摘要：目的：研究肉苁蓉总苷对“CoY射线损伤小鼠T淋巴细胞功能的影响，

方法；用“Co照射：Gy一次全身照射NIH小鼠，检测小鼠的迟发型超敏反应，胸腺指数，T淋巴细胞增殖反应和11-2的活性、

结果：“Co照射后可明显抑制小鼠迟发型超敏反应，降低胸腺指数，并使T淋巴细胞增殖能力及11．-2的活性明显下降，GCx（31.25、62.5.125mg／kg）能增强受照射小鼠迟发型超敏反应，增加构腺指数，增强T淋巴细胞增殖反应和IL-2的活性，结论：肉苁蓉总苷对辐射损伤小鼠的T淋巴细胞功能具有较强的保护作用。

关键词：内苁蓉总查；辐射损伤：T淋巴细胞

肉苁蓉具有补肾、益精、润燥、滑肠等功效。近代药理学研究表明，肉苁蓉粗制剂具有增强免疫功能、促进记忆、抗衰老等作用。肉苁蓉总（glycosides ofcistanche，GCs）是从新疆北部产盐生肉苁蓉中提取的主要活性成分，具有抗脂质过氧化作用，对辐射小鼠造血系统损伤有保护作用，并能不同程度地调节辐射损伤小鼠的体液免疫、细胞免疫和非特异性免疫功能本实验通过Co4Gy一次全身照射NIH造成辐射损伤，以迟发型超敏反应、胸腺指数及T 淋巴细胞增殖反应和11．-2的活性为指标，旨在研究肉苁蓉总苷对Co照射损伤小鼠T 淋巴细胞功能的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药品与试剂 肉苁蓉总苷由新疆医科大学药学院植物化学研究室提供。刀豆蛋白A（Con A）、植物血凝素（PHA）、四甲基偶氮唑盐（MTT）、RPMI-1640 均为Sigma产品，2,4-二硝基氯苯（DNCB）为上海试剂一厂产品，黄芪注射液（AM、上海福达有限公司生产，批号：991208），小牛血清（新疆畜牧科学院）；绵羊红细胞（SRBC），由新疆医科大学动物房采集，补体采自多只豚鼠的混合血清、一20C保存备用。

1.1.2 实验器材 GZU 微空滤膜（河北省冀州医疗器材厂），MCO96型CO2培养箱（日本SANYO）Electric Co.Lfd）.无菌超净台（苏州净化设备厂）。Mode1450酶标仪（Bio-Rad），YXQGO2型手提式 高压蒸汽消毒锅（山东新华医疗器械厂），Sartorius-BS110S电子分析天平（北京电子天平仪器厂）．SARTORIUS 2355 型电子称（德国产）。

1.1.3 实验动物 NIH小鼠由新疆医科大学动物中心提供.BLAB／c纯系小鼠由新疆地方病研究所动物中心提供，

1.2 方法

1.2.1 小鼠迟发型超敏反应及胸腺指数的测定取NIH小鼠60只，堆雄兼用，体重（20.57±1.77）g·随机分为6组：（1）正常对照组（生理盐水20ml／kg）：（2）照射对照组（生理盐水20ml／kg）；（3）GCs1组（31.25 mg／kg）：（4）GCs1组（62.5mg／kg）；（5）GCs组（125mg／kg）；（6）黄芪组（黄芪注射液20ml／kg，相当于生药40g／kg）。以上各组灌胃给药，每日1次，连续给药14d，于给药第6天后2～6组用Co照射·照射剂量为4Gy。照射后次日用7％的2.4二硝基氯苯（DNCB）100pl涂抹小鼠腹部致敏，6d后用1％的DNCB 20pl滴于小鼠右耳耳廓内外两面，于24h后处死小鼠，剪下左右两耳，用6mm打孔器取下耳片，用电子天平称重，每只小鼠的右耳片减左耳片的重量即为肿胀度，测定迟发型超敏反应（DTH））：取胸腺，以胸腺重／体重为胸腺指数。

1.2.2 四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法测定小鼠T淋巴细胞增殖反应 取NIH小鼠72只，雌维兼用，体重（20.18±2.01）g·分组、给药方式及Co照射均同1.2.1项，末次给药2h后断头处死小鼠，置冰冷的1％新洁尔灭溶液中浸泡2～3min．消毒皮肤，于无菌条件下取小鼠脾脏，剪碎过滤，用0.17mol／1．的氯化铵溶液数滴破坏红细胞，迅速用含双抗的RPM1-1640液洗3次，配成终浓度为2x10个／nl的牌细胞悬液，取上述各组小鼠牌细胞悬液加入96孔培养板，每孔100pl，制备2份。一份加人PHA1mg／1．．50μl／孔），另一份加入Con A t5 mg／1．100pl／孔），37C，5％（体积分数）CO：培养箱培养18h后弃上清液，每孔再加人100pl MTT（1mg／1．溶液，震荡15min．37（．5％（体积分数）CO．培养箱继续培养4h．1C离心（1500r／min．5min）．轻弃上清液，每孔加入100pl酸化异丙醇．震荡23min．用酶标仅（570mm）检测光密度值（OD）．以OD值反映淋巴细胞增殖能力。

