摘　要：目的：对肉苁蓉药材中松果菊苷、毛蕊花糖苷含量进行测量不确定度评定。方法：参考《化学检测领域测量不确定度评定利用质量控制和方法确认数据评定不确定度（ＲＢ／Ｔ　１４１－２０１８）》，通过安达森

－达林检验验证测量系统，应用期间精密度及方法确认数据，计算出期间精密度不确定度分量ｕＲ′、偏倚不确定度分量ｕｂ、合成标准不确定度ｕｃ与扩展不确定度Ｕ。结果：经过安德森－达林检验，证明测量系统符合正态性与独立性假设，质量控制数据与期间精密度数据可用于不确定度计算。结论：期间精密度和方法确认数据可用于检验实验室对肉苁蓉药材中松果菊苷、毛蕊花糖苷含量的测量不确定度评定，此评定方法也可用于其他药材的含量测量不确定评定。

关键词：质量控制；方法确认数据；肉苁蓉；松果菊苷；毛蕊花糖苷；不确定度评定

肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉Ｃｉｓｔａｎｃｈｅ　ｄｅｓｅｒｔｉｃｏｌａ　Ｙ．Ｃ．Ｍａ或德赢vwin登录 Ｃｉｓｔａｎｃｈｅ　ｔｕｂｕｌｏｓａ （Ｓｃｈｅｎｋ）Ｗｉｇｈｔ的干燥带鳞叶的肉质茎［１］，被誉为“沙漠人参”，是中国传统的名贵中药材［２－５］。在２０１５年版《中华人民共和国药典：一部》中规定，松果菊苷、毛蕊花糖苷是肉苁蓉药材的含量测定指标，其含量检测采用高效液相色谱法进行测定。松果菊苷、毛蕊花糖苷作为肉苁蓉药材的质量控制指标，评定其含量测定不确定度对于评价肉苁蓉药材的质量有着重要意义。按照《化学检测领域测量不确定度评定利用质量控制和方法确认数据评定不确定度（ＲＢ／Ｔ　１４１　２０１８）》［６］，在期间精密度测量条件下，获得肉苁蓉的质量控制结果和方法确认数据，应用安德森－达林统计检验对测量系统正态性与独立性假设进行检验，对期间精密度不确定度分量ｕＲ′和偏倚不确定度分量ｕｂ进行合并，最终计算出样品水平下的合成标准不确定度ｕｃ与扩展不确定度Ｕ［７］，以一种相对简单的方法对肉苁蓉药材中松果菊苷、毛蕊花糖苷含量的测量不确定度进行了评定。

２　肉苁蓉药材含量检测

肉苁蓉药材的含量检测参照２０１５年版《中华人民共和国药典：一部》“肉苁蓉”项下“含量测定”进行：色谱条件与系统适用性试验：以Ｃ１８键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相Ａ，以０．１％甲酸溶液为流动相Ｂ，按表１中的规定进行梯度洗脱；检测波长为３３０ｎｍ。理论板数按松果菊苷峰计算应不低于３　０００［１］。

　对照品溶液的制备：取松果菊苷对照品、毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加５０％甲醇制成每１ｍＬ各含０．２ｍｇ的混合溶液，即得［１］。

供试品溶液的制备：取本品粉末（过四号筛）约１ｇ，精密称定，置１００ｍＬ棕色量瓶中，精密加入５０％甲醇５０ｍＬ，密塞，摇匀，称定重量，浸泡３０ｍｉｎ，超声处理４０ｍｉｎ（功率２５０Ｗ，频率３５ｋＨｚ），放冷，再称定重量，加５０％甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，滤过，取续滤液，即得［１］。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各１０μＬ，注入液相色谱仪，测定，得到对照品溶液与供试品溶液中各化合物的保留时间与峰面积，根据保留时间进行定性，峰面积进行定量，计算得到药材中松果菊苷、毛蕊花糖苷的含量［１］。

３　测量系统的安德森－达林检验

实验室根据高效液相色谱法（通则０５１２），将肉苁蓉药材样品（ＱＣＳ样品）纳入日常检测中，在期间精密度测量条件下，对肉苁蓉药材中的松果菊苷、毛蕊花糖苷含量进行不确定度评定。实验室在近２个月的时间内，得到２４个测试结果（ｍ＝２４，单位为％），统计受控检验按下式计算，结果见表２。

４　期间精密度不确定度分量ｕＲ′的评定

当所用ＱＣＳ样品的测量涵盖全部分析过程时，样品水平下的ｕＲ′评定采用ｕＲ′＝ＳＲ′，式中：ＳＲ′为期间精密度标准差。根据表２的统计信息，求得ｕＲ′松＝ＳＲ′松＝０．１１５％。根据表３的统计信息，求得ｕＲ′毛＝ＳＲ′毛＝０．０６％。

