摘要：目的　观察肉苁蓉苯乙醇苷预防给药对高原脑水肿模型大鼠的作用及可能的作用机制。方法　大鼠随机分为正常对照组，模型组，大花红景天口服液组[1.78 mL/（kg · d）]，肉苁蓉苯乙醇苷低、中、高剂量组[75、150、300 mg/（kg · d）]，每组12 只，灌胃预防给药10 d，第8 日起除正常对照组外其余各组置于模拟海拔5 000 m 高原环境72 h 建立高原脑水肿模型，观察各组大鼠脑组织病理改变，检测脑组织含水量、脑组织匀浆中白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）酶活力。结果　与正常对照组相比，模型组大鼠出现明显的脑水肿，脑组织含水量显著升高，脑匀浆液中IL-6、TNF-α、MDA 含量增高，SOD 和GSH-Px 酶活力显著降低。肉苁蓉苯乙醇苷能够改善高原脑水肿大鼠脑水肿病理改变，降低脑组织含水量，降低脑匀浆中IL-6 、TNF-α、MDA 含量，且能提高SOD 和GSH-Px 的酶活力。结论　肉苁蓉苯乙醇苷能够预防高原脑水肿的发生，可能与其抗炎、抗氧化应激有关。

关键词：肉苁蓉；苯乙醇苷；高原脑水肿

高原脑水肿（high-altitude cerebral edema，HACE）一般发生在初次进入海拔＞ 3 000 m 高原环境时，由于机体对高原低压低氧环境的不适应而导致的一种严重威胁生命的疾病，它与高原反应、高原肺水肿是急性高原

病的3 种表现形式[1]。尽管关于HACE 的研究相比高原肺水肿较少，但相关研究表明氧化应激、炎症反应在HACE 发病中发挥了重要作用[2-3]。

　　肉苁蓉苯乙醇苷（phenylethanoid glycosides from CistancheSalsa，PhGCs）是从新疆德赢vwin登录 中提取获得，相关研究成功分离得到了多种苯乙醇苷，主要包含松果菊苷和毛蕊花糖苷[4]。多年来对PhGCs 的药理作用研究表明其与抗高原病有效成分红景天苷具有相似的药理作用，具有抗缺氧、抗辐射、清除自由基等[5-7]。本实验利用西北地区特殊环境人工实验舱建立大鼠HACE模型[8-9]，PhGCs 预防给药，观察其对HACE 的预防作用及其可能的作用机制。

1　材料

1.1　动物

　　实验动物Wistar 大鼠，SPF 级， 雌雄各半， 体重180 ～ 220 g [ 新疆医科大学实验动物中心，动物生产许可证号SCXK（新）2011-0004，动物使用许可证号为SYXK（新）2011-0004]。

1.2　仪器

　　西北特殊环境人工实验舱（贵州风雷航空军械有限责任公司，DY-2）；光学显微镜（日本Nikon 公司，E 200）；组织切片机（德国美康公司，HM 340 E）；电子天平（梅特勒- 托利多仪器有限公司，AL204，精度：0.1 mg）；酶标仪（美国Bio-RAD，XMark 7M）；紫外分光光度计（上海棱光技术有限公司，SpectrumLab22）；电热恒温干燥箱（湖北黄石市医疗器械有限公司，SKHG-01）。

1.3　试药

　　PhGCs（北京大学屠鹏飞教授提供，含量：90.70%，用蒸馏水配制成相应浓度的溶液）；大花红景天口服液（西藏藏药集团股份有限公司，批号：120503，规格：10 mL）； 肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α） 试剂盒（ 批号：ZJAGBZAB01）、白介素-6（interleukin-6，IL-6） 试剂盒（ 批号：ZIBIBZAB 02）（上海依科赛生物制品有限公司）；戊巴比妥钠（美国Amresco 公司， 批号：20110612）； 多聚甲醛（ 成

都市科龙化工试剂厂，批号：20110901）；超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD） 试剂盒（ 批号：20130812）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）试剂盒（批号：20130812）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathioneperoxidase，GSH-Px）试剂盒（批号：20130814）（南京建成生物工程研究所）；PBS 磷酸盐缓冲液粉剂（福州迈新生物技术开发有限公司，批号：13061716）。

