌鲁木齐830001）

摘要：目的 研究肉苁蓉总苷体外清除自由基作用及对OH＊引起的INA损伤的保护作用。方法 采用现代生物化学发光技水，检测内苁蒙总苷对OZ，OHHO2＇O2等自由基的清除作用。并通过G22＋-Hhen-H2OrViC-DNA发光体系 研究肉 苁蓉总苷对OH＊引起的INA氧化损伤的保护作用，结果 内苁蒙总并对O2OH，H2O2O2活性氧自由基均有清除作用，其50％抑制浓度（ICo）分别为0.0731.7.031.0.098.0.1254mg＂ml，对INA化学发光的ICo为0.4211＂gmL，结论 实验结果表明，肉苁蓉总苷能有效地清除各种活性氧自由基能保护CH＊引发的DNA氧化损伤。

关键词：内苁蒙总苷：自由基：DNA损伤

中图分类号：R966：文献标识码：A：文章编号：1001-2494（2001）01-0029-04

肉苁蓉 Cistanche salsa（C.A.Mey）G.Beek.有 补中益气、益精、壮阳之功效，据文献报道肉苁蓉可增强机体免疫力，有延缓衰老等作用，我室研究发现肉苁蓉总苷（glycosides of Cistanche，GCs）对小鼠组织的抗氧化作用及显著降低组织脂褐质含量：对大鼠心肌缺血的保护作用；并具有抗脂质过氧化和抗辐射作用，作者用化学发光法检测GCs的体外清除自由基作用及对OH·引发的DNA氧化损伤的保护作用，以探讨其抗心肌缺血和抗辐射作用的机制.

1 材料和方法

     1.1 材料

1.1.1 药物 肉苁蓉总苷由新疆医科大学药学院植化室按日本文献（公开特许公板（A）昭63-198627）方法。从北疆产盐生肉苁蓉［Cstunche sulsa（C.A.Mey）G.Beek］中提取，主要成分为苯乙醇苷类

1.1.2 试剂 黄嘌呤氧化酶，次黄嘌呤，酵母多糖。鲁米诺（hmnol）.小牛胸腺DNA、邻菲罗啉（Phen）均为Signa公司产品，其余所需试剂均为国产分析纯。

1.1.3 仪器 SHG-1型生物化学发光测定仪（上海市检测技术所检测仪器厂）．HY-4调速多用振荡器（江苏医疗仪器厂），PHHS-25型pH计（上海雷磁仪器厂）。

1.2 方法

1.2.1 超氧阴离子自由基（O）的测定 以黄嘌呤氧化酶-次黄嘌呤-鲁米诺发光体系产生O2，按文献19方法测定，向各测量管中分别加入不同浓度的样品液100，空白对照管加100磷酸钾缓冲液。然后各管加入次黄嘌呤8004，鲁米诺50凡测本底发光强度10-最后注入黄嘌呤氧化酶50L启动发光反应，连续测定扩增的发光强度10s至出现峰值，根据各样品的抑制率求出抑制发光强度50％的样品浓度，即Coo值。

1.2.2 羟自由基（OH-）的测定 以ViC-CasO：-酵母悬液-HO2发光体系产生OH：按文献方法测定，由测量管中分别加入0.3mg＊mlViC 2000.45mg＂mlCusO：4004．酵母菌200円（加时摇匀），然后分别加入不同浓度的样品液600L空白对照管加600川磷酸钠缓冲液，分别测定各管本底发光浓度10s最后注入1％的H202600摇匀，启动发光反应，连续测定发光强度10～至出现峰值，求出1Co值。

1.2.3 过氧化氢（HO2）的测定 以血红蛋白-鲁米诺H：O2发光体系，按文献6］方法测定，向各测量管加入双蒸水650円，空白对照管加双蒸水700円。再分别加入不同浓度的样品液50円，混匀，加鲁米诺100后，测定各管的本底发光强度10s，最后加0.03％H2O2100L 启动发光反应，连续测定反应强度10s至出现峰值，求出样品的ICso值。

