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徐荣',刘友刚2,陈君",陈士林”
1中国医学科学院北京协和医学院 药用植物研究所,北京100094
2天津中医药大学基础医学院,天津 300193
摘要:肉苁蓉(Cistanche deserticola Y.C.Ma)为列当科肉苁蓉属多年生寄生性药用植物,具有抗衰老、增强人体免疫力、增强记忆和学习能力和抗炎、抗疲劳等作用。其化学成分主要包括苯乙醇苷类、多糖、环烯醚萜、木质素及半乳糖醇等,由于目前评价肉苁蓉药材质量的标准过于局限,为了更好地评价肉苁蓉的质量,保证药材及其产品的疗效,本文对肉苁蓉主要有效成分的分析方法进行了综述。关键词:肉苁蓉 有效成分 分析方法 进展
列当科肉苁蓉属多年生寄生性药用植物肉苁蓉(Cistanche deserticola Y.C.Ma)为2005年前历版《药典》收录的肉苁蓉药材的唯一基源植物,具有滋肝养肾,益精血,润肠通便之功效"。目前,评价肉苁蓉质量主要是对《药典》规定的指标成分毛蕊花糖苷和松果菊苷的含量进行测定,但中药材所含化学成分非常复杂,药效并不是由任何单一的活性成分决定,而是多种活性成分共同作用的结果。因此,这种单纯以两种成分含量的高低来评价肉苁蓉药材质量的优劣存在明显的不足。本文对有关肉苁蓉成分分析方法的文献进行了综述,为肉苁蓉质量控制和评价方法的完善和优化提供了基础。
1 肉苁蓉主要化学成分的分析方法
肉苁蓉的主要化学成分包括苯乙醇苷类、多糖、环烯醚帖、甜菜碱和半乳糖醇等。目前,苯乙醇苷类的种类最多,在防止脂质过氧化发挥肝保护作用和清除NO自由基体现抗炎活性方面发挥着作用。肉苁蓉多糖也是的一种重要的药理活性成分,具有抗氧化和抗衰老的作用,并在免疫和抗脂质过氧化方面有独特作用3。此外,肉苁蓉中含有一定量的甜菜碱和半乳糖醇,具有促进脂肪代谢、抗脂肪肝、保护肾脏、降压和润肠通便的功能7。
1.1 苯乙醇苷类有效活性成分
苯乙醇苷类是肉苁蓉中的主要有效活性成分,也是肉苁蓉质量控制的主要检测指标。早期的苷类物质的含量测定大多是对其苯乙醇总苷的含量进行测定,常采用比色法,如成杰等将肉苁蓉用乙醇回流提取,提取液经浓缩,乙酸乙酯脱脂和正丁醇萃取有效成分等步骤,再经大孔树脂、AB-8吸附,甲醇洗脱,用紫外分光光度法测定含量。结果表明测定的范围为3.20-32.0mg·L,平均回收率为100.6%,RSD=3.5%。李俐等110)采用应用苯乙醇苷类中的酚性基团与重氮盐能生成有色物质为原理,在486nm处进行测定,回收率101.3%,RSD为3.70%。但比色法存在稳定性差、可重复性差、误差大等缺点,并且前处理复杂,不适合苯乙醇苷的定量测定。
高效液相色谱(HPLC)法因其灵敏度高、线性范围广等优点,在肉苁蓉中苯乙醇苷类物质的含量测定中应用最广,张思巨等"利用HPLC同时测定了肉苁蓉中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量。测定条件:以流动相(乙腈-甲醇-0.1%醋酸溶液10:15:75)为溶剂,超声提取40分钟,制备得供试品溶液,色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-甲醇-0.1%醋酸溶液(10:15:75)为流动相,检测波长为334nm。结果表明此方法简便,精密度、重现性良好,结果准确可靠,该方法被2005版采纳并规定松果菊苷的含量不低于0.3%2。
1.2 肉苁蓉多糖
多糖提取分离和含量测定的方法大多以乙醇为溶剂,利用回流提取法提取多糖,苯酚硫酸法测定多糖含量。孙萍等2采用微波技术从肉苁蓉中提取多糖,并对其含量进行了测定,结果表明反应时间缩短,提取效率提高,说明微波技术在多糖提取方面有很大潜力。李艳等首次运用超声技术从肉苁蓉中提取出多糖,并对其含量进行了测定,提取时间大大缩短。玄国东等“选用提取时间、温度、固液比3个反应因素作为研究对象,以多糖提取率为考察指标,通过响应面分析方法优化肉苁蓉多糖的提取工艺条件。结果表明,提取时间193.0min、温度94.59℃、固液比10.89,多糖提取率的理论值为85.5%。
1.3 8-表马钱子苷酸件
8-表马钱子苷酸是肉苁蓉属植物中主要的一种环烯醚萜苷类成分,杨建华等(13)建立了HPLC法测定肉苁蓉中8-表马钱子苷酸的含量的方法:Hypersil ODS-2色谱柱(4.6mmx250mm,5μm),流动相为乙腈-0.4%磷酸(9:91),流速1.0mL-min',柱温25℃,检测波长235nm,本法操作简便快速,灵敏准确。
1.4 甜菜碱
甜菜碱是一种季铵型水溶性生物碱,常用含量测定方法有比色法、薄层色谱扫描法和重量法等,但随着HPLC技术的普及,HPLC法已逐渐成为其含量测定的首选方法。龚立冬等(16利用HPLC一蒸发光散射法成功的建立了测定肉苁蓉中甜菜碱的含量,方法采用Waters Spherisorb S5 NH2色谱柱(250mmx4.6mm,5 μm),柱温25℃,流动相为0.1%(体积分数)三氟乙酸水溶液一甲醇(体积比为15:85),流速0.6mL/min.蒸发光散射检测器参数为漂移管温度90℃,喷雾器温度45℃,载气(氮气)压力110kPa(16psi)。该法具有良好的线性关系,可以作为甜菜碱的含量测定方法。同时研究发现德赢vwin登录 不含甜菜碱,因此可以将甜菜碱作为标志物质来鉴别正品肉苁蓉和德赢vwin登录 。
1.5 半乳糖醇
鲍忠等7用HPLC 分离,蒸发光散射检测器(ELSD)检测苁蓉中通便有效成分半乳糖醇的含量,采用Prevail Carbohydrate ES聚合凝胶柱(250mmx4.6mm,5μm),流动相为乙腈一水(77:23),流速为0.7mL-min;柱温为25℃,检测器漂移管温度为40℃,气体压力为240kPa测定半乳糖醇的含量,最高含量可达10%。该方法简便、准确,可作为检测肉苁蓉中半乳糖醇的常用方法。
2 问题与建议
近年来,肉苁蓉的需求逐年增加,但野生资源已濒临枯竭,供需矛盾日趋尖锐。同时,肉苁蓉已被列为国家二级保护植物,并收入《国际野生植物保护名录》,同时被列入濒危动植物种国际贸易公约(CITES)附录二(18)。因此,肉苁蓉的人工栽培势在必行,而当前缺乏全面评价栽培与野生肉苁蓉质量的方法体系,利用现有的《药典》标准并不能完全保证肉苁蓉等中药复杂体系的药效和用药安全问题。通过对肉苁蓉主要化学成分分析方法的综述发现,肉苁蓉中主要成分的含量测定方法均比较成熟,但这些方法并未被多数研究人员采纳。因此,我们建议有关部门将肉苁蓉主要有效成分的分析方法进行验证并择优采纳,同时增加指标成分的种类,保证药材及其产品的疗效,同时为栽培生产过程中全面客观的评价肉苁蓉药材的质量提供依据。
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