2　方法

2.1　分组与用药

　　Wistar 大鼠随机分为6 组：正常对照组、模型组、大花红景天口服液组（1.78 mL·kg － 1）、PhGCs 低剂量组（75 mg·kg － 1）、PhGCs 中剂量组（150 mg·kg － 1）、PhGCs 高剂量组（300 mg·kg － 1），每组12 只。各组均在SPF 环境饲养，正常对照组、模型组灌胃蒸馏水（1.0mL/100 g），其余各组按照相应剂量灌胃给药，连续给药10 d，第8 日除正常对照组外其余各组置于模拟海拔5 000 m 高原环境的人工实验舱中饲养72 h。舱内高度以10 m·s － 1 的速度匀速上升到海拨5 000 m 水平（大气压为54.1 kPa，氧分压为11.52 kPa），其间动物自由进水及进食，每24 h 开舱0.5 h 给药，添加饲料及饮水。

2.2　动物处理

　　各组大鼠出舱后立即腹腔注射戊巴比妥钠（2%，0.2mL/100 g）麻醉，腹主动脉取血，打开颅腔，取脑组织，取左脑上半部称重后锡箔纸包裹用于测定含水量，左脑下半部4% 多聚甲醛固定，用于HE 染色。右脑称重，加

PBS 液制备10% 匀浆液，3 000 r·min － 1 离心10 min，分装上清液－ 80 ℃冰箱冻存，用于测定TNF-α、IL-6、SOD、MDA、GSH-Px。

2.3　脑组织病理学观察

　　脑组织放入4% 的多聚甲醛中充分固定后，脱水、包埋、切片、HE 染色，不同放大倍数下光学显微镜下观察病理改变，并拍摄图片。

2.4　脑含水量测定及脑组织匀浆炎症及氧化应激相关指标的测定

　　将锡箔纸包裹的脑组织，置烤箱（80 ℃，72 h）烤至恒重，称干重量，计算含水量：含水量＝（组织重量－组织干重量）/ 组织重量×100%。利用酶联免疫试剂盒测定TNF-α、IL-6 含量，紫外分光光度计测定MDA、

SOD、GSH-Px，具体步骤按照说明书进行操作。

2.5　统计学分析

　　采用SPSS 16.0 软件进行分析，计量数据均采用x±s表示，数据先进行正态性检验，符合组间比较采用独立样本t 检验，不符合进行对数转换。检验水准为α ＝ 0.05。

3　结果

3.1　PhGCs 对HACE 大鼠脑组织病理改变的影响

　　在光镜下观察各组大鼠脑组织病理切片可见，正常对照组脑组织分子层、外颗粒细胞层、椎体层细胞层、内颗粒细胞层、多行细胞层结构清楚，未发现病变。模型组大鼠脑组织毛细血管充血、水肿，分子层、椎体层细胞水肿明显。PhGCs 低剂量组大鼠脑组织分子层部分血管扩张充血水肿，细胞轻度水肿，水肿较模型组减轻；PhGCs 中剂量组大鼠脑组织部分脑膜下血管扩张充血，偶见细胞水肿，水肿较模型组明显减轻；PhGCs 高剂量组分子层无明显水肿，血管周围轻度水肿，水肿较模型组明显减轻。大花红景天组大鼠脑组织分子层散在水肿，散在血管极轻度水肿，水肿较模型组明显减轻。可知模型组大鼠脑组织明显水肿，模型成立。PhGCs、大花红景天可以降低HACE 模型大鼠脑水肿程度，结果见图1。

3.2　PhGCs 对HACE 大鼠脑组织含水量的影响

　　与正常对照组相比，模型组脑组织含水量升高，差异具有统计学意义（P ＜ 0.01），说明模型成立。PhGCs低、中、高剂量组和大花红景天组大鼠脑组织含水量与模型组相比均降低，差异具有统计学意义（P ＜ 0.01），

PhGCs 各剂量组与大花红景天组脑组织含水量比较，差异无统计学意义，结果见表1。

3.3　PhGCs 对HACE 大鼠脑组织TNF-α、IL-6 的影响

　　与正常对照组比较，模型组大鼠脑组织匀浆液中TNF-α、IL-6 含量显著升高（P ＜ 0.01）。PhGCs 低、中、

高剂量组和大花红景天组大鼠脑组织匀浆液中TNF-α、IL-6 含量低于模型组（P ＜ 0.05），差异有统计学意义。PhGCs 各剂量组与大花红景天组脑组织TNF-α、IL-6 含量比较差异无统计学意义，结果见表2。

