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李琳琳 王晓雯 王雪飞 木胡牙提 堵年生
(新疆医学院 乌鲁木齐830054)
摘要 肉苁蓉总试(GCs)可明显增强小鼠红细胞SOD活性,降低血清MDA含量,提高肝,肾组织中DNA.RNA含量,能明显促进受“Co照射损伤后小鼠红细胞SOD活性及脾核酸含量的恢复,降低肝MDA含量,提示GC对核酸的保护作用及辐射防护作用与其抗脂质过氧化作用密切相关。
关键词 肉苁蓉总试 DNA RNA 抗脂质过氧化 辐射防护
肉苁蓉有补中益气,益精,壮阳之功效,在历代抗老延年古方中,出现的机率仅次于人参。近有文献报道,肉苁蓉可增强机体免疫功能;促进记忆,提高智能;调节神经系统,提高性功能及抗衰老等作用,肉苁蓉粗制剂可增强小鼠红细胞SOD活性;显著降低心肌脂褐质含量;提高阳虚动物DNA的合成能力,明显延长果蝇寿命,但对肉苁蓉总甙(GCs)的药理作用研究,国内外尚未见报道,本研究旨在探讨GCs对核酸的保护作用及辐射防护作用与抗脂质过氧化作用的关系。
1 材料和方法
1.1 药品与试剂 肉苁蓉总试,从北疆产盐生肉苁蓉 Cistanche salsa C.A.Mey.中提得,主要成分为苯乙醇甙类,提取方法按日本文献(公开特许公报(A)昭63-198627)进行,由本院药学系植化教研室堵年生教授提供。硫代巴比妥酸,上海试剂一厂生产;DNA.RNA标准品分别由上海市牛奶公司和中国科学院生物化学研究所提供,此二者均按定磷法进行了纯度测定。1.2 GCs的抗脂质过氧化作用 NIH 小鼠110只,体重(22.5±2.1)g,雌雄兼用,随机分为4组:对照组给生理盐水(NS)20mlkg-1.灌胃(ig);GCs组.分别给GCs 62 5.125.250mg*kg,g各18天,末次给药2h后,摘取眼球取血501供测红细胞中SOD活力;剩
余血制备血清,测血清MDA含量;速取心肝,脑,肾等脏器,用冰生理盐水冲洗,制备各组织匀浆,红细胞SOD抽提液按文献制备,DNA和RNA的抽提液制备:取心,肝,脑,肾脏器称重.剪碎放入碾钵中,加入2ml.15%的三氯醋酸,在冰水浴中磨成匀浆,移入离心管,再用2ml 15%的三氯醋酸冲洗碾钵,共3次,洗涤液全部移入离心管中,离心4000r"min',10min,弃上清,沉淀中加入无水乙醇2ml混匀后,置90℃水浴中加热2min,冷却后离心,4000rmin'.10min.弃上清.沉淀中加入8ml 5%的三氯醋酸混匀,放入90℃水浴中抽提15min,冷却后离心,4000r*min',10min。上清液倒入10ml的容量瓶中,沉淀中加入1ml5%的三氯醋酸,混匀,离心,4000r"min'.5min,上清液再倒入10ml的容量瓶中,用蒸馏水定容,混匀,DNA和 RNA的抽提液制备完毕。生化指标测定:红细胞SOD活性用邻苯三酚自氧化法”;血清MDA 含量用TBA 显色法:DNA和RNA抽提液分别经二苯胺显色法及苔黑酚显色法测得各组织中DNA和RNA含量
1.3 GCs的抗辐射作用 NIH小鼠120只,体重(21.0±2.2)g,雌雄兼用,随机分为4组:正常组,NS 20mlkg共18天;其余90只鼠接受CoY射线1次全身照射,受照剂量为6Gy,随后分成损伤组:照射后立即给予NS20mlkgd:GCs治疗组:照射后分别给以125,250mg*kg'·d',各18天,各组末次给药2h后,按前述实验方法分别进行红细胞内SOD活性,肝脏MDA含量,肝,脾组织中 DNA.RNA 含量的测定,及肝,脾脏的组织形态学观察。所有数据用x土s表示,组间进行:检验处理.
2 结果
2.1 GCs的抗脂质过氧化作用
21.1 GCs对正常小鼠红细胞内SOD活性、血清 MDA 含量的影响 从表1可见GCs62 5mg*kg组与对照组相比无差异(P>0.05).GCs125.250mg'kg'组均能显著增加红细胞内SOD活性(P<0.01)降低血清MDA含量(P<0.05).
表1 GCs对正常小鼠红细胞内SOD活性。
血清MDA含量的影响
组别 | 剂量 | SOD | MDA | |
mgkg | Um | mmlml- | ||
对图 | 6 | 66 1±186.6 | 4.05±0.95 | |
GC | 62.5 | 6 | 87.1±134.3 | 4.03±0.92 |
125 | 8 | 77.9±176.32 | 3.39±0 98 | |
250 | 8 | 59 8±1909 | 3.46±1.019 |
法①工士:②对照组n=20 GCs组n均=30③与对照组比较P<0.05 P<0.01(下同)
21.2 GCs对正常小鼠各脏器DNA含量的影响 由表2可见各给药组与对照组相比,心、脑DNA 含量均无明显差异(P>0.05).GCs62.5mgkg '组对肝、肾DNA含量无影响;GCs125mg*kg'组和250mg*kg 组肝脏中 DNA含量较对照组分别增加9.6%(P<0.05),14.2%(P<0.01);肾脏中DNA含量较对照组分别增加15.4%,16.0%(P均<0.01)
表2 GCs对正常小鼠各脏器DNA含量的影响
组别 | 剂量 | DNA Pg | /100mg | ||||||
mg'kg | 心 | 脑 | 肝 | 肾 | |||||
对照 | 72 2±13.3 | 53.7± | 4.1 | 9 | 6.1±17.0 | 141.6±207 | |||
GC | 62.5 | 73.7±14.2 | 58.7±2 | 0 0 | 9 | 6.4±10.2 | 146.2±209 | ||
125 | 72.2±14.6 | 58.1±1 | 66 | 10 | 5.3±10.6 | 163.4±222 | |||
250 | 73.4±12.5 | 63.3±1 | 8.6 | 10 | 9.7±17.8 | 164 3±192 | |||
21.3 GCs对正常小鼠各脏器RNA含量的影 | GCs 125,250mg*kg'组肝脏RNA含量较对照 | ||||||||
响 由表3可见各给药组与对照组相比,心、脑 | 组分别增加18.1%,26.2%(P均<0.01);肾脏 | ||||||||
RNA 含量均无明显差异(P>005).GCs | RNA 含量较对照组分别增加20.9%,25.4% |
组对肝、肾脏RNA 含量无影响: (P均<001).625mg*kg
表3 GCs对正常小鼠各脏器RNA含量的影响
剂量 | RNA P | g/100ng | |||
mg'kg* | 心 | 脑 | 肝 | 肾 | |
对照 | 76.1±17.9 | 81 2±17.3 | 253.5±56.7 | 133.4±17.9 | |
GC | 62.5 | 78.3±18.3 | 80 7±17.1 | 252 6±42.9 | 142.9±28.9 |
125 | 76.4±18.4 | 81.4±153 | 299.5±52.92 | 161.3±27.8 | |
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