摘要：目的　考察从德赢vwin登录 中提取、纯化苯乙醇总苷类物质的最佳工艺和条件。方法　通过正交试验优化德赢vwin登录 中苯乙醇总苷的提取工艺，并通过筛选大孔吸附树脂、洗脱液，选择最适树脂和最佳纯化条件。结果　苯乙醇总苷的最佳提取工艺为：１２倍６０％乙醇，超声提取３次，每次３０ｍｉｎ，提取率９５％以上，从８种大孔吸附树脂中选出纯化效果最佳的ＤＭ１３０树脂，最大静态吸附量为３４４．４９ｍｇ／ｇ，用６０％乙醇洗脱，解析率达９６％，纯度达９７％。结论　该方法简单易行，周期短，成本低，所得苯乙醇总苷纯度高，对工业生产具有指导意义。

关键词：德赢vwin登录 ；苯乙醇总苷；松果菊苷；大孔吸附树脂

德赢vwin登录 为列当科植物德赢vwin登录 Ｃｉｓｔａｎｃｈｅ　ｔｕｂｕｌｏｓａ（Ｓｅｈｒｅｎｋ）Ｒ．Ｗｉｇｈｔ的干燥带鳞叶的肉质茎，俗称红柳大芸，具有益精血、补肾助阳、润肠通便、延缓衰老等功能［１］，是我国稀有的名贵中药材，在《神农本草经》中被列为上品［２］，为中医常用的补肾壮阳药物，被人们誉为“沙漠人参”。其主要活性成分为苯乙醇总苷类物质［３］，其中的代表成分为松果菊苷和毛蕊花糖苷，《中国药典》（２００５年版）正式收录。国内外的许多专家和学者在德赢vwin登录 的人工种植［４］、化学成分研究［５］、药理作用［２］、加工工艺和产品开发［６－８］等方面进行了大量的研究。本研究考察从德赢vwin登录 中提取、纯化活性成分苯乙醇苷类物质的最佳提取条件，为德赢vwin登录 的大规模生产加工提供科学依据。

１　仪器和材料

ＵＶ１１０２紫外分光光度计（上海天美科学仪器有限公司），ＨＵ１０２５０Ｂ／３３超声清洗仪（天津市恒奥科技发展有限公司），ＡＬ１０４电子天平（德国梅特勒公司）。德赢vwin登录 （新疆博远欣绿生物科技有限公司提供，由新疆中药民族药研究所王果平助理研究员鉴定）。树脂ＤＭ１３０、ＡＢ－８（山东鲁杭立科药物化学有限公司），树脂Ｄ１０１、ＨＰＤ１００、ＨＰＤ６００（沧州宝恩化工有限公司），树脂ＬＳＡ２１、ＬＳＡ１０、ＬＸ３８（西安蓝晓科技有限公司）。色谱纯甲醇购自美国ＴＡＤＩＡ 公司，其它试剂均为分析纯，松果菊苷（批号１１１６７０）对照品购自中国药品生物制品鉴定所。

２　方法与结果

２．１　标准曲线的制定

２．１．１　对照品溶液制备　精密称取松果菊苷１０ｍｇ，置５０ｍＬ容量瓶中，加甲醇至刻度，充分振荡溶解，配制成０．２ｍｇ／ｍＬ的对照品溶液。

２．１．２　供试品溶液制备　按文献［３］的方法制备供试品溶液。

２．１．３　标准曲线的制备［３］　准确吸取松果菊苷对照品溶液０．５、１．０、１．５、２．０、２．５ｍＬ，分别置于２５ｍＬ容量瓶中，加甲醇至刻度，以甲醇为空白对照，照分光光度法（《中国药典》（２００５年版）附录ＶＢ），３３３ｎｍ处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，对照品质量浓度为横坐标，绘制标准曲线得回归方程：Ｙ ＝０．０２２　２　Ｘ ＋０．０１４　６，γ＝０．９９９　９。

２．２　德赢vwin登录 中苯乙醇总苷的提取　选用乙醇溶液为提取溶媒超声提取，对乙醇浓度、溶媒倍数、提取时间、提取次数４个因素进行考察，每个因素各取３个水平（表１）。采用Ｌ９（３４）正交法进行试验。以苯乙醇总苷提取率为考察指标，结果各因素对提取效果的影响程度依次为Ｃ＞Ａ＞Ｂ＞Ｄ，影响最大的是提取次数（Ｃ）和固液比（Ａ），乙醇浓度（Ｂ）和提取时间（Ｄ）的影响较小，综合考虑成本和生产周期，得各因素的最佳水平组合为Ａ３Ｂ２Ｃ３Ｄ２。经３次验证试验，用该工艺条件从德赢vwin登录 中提取苯乙醇总苷，提取率为９５％以上（表２）。

２．３　德赢vwin登录 提取物中苯乙醇总苷的纯化

２．３．１　树脂的预处理　分别用９５％乙醇浸泡树脂ＤＭ１３０、ＡＢ－８、Ｄ１０１、ＨＰＤ１００、ＨＰＤ６００、ＬＳＡ２１、ＬＳＡ１０、ＬＸ３８　２４ｈ，使树脂充分溶胀，然后用９５％乙醇洗涤至流出液中加适量水不变混浊；改用纯化水冲洗至无醇味。然后对树脂进行酸碱处理，再用去离子水洗至滤液ｐＨ 值为中性。

２．３．２　供试液的制备　按“２．２”项条件提取德赢vwin登录 ，合并提取液，浓缩回收乙醇至无醇味，加入适量水后混匀，静置水沉，离心，去除水沉物，收集上清液备用。