1.2.4 单线态氧（O2）的测定 以NaOC1-HbO2-鲁米诺发光体系 按文献［6］方法测定，向各测量管加入pH 8.0.5mmolLNaOH 400（空白管加500 D，鲁米诺504，不同浓度的样品液100＃1．上机测本底发光后，加NaOC1 100，再立即加HO2300円。快速混合，测出10s发光强度，找出发光峰值，反应

体系的总体积为950LpH8.0．求出样品的Cm值。1.2.5 对OH·引起的DNA的化学发光测定 以Gn2-hen-HO2-ViC-DNA发光体系 按文献［7］方法测定，根据要求设管，向各管加入不同浓度的样品液50円（空白管加入等体积的蒸馏水），再加入2mmd-L-＇的Phen 50L，2mmol·L-＇VaC 201.0.2 mnd-L-Cas0250＃10.1mol-L-＇磷酸缓冲液（pH 5.5）730＃1.100g“mL＇小牛胸腺DNA 50，测定本底发光强度6s后，最后加入0.5％的H2O250L启动反应（反应终体积为1mL），测定6s的发光强度，获得发光动力曲线，以抑制发光50％的浓度。表示样品对DNA的保护效果。

1.2.6 数据处理 GC按4-6个不同稀释浓度检测，每个浓度5个样管，取其均数计算化学发光（CL）抑制率，用抑制最大发光强度的半数药物浓度Co表示药物清除自由基作用。

2结果

2.1 对OT的清除作用

按O自由基产生的发光体系用SHG-1型生物发光测量仪，采用R程序立即并连续测出发光强度，以CP 10s最高，依次加入不同浓度的GC，测其对发光峰值的影响，根据峰值计算CCs各浓度的抑制率，求出抑制率与浓度之间的回归方程，再计算C，结果见表1．

表1 CC对O了的清除作用

Tabl The meaging dfeet of CCa on 0

出y-277.69＋3.5hr．-0.858＜0.05.1Cm-7.382x10＊g＊-

结果表明，GCs对O有明显的清除作用。

2.2 对OH的清除作用

按OH·自由基产生的发光体系，测量方法同前。求ICo结果见表2．

结果表明，GCs具有清除OH·自由基作用，

2.3 对O2的清除作用

按产生O2的发光体系，测量方法同前，求C结果见表3．

结果表明，GCs明显清除O2自由基。

2.4 对H2O2清除作用

表2 GC、对CH＊的清除作用

Tab 2 The cavenging efleet d GCsonOH*

注：y-05.66＋11.43s-0.8％P＜00.0-2.01x0-1 (7.031mg*ml-)

表3 GC、对C2的清除作用

Tab 3 The maenging effeet d GCs en b

注：y-28.55＋42.14mmr-0.967P＜00．-1.250x0＊- (0.1254mgm-)

按血红蛋白-鲁米诺-H：O2发光体系，测量方法同前，求ICso，结果见表4．

表4 GC对H：O2的清除作用

Tab 4 The cawnging cflect of CCaen H20

浓度／a-1	发光单值／cp0	控制率％
空白管	29221±2050.39	-
X	7341217.96	99.31
A	19968士2MR．％	92.02
1.67x0-*	7075±718.23	70.53
-8	1387913086.74	44.78
0.5x10-	18276011687.78	上一篇：肉苁蓉总苷药理作用的研究现状 下一篇：肉苁蓉总苷胶囊治疗阿尔茨海默病的临床研究 CONTACT US 联系方式 公司：win德赢官方 地址：新疆和田洛浦县杭桂路232号 公司网址：www.www.wagawa.com 厂家服务热线：0903-6682528 全国服务热线：400-966-8288 在线商城扫一扫购买 SHORTUCT MENU 快捷导航 网站首页 新闻中心 企业荣誉 公司产品 vwin.com 商城 德赢vwinac米兰伙伴 copyright © 2018-2019 www.www.wagawa.com win德赢官方 All rights reserved    新ICP备15002650号-1     网站技术支持：新疆百疆图网络服务有限公司 map