刘凤霞，王晓雯，罗兰；新华·那比，王雪飞（新疆医科大学1基础医学院解训学教研宝，2药学院药理学教研室，新疆乌鲁本齐 830054）

摘要：目的 研究肉苁蓉总苷（Gkcosiles of citanhe GCs）对淀粉样肽（AP）所致阿尔采末病（AD）模型小鼠的保护作用，并探讨其作用机制，方法 采用小鼠脑室内一次性微量注射β-AP，诱发PAP在脑内的沉积，造成AD小数模型。10d后，一次性训练被动回避跳台实验测定AD小蒙

学习记忆能力：检测脑组织 SOD活性，MDA含量及 GSH-Px活性：电子显微镜检测脑组织神经细胞的病理变化：TUNEL法检测脑细胞调亡：免疫组化SABC法检测Bax Bet2的表达。结果 GCs可提高β-AP所致AD小鼠学习记忆水平降低脑组织MDA含量，提高 SOD及GSIHPx活性：使脑组织中某些病理改变得到改善：降低脑细胞码亡率：使 Bax的表达减弱，Be12的表达增强。结论 GCa对β-淀粉样肽所致AD小鼠学习记忆能力提高，其作用机制可能与其增强自由基清除酶活性，防止脂质过氧化作用，抑制β-AP在脑内的沉积及抑制脑细胞调亡有关。

关键词：肉苁蓉总作；阿尔采末病：淀粉样肽：自由基

阿尔采末病（AD）是老年期发生的一种以进行性认知障碍和记忆损害为主要特征的脑退行性疾病，其病理改变以老年斑（SP）、神经纤维缠（NFT）和神经元的丢失为主要特征”，由于其病因及发病机制不清，目前尚缺乏肯定有效的治疗手段。研究发现AD患者脑内细胞外沉积的凝聚态的β-淀粉样肽（β-mmybid peptidaβ-AP）具有神经毒，可引起动物学习记忆减退和认知功能障碍，还可出现神经退化和死亡1．因此此模型常用于AD发病机制的研究和药物筛选工具.肉苁蓉（herba cistandres）俗名大芸，为列当科植物，是一味著名的补益中药 具有补肾阳，益精血，润肠通便，抗衰老，抗氧化等方面功效”。肉苁蓉总苷（gkoosides ofcistanche GCs）是从南疆德赢vwin登录 中提得，主要成分是苯乙醇总苷，本课题组多年来已对GCs的抗氧化“，清除自由基”，抗衰老1等药理作用进行了深入的研究，本文旨在研究CCs对β-AP造成的AD小鼠的学习记忆的影响，并探讨其作用机制。

1 材料与方法

11 药品与试剂 肉苁蓉总苷，由新疆医科大学药学院植物化学室按日本文献［公开特许公报（A）昭63- 198627］方法，从南疆德赢vwin登录 中提得，主要成分是苯乙醇苷类：β-APss购自 Sima公司，以灭菌生理盐水溶解，浓度为1.0mmol·L密封后放37℃培养箱中1wk维生素E系上海建安制药厂生产考马斯亮蓝.MDA.SOD.GSH-Px测试试剂盒，购自南京建成生物工程研究所；细胞调亡原位检测试剂盒为德国宝灵曼公司产品。Bax（P 19）．Bc＋2（N-19）兔抗鼠多抗系美国 Sant Cnuz Biotechnology 公司产品SABC免疫组化染色试剂盒系武汉博士德生物有限公司产品，DAB购自 Sima公司。

1.2 模型制备及试验分组：

1.2.1 模型制备 NH小鼠，含，体重（22±2）g由新疆医科大学实验动物中心提供（合格证：医动字第16-003号），小鼠用水合氯醛（400mg）kg＇）腹腔注射后，以75％乙醇消毒后在其双耳前缘连接线中点偏右1mm处用微量注射器垂直注入凝聚态的β-AP2＃1对照组注入等量生理盐水，注入时间2mm留针2mm起针局部消毒后缝合皮肤