3.4　PhGCs 对HACE 大鼠脑组织氧化应激的影响

　　与正常对照组比较，模型组大鼠脑组织SOD、GSHPx酶活力显著降低，MDA 含量显著升高（P ＜ 0.01）。PhGCs 低、中、高剂量组和大花红景天组大鼠脑组织SOD、GSH-Px 酶活力高于模型组，MDA含量低于模型组，

差异有统计学意义（P ＜ 0.05）。PhGCs 各剂量组与大花红景天组大鼠脑组织SOD、GSH-Px 和MDA 含量比较差异无统计学意义，结果见表3。

4　讨论

　　近年来，国内关于中药防治高原病研究已取得了重大创新性成果，用于防治高原病具有自主知识产权的中药相继研发成功。如西藏军区研制的红景天胶囊，已获准军队特需药品批准文号，作为防治高原病的专用药品装备于高原边防部队。由青海、西藏地方药业公司推出的大花红景天口服液，获准国家中药品种正式批准文号，临床上适用于防治急、慢性高原病[10]。PhGCs 药理作用与红景天苷相似，所以我们选择了市场上在销售使用且有药准字号的大花红景天口服液作为了阳性对照药。

　　大量研究[11-12] 证明在HACE 患者TNF-α、IL-6 水平升高，周其全等[13] 研究表明TNF-α 在改变血脑屏障通透性增高中起了重要作用，是高原环境下血脑屏障通透性增高的重要因素。TNF-α 在低氧血症时分泌增加，当TNF-α在血液中异常增多时，可损伤血管内皮细胞，造成血管内皮细胞形态改变、细胞膜及细胞器损害等，而且TNF-α还能作为一个细胞凋亡的胞内信号诱导血管内皮细胞凋亡，促使内皮素（endothelin，ET-1） 的产生而加重血管壁的损伤，并且有促进IL-6 分泌的作用[14]。

　　低氧被认为是导致急性高原病发生的关键因素，低氧诱导的氧化应激反应在脑动脉高压和血管渗漏中发挥重要作用，局部的自由基参与引起血管损伤。脑血管损伤、液体漏出增多可引起脑水肿[15-16]。周其全等[17] 研究表明氧自由基在HACE 形成中起了重要作用，是高原环境下血脑屏障通透性增高的重要因素。低氧环境下，自由基和MDA 会显著升高，而抗氧化酶功能下调，因此抗氧化酶功能低下和脂质过氧化损伤增加可能在急性高原病发病中具有重要意义。MDA 由脂肪酸过氧化物分解产生，是生物系统中最常测量的脂质过氧化产物。体内抗氧化酶包括SOD、GSH-Px 等，它们或直接清除超氧自由基和过氧化氢，或转换为活跃较低的物质，从而发挥防御作用。所以我们检测了脑组织匀浆液中SOD、MDA、GSH-Px。

　　在本次实验中，与正常对照组相比，HACE 模型组大鼠脑组织匀浆液中TNF-α、IL-6 量显著升高，SOD、GSH-Px 酶活力降低，而MDA 含量显著升高，说明低氧诱导大鼠氧化应激功能失调及炎症参与了HACE 的形成。PhGCs 预防给药后可以降低脑水肿模型大鼠脑组织的含水量，显著改善脑组织水肿病理改变，说明其具有预防HACE 发生的作用，PhGCs 可以提高低氧时大鼠脑组织SOD、GSH-Px 酶活力，降低脑组织中低氧引起的MDA 含量，PhGCs 预防给药组大鼠脑组织TNF-α、IL-6含量显著低于模型组，提示我们抗氧化应激和抗炎可能是PhGCs 防治高原病的作用机制之一。综合本实验结果来看，PhGCs 中剂量组效果略优于高剂量，但差异未见统计学意义。未见相关文献报道PhGCs 为肝药酶诱导剂，可排除药物诱导肝药酶活性增加而加速自身代谢的可能。推测可能的原因是随着药物浓度的增加，药物在体内的浓度超出了量效关系范围，在中剂量时体内受体已经全部占领，受体饱和，故未见高剂量效果继续增加，且药物为糖苷类，可能在胃内水解出糖，浓度过高黏度增加反而限制了药物的有效吸收。

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