５　偏倚不确定度分量ｕｂ的评定

偏倚不确定度分量的评定采用加标回收实验分析进行。实验室进行了肉苁蓉药材中５０％、８０％、１００％、１２０％、１５０％、２００％加标量的加标回收试验，每个水平加标量做三平行。回收率数据见表４。多水平的偏倚不确定度分量ｕｂ的评定采用公式进行计算，式中ｂｉ为第ｉ个回收率与平均回收率的差值。由表４的数据计算得到ｕｂ松＝０．０２３　１％；由表５的数据计算得到ｕｂ毛＝０．０２６　１％。

６　扩展不确定度分量Ｕ 的评定

在９５％概率下，扩展不确定度按Ｕ ＝２ｕｃ＝２计算。式中：Ｕ 为扩展不确定度；ｕｃ为合成标准不确定度。已知ｕＲ′松＝０．１１５％，ｕｂ松＝０．０２３　１％，由上式求得肉苁蓉药材中松果菊苷含量的测量不确定度合理估计值为：Ｕ＝２＝０．２４％。已知ｕＲ′毛＝０．０６％，ｕｂ松＝０．０２６　１％，由上式求得肉苁蓉药材中毛蕊花糖苷含量的测量不确定度合理估计值为：Ｕ＝２＝０．１３％。

７　讨论

本研究按照《化学检测领域测量不确定度评定利用质量控制和方法确认数据评定不确定度（ＲＢ／Ｔ　１４１－２０１８）》的方法，在期间精密度测定条件下，分别获得肉苁蓉中２４个松果菊苷数据及２４个毛蕊花糖苷数据，应用安德森－达林检验分别对２４个松果菊苷数据及２４个毛蕊花糖苷数据进行计算，得到松果菊苷的Ａ２＊Ｓ ＝０．３４６　２，Ａ２＊ＭＲ＝０．６５０　３，毛蕊花糖苷的Ａ２＊Ｓ ＝０．３６８　９，Ａ２＊

ＭＲ＝０．６６８　３，结果均小于１．０，表明在９９％概率下接受测量系统的正态性与独立性假设。在期间精密度测定条件下，基于质量控制结果和方法确认数据，可算出期间精密度不确定度ｕＲ′，同时根据加标回收实验结果，可以算出偏倚不确定度分量ｕｂ，即可得出合成标准不确定度ｕｃ和扩展不确定度Ｕ。此种不确定度评定方法要求有充分的重复测量次数，所得到的不确定度具有统计学的严格性，更为客观。期间精密度实验数据为劲牌有限公司不同实验室在不同时期检测得到，且ｕＲ′的评定数据经过安德森－达林检验，证明整个检测系统处于稳定受控状态。

从扩展不确定度的评定结果看，测量不确定度主要来源于期间精密度不确定度分量。而期间精密度不确定度分量采用的是期间精密度条件下的标准差，表明实验室环境条件的变化对检测结果的影响较大，提示实验室在日常质量控制工作中应加强此方面的控制，从而确保检测结果真实、可信。

参考文献：

［１］　国家药典委员会．中华人民共和国药典：一部［Ｓ］．北京：中国医药科技出版社，２０１５：１３５－１３６．

［２］　刘鹏，刘华．肉苁蓉研究进展［Ｊ］．宁夏农林科技，２０１９，６０（１１）：９－１２，５６．

［３］　毕萃萃，刘银路，魏芬芬，等．肉苁蓉的主要化学成分及生物活性研究进展［Ｊ］．药物评价研究，２０１９，４２（９）：１８９６－１９００．

［４］　高妍，过立农，马双成，等．基于ＵＰＬＣ特征图谱及主要成分含量的３种肉苁蓉比较研究［Ｊ］．中国中药杂志，２０１９，４４（１７）：３７４９－３７５７．

［５］　谯明，朱毅，杨建华，等．肉苁蓉尿囊素提取物安全性毒理学评价［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，２０１９，２５（９）：９５－１０２．

［６］　国家认证认可监督管理委员会．化学检测领域测量不确定度评定利用质量控制和方法确认数据评定不确定度：ＲＢ／Ｔ１４１－２０１８［Ｓ］．北京：中国标准出版社，２０１８：１－９．

［７］　赵蕊，于毅涛，杜美玲．利用质量控制和方法确认数据评定汽油中ＭＴＢＥ含量的测量不确定度［Ｊ］．石油工业技术监督，２０２０，３６（１）：９－１１．