摘要：目的 研究肉苁蓉总苷（Gleosides of cistantho GCs）对P淀粉样肽（β-AP）所致阿尔采末病（AD）模型小鼠的保护作用，并探讨其作用机制。方法 采用小鼠脑室内一次性微量注射B-APn诱发βAP在脑内的沉积，造成AD小鼠模型。10d后，一次性训练被动回避跳台实验测定 AD小鼠

学习记忆能力：检测脑组织 SOD活性，MDA含量及GSHPx活性：电子显微镜检测脑组织神经细胞的病理变化：TUNEL法检测脑细胞调亡：免疫组化 SABC法检测 Bax／Be12的表达。结果 GCs可提高βAP所致 AD小鼠学习记忆水平：

降低脑组织 MDA含量，提高SOD及GSHPx活性；使脑组织中某些病理改变得到改善；降低脑细胞调亡率；使Bax的表达减弱，Be12的表达增强。结论 GCa对淀粉样肽所致AD小鼠学习记忆能力提高，其作用机制可能与其增强自由

基清除酶活性，防止脂质过氧化作用，抑制P-AP在脑内的沉积及抑制脑细胞调亡有关。

关键词：肉苁蓉总苷；阿尔采末病；淀粉样肽；自由基；细胞调亡

阿尔采末病（AD）是老年期发生的一种以进行性认知障碍和记忆损害为主要特征的脑退行性疾病。其病理改变以老年斑（SP），神经纤维缠结（NFT）和神经元的丢失为主要特征＂。由于其病因及发病机制不清，目前尚缺乏肯定有效的治疗手段。研究发现AD患者脑内细胞外沉积的凝聚态的β定粉样肽（β-anyloid peptilo β-AP）具有神经毒，可引起动物学习记忆减退和认知功能障碍，还可出现神经退化和死亡，因此，此模型常用于AD发病机制的研究和药物筛选工具，肉苁蓉（beita cistanch-e6）俗名大芸，为列当科植物，是一味著名的补益中药，具有补肾阳，益精血，润肠通便，抗衰老，抗氧化等方面功效问，肉苁蓉总苷（ghconiles ofcisanche GCs）是从南疆德赢vwin登录 中提得，主要成分是苯乙醇总苷，本课题组多年来已对GCs的抗氧化＂，清除自由基，抗衰老＂等药理作用进行了深入的研究。本文旨在研究GCs对β-AP造成的AD小鼠的学习记忆的影响，并探讨其作用机制。

1 材料与方法

11 药品与试剂 肉苁蓉总苷，由新疆医科大学药学院植物化学室按日本文献（公开特许公报（A）昭63498627方法，从南疆德赢vwin登录 中提得，主要成分是苯乙醇苷类：β-APsa购自 Signa公司，以灭菌生理盐水溶解，浓度为1.0mmel·L密封后放37C培养箱中1wk维生素E系上海建安制药厂生产：考马斯亮蓝、MDA，SOD、GSHPx测试试剂盒，购自南京建成生物工程研究所；细胞凋亡原位检测试剂盒为德国宝灵曼公司产品。Bax（P-19），Bcl（N-19）免抗鼠多抗系美国 Sanh C mz Bitechnology 公司产品，SABC免疫组化染色试剂盒系武汉博士德生物有限公司产品，DAB购自 Sigma公司。

1.2 模型制备及试验分组：

121 模型制备 NH小鼠，含，体重（22±2）g由新疆医科大学实验动物中心提供（合格证：医动字：第16-003号）。小鼠用水合氯醛（400mg＊kg）腹腔注射后，以75％乙醇消毒后在其双耳前缘连接线中点偏右1mm处用微量注射器垂直注入凝聚态的β-AP2P1对照组注入等量生理盐水，注入时间2mb留针2mm起针局部消毒后缝合皮肤。

