摘要: 目的观察肉苁蓉苯乙醇苷类成分( CPhGs) 对牛血清白蛋白( BSA) 致大鼠肝纤维化的防治作用。方法将SD 大鼠随机分为6 组，每组12 只，即正常对照组、肝纤维化模型组( 模型组) 、复方鳖甲软肝片阳性对照组

( 600 mg /kg) 及CPhGs 高剂量组( 500 mg /kg) 、中剂量组( 250 mg /kg) 、低剂量组( 125 mg /kg) ; 采用静脉注射BSA 诱导建立大鼠肝纤维化模型; 造模同时，灌胃给予大鼠CPhGs 提取物，连续12 w，末次给药后腹主动脉采血，取出肝脏和脾脏。计算肝脾指数，检测大鼠血清肝功能指标及肝脏病理组织学变化。结果与正常对照组比较，模型组大鼠肝脏指数明显增加，血清AST 含量明显增加。与模型组比较，复方鳖甲软肝片阳性对照组及CPhGs 不同剂量组大鼠肝脏指数均显著降低，CPhGs 不同剂量组大鼠脾脏指数明显下降，CPhGs 不同剂量组大鼠血清ALT、AST 含量显著下降。CPhGs 可使BSA 诱导的大鼠肝脏纤维增生明显减轻。病理结果显示，正常对照组大鼠肝组织未见异常，CPhGs 不同剂量组治疗效果显著，形态基本上接近于正常对照组。结论肉苁蓉苯乙醇苷类成分具有保护肝细胞和防治肝纤维化的作用。

关键词: 肉苁蓉; 苯乙醇苷类成分; 肝纤维化; 牛血清白蛋白

肉苁蓉( Cistanche) 属多年生根寄生草本植物，是名贵中药材，具有补肾、益精、润肠、抗衰老等功效，由于其生长于沙漠环境，又有“沙漠人参”之美誉。国内外学者对肉苁蓉的化学成分进行了大量研究，迄今为止已经分离出约70 种化合物，包括苯乙醇苷类、环烯醚萜类、木脂素类化合物以及生物碱和糖类等其他成分，其中最主要成分为苯乙醇苷类化合物［1］。苯乙醇苷类成分具有很强的抗菌、抗炎、抗病毒、抑制弹性蛋白酶、抗氧化、免疫调节、增强记忆及强心等多种药理活性［2］。本实验从肉苁蓉药材中分离得到苯乙醇苷类化合物，并研究其对牛血清白蛋白( BSA) 所致大鼠肝纤维化的防治作用，旨在为肉苁蓉中苯乙醇苷类化合物的抗肝纤维化作用机制及相关保健品或药品的开发提供依据。

1 材料和方法

1． 1 药材与仪器肉苁蓉苯乙醇苷类成分提取物( CPhGs) 由新疆药物研究所植物化学室提供。用时将药物配制成不同浓度，置4℃冰箱保存待用。复方鳖甲软肝片( 内蒙古福瑞科技股份有限公司产品，批号: 20131006) ，牛血清白蛋白( BSA) ( Sigma公司产品，CAS: 9048-46-8，原装进口) 。羊毛脂( 上海源叶生物科技公司) ，液体石蜡( 天津市富宇精细化工有限公司) ，磷酸盐缓冲液( 飞世尔生物化学制品( 北京) 有限公司，批号: NZD1132) 。电热恒温培养箱( 上海一恒科技有限公司) ，立式压力蒸汽灭菌器( 上海博讯实业有限公司医疗设备厂) ，L-530 多管架自动平衡离心机( 长沙湘仪离心机仪器有限公司) ，全自动生化分析仪( 迈瑞公司，系列号: A086A0182) 。

1． 2 实验动物SD 大鼠72 只，雄性，体质量( 200± 20) g，SPF 级，由新疆医科大学实验动物中心提供，动物使用许可证号: SYXK( 新) 2003-0001。

1． 3 实验方法

1． 3． 1 弗氏不完全佐剂的制备称量羊毛脂50 g置于烧杯中，加入100 mL 液体石蜡，加热至70℃混匀，高压灭菌后备用。

1． 3． 2 大鼠免疫性肝纤维化模型的建立造模分为致敏阶段和尾静脉攻击阶段: ( 1) 致敏阶段: 除正常对照组大鼠注射生理盐水( 每次每只0． 5 mL) 以外，其余各组动物均多点皮下注射含9 mg /mL BSA的弗氏不完全混合乳化液，每次每只0． 5 mL，共5次。前2 次注射间隔为14 d，后3 次注射间隔为7d。末次致敏注射后1 w，于眼内眦静脉丛采血，采用双向扩散法检测大鼠血清抗BSA 抗体; ( 2) 尾静脉攻击阶段: 抗体阳性大鼠继续进行尾静脉攻击，即模型组及给药组大鼠尾静脉注射BSA，每只首次2mL，每周2 次，其后浓度逐渐升至每次4 mL /只，连续5 w，共10 次。

1． 3． 3 实验分组及药物干预SD 大鼠随机分为6 组，每组12 只，即正常对照组、肝纤维化模型组( 模型组) 、复方鳖甲软肝片阳性对照组( 600 mg /kg) 及CPhGs 高剂量组( 500 mg /kg) 、中剂量组( 250 mg /kg) 、低剂

