细胞培养至对数生长期时分别加入上述各组药物，每日1次。培养96h时，模型组、银杏叶片组和GCs各剂量组分别加入终浓度为20 μmol-L-的Aβss，正常对照组以等体积培养基替代。

MTT比色法测定细胞存活率取96孔板，细胞培养井分组，Aβs．m诱导24h和48h后，常规MTT法测定，计算PC12细胞存活率。吸收光波长为570nm。每组设8个复孔，实验重复3次。

分光光度法检测细胞中LDH活性 另取96孔板，细胞培养并分组，Aβxm诱导24h和48h后，分别收集细胞上清液，精密吸取上清液0.02ml。按LDH试剂盒说明书操作，计算各组细胞上清液中LDH 活性。吸收光波长为440mm。每组设12个复孔，实验重复3次。

流式细胞术 Annexin V／PI法检测细胞凋亡 取25ml培养瓶，按上述方法培养细胞并分组，收集细胞悬液，将细胞悬浮于1xAnnexin V混合缓冲液中。取细胞悬液100μL，按调亡检测试剂盒说明书操作，流式细胞仪测定细胞凋亡率。

统计学处理 数据以王±：表示，使用PEMS3.1统计软件处理。采用方差分析，两两比较，P＜0.05为有显著差异。

结果

细胞的形态及生长情况 光镜下观察可见，模型组PC12细胞数目显著减少，细胞接触松散，部分细胞皱缩，变圆、脱落的细胞数目较多，诱导48h比24h产生变圆、脱落的细胞数日更多。见图1。与模型组相比，银杏叶片组和GCs各剂量组细胞数目显著增多，细胞接触紧密，贴壁生长旺盛，少量细胞皱缩，变圆、脱落的细胞数目明显较少，受损程度明显较轻。GCs低、中、高剂量组中存活的细胞，随GCs剂量的增高，皱缩、变圆、脱落的细胞数目呈明显减少。

细胞存活率 Aβzsa诱导PC12细胞24h及48h后，与正常对照组比较，模型组PC12细胞的存活率显著降低（P＜0.01），诱导48h后的存活率低于24h。与模型组比较，作用24h后，银杏叶片组和GCs各剂量组的细胞存活率均显著增加（P＜0.01）．GCs中剂量组细胞的存活率与低剂量组无显著差异（P＞0.05），GCs高剂量组细胞的存活率高于中剂量组（P＜0.05）。但作用48h后，GCs高剂量组细胞的存活率与中剂量组相比无显著差异（P＞0.05）。作用48h后CCs各剂量组细胞的存活率均显著低于作用24h（P＜0.01）。见表1。表1各组PC12细胞的存活率及乳酸脱氢酶（LDH）活性检测结果

单国素方差分析，两两比较；与模型组比较，P＜001：与CC低剂量组比较。甲＞0.05．P＜0.05，甲＜0.01：与GC中制量相比，中＞0.05．P＜0.05，P＜001：与两导24h后检测比数，P＜0.01

图1 光镜观察不同处理后PC12细胞的形态变化（x160）（24％），D：正常对照期（48％），E：模型组（48％），F：CG真量型（48％）

细胞中LDH活性情况 Aβsm诱导PC12细胞24h和48h后，与正常对照组比较，模型组PC12细胞的LDH活性显著增加（P＜0.01），诱导48h后LDH的活性高于24h。与模型组比较，GCs各剂量组和银杏叶片组细胞的LDH活性显著降低（P＜0.01）。作用24h和48h后，GCs中剂量组细胞的IDH活性低于低剂量组（P＜0.05或P＜0.01），GCs高剂量组细胞的LDH活性低于中剂量组（P＜0.05或P＜0.01）。作用48h后GCs各剂量组细胞的LDH活性显著高于作用24h（P＜0.01）。见表1。

细胞的凋亡率 与正常对照组细胞的凋亡率（24h：1.8％，48h：10.1％）比较，模型组细胞的凋亡率显著增加（24h：26.7％，48h：51.0％）。与模型组比较，GCs低剂量组细胞的凋亡率（24h：20.1％，48h：32.4％）、中剂量组细胞的调亡率（24h：14.9％，48h：26.9％）、高剂量组细胞的调亡率（24h：10.3％，48h：18.3％）均显著下降，与银杏叶片组细胞的调亡率（24h：11.8％，48h：15.6％）相似。

讨 论

本研究利用体外培养的PC12细胞经Aβs．s诱导成功建立AD细胞模型，检测不同剂量CCs对细胞存活率、LDH释放量和细胞调亡率的影响。结果显示，Aβsis（20μmol-L-）可诱导PC12细胞膜损伤，使细胞存活率下降，细胞LDH活性增高、细胞凋亡率增加，与文献［6］报道一致。与模型组相比，GCs各剂量组细胞数目显著增多，生长状态明显改善。随GCs剂量的增高，PC12细胞的存活率增高，LDH活性下降，细胞凋亡率降低。提示，GCs对Aβsm诱导PC12凋亡细胞具有抑制作用，且对损伤的神经细胞有保护作用。其中，高剂量GCs作用48h效果最明显。

研究表明，Aβ聚合成不溶性纤维时，会促使细胞外自由基生成，导致细胞器、细胞膜和细胞骨架受到损伤，引起细胞凋亡”。而自由基的生成是AD发生的重要因素网。已有报道称，Aβsss可使PC12细胞中调亡抑制基因bax的表达增强＂。研究证实，GCs具有体外清除自由基的作用，能提高Aβ所致AD模型小鼠的学习记忆力，防止脂质过氧化作用，使bax表达减弱、bcl-2表达增强m。因此，GCs对Aβxs诱导PC12凋亡细胞具有保护作用，其机制可能是通过促使bax表达减弱、bcl-2表达增强，从而抑制细胞凋亡。关于GCs对Aβsn诱导PC12凋亡细胞与bcx／bel-2的关系将进一步研究证实。

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