栾朝霞

（江苏警官学院，江苏南京210031）

摘要：为优化大孔树脂纯化内苁蒙多酚提取物的工艺条件，通过静态吸附与洗脱试验筛选合适的大孔树脂型号，并研究其吸附等温与吸附动力学模型后，采取动态或附与流脱半国素实验确定最佳纯化工艺条件，同时进行动物的抗造动性疲劳研究。实验结果表明，HPD-400大孔树脂的喊附等温方程符合Langnuir模型，吸附量随温度升高而降低，且符合准二级动力学吸附过程。采用大孔树脂纯化内苁蒙多酚提取物的最佳工艺条件为：配制体积60ml．，6mg／ml．上样溶液，以2mL／min流速上样至HPD-400大孔树脂饱和吸附后，采用体积为180ml，60％乙醇溶液，以1mL／min流速洗脱，提取物中内苁蒙多酚纯度由20.12％提高至42.63％。与空白对照组相比，不同制量的内苁蒙多酚纯化产物可显著延长小鼠游冰力竭时间（P＜0.05，P＜001），显著增加体内肝糖原、肌糖原含量与乳酸脱氢酶活力（P＜0.05，P＜0.01），并有极显著降低乳酸浓度水平（P＜001），因此可较好地缓解机体疲劳，从而为内苁蒙多酚化合物的后续开发利用提供参考。

关键词：内苁蓉，多酚，提取物，纯化，抗运动性疲劳

肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉的干燥带鳞叶肉质茎，长期服用具有“补精益血”之功效，被卫计委认定为药食同源品种-4。由于该植物含有多糖、多酚、生物碱、维生素及多种矿物质等营养成分，因而近年在药品和食品领域应用较多，王丽卫等“研究发现肉苁蓉可明显改善胃肠道的消化功能：Yang等另发现其可加强骨矿物质密度；而王小新、陈志豪等曾分别对肉苁蓉的抗疲劳作用进行探讨，但没有研究具体活性成分的作用。多酚化合物通常具有抗氧化、增强机体免疫及抗衰老等生理活性，而对肉苁蓉多酚提取物的纯化工艺优化和抗运动性疲劳作用的研究却鲜有报道。因此，本研究利用大孔树脂具有选择性高、干扰因素少、可重复循环利用的特点-，在提取肉苁蓉多酚物质的工艺基础上，探讨大孔树脂对其纯化的最佳工艺条件，并通过相关动物实验观察其体内抗运动性疲劳的作用效果，为肉苁蓉资源的后续开发和利用提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

试验动物 健康雄性小鼠50只（动物许可证号：SYXK（苏）2019-0030），体质量10-18g·由江苏省实验动物中心提供，生长环境温度20-25℃，相对湿度50％-70％；肉苁蓉 安徽亳州药材市场，经鉴定为列当科肉苁蓉属植物肉苁蓉：没食子酸标准品 Sigm公司：Folin-酚试剂、无水乙醇、碳酸钠 均为分析纯国药集团化学试剂有限公司：乳酸（BLA）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌糖原（MG）和肝糖原（HG）检测试剂盒 南京建成生物工程研究所；试验用水为去离子水。

WK-40型药材粉碎机 青州迈德森制药机械厂：UV7595 型紫外-可见分光光度计 上海精密科学仪器有限公司：FA1004B型电子天平 上海越平科学仪器有限公司：NKA-2．HPD 100．HPD 300 大孔树脂 北京英莱克科技发展有限公司：AB-8．HPD400树脂 合肥四峰生物科技有限公司：1ab-1A-50E型冷冻干燥机 北京博医康实验仪器有限公司：SHZ-82型水浴恒温振荡器 常州国旺仪器有限公司：小鼠恒温游泳池 上海艾研生物科技有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 多酚提取物制备 将干燥后的肉苁蓉完全粉碎后，过80目筛，准确称取20g，加入400ml．70％乙醇溶液，在60℃温度下回流提取30mmn后过滤。提取两次，合并滤液减压回收乙醇后，冷冻干燥备用。

1.2.2 树脂型号选择

1.2.2.1 树脂预处理 将大孔树脂浸泡于90％乙醇中24h．充分溶胀后湿法装柱，后用90％乙醇反复冲洗·直至流出液与水混合（Va：V-1：5）无白色浑浊出现，再用水洗至无乙醇气味，加入3％ 盐酸浸泡3h．用水洗至中性：再用3％氢氧化钠溶液浸泡3h。用水洗至中性，备用。

1.2.2.2 静态吸附与洗脱 准确称取5.0g六种不同极性的大孔树脂（NKA-2、HPD 100、AB-8、HPD300、HPD 400）置于锥形瓶内，分别加入6mg／ml100ml提取液后，置于恒温振荡器内，静态吸附24h后过滤。通过下式测得不同类型大孔树脂的静态饱和吸附量与吸附率。