量组( 125 mg /kg) 。CPhGs 不同剂量组和阳性对照组在造模的同时按剂量灌胃给药，每天1 次，持续12 w。

1． 4 指标检测各组末次给药后禁食( 不禁水) 12h，称重，经戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后，腹主动脉采血，3 500 r /min 离心10min，取血清测定谷草转氨酶( ALT) 、谷丙转氨酶( AST) ; 采血后处死大鼠，剖取肝脏和脾脏，称量肝脏及脾脏湿重，计算肝脏指数和脾脏指数( 脏器指数= 脏器重量/体质量×100) 。取肝脏左叶同一部位，固定，切片，常规HE染色，进行病理组织学观察。肝纤维化分级参照文献［3］分为5 级: 0 级: 无纤维化; Ⅰ级: 纤维结缔组织仅限于汇管区或汇管区有扩大，有向小叶发展的倾向; Ⅱ级: 纤维结缔组织增生明显，超过小叶的2 /3 并伴有Ⅰ级改变; Ⅲ级: 纤维结缔组织进入肝小叶中央静脉周围; Ⅳ级: 纤维结缔组织在全小叶呈多处弥漫性增生，有假小叶形成，并有Ⅲ级改变。

1． 5 统计学处理用SPSS17． 0 统计软件进行统计学分析，数据采用均数± 标准差( -x ± s) 表示; 多组间均数比较采用方差分析one-way ANOVA，多组样本均数两两比较采用LSD 方法进行统计学分析，检验水准α = 0． 05。

2 结果

2． 1 CPhGs 对BSA 致肝纤维化大鼠脏器系数的影响与正常对照组比较，模型组大鼠肝脏指数明显增加，差异有统计学意义( P ＜ 0． 05) 。与模型组比较，复方鳖甲软肝片组及CPhGs 不同剂量组大鼠肝脏指数明显下降，CPhGs 不同剂量组大鼠脾脏指数明显下降，差异均有统计学意义( P ＜0． 05) ，见表1。

2． 2 CPhGs 对BSA 致肝纤维化大鼠肝功能酶指标的影响与正常对照组比较，模型组ALT 含量增加，但差异没有统计学意义; AST 含量增加，差异具有统计学意义( P ＜0． 05) ; 与模型组比较，CPhGs 高剂量组大鼠血清ALT 含量显著降低; 复方鳖甲软肝片组及CPhGs 高、中、低剂量组大鼠血清AST 含量显著降低，差异有统计学意义( P ＜0． 05) ，结果见表2。

2． 3 CPhGs 对BSA 致肝纤维化大鼠病理组织学的影响正常对照组大鼠肝组织未见异常，肝小叶结构正常，肝细胞无变性坏死( 图1) 。模型组大鼠肝纤维化呈Ⅲ ～Ⅳ级纤维化，纤维结缔组织进入肝小叶中央静脉周围，纤维结缔组织在全小叶呈多处弥漫性增生，有假小叶形成( 图2) 。复方鳖甲软干片阳性对照组与模型组比较病理变化有所缓解，纤维结缔组织在小叶弥漫性增生减少( 图3) 。CPhGs高、中剂量组病理组织切片显示肝组织形态基本上接

近于正常对照组，肝细胞无变性坏死，无肝纤维化( 图4、5) 。CPhGs 低剂量组纤维结缔组织仅限于汇管区或汇管区有扩大，有向假小叶发展的倾向( 图6) 。

3 讨论

肝纤维化是指肝细胞发生坏死及炎症刺激时肝组织内纤维、结缔组织异常增生的病理过程。肝纤维化是继发于各种形式慢性肝损伤之后组织修复过程中的代偿反应［4］，延缓肝纤维化的病程发展对慢性肝炎的治疗非常重要［5］。肝细胞损伤引起的炎症反应是促成肝纤维化形成的直接因素［6 － 7］。ALT 和AST 是国内外应用最为广泛的反映肝细胞损害的检测指标，转氨酶主要存在于肝细胞内。当肝细胞发生炎症、坏死等损伤及细胞膜损伤时，转氨酶从高梯度向血中释放，导致血清转氨酶升高。因此血清转氨酶水平是临床反映肝细胞损伤的敏感指标。本实验结果表明，与模型组比较，各给药组大鼠血清ALT、AST 含量明显下降，提示复方鳖甲软肝片及肉苁蓉苯乙醇苷类成分提取物具有保护肝细胞作用。在肝纤维化发生、发展过程中肝细胞的病理变化复杂，涉及肝细胞损伤( 变性、坏死) 、炎性、慢性持续的损伤修复反应、氧化应激反应及相关递质的调控，同时与肝窦内皮细胞、细胞外间质的功能紊乱和交互作用有关。如能有效保护肝细胞，防止肝细胞脂肪变性、坏死，即可阻止炎细胞浸润和纤维组织增生，从而切断向肝纤维化、肝硬化发展的病理过程［8］。本实验用尾静脉注射BSA 建立免疫性肝纤

维化模型，其主要原理是异种血清进入机体引发免疫应答，在肝脏主要是在门静脉汇管区形成免疫复合物沉积，沉积的免疫复合物引起局部炎症反应，激发各种细胞因子的产生，肝星状细胞转变为肝纤维母细胞，分泌大量细胞外基质，发生纤维化［9 － 10］。本实验研究结果显示，肉苁蓉苯乙醇苷类成分提取物高、中、低剂量均能显著降低模型大鼠肝、脾脏指数，表明肉苁蓉苯乙醇苷类成分提取物能显著改善肝、脾充血、肿大，减轻肝、脾损伤。本研究病理组织学观察结果显示，肉苁蓉苯乙醇苷类成分高、中剂量组病理组织切片肝组织形态基本上接近于正常对照组，减轻肝细胞变性及炎性细胞浸润，抑制胶原纤维的合成与沉积，提示肉苁蓉苯乙醇苷类成分对BSA

所致肝纤维化大鼠具有一定的防治作用，但其作用机制还需要进一步探讨。

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