邬利娅·伊明厂，王晓雯＇，王雪飞＇，海力曼·依拉洪2，谢瑶芸2，堵年生（新疆医科大学药学院药理学教研室，基础医学院电镜室，药学院天然药物化学教研室，新疆 乌鲁木齐 830054）

摘要：目的：探讨肉苁蓉总苷（GCs）时阿霉素（Dox）所致小鼠心肌损害的保护作用及其机制，方法：选用NIH小鼠一次腹腔注射 Dox（17.5mgkg）造成急性心肌损伤模型，测定心肌超氧化物歧化酶（SOD）活性；硒谷胱苷肽过氧化物酶（Se-GSH-Px）活性：丙二醛（MDA）含量及血清肌酸磷酸激酶（CPK）活性电镜检查心肌细胞超微结构的改变 结果：腹腔注射 Dbx 48h后可致小鼠心肌明显损害，心肌 SOD及 Se-GSH-A活性下降，MDA含量升高，血清中CPK的活性增强同时出现心肌组织超微结构的损伤 CCs（62.5 125.0 250.0mgkg）能增加心肌SOD Se-GSH-Px活性，降低 MDA含量，减少CPK释放减轻心肌超微结构的损伤 结论：肉苁蓉总苷对阿霉素所致心肌损害有一定的保护作用，其机制可能与其保护心肌 SOD及 Se-CSH-P活性及其清除自由基，防止脂质过氧化有关

关键词：阿霉素；肉苁蓉总苷；心脏毒性；脂质过氧化；肌酸磷酸激酶；超微结构

中图分类号：Q949 752.7：R978.1：R-332 文献标识码：A 文章编号：1009-5551（2003）01-0028-03

阿霉素（Dox）属葱醌类抗生素，对多种恶性肿瘤具有良好的疗效，但由于其具有急，慢性心肌毒性作用，限制了Dox在临床上的广泛应用。已知Dox的抗肿瘤作用为影响 DNA复制及 RNA合成，而其心脏毒性则与半醌阿霉素诱导的脂质过氧化损伤有关因此，寻找自由基清除剂和抗氧化剂拮抗Dox的心脏毒性，而保留其抗肿瘤活性具有重要意义 肉苁蓉总苷（GCs）是从肉苁蓉中提取的活性成分。有关的研究发现，GCs对小鼠组织有抗氧化作用，可显著降低脂褐素含量对大鼠心肌缺血有保护作用“，并具有抗脂质过氧化和抗辐射作用本研究旨在探讨 GG对 Dox所致小鼠心肌损伤的保护作用及其机制

1 材料与方法

1.1 药品与试剂 GCs从新疆北部产盐生肉苁蓉中提取，主要成分为松果菊苷、麦角甾苷等苯乙醇苷类（新疆医科大学药学院天然药物化学教研室提供）；四甲氧基丙烷（TMP Sigma公司）：阿霉素（Dox，浙江海正药业股份有限公司）；维生素 E（VitE.上海延安制药厂）；其他试剂均为国产。

1.2 实验器材 721型分光光度计（上海第三分析仪器厂）；OLYMPUS显微镜（日本产）；JEM-100CXII透射电镜（日本产）；pHS-250型酸度计（上海雷磁仪器厂）

1.3 动物分组与给药 NIH小鼠由新疆地方病研究所动物实验中心提供，医学实验动物合格证编号：16-068号，选NIH小鼠 138只，体重（24±2）g，雌雄各半。随机分为6组（每组23只）：

（1）对照组：生理盐水（NS）20ml／kg；

（2）Dox 损伤组 NS 20ml／kgs

（3）VitE组：VitE 100mg／kg

（4）GC4组： GCs 62.5mg／kg

（5）GCm组：GCs 125.0mg／kg 

（6）GCm组：GCs 250.0mg／kg，

   以上各组均灌胃给药，每日1次 Dox损伤组、VitE组、GC组、GCm组，GCm组于给NS及 GCs后第4天腹腔注射 Dox17.5mg／kg 48h后，摘眼球取血制备血清，并立即处死动物取出心脏，NS冲洗，用滤纸吸干后称重，在水浴条件下，用NS制备心肌匀浆，离心，3500r／min．30min．取上清液测生化指标 每组余3只小鼠，取心脏制作电镜标本

1.4 生化指标的测定 采用邻苯三酚自氧化法测定心肌超氧化物歧化酶（SOD）活性；采用 DTNB法”测定心肌硒谷胱甘肽过氧化物酶（Se-GSH-Bx）活性；采用TBA法测定心肌脂质过氧化产物丙二醛（MDA）含量；蛋白质定量采用 CBB-SDS法”：采用 CPK法测定血清肌酸磷酸激酶（CPK）活性。

