肉苁蓉Cistanche deserticola Y. C. Ma 又名荒漠肉苁蓉,为列当科肉苁蓉属植物,其带鳞叶的干燥肉质茎作为中药肉苁蓉使用,是《中华人民共和国药典》收载的正品。肉苁蓉味甘、性温,具有“补肾阴益精血,润肠通便”之功效,可用于治疗男子阳痿、女子不孕、腰膝冷痛、血枯便秘等[1 ]。近年来中药肉苁蓉因具有显著的改善记忆、抗衰老、抗疲劳、增强机体免疫等功能而备受人们关注,其化学成分及药理作用报道较多[2, 3 ]。而文献检索表明,新鲜荒漠肉苁蓉的相关研究则较少,仅屠鹏飞等人研究过其鲜花序的正丁醇萃取物的化学成分[4 ]。笔者在对新鲜肉苁蓉化学成分的系统研究中,发现其石油醚提取物和醋酸乙酯提取物均具有一定的抗肿瘤活性。本实验用GC-M S对石油醚提取物的化学成分进行分析鉴定,同时用流式细胞术检测其对小鼠乳腺癌ts FT210细胞的周期抑制活性。

1　实验部分

1. 1　仪器、试剂及样品: GC-MS联用仪英国V G公司, Fi so ns MD800GC /MS型。采用小鼠乳腺癌t s-FT210细胞。流式细胞术采用美国BD公司Va ntage型流式细胞仪,细胞在细胞周期各时相中的分布利用Mod Fit LT软件分析计算。胎牛血清( FBS)和RPMI-1640 细胞培养基分别为Hyclo ne 公司( Cat. No. STF721)和Gibcobrl公司产品,碘化丙啶( PI)和Tri ton X- 100均为Sigma公司产品。新鲜肉苁蓉药材采于内蒙古阿拉善盟,经中国海洋大学海洋药物与食品研究所刘红兵老师鉴定为肉苁蓉C. desert icola Y. C. Ma 带鳞叶的肉质茎。

1. 2　样品的提取: 新鲜荒漠肉苁蓉药材450 g 切碎后,用沸程30～ 60℃的石油醚2 000 mL渗滤,低温减压回收溶剂,再经无水硫酸钠干燥,得黄色透明液体,密封保存于- 10℃冰箱中备用。收率为0. 93%。

1. 3　石油醚提取物的GC-M S分析: 气相色谱条件: 色谱柱为30QC2 /AC5石英毛细管柱( 30 m×0. 32 mm) ; 柱温80～ 280℃ ,程序升温3℃ /min; 分流比30∶ 1; 气化室温度240 ℃ ; 柱前压82. 8 kPa;载气为高纯N2。

质谱条件: EI-MS, 电子能量70 eV; 离子源温度200℃ ; 灯丝电流4. 1 A;质量范围35～ 450m /z;扫描周期1 s; 数据处理用LAB-BASE系统,使用美国国家标准局NBS库检索,并参考文献加以确认。

1. 4　抗肿瘤活性测试: 参照文献方法[5 ] , 利用流式细胞术检测荒漠肉苁蓉石油醚提取物对t sFT210细胞的周期抑制活性。

2　结果

2. 1　石油醚提取物化学成分鉴定: 经GC-MS联用仪分析鉴定,荒漠肉苁蓉的石油醚提取物共检出46个峰,用美国国家标准局NBS库检索,并参考文献加以确认, 共鉴定出25 个化合物, 占峰面积的75. 03% ,结果见表1。结果显示,酯类和烷烃类化合物为肉苁蓉石油醚提取物的主要成分。其中质量分数最高的是14-甲基-十五烷酸甲酯( 13. 61% ) ,其次为十六烷酸乙酯( 12. 39% )和2, 5, 6-三甲基-辛烷( 7. 60% )。

2. 2　抗肿瘤活性: 流式细胞术检测结果表明,荒漠肉苁蓉石油醚提取物在10μg /mL时对tsFT210细胞有明显的G0 /G1 期抑制活性(图1)。

3　讨论

目前,肉苁蓉的生物活性研究主要集中在改善记忆、抗衰老、增强机体免疫功能等方面,在抗肿瘤方面尚无报道。本实验首次利用流式细胞术初步评价了新鲜荒漠肉苁蓉石油醚提取物对小鼠乳腺癌t sFT210细胞周期抑制活性,并利用GC-MS 对其化学成分进行分析。在荒漠肉苁蓉石油醚提取物中,主要为烷烃类和烷酸酯类及少量的酚类和环己酮类化合物,关于这些化合物的抗肿瘤活性尚未见报道。因此,关于荒漠肉苁蓉石油醚提取物中的抗肿瘤活性成分,还有待进一步研究才能确定。

致谢: GC-MS由昆明植物所丁靖垲教授测定。

Ref erences:

[1 ]　Jiangsu New Medi cal Coll ege. Dict ionar y of Chinese Ma teriaMed ica (中药大辞典) [M ]. Sh anghai: Sh angh ai Peopl e′sPublishing House, 1997.

[2 ]　Song Z H, Lei L, Tu P F. Advances in res earch of ph armacological activit y in plan ts of Cistanche Hof fing. et Link [ J].Ch in Tra dit Herb Dru gs (中草药) , 2003, 34( 9): 16-17.

[3 ]　Zhang L H, Du N S. Advances in res earch of ch emical constituents in plant s of Herba Cistanche [ J ]. Ch in Trad it PatMed (中成药) , 2003, 25( 4): 323-327.

[4 ]　Tu P F, He Y P, Lou Z C. Studi es on the ch emical constituent s of th e f resh inf lo rescences of d esert living ci st anche(Cistanche d esert icola ) [ J] . Ch in Trad it Herb Drugs (中草药) , 1994, 25( 9): 451-452.

[5 ]　Liu H B, Cui C B, Cai B, et al . Is olation , identi fication andanti tumor activi t y of t rit erp enes f rom Pterocar ya tonkinesis( French. ) Dode [ J] . Ch in J Med Chem (中国药物化学杂志) , 2004, 14( 3): 168-170.