关键词:肉苁蓉;苯乙醇苷;学习记忆

肉苁蓉被称为地精，大芸等，蒙语中亦被称为"查干告亚"，始载于《神农本草经》，被列为上品，肉苁蓉在世界上约有18 种，我国约有4 种1 变种［1］，现代药理学研究发现肉苁蓉有增强机体免疫功能，促进记忆［2，3］，抗衰老等作用。本文主要研究肉苁蓉苯乙醇苷对小鼠学习记忆能力的影响，建立东莨菪碱致学习记忆障碍模型，观察并评价其促智作用并对作用机理进行阐述。研究肉苁蓉苯乙醇苷对于乙酰胆碱酯酶的影响以及抗氧化酶的影响。

1 材料和方法

1． 1 药材、试剂及主要仪器

肉苁蓉购于内蒙古中蒙医院药房，氢溴酸东莨菪碱购自中国药品生物制品检定所其它试剂为国产分析纯。旋转蒸发仪购自上海亚荣生化仪器有限公司; 方形水迷宫由中国医学科学院协和药物研究所提供; Morris 水迷宫设备以及行为记录分析软件由上海吉量软件科技有限公司提供;

1． 2 实验动物清洁级昆明种小鼠，体重20 ± 2g，雌雄各半，购自内蒙古大学实验动物中心( 动物号YXQ( 蒙)2002 － 0001) 。自由饮水摄食，12 h 明暗交替。

1． 3 肉苁蓉苯乙醇苷的制备取干燥的肉苁蓉30g，粉碎后过20 目筛。加入8 倍量70%乙醇，以70℃提取，提取2 次，合并2次提取物后低温冻干制得。

1． 4 实验动物的分组以及东莨菪碱致学习记忆障碍模型的建立提前对于小鼠进行筛选，选择120sec 找到平台的动物进行实验。将小鼠随机分为5 组，每组15 只，分别是正常组、东莨菪碱模型组以及肉苁蓉苯乙醇苷三个剂量组( 10mg /kg，20mg /kg，40mg /kg) 。东莨菪碱致学习记忆功能障碍模型的建立，参考文献方法［4］进行。

1． 5 通道式( 方形) 水迷宫行为学测试各模型及对照组动物依次进行水迷宫实验，第1 d 路径包括1 个盲端，第2 d 有2 个盲端，第3d有3 个盲端，4、5、6、7d 均为4 个盲端。每天训练两次，记录每只动物在游泳中进入盲端的次数及游出时间，如果120 s 内未上岸，按120 s 计算。

1． 6 Morris 水迷宫行为测试参考文献方法［5］，测其在120s 在原平台所在象限的游泳时间比例及跨越平台所在位置的次数( 即穿梭次数) 和第1 次到达原平台的时间，并计算潜伏期。

1． 7 脑组织SOD 活性、MDA 的测定以及大脑皮层中胆碱酯酶含量的测定参照试剂盒说明书取脑组织后检测乙酰胆碱酯酶活性。另一部分动物取全血以及脑组织按照

试剂盒说明书，检测MDA 和SOD 的含量。

1． 8 统计学分析数据以Mean ± S 表示，各组间的差异比较用Excel 软件，组间比较采用t 检验，以P ＜ 0． 05 认为存在显著性的差异。

2 实验结果

2． 1 肉苁蓉苯乙醇苷对学习记忆障碍模型小鼠影响

2． 1． 1 方形水迷宫结果

实验结果如表1 所示，方形水迷宫实验中，东莨菪碱模型组小鼠发生错误次数以及找到终点所需的时间与正常组比较具有显著的差异( P ＜0. 01) ，肉苁蓉苯乙醇苷具有显著的提高学习记忆作用，在20mg /kg 以及60mg /kg 组能显著降低碰壁次数( P ＜ 0． 05) 并且显著的缩短找到安全岛的时间( P ＜ 0． 05) 。