1.5 心肌组织的电镜检查 取心尖部采用4％戊二醛和％钱酸双重固定，丙酮脱水，Epon812包埋铅铀电子染色，JEM-100CXI透射电镜观察。

1.6 统计学处理 所有数据以士s表示，实验数据经方差齐性检验后，采用F检验及q检验进行统计学处理。检验水准a＝0.05

2 结果

2.1 GCs对 Dox损伤心肌生化指标的影响 见表1

21.1 GCs对 Dox损伤心肌 SOD活性的影响Dox损伤组较对照组心肌 SOD活性降低 41.1％（P＜0.01）．GC4·GC＊、GCm组及 Vit E组心肌SOD活性分别较 Dox损伤组增加 30.9％、33.2％．36.5％和34.9％（P均＜0.01），GCm组接近对照组（P＞0.05），其余各组均低于对照组

2 1.2 GCs对 Dox损伤心肌 Se-GSH-P活性的影响 Dox损伤组与对照组相比心肌 Se-GSH-Px活性降低26.2％（P＜0.01），GCs、GCa、GCm组及 Vit E组分别较 Dax 损伤组增加 19.2％．21.1％、25.0％和26％（P均＜0.01），均接近于对照组（P＞0.05）

21.3 GCs对 Dox损伤心肌 MDA含量的影响Dox损伤组 MDA含量较对照组增加25.8％（P＜0.01），GC4、GCa、GCm组及 VitE组分别较 Dax损伤组降低 167％、17.36、18.6％和 17.3％（P均＜0.01），均接近于对照组（P＞0.05）

2.1.4 GCs对 Dox损伤小鼠血清CPK活性的影响 Dox损伤组血清 CPK活性较正常组增加87.3（P＜0.01），GC4，GCa、GCm组及 Vit E 组分别较 Dox损伤组降低 26.6％、33．％、37.4％和36.7％（P均＜0.01），均高于对照组

表1 GC对 Dox损伤心肌生化指标的影响

注：与对照组比较＊P＜0.01与Dox损伤组比较＊P＜0.01

2.2 小鼠心肌的电镜检查

22.1 对照组 心肌纤维肌膜完整，肌原纤维排列有序.肌节各带结构清晰，线粒体排列整齐，结构正常，核结构正常

2.2.2 Dox 损伤组 可见心肌纤维超微结构有明显改变，心肌细胞肿胀，胞浆内肌节增长，明带增宽，部分区域出现异常收缩带，Z线物质增多，线粒体弥漫性肿胀，增生 婚排列稀疏，有断裂，空泡变性。肌浆网扩张，次级溶酶体增多，可见灶性变性，核体积增大，核周隙增宽。

22.3 GCJ组 心肌纤维肿胀有所减轻，肌节结构基本正常，但肌节仍较对照组宽，线粒体肿胀有所减轻，基质密度增强，嵴密度增高，个别线粒体嵴仍有改变。胞质内次级溶酶体增多。

224 GClI、I组 心肌纤维结构基本恢复正常。肌原纤维排列整齐，肌节结构正常线粒体结构恢复正常

反应或 Fenton反应产生羟自由基（OH）05和OH大量蓄积，可造成组织 细胞膜发生脂质过氧化反应，引起生物大分子损伤！

实验中观察到，给小鼠1次腹腔注射 Dox（17.5mg／kg）48h后，小鼠心肌自由基清除酶 SOD及Sc-GSH-Px活性显著降低，脂质过氧化产物 MDA含量明显升高，血清 CPK活性增加 电镜下呈现心肌超微结构损伤，表现为线粒体明显肿胀，崎断裂，空泡变性，基质密度降低，肌浆网扩张等

GCs各剂量组均能显著提高 Dox损伤小鼠心肌自由基清除酶 SOD Se-GS H-Px活性，降低 MDA含量，减少 CPK释放 提示CC-通过提高机体内自由基清除酶的活性而减少 Dox诱导产生的脂质过氧化损伤。CCa、CCm组显著保护心肌纤维的超微结构不受 Dox的损害。在体外用现代生物化学发光分析技术检测，发现 CCs能有效清除05.0H，HO：等活性氧自由基，其中对05的清除作用尤其显著門！提示GC-能清除半醌 Dox在心肌中诱导产生的（五，从而中断自由基链锁反应，起脂质过氧化链的阻断剂作用

3 讨论

（LOO°），使之变为脂氢过氧化物（LOOH），后者再由GSH-Px分解成无毒的羟化物，阻止了自由基对生物膜中不饱和脂肪酸的过氧化，从而减轻 Dox对心肌细胞的损害，其机制还有待深入研究.

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