徐圣，柴莎莎

（武汉职业技术学院生物工程学院，湖北武汉430074）

摘要：建立HPLC-DAD同时检测肉苁蓉中主要活性物质7种苯乙醇苷类成分的快速分析方法。使用Agilent ZORBAXC18色谱柱（150mmx4.6mm，5μm），以乙腈-0.1％甲酸为流动相进行梯度洗脱，二极管阵列检测器，波长330nm，外标法定量。7种苯乙醇苷类成分在检测范围内有良好的线性，相关系数均在0.9995以上，检出限为0.5-2μg／mL，定量限为2-10μg／mL。在3个水平下加标回收率为85.12％-97.21％，相对标准偏差低于5％。该方法快速、准确、简便，适用于肉苁蓉苯乙醇苷类成分的检测需求，后续可以为控制肉苁蓉质量提供有力支持和有效保障。

关键词：HPLC；肉苁蓉；活性物质；检测；质量控制

一、材料与方法

（一）材料与试剂

麦角甾苷对照品（纯度98％）、异麦角甾苷对照品（纯度98％）、松果菊苷对照品（纯度98％）、管花苷A对照品（纯度98％）、2＇-乙酰毛蕊花糖苷对照品（纯度98％）、肉苁蓉苷A对照品（纯度98％）、肉苁蓉苷F对照品（纯度98％），成都曼思特生物科技技术有限公司：甲醇（色谱纯）。Fisher公司；乙腈（色谱纯），Fisher公司；甲酸（色谱纯），Fisher公司；水为屈臣氏纯净水。市购：

试验采用的肉苁蓉原料采自主产区，经湖北省中医药研究院鉴定为肉苁蓉，共10批，见表1。

表1 肉苁蓉原料产地信息

（二）主要仪器与设备

1260高效液相色谱仪：美国安捷伦公司，配有二极管阵列检测器：SB-800D数显普通型超声波清洗机：宁波新芝公司；XSR105电子天平：美国梅特勒公司。十万分之一天平：美国梅特勒公司；DJ-04B小型破碎机：上海鼎广机械设备有限公司。ZORBAXC18色谱柱（150mmx4.6mm，5μm）：美国安捷伦公司。

（三）方法

1．溶液配制

（1）标准溶液

分别精密称取麦角留苷对照品20mg、异麦角甾苷对照品20mg、松果菊苷对照品20mg、管花苷A对照品10mg、2＇-乙酰毛蕊花糖苷对照品10mg、肉苁蓉苷A对照品10mg，肉苁蓉苷F对照品10mg，于25mL容量瓶中，以甲醇-水（1：1）混合溶液定容至刻度，即得各标准溶液储备液。分别取各对标准溶液储备液适量于量瓶中，甲醇-水（1：1）混合溶液定容至刻度，即得标准混合溶液。

（2）样品溶液

取肉苁蓉粉末，过4号筛，精密称取1g，置100mL棕色量瓶中，加入甲醇-水（1：1）50mL，盖上瓶塞，摇匀，称定质量，然后浸泡30min，超声处理40min后放置室温，再称定质量，加甲醇-水（1：1）补

足减失的质量．摇匀，静置，取上清液［1］．过0.45μm滤膜，备用。

2．色谱条件

以0.1％甲酸水溶液为流动相A．乙腈为流动相B．进样量10微升，柱温30℃，检测波长为330nm，梯度洗脱程序见表2。

表2 梯度洗脱程序

二、结果与讨论

（一）流动相条件的优化

1．流动相的选择

比较甲醇-水、甲醇-甲酸水、乙腈-水和乙腈-甲酸水系统溶液梯度洗脱对7种目标物的分离效果，结果表明，在相同色谱条件下，不加甲酸，各组分峰形较差，有明显的拖尾现象：使用甲醇-0.1％甲酸水溶液，各组分的峰出现较密集，面使用乙腩-0.1％甲酸水溶液作为流动相梯度洗脱时，7个苯乙醇苷类成分均可获得良好的分离度和峰形。因此采用乙腈-0.1％甲酸水溶液作为流动相对7种苯乙醇苷类物质进行色谱分离。

2．波长的确定

通过紫外吸收光谱对7种苯乙醇苷类成分进行全波长扫描，发现7个苯乙醇苷类成分在330nm处有最大吸收，故确定本实验的测定波长为330nm。

3．柱温的选择

比较了25℃，30℃、35℃柱温条件下，对7种苯乙醇苷类成分的分离效果，结果表明在相同色谱条件下，30℃时分离效果最好，确定本实验的柱温为30℃。

（二）线性方程、线性范围和检出限

按照2．色谱条件，依次对7种苯乙醇苷类成分的系列标准工作溶液进样分析，以保留时间定性，色谱峰面积定量。以质量浓度为横坐标，色谱峰的面积为纵坐标，进行线性回归，绘制标准曲线。将信噪比等于3时的7种苯乙醇苷类物质对应的浓度作为检测限，信噪比等于10时对应的7种苯乙醇苷类成分浓度作为定量限，得到各苯乙醇苷类成分的线性回归方程、相关系数、检测限和定量限，结果见表3