1.2.3 小鼠白细胞介素-2活性的测定 取1.2.2项终浓度为2＞．10°个／ml的脾细胞悬液加至21孔板内（1ml／孔），同时加入PHA（1mg／ml．100gl）．置37C．5％CO2培养箱培养38h后收集上清液，于-20C保存待测。选用BALB／c纯种6～8周龄小鼠5只，无菌取出胸腺，用5％Hank＇s制备单个胸腺细胞悬液，再用含10％NBS RPMI-1610 培养液配成2x10°个／ml的细胞悬液，置96孔培养板内，一份加入PHA（1mg／ml，50pl／孔），另一份再加入Con A（5mg／L，100pl／孔），再加入上述待测样品，37C、5％CO2培养箱培养44h，离心，弃上清液，加入MTT液（1mg／ml，100pl／孔）．培养4h．离心，弃上清液，加入盐酸异丙醇（1：300体积比，100孔）．微量震荡15min后，用酶标仪（570mm）检测光密度值（OD），以OD值反映IL-2水平。

1.2.4 统计学处理 所有数据以产士，表示，采用PEMS统计软件进行数据处理，经方差齐性检验后，采用F检验及检验，检验水准4＝0.05

2 结果

2.1 GC＊对Co照射小鼠退发型超敏反应及胸腺指数的影响 与正常对照组比较，照射剂量4tiy可导致小鼠DTH反应明显减轻，胸腺指数明显下降：写照射对照组比较，31.25.62.5.125 mg／kg GCs剂量组可能增强受照射小鼠的DTH反应，增加受照射小鼠的胸腺指数，其值均恢复到正常或正常以上（表1）。

表1 GCS对Co照射小鼠DTII、胸腺指数的影响

表2 GCS对Co照射小鼠淋巴细胞增殖反应及IL-2活性的影响（土s．n＝12）

2.2 GCs对“Co照射小鼠T淋巴细胞增殖反应及11．-2活性的影响 与正常对照组比较，照射剂量4Gy可导致PHA、ConA诱导的小鼠T淋巴细胞增殖能力明显降低，可使I1．-2的产生及活性明显下降；31.25,62.5.125mg／kg GCs剂量组可增强受照射小鼠的T淋巴细胞增殖反应，增加受照射小鼠的11．2的活性（表2）。

3 讨论

电离辐射可使机体内所有的生物分子电离激发、化学键断裂，并生成大量的自由基，发生脂质过氧化损伤。＂Co照射小鼠，可使其体内产生自由基，自由基诱发细胞的不饱和脂肪酸的氧化反应，产生过氧化脂质，从面破坏细胞膜及生物大分子的功能，导致细胞，组织损伤。因此自由基引起的氧化损伤可能是电离辐射损伤的原围之一。机体的免疫系统对辐射高度敏感，不同的辐射剂量作用于机体，均可使免疫功能下降。当Co照射剂量为2.4Gy时，分别造成小鼠体液免疫，细胞免疫及非特异性免疫功能下降，这说明不同照射剂量对免疫功能的损伤程度是不同的本实验采用的～Co照射剂量为1Gy，发现该照射剂量可明显抑制小鼠的细胞免疫，表现为迟发型超敏反应明显减轻，胸腺指数明显下降：可导致植物血凝素（PHA）及刀豆蛋白A（ConA）诱导的小鼠T淋巴细胞增殖能力明显降低，11.2活性明显下降。11-2共有诱导Th细胞，Te细胞增殖。刺激B细胞产生抗体，活化巨噬细胞，增强NK细胞活性等作用，是体内的--种极为重要的细胞因子。31.25,62.5.125mg／kgGCs可增强受照时小鼠迟 发型超敏反应，增加胸腺指数：增强由PHA 和ConA诱导的T淋巴细胞增殖反应和11．-2的活性，本实验

采用黄芪注射液为阳性照，发现GCs对辐射损伤小鼠T 细胞功能具有的防护作用与黄芪类似。同时，GCs具有抗自由基损伤、抗脂质过氧化作用，在体外对多种活性氧自由基有不同程度的清除作用，对OH·引发的DNA损伤有一定的保护作用心，提示GCs可能通过直接或间接清除自由基、抗脂质过氧化面对抗辐射对T淋巴细胞功能的损伤。