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肉苁蓉中主要活性物质的快速检测方法(一)

发布日期:2021-11-12 12:53:00

徐圣,柴莎莎

(武汉职业技术学院生物工程学院,湖北武汉430074

摘要:建立HPLC-DAD同时检测肉苁蓉中主要活性物质7种苯乙醇苷类成分的快速分析方法。使用Agilent ZORBAXC18色谱柱(150mmx4.6mm5μm),以乙腈-0.1%甲酸为流动相进行梯度洗脱,二极管阵列检测器,波长330nm,外标法定量。7种苯乙醇苷类成分在检测范围内有良好的线性,相关系数均在0.9995以上,检出限为0.5-2μgmL,定量限为2-10μgmL。在3个水平下加标回收率为85.12-97.21%,相对标准偏差低于5%。该方法快速、准确、简便,适用于肉苁蓉苯乙醇苷类成分的检测需求,后续可以为控制肉苁蓉质量提供有力支持和有效保障。

关键词:HPLC;肉苁蓉;活性物质;检测;质量控制


一、材料与方法

(一)材料与试剂

麦角甾苷对照品(纯度98%)、异麦角甾苷对照品(纯度98%)、松果菊苷对照品(纯度98%)、管花苷A对照品(纯度98%)、2-乙酰毛蕊花糖苷对照品(纯度98%)、肉苁蓉苷A对照品(纯度98%)、肉苁蓉苷F对照品(纯度98%),成都曼思特生物科技技术有限公司:甲醇(色谱纯)。Fisher公司;乙腈(色谱纯),Fisher公司;甲酸(色谱纯),Fisher公司;水为屈臣氏纯净水。市购:

试验采用的肉苁蓉原料采自主产区,经湖北省中医药研究院鉴定为肉苁蓉,共10批,见表1

1 肉苁蓉原料产地信息

编号

批号

来源

批号

批号

来源

1

190315

6

190312


2

190701

新疆

7

190611

内蒙古

3

190721


8

190722

内蒙古

4

200311

新疆

9

200112

内蒙古

5

200311

新疆

10

200923

内蒙古

(二)主要仪器与设备

1260高效液相色谱仪:美国安捷伦公司,配有二极管阵列检测器:SB-800D数显普通型超声波清洗机:宁波新芝公司;XSR105电子天平:美国梅特勒公司。十万分之一天平:美国梅特勒公司;DJ-04B小型破碎机:上海鼎广机械设备有限公司。ZORBAXC18色谱柱(150mmx4.6mm5μm):美国安捷伦公司。

(三)方法

1.溶液配制

1)标准溶液

分别精密称取麦角留苷对照品20mg、异麦角甾苷对照品20mg、松果菊苷对照品20mg、管花苷A对照品10mg2-乙酰毛蕊花糖苷对照品10mg、肉苁蓉苷A对照品10mg,肉苁蓉苷F对照品10mg,于25mL容量瓶中,以甲醇-水(11)混合溶液定容至刻度,即得各标准溶液储备液。分别取各对标准溶液储备液适量于量瓶中,甲醇-水(11)混合溶液定容至刻度,即得标准混合溶液。

2)样品溶液

取肉苁蓉粉末,过4号筛,精密称取1g,置100mL棕色量瓶中,加入甲醇-水(1150mL,盖上瓶塞,摇匀,称定质量,然后浸泡30min,超声处理40min后放置室温,再称定质量,加甲醇-水(11)补


足减失的质量.摇匀,静置,取上清液[1].过0.45μm

滤膜,备用。

2.色谱条件

0.1%甲酸水溶液为流动相A.乙腈为流动相B.进样量10微升,柱温30℃,检测波长为330nm,梯度洗脱程序见表2

2 梯度洗脱程序

时间(min)

流动相A(%)

流动相B(%)

流速(mL/min)

0

90

20

0.4

10

80

20

0.4

22

60

40

0.4

25

60

40

0.4

28

30

70

0.4

30

30

70

0.4

二、结果与讨论

(一)流动相条件的优化

1.流动相的选择

比较甲醇-水、甲醇-甲酸水、乙腈-水和乙腈-甲酸水系统溶液梯度洗脱对7种目标物的分离效果,结果表明,在相同色谱条件下,不加甲酸,各组分峰形较差,有明显的拖尾现象:使用甲醇-0.1%甲酸水溶液,各组分的峰出现较密集,面使用乙腩-0.1%甲酸水溶液作为流动相梯度洗脱时,7个苯乙醇苷类成分均可获得良好的分离度和峰形。因此采用乙腈-0.1%甲酸水溶液作为流动相对7种苯乙醇苷类物质进行色谱分离。

2.波长的确定

通过紫外吸收光谱对7种苯乙醇苷类成分进行全波长扫描,发现7个苯乙醇苷类成分在330nm处有最大吸收,故确定本实验的测定波长为330nm

3.柱温的选择

比较了25℃30℃35℃柱温条件下,对7种苯乙醇苷类成分的分离效果,结果表明在相同色谱条件下,30℃时分离效果最好,确定本实验的柱温为30℃

(二)线性方程、线性范围和检出限

按照2.色谱条件,依次对7种苯乙醇苷类成分的系列标准工作溶液进样分析,以保留时间定性,色谱峰面积定量。以质量浓度为横坐标,色谱峰的面积为纵坐标,进行线性回归,绘制标准曲线。将信噪比等于3时的7种苯乙醇苷类物质对应的浓度作为检测限,信噪比等于10时对应的7种苯乙醇苷类成分浓度作为定量限,得到各苯乙醇苷类成分的线性回归方程、相关系数、检测限和定量限,结果见表3



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