1.22 试验分组 采用分层随机法随机将动物分为6组：①生理盐水对照组（假手术组）；②β淀粉样肽组（模型组）：③维生素 E组：（阳性对照组）50mg·kg；④GCs不同剂量组：62-5,125,250mg＊ kg．于造模手术前7d开始灌胃给药，假损伤组及模型组给蒸馏水，每天1次，共174

1.3 现察指标及检测方法

http://www.cnk 装置为 80cmx16mx40m的茶色有机玻璃箱，箱底铺有铜栅作为刺激电极，内设高4.5cm直径6.5cm的橡皮垫作为回避电击的安全平台。先放入小鼠适应5mn随后通以36V交流电，小鼠遭到电击后跳上安全平台，如从台上跳下，双足接触铜栅为错误反应。记录3mm内出现的错误反应数。24h后重测验，以小鼠学习和次日重测验（记忆）过程中出现的错误反应次数来评价学习记忆能力。

1.32 生化指标 于造模后10d新头取脑，制成10％脑匀浆，按试剂盒说明书测定SOD活性、MDA含量，GSH-Px活性。考马斯亮蓝 CBB-SDS法进行脑组织蛋白质含量。

13.3 脑组织病理观察 实验动物用10％甲醛溶液灌流固定30mim取脑组织小于1mm：取材后4％戊二醛和1％饿酸固定1h：Epon812包埋，铀-铅双染或不经复染，电镜观察并摄片。

134 脑组织细胞凋亡的测定 采用TUNEL法，术后10d断头取脑，用10％甲醛溶液固定。石蜡切片，常规脱蜡脱水处理，滴加 TUNEL反应混合物，37C孵育60min滴加转化剂-POD．37C孵育 30mn滴加DAB底物溶液，室温孵育5～20min光镜下观察结果。

135 免疫组化 SABC法检测 Bax Bcl-2的表达操作程序按免疫组化 SABC染色试剂盒说明书进行。

136 Bax／Be12免疫组化半定量标准 阴性

（一）：无表达；弱阳性（十）：在若干细胞内表达，阳性细胞占整个视野的0～25％，着色浅；阳性（十十）：阳性细胞占整个视野的25％～50％，着色强度中等：强阳性（卅）：阳性细胞占整个视野的50％以上，着色深。

137 统计学处理 采用SPSS11.5统计软件包，结果用土。表示。两组及多组样本均数比较进行单因素方差分析。方差齐时，两两比较采用 LSD法：方差不齐时，两两比较采用Dunnets＇sC法。

2 结果

21 GCs对β淀粉样肽所致AD小鼠模型被动回避反应能力的影响 在跳台实验学习和重测实验中，与假手术组相比，模型组出现的错误反应次数增多（P＜0.01），表明β-AP注入小鼠脑室破坏小鼠的被动回避反应能力；与模型组相比，GC-组和维生素E组，减少错误次数（P＜0.01）。见Tab 1．

22 GCs对β淀粉样蛋白肽所致AD小鼠模型脑0.01），SOD活性降低（P＜0.01），MDA含量增高

（P＜0.01）；与模型组相比，GCs组和维生素E组GSH-Px活性增高（P＜0.05，P＜0.01），SOD活性＜0.05．P＜0.01）．MDA含量降低（P＜0.05.P<0.01).Tab 2.

Tabl Efeet afGC.m ming and mmary

he Alhenersdesemice indured by brah bsns

**p<0.01tlgp"p<0.01 vamodelgroup

Tah 2 EfeetafGC.on hrah M DA contens SO D sctivy and GSH-Pr sctivity n the Aheeed beaen ice indaeed

23 GCs对β淀粉样肽所致AD小鼠模型脑组织细胞凋亡的影响 细胞调亡时，TUNEL法检测，光镜下可看到凋亡细胞呈黄褐色，而正常脑细胞呈蓝染，实验结果显示，β-AP注射侧脑室10d后，即可见许多凋亡细胞，GCs组和维生素 E组凋亡细胞明显少于模型组（400倍）。见Tab 3．FgL