2． 1． 2 morris 水迷宫行为测试结果在4d 的认知训练中，在给予东莨菪碱后随着训练时间的延长，各组小鼠的逃避潜伏期和游泳路程均逐渐缩短; 从第3d 开始，东莨菪碱模型组与对照组相比，小鼠逃避潜伏期和游泳距离明显延长，说明小鼠记忆障碍模型成功建立。在训练的第5 天，安全岛被移走后定位巡航结果，肉苁蓉苯乙醇苷( 60mg /kg) 组对于小鼠的逃避潜伏期和游泳路程均明显缩短( P ＜ 0． 05) ，见表2。

2． 2 肉苁蓉苯乙醇苷对模型小鼠脑组织中MDA、SOD 和乙酰胆碱酯酶活性的影响

肉苁蓉苯乙醇苷具有提高脑组织中SOD 活性并显著的降低MDA 的含量( P ＜ 0． 05) ，见表3，提示，肉苁蓉苯乙醇苷具有抗脂质过氧化的作用。东莨菪碱可以显著的提高小鼠脑内皮层组织中AchE的含量( P ＜ 0． 01) ，而苯乙醇苷组( 20mg /kg，60mg /kg) 能够显著降低乙酰胆碱酯酶活性( P ＜ 0． 05或P ＜ 0． 01) ，见表3

3 讨论

学习记忆是脑的高级功能，是构成智能的要素。东莨菪碱是中枢性抗胆碱药，通过阻断中枢M胆碱受体，抑制小鼠学习和学习后的短时记忆，作用于记忆的获得环节，引起类似记忆和认知障碍模型。肉苁蓉苯乙醇苷对于东莨菪碱所致的学习记忆功能障碍具有很好的治疗作用，在方形水迷宫实验中，在给予中肉苁蓉苯乙醇苷后可以显著的缩短找到平台时间并减少发生错误次数; 在Morris 水迷宫实验中，肉苁蓉组可以显著缩短潜伏期以及找到平台的时间。MDA 反应体内脂质过氧化损伤的程度，在给予东莨菪碱后显著提高脑内MDA 的含量并显著降低SOD 活性，提示东莨菪碱所致的学习记忆障碍与脑内脂质过氧化有关，肉苁蓉苯乙醇苷具有显著的抗脂质过氧化作用，同时这也可能是其用于治疗老年痴呆的药理学基础之一。对于乙酰胆碱在学习记忆中的作用具有重要的作用，Ach 在脑内由ChAT 催化合成，并通过AChE 分解，形成ACh 的代谢循环。在东莨菪碱模型组中，在大脑皮层中AChE 异常升高，导致突出间隙ACH 被水解，使得动物的学习记忆能力迅速降低，而在给予与肉苁蓉苯乙醇苷后可以显著降低ACHE 的活性，使得突出间隙的ACH 的以恢复。总之，本实验发现肉苁蓉苯乙醇苷能有明显的提高学习记忆功能，而这种提高学习记忆作用与抗脑内脂质过氧化作用和降低ACHE 活性有关，对于肉苁蓉提高学习记忆功能的研究为该药用植物的进一步开发提高药理学依据。

参考文献

［1］张雷红，堵年生． 肉苁蓉化学成分的研究概况［j］． 中成药，2003( 04) : 323 － 327

［2］刘凤霞，王晓雯，王雪飞． 肉苁蓉总苷对喹啉酸所致Alzheimer 病小鼠学习记忆的影响及其作用机制［j］． 新疆医科大学学报，2005( 12) : 1131 － 1134

［3］刘凤霞，王晓雯，罗兰，等． 肉苁蓉总苷对β － 淀粉样肽所致阿尔采末病小鼠模型学习记忆的影响及其机制［j］． 中国药理学通报，2006( 05) : 595 － 599

［4］顾彬，汪淼，张文生． 强记片对东莨菪碱致小鼠学习记忆障碍的影响及机理研究［j］． 北京中医药大学学报，2008( 09) : 616 － 618

［5］张均田，石成璋，梅保幸，等．“水迷宫”自动控制仪的研制及在神经药理研究中的应用［j］． 药物分析杂志，1991 ; 11( 1) : 23 － 26．