２．３．３　大孔吸附树脂的选择试验　将精密称取处理好的树脂ＤＭ１３０、ＡＢ－８、Ｄ１０１、ＨＰＤ１００、ＨＰＤ６００、ＬＳＡ２１、ＬＳＡ１０、ＬＸ３８各１ｇ置带塞三角瓶中，分别加入２０ｍＬ（过量的）德赢vwin登录 提取物溶液，静置过夜。充分吸附后过滤，测定滤液中苯乙醇总苷的浓度，按下列公式计算吸附量：吸附量＝（吸附前浓度－吸附后浓度）×２０／树脂量（ｇ）。过滤后的树脂用足量纯化水洗干净，再用１００ｍＬ　８０％乙醇洗脱，收集洗脱液，测定苯乙醇总苷的浓度。然后将洗脱液浓缩、干燥，测定干燥物中苯乙醇总苷含量，计算解析率。在所有树脂中，ＤＭ１３０对苯乙醇总苷的吸附最好，ＡＢ－８次之。ＤＭ１３０的解析率最高，ＤＭ１３０ 洗脱液干燥物中苯乙醇总苷含量为９８．３２％（表３）。综合以上吸附和解析效果，本研究选择ＤＭ１３０为纯化苯乙醇总苷的树脂。

２．３．４　最大吸附量试验与动态吸附曲线　用德赢vwin登录 提取液配成约４０ ｍｇ／ｍＬ 的溶液，以１．５ＢＶ／ｈ的流速通过１０ｍＬ树脂吸附，收集流出液，测定每１ＢＶ 中的苯乙醇总苷浓度。以流出液体积为横坐标，流出液中苯乙醇总苷浓度为纵坐标，绘制动态吸附曲线，至流出液中苯乙醇总苷浓度与上样液相等为止。用水冲洗至流出液不浑浊，再用６０％乙醇洗脱，收集洗脱液浓缩干燥，测定干燥物中苯乙醇总苷含量。如图１所示，苯乙醇总苷物质从６ＢＶ 开始有少量泄漏，至１０ＢＶ 时吸附达饱和。乙醇洗脱液浓缩干燥后，得动态吸附苯乙醇总苷的最大吸附量为３２３ｍｇ／ｇ。

的增高而增大，２０％、４０％、６０％和８０％乙醇的解析率分别为３２．１％、８９．６％、９５．１％、９５．３％，６０％乙醇与８０％乙醇无明显差异。结合“２．３．４”的结果，选择６０％乙醇为洗脱剂。

２．３．６　动态解析曲线的制备　将德赢vwin登录 提取物配成约４０ｍｇ／ｍＬ的溶液，过树脂吸附，用蠕动泵控制上样速度为１．０ｍＬ／ｍｉｎ（１．５ＢＶ／ｈ），上完样后静置吸附１ｈ。用水冲洗至流出液不浑浊，用

６０％乙醇洗脱，每洗脱１．０ＢＶ 测定其中苯乙醇总苷浓度，以洗脱液体积为横坐标，苯乙醇总苷浓度为纵坐标作图。流出液在１．０ＢＶ 时迅速达到最大值，２．５ＢＶ 洗脱液即可将苯乙醇总苷基本洗脱干净，无拖尾，解析率为９５％（图２）。

２．４　重复验证试验　量取德赢vwin登录 提取浓缩液，用蠕动泵控制上样速度为１．０ｍＬ／ｍｉｎ（１．５ＢＶ／ｈ），上完样后静置吸附１ｈ，用足量的水洗脱未被吸附的杂质，再用２．５ＢＶ８０％乙醇洗脱，控制流速为１．０ｍＬ／ｍｉｎ。收集乙醇洗脱液，浓缩，干燥，测定干燥物中苯乙醇总苷的含量，计算回收率。重复３次，得苯乙醇总苷的平均含量为９７％，平均解析率可达９６％。

３　结论

本研究从德赢vwin登录 中提取苯乙醇总苷，用乙醇溶液为提取溶媒，无毒安全，价格便宜，容易回收再利用；采用超声提取，可以大大缩短生产周期。纯化树脂选用ＤＭ１３０大孔树脂可反复使用，再生简单，吸附量大，所得产品纯度高，回收率高。

参考文献：

［１］　国家药典委员会．中华人民共和国药典：一部［Ｓ］．２０１０年版．北京：中国医药科技出版社，２０１０：１２６．

［２］　陈绍淑，何生虎，曹晓真，等．肉苁蓉药理及化学成分的研究进展［Ｊ］．甘肃畜牧兽医，２００５，３５（３）：４１－４４．

［３］　王丽楠，陈君，杨美华，等．肉苁蓉中苯乙醇苷的含量测定［Ｊ］．西北药学杂志，２００８，２３（２）：６７－６９．

［４］　贾晓光．新疆常用中药栽培技术［Ｍ］．乌鲁木齐：新疆科学技术出版社，２００４：８４－８８．

［５］　贾晓光，谢海辉，李勇，等．德赢vwin登录 化学成分研究［Ｊ］．新疆大学学报，２００７，２４（７）：２１４－２１６．

［６］　卿德刚，张娟，吴涛，等．大孔树脂对德赢vwin登录 中松果菊苷的纯化工艺研究［Ｊ］．中国中医药科技，２０１１，（１８）：４１－４２．

［７］　吴波，付王梅．肉苁蓉提取工艺的正交设计研究［Ｊ］．广东药学，２００４，１４（６）：２９－３１．

［８］　郭雄飞，吴亚东，倪慧，等．德赢vwin登录 不同部位有效成分含量的考察比较［Ｊ］．新疆医科大学学报，２０１２，３５（１）：４８－５０．