1.2.2 试验分组 采用分层随机法随机将动物分为6组：①生理盐水对照组（假手术组）；②β-淀粉样肽组（模型组）；③维生素E组：（阳性对照组）50mgkg；④CCs不同剂量组：62.5.125.250mg kg．于造模手术前7d开始灌胃给药，假损伤组及模型组给蒸馏水，每天1次，共17d

1.3 观察指标及检测方法

栅作为刺激电极，内设高4.5m直径6.5cm的橡皮垫作为回避电击的安全平台。先放入小鼠适应5mn随后通以36V交流电，小鼠遭到电击后跳上安全平台，如从台上跳下，双足接触铜栅为错误反应。记录3mm内出现的错误反应数．24h后重测验，以小鼠学习和次日重测验（记忆）过程中出现的错误反应次数来评价学习记忆能力。

1.3.2 生化指标 于造模后10d断头取脑，制成10％脑匀浆，按试剂盒说明书测定 SOD活性、MDA含量、GSH-Px活性。考马斯亮蓝CBB-SDS法进行脑组织蛋白质含量。

1.3.3 脑组织病理观察 实验动物用10％甲醛溶液灌流固定30mn取脑组织小于1mm：取材后4％戊二醛和1％饿酸固定1h Epon812包埋，铀铅双染或不经复染，电镜观察并摄片。

1.3.4 脑组织细胞凋亡的测定 采用TUNEL法，术后10d断头取脑，用10％甲醛溶液固定。石蜡切片，常规脱蜡脱水处理，滴加TUNEL反应混合物，37℃孵育60mmn滴加转化剂-POD．37℃孵育30min滴加DAB底物溶液，室温孵育5-20min光镜下观察结果。

1.3.5 免疫组化SABC法检测BaxBct2的表达操作程序按免疫组化 SABC染色试剂盒说明书进行.

1.3.6 Bm Bet2免疫组化半定量标准 阴性

（-）；无表达：弱阳性（十）；在若干细胞内表达，阳性细胞占整个视野的0-25％，着色浅；阳性（十十）；阳性细胞占整个视野的25％-50％，着色强度中等强阳性（卅）；阳性细胞占整个视野的50％以上，着色深。

1.3.7 统计学处理 采用SPSS11.5统计软件包，结果用土s表示，两组及多组样本均数比较进行单因素方差分析，方差齐时，两两比较采用L.SD法；方差不齐时，两两比较采用 Dunnetts＇sC法。

2结果

2.1 GCs对β-淀粉样肽所致 AD小鼠模型被动回避反应能力的影响 在跳台实验学习和重测实验中，与假手术组相比，模型组出现的错误反应次数增多（P＜0.01）表明β-AP注入小鼠脑室破坏小鼠的被动回避反应能力；与模型组相比GC-组和维生素E组，减少错误次数（P＜0.01）．见Tab 1．

（P＜0.01）；与模型组相比CCs组和维生素E组GSH-Px活性增高（P＜0.05P＜0.01），SOD活性增高（P＜0.05 P＜0.01）．MDA含量降低（P＜0.05P<0.01).Tab 2

Tabl EfectofGCsa baming anl memory h

the Akheiners dinse mie hduced by trah lesbns

due o famybil peptile(±sn=10)

<0.01wtolgnp<0.01smodelgup

Tb 2 EfRct of G Cs on brabM DA on Ent SOD acthity nd

23 GCs对β-淀粉样肽所致 AD小鼠模型脑组织细胞凋亡的影响 细胞凋亡时，TUNEL法检测，光镜下可看到凋亡细胞呈黄褐色，而正常脑细胞呈蓝染，实验结果显示，B-AP注射侧脑室 10d后，即可见许多凋亡细胞，GCs组和维生素E组凋亡细胞明显少于模型组（400倍）。见Tab 3 Fig L