摘要本文对德赢vwin登录 中松果菊苷的提取和纯化工艺进行了初步研究。确定了德赢vwin登录 中松果菊苷的最佳提取工艺条件：10 倍量75％乙醇回流提取2 次，每次1h，此条件下德赢vwin登录 提取物中松果菊苷的含量为11.2％。通过HPD- 100 大孔吸附树脂纯化后松果菊苷的含量达到32.8％，回收率为91.5％。

关键词德赢vwin登录 ；松果菊苷；提取；纯化；树脂

德赢vwin登录 [Cistanche tubulosa（Schenk）R.Wight]又称红柳大芸、管花大芸，为列当科肉苁蓉属多年生寄生植物，与药典收载的荒漠肉苁蓉功效相同，具有补肾阳、益精血、润肠燥、通便之功效[1-2]，临床上用于阳痿、不孕、腰膝酸软、筋骨无力、肠燥便秘等症。德赢vwin登录 化学成份主要为苯乙醇苷类、环烯醚萜类[3-4]、木质素类、D-甘露醇、甜菜碱及糖类等成份[5]。本实验对德赢vwin登录 中松果菊苷的提取和纯化进行了初步研究。

1 材料与仪器

1.1 材料与试剂

德赢vwin登录 （新疆和田高辰生物医药科技有限公司），松果菊苷对照品（中国药品生物制品检定所），试剂均为分析纯。

1.2 主要仪器

RE-52AA 旋转蒸发仪；冷冻干燥仪（德国制造）；针筒式微孔滤膜过滤器；SHB-III 循环水式多用真空泵；玻璃层析柱；高效液相色谱仪LC-6AD PUMP，岛津RID-10A，YMC ODS-A Columns（250mm×4.6mm250mm×20mm id）。

2 方法与结果

2.1 松果菊苷标准曲线的绘制

精密吸取对照品溶液适量，注入液相色谱仪，以松果菊苷的峰面积为横坐标，相应的进样量为纵坐标，结合松果菊苷标准品色谱图（图略）绘制标准曲线，得回归方程：y=8.31466×10-7x-0.0246336，r=0.9999245，线性范围：0.904~9.04μg。

2.2 松果菊苷的乙醇正交提取法按L9 （ 34）正交试验设计表的条件进行试验，因素水平设计见表1，结果见表2。

直观分析表明，在所选因素水平范围内，提取次数为主要影响因素，乙醇浓度影响较小，料液比影响最小，试验表明提取时间无统计学意义，可作为空白对照。故确定最优方案为A2B3C2，且75％的乙醇提取2 次，每次1h，料液比1∶10，松果菊苷含量为11.2％。

2.3 松果菊苷的纯化

2.3.1 大孔吸附树脂的筛选静态吸附和解吸实验：将已处理好的3 种湿树脂置于锥形瓶中，将配制好的松果菊苷提取液加入至接近饱和，用水洗至流出液为无色，再用乙醇进行解析，定时取样进行分析，上HPLC 测定并计算树脂的吸附和解析率，结果见表3 表4。

选择树脂时应从两方面来考虑：吸附性能和解析性能，从表3 表4 中数据可以看出，吸附率：HPD-100>D-101>AB-8，解吸率：HPD-100>D-101>AB-8，综合考虑吸附率和解吸率，选择HPD-100树脂。

2.3.2 HPD-100 树脂对松果菊苷纯化性能的考察（1）洗脱剂浓度的选择：取适量肉苁蓉提取物配制成6.1051mg/mL 的上样液20mL，加入处理好的HPD-100 型树脂的层析柱中，依次用3BV （柱体积） 的水和10％、20%、30%、40％、50%、60%的乙醇梯度洗脱，每隔0.5BV（柱体积）收集一次洗脱液，共收集19 份。用HPLC测定。梯度洗脱各管松果菊苷的含量（图略）。水洗液中松果菊苷含量较少，10％、20％乙醇洗脱液中松果菊苷含量明显增加，当浓度为30％时，洗脱液中松果菊苷含量达到最高值，因此，确定30％的乙醇为最佳解吸溶剂，水洗液可忽略不计，故可用水洗除去杂质。（2）泄露曲线的确定：将10g 已处理好HPD-100型树脂装柱（1.5cm），用浓度为24.1mg／mL 的100mL松果菊苷提取液上样进行动态吸附，控制流速1.5BV/h，用试管收集流出液，每隔0.5BV（柱体积）为1 管，共收集19 管，上液相测定松果菊苷含量，计算最大上样量。结果，10gHPD-100 树脂吸附此浓度的肉苁蓉提取液从6.5BV（柱体积）起有泄漏，9.5BV（柱体积）时HPD-100 树脂可达饱和吸附（8.5×11×24.1=2254mg），即1gHPD-100 树脂可吸附0.23g 肉苁蓉提取物。（3）吸附流速的确定：取适量肉苁蓉提取物配制成11.64mg/mL 样品液，分别取5mL 加入处理好的4 个HPD-100 型树脂的层析柱中，3 份树脂分别以0.5、1.0、1.5、2.0mL/min 的流速进行动态吸附，计算松果菊苷的得率。结果见表5。

由表5 可知，流速过快会降低松果菊苷精制收率，流速过慢会增加循环周期，综合考虑控制流速1.5mL／min 较理想。（4）HPD-100 型大孔吸附树脂纯化松果菊苷的工艺验证：采用HPD-100 型大孔吸附树脂，在样品浓度5.5mg/mL，吸附流速1.5mL/min，上样量20mL，依次以3BV（柱体积）水洗、6BV（柱体积）30％的乙醇为洗脱剂的条件下纯化松果菊苷。纯化后德赢vwin登录 提取物中松果菊苷含量由10.6％提高到32.8％，收率为29.4％，纯度为91.5％。

3 结论

德赢vwin登录 中松果菊苷的最佳提取工艺条件为：10 倍量75％乙醇回流提取2 次， 每次1h，1gHPD-100 树脂可吸附0.23g 肉苁蓉提取物，此条件下德赢vwin登录 提取物中松果菊苷的含量为11.2％。通过HPD-100 大孔吸附树脂纯化后松果菊苷的含量能达到32.8％，回收率为91.5％，可用于指导工业化生产。

参考文献

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典.2005 年版一部.北京：化学工业出版社，2005：90.

[2] 孙永强，郑兴国，陆中元，等.新疆肉苁蓉资源人工种植研究初探.干旱区资源与环境，2003，5（17）：3.

[3] Hai Hui -xie，Toshio Morikawa.Monoterpen constituents fromcistanche tubulosa-chemical structures of kankanosides A-E andkankanol. Chem pharm Bull，2006，54（5）：669-675.

[4] 贾晓光，谢海辉，李勇，等.德赢vwin登录 化学成份研究.新疆大学学报（自然科学版），2007，24：214-216.

[5] 刘国钧.肉苁蓉及其人工种植.中国劳动社会保障出版社